本發(fā)明涉及生物離體組織或器官的保存領(lǐng)域，特別涉及一種胎盤(pán)保存液的制備方法。
背景技術(shù)：
：間充質(zhì)干細(xì)胞是干細(xì)胞家族中的重要一員，可以不斷進(jìn)行自我更新，具有多向分化潛力。目前，間充質(zhì)干細(xì)胞主要來(lái)源于骨髓、臍血、臍帶組織和胎盤(pán)組織等,從胎盤(pán)組織中分離得到的間充質(zhì)干細(xì)胞，具有來(lái)源方便，數(shù)量充足，制備簡(jiǎn)單、快捷，細(xì)胞增殖能力和分化能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，具有較高的應(yīng)用價(jià)值。胎盤(pán)從采集到制備，這個(gè)過(guò)程需要一定時(shí)間，然而胎盤(pán)在離體環(huán)境下會(huì)迅速影響胎盤(pán)組織的代謝狀況，其細(xì)胞活力會(huì)在短時(shí)間內(nèi)明顯下降，因此如何保證間充質(zhì)干細(xì)胞的活性是問(wèn)題的關(guān)鍵。通常情況下，在采集完胎盤(pán)后，將其置于保存液中進(jìn)行保存，給細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)成分，維持活力?，F(xiàn)有保存液主要是在緩沖液的基礎(chǔ)上添加樹(shù)種氨基酸、抗生素、人血白蛋白等成分，雖然可以較好的維持細(xì)胞活性，然而過(guò)程繁瑣，成分復(fù)雜，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，無(wú)法在短時(shí)間內(nèi)大量配置。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種胎盤(pán)保存液的制備方法，解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的保存液配置繁瑣，過(guò)程復(fù)雜，工作量大等問(wèn)題。為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種胎盤(pán)保存液的制備方法，包括以下步驟：(1)準(zhǔn)備濃度為0.9％的氯化鈉水溶液；(2)向步驟(1)中的溶液中加入AIM—V無(wú)血清培養(yǎng)基，形成保存液；(3)向步驟(2)所得的保存液中加入NaHCO3，調(diào)節(jié)PH至7.1—7.4；(4)將步驟(3)所得的保存液通過(guò)20μm—25μm濾膜進(jìn)行過(guò)濾，最終得胎盤(pán)保存液。作為優(yōu)選，步驟(2)中所述的AIM—V無(wú)血清培養(yǎng)基含有L—谷酰酰胺，50μg/ml硫酸鏈霉素和10μg/ml硫酸慶大霉素。作為優(yōu)選，所述胎盤(pán)保存液中AIM—V無(wú)血清培養(yǎng)基的濃度為30％—40％。作為優(yōu)選，步驟(4)所用的濾膜孔徑為22μm。。本發(fā)明的有益效果是：胎盤(pán)保存液直接由濃度為0.9％的氯化鈉水溶液和AIM—V無(wú)血清培養(yǎng)基配置而成，可以有效的維持細(xì)胞滲透壓和活力，提高細(xì)胞抵抗力，對(duì)細(xì)胞無(wú)毒副作用，同時(shí)因成分簡(jiǎn)單，配置方便快捷，提高使用率。具體實(shí)施方式下面對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式作進(jìn)一步說(shuō)明。在此需要說(shuō)明的是，對(duì)于這些實(shí)施方式的說(shuō)明用于幫助理解本發(fā)明，但并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限定。此外，下面所描述的本發(fā)明各個(gè)實(shí)施方式中所涉及的技術(shù)特征只要彼此之間未構(gòu)成沖突就可以相互組合。本發(fā)明的一種胎盤(pán)保存液的制備方法，包括以下步驟：(1)準(zhǔn)備濃度為0.9％的氯化鈉水溶液；(2)向步驟(1)中的溶液中加入AIM—V無(wú)血清培養(yǎng)基，形成保存液；(3)向步驟(2)所得的保存液中加入NaHCO3，調(diào)節(jié)PH至7.1—7.4；(4)將步驟(3)所得的保存液通過(guò)20μm—25μm濾膜進(jìn)行過(guò)濾，最終得胎盤(pán)保存液。其中AIM—V無(wú)血清培養(yǎng)基含有L—谷酰酰胺，50μg/ml硫酸鏈霉素和10μg/ml硫酸慶大霉素；所得胎盤(pán)保存液中AIM—V無(wú)血清培養(yǎng)基的濃度為30％—40％；步驟(4)所用的濾膜孔徑為22μm。上述所得胎盤(pán)保存液直接由濃度為0.9％的氯化鈉水溶液和AIM—V無(wú)血清培養(yǎng)基配置而成，可以有效的維持細(xì)胞滲透壓和活力，提高細(xì)胞抵抗力，對(duì)細(xì)胞無(wú)毒副作用，同時(shí)因成分簡(jiǎn)單，配置方便快捷，提高使用率。