本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，特別是涉及枯草芽孢桿菌HMB19198制劑在防治番茄黃萎病的方法。
背景技術(shù)：
番茄(學(xué)名：Lycopersicon esculentum Mill)是茄科番茄屬中的草本植物，體高0.6-2米，全體生粘質(zhì)腺毛，有強(qiáng)烈氣味，莖易倒伏，葉羽狀復(fù)葉或羽狀深裂，花序總梗長(zhǎng)2-5厘米，常3-7朵花，花萼輻狀，花冠輻狀，漿果扁球狀或近球狀，肉質(zhì)而多汁液，種子黃色，花果期夏秋季。
而在飲食中，番茄是家喻戶曉的食物，有的人喜歡把它當(dāng)做水果吃，直接用來(lái)生吃；有的人喜歡把它當(dāng)做蔬菜吃，做成各種各樣的菜肴，其極具有食用價(jià)值。
番茄除了食用價(jià)值，還具有極高的藥用價(jià)值，其具有止血、降壓、利尿、健胃消食、生津止渴、清熱解毒、涼血平肝的功效。由于番茄中維生素A、維生素C的比例合適，所以常吃可增強(qiáng)小血管功能，預(yù)防血管老化。番茄中的類黃酮，既有降低毛細(xì)血管的通透性和防止其破裂的作用，還有預(yù)防血管硬化的特殊功效，可以預(yù)防宮頸癌、膀胱癌和胰腺癌等疾病。
綜上，番茄是現(xiàn)代人適合的健康蔬果，作為食用蔬菜已被全球性廣泛種植，即栽培種植有良好前景，具有巨大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
番茄原產(chǎn)南美洲，是全世界栽培最為普遍的果菜之一，中國(guó)栽培番茄是從50年代初迅速發(fā)展，現(xiàn)已成為我國(guó)主要果菜之一?，F(xiàn)中國(guó)各地普遍種植，栽培面積仍在繼續(xù)擴(kuò)大。
在種植過(guò)程中，不可避免的會(huì)發(fā)生很多病害，造成不同程度的減產(chǎn)或更甚至絕產(chǎn)。
番茄黃萎病是保護(hù)地和露地番茄生產(chǎn)的重要病害之一，可大幅度降低番茄的產(chǎn)量和品質(zhì)，是番茄生產(chǎn)的一個(gè)主要限制因素。希臘番茄黃萎病嚴(yán)重，有時(shí)會(huì)使番茄產(chǎn)量下降50％甚至更多。南非、加拿大、意大利、法國(guó)、美國(guó)等都有報(bào)道，產(chǎn)量損失23％以上。
番茄黃萎病多發(fā)生于番茄生長(zhǎng)后期，葉片由下向上逐漸變黃，首先是葉緣變色，變色沿葉脈擴(kuò)大，輪廓清晰，成為“V”形黃斑，以后下部葉片明顯枯死。發(fā)病重的結(jié)果小或不能結(jié)果，剖開病株莖部，維管束變淺褐色，病株并不迅速枯死，而是逐漸落葉，表現(xiàn)慢性的向上枯死，別于枯萎病。
此前，此病害在我國(guó)發(fā)生較少，但隨著陜西關(guān)中地區(qū)曾發(fā)現(xiàn)此種病害，黑龍江省也對(duì)此病害進(jìn)行報(bào)道，近年來(lái)在保護(hù)地番茄生產(chǎn)中此病害越來(lái)越有加重蔓延的趨勢(shì)。
經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，番茄黃萎病的病原菌為番茄黃萎病菌(verticillium dahlia)。在目前的番茄黃萎病防治中，本技術(shù)領(lǐng)域技術(shù)人員還沒(méi)有找到“特效藥”。在本領(lǐng)域內(nèi)，技術(shù)人員也正在不斷的試驗(yàn)摸索中尋找能更好防治番茄黃萎病的制劑，其中使用較廣泛的為“50％多·?？蓾裥苑蹌保撍巹橐环N化學(xué)藥劑，由于是化學(xué)藥劑，故其存在根本性的弊端，如藥性單一，易造成高毒、高殘、導(dǎo)致番茄品質(zhì)降低，同時(shí)易產(chǎn)生抗藥性。因?yàn)樵谕坏貐^(qū)長(zhǎng)期，連續(xù)使用一種農(nóng)藥，或使用作用機(jī)理相同的農(nóng)藥，害蟲、病菌或雜草對(duì)農(nóng)藥抵抗力就會(huì)的提高，進(jìn)而產(chǎn)生一定的抗藥性。
近年來(lái)，生物防治方法由于高效、環(huán)保、無(wú)污染、無(wú)殘留等優(yōu)點(diǎn)越來(lái)越受到重視。因此，如何尋找到能夠防治番茄黃萎病生物菌劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員目前亟需解決的技術(shù)問(wèn)題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種預(yù)防或治療番茄黃萎病的方法。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：
一種預(yù)防或治療番茄黃萎病的方法，包括：為番茄施用枯草芽孢桿菌HMB19198制劑。
優(yōu)選的，所述枯草芽孢桿菌HMB19198制劑的活芽孢含量為：10億活芽孢/克枯草芽孢桿菌可濕性粉劑。