實(shí)施例1：向0.9％的氯化鈉水溶液中加入AIM—V無(wú)血清培養(yǎng)基，形成保存液，再加入NaHCO3，調(diào)節(jié)PH至7.1—7.4；最后將保存液通過(guò)22μm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，最終得胎盤(pán)保存液，其中AIM—V無(wú)血清培養(yǎng)基的濃度為30％。實(shí)施例2：向0.9％的氯化鈉水溶液中加入AIM—V無(wú)血清培養(yǎng)基，形成保存液，再加入NaHCO3，調(diào)節(jié)PH至7.1—7.4；最后將保存液通過(guò)22μm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，最終得胎盤(pán)保存液，其中AIM—V無(wú)血清培養(yǎng)基的濃度為40％。對(duì)比例1：向0.9％的氯化鈉水溶液中加入AIM—V無(wú)血清培養(yǎng)基，形成保存液，再加入NaHCO3，調(diào)節(jié)PH至7.1—7.4；最后將保存液通過(guò)22μm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，最終得胎盤(pán)保存液，其中AIM—V無(wú)血清培養(yǎng)基的濃度為20％。對(duì)比例2：向0.9％的氯化鈉水溶液中加入AIM—V無(wú)血清培養(yǎng)基，形成保存液，再加入NaHCO3，調(diào)節(jié)PH至7.1—7.4；最后將保存液通過(guò)22μm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，最終得胎盤(pán)保存液，其中AIM—V無(wú)血清培養(yǎng)基的濃度為50％。用上述實(shí)施例和對(duì)比例配置好的胎盤(pán)保存液浸沒(méi)胎盤(pán)，在4℃避光保存，具體方法為：由醫(yī)護(hù)人員把新鮮采集的胎盤(pán)放置于胎盤(pán)采集盒中，并把4℃胎盤(pán)保存液轉(zhuǎn)移至胎盤(pán)采集盒中，胎盤(pán)保存液應(yīng)浸沒(méi)胎盤(pán)，封好采集盒蓋子后置于4℃中保存、運(yùn)輸。細(xì)胞活力檢測(cè)：以實(shí)施例1—2所述的胎盤(pán)保存液保存的胎盤(pán)為實(shí)驗(yàn)組1—2，以對(duì)比例1—2所述的胎盤(pán)保存液保存的胎盤(pán)為對(duì)照組1—2。各實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組胎盤(pán)分別在24h、48h、96h進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，按照常規(guī)方法分離胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞，取分離得到的胎盤(pán)干細(xì)胞，調(diào)整密度為1×106cells/ml，進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)，結(jié)果如表1所示。表1細(xì)胞活率24h48h96h實(shí)驗(yàn)組193.85％89.58％82.15％實(shí)驗(yàn)組294.98％90.14％81.24％對(duì)照組188.48％72.56％56.38％對(duì)照組292.23％85.26％63.24％實(shí)驗(yàn)組1、2分離得到的胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞整體的細(xì)胞活率要高于對(duì)照組1、2分離得到的胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞。對(duì)照組1可能是因?yàn)榕囵B(yǎng)基含量低，導(dǎo)致細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)成分不足；對(duì)照組2前24h細(xì)胞活率在90％以上，隨著時(shí)間推移，細(xì)胞活率出現(xiàn)了明顯的下降，可能是由于培養(yǎng)基含量高，細(xì)胞代謝偏旺盛，產(chǎn)生代謝廢物，致使溶液PH降低，影響細(xì)胞活性。以上對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方式作了詳細(xì)說(shuō)明，但本發(fā)明不限于所描述的實(shí)施方式。對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言，在不脫離本發(fā)明原理和精神的情況下，對(duì)這些實(shí)施方式進(jìn)行多種變化、修改、替換和變型，仍落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3