優(yōu)選的，所述枯草芽孢桿菌HMB19198制劑的用量為1.5g/穴-2.5g/穴。
優(yōu)選的，所述制劑處理施用方式為為一次性穴施給藥。
優(yōu)選的，所述制劑施用的時(shí)機(jī)為在番茄苗生長(zhǎng)至3-4片復(fù)葉時(shí)
本發(fā)明的枯草芽孢桿菌制劑是一種利用生物防治番茄黃萎病的解決辦法，該菌劑對(duì)番茄黃萎病有較好的防治效果，在試驗(yàn)劑量下其防治效果可達(dá)到61.66％-77.87％。其中以2.5g/穴處理防效最高。有比50％多·?？蓾裥苑蹌┗瘜W(xué)農(nóng)藥防治效果更好的前提下，同時(shí)還是一種微生物菌劑，這樣就保證了番茄黃萎病的防治是高效環(huán)保，無(wú)污染的；同時(shí)制作方法也非常簡(jiǎn)單，成本也非常低，使用技術(shù)非常成熟，是防治番茄黃萎病的一種更佳手段。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明的核心是提供一種預(yù)防或治療番茄黃萎病的方法，能夠有效的防治番茄黃萎病。
下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
實(shí)施例一：枯草芽孢桿菌可濕性粉劑防治番茄黃萎病的安全性測(cè)試。
本實(shí)施例的目的是測(cè)定枯草芽孢桿菌可濕性粉劑防治番茄的安全性，為其防治番茄黃萎病提供依據(jù)。
本實(shí)施例的供試作物為番茄，其中作物品種分別為北京碩源種子有限公司提供的“奧賽特948”、上海番茄研究所和上海長(zhǎng)征良種實(shí)驗(yàn)場(chǎng)提供的“粉紅番茄918”和天津市津科力豐種苗有限公司提供的“白果強(qiáng)豐”，分別使用育苗盤進(jìn)行育苗，待番茄苗長(zhǎng)出4-6片真葉時(shí)，選取健康、長(zhǎng)勢(shì)一致的番茄苗備用。
本實(shí)施例的供試藥劑為利用枯草芽孢桿菌HMB19198生產(chǎn)的微生物菌劑，該微生物菌劑的活性成分為枯草芽孢桿菌HMB19198芽孢和它的胞外代謝產(chǎn)物。本實(shí)施例使用以枯草芽孢桿菌HMB19198芽孢制成的10億活芽孢/克枯草芽孢桿菌可濕性粉劑，其用量一般為6KG/畝，而在生產(chǎn)商番茄每畝一般定植3000株左右，本實(shí)驗(yàn)按每畝定植3000株計(jì)算，每株劑量一般為2g/穴。故本實(shí)驗(yàn)取劑量設(shè)定一般劑量的1倍、2倍和4倍劑量(2g、4g和8g/穴)為安全性試驗(yàn)劑量。
本實(shí)施例的試驗(yàn)方法如下：用電子天平秤稱取適量供試藥劑備用。在試驗(yàn)田中，用打孔器打孔，行距70cm，株距30cm，每畝約3000穴，移栽前穴施不同劑量的枯草芽孢桿菌，每穴移栽1顆番茄苗，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照，每處理重復(fù)4次，每處理40棵苗。然后給番茄苗設(shè)小拱棚。移栽后1、7、14和21天，觀察番茄葉片的顏色、形狀及植株生長(zhǎng)狀況，末次調(diào)查測(cè)量番茄的株高，每處理隨機(jī)測(cè)量10株。
測(cè)試結(jié)果見下表：
表1、番茄(奧賽特948)穴施枯草芽孢桿菌21天后株高測(cè)量結(jié)果匯總
注：同列數(shù)據(jù)中數(shù)字帶有字母表示無(wú)顯著差異(P＝0.05)，反之為顯著差異，下同。
表2、番茄(粉紅番茄918)穴施枯草芽孢桿菌21天后株高測(cè)量結(jié)果匯總
表3、番茄(白果強(qiáng)豐)穴施枯草芽孢桿菌21天后株高測(cè)量結(jié)果匯總
表4、番茄(奧賽特948)穴施枯草芽孢桿菌21天后株高測(cè)量結(jié)果
表5、番茄(粉紅番茄918)穴施枯草芽孢桿菌21天后株高測(cè)量結(jié)果
表6、番茄(白果強(qiáng)豐)穴施枯草芽孢桿菌21天后株高測(cè)量結(jié)果
經(jīng)以上調(diào)查結(jié)果分析，番茄穴施不同劑量的10億活芽孢/克枯草芽孢桿菌可濕性粉劑后，未發(fā)現(xiàn)葉片變色以及卷葉、增厚、畸形等可視藥害癥狀，番茄植株生長(zhǎng)狀況良好，根數(shù)及根長(zhǎng)正常。用藥后21天，株高測(cè)量顯示，供試番茄(奧賽特948、粉紅番茄918、白果強(qiáng)豐)穴施不同劑量10億活芽孢/克枯草芽孢桿菌可濕性粉劑的株高與空白對(duì)照之間無(wú)顯著差異。
綜上所述，供試藥劑10億活芽孢/克枯草芽孢桿菌可濕性粉劑，在試驗(yàn)劑量下對(duì)番茄安全，未發(fā)現(xiàn)對(duì)番茄生長(zhǎng)有何不良影響。
實(shí)施例二：枯草芽孢桿菌可濕性粉劑防治番茄黃萎病室內(nèi)生物活性測(cè)定。
本實(shí)施例的目的是明確枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)番茄黃萎病室內(nèi)生物活性，確定藥劑的最佳使用劑量和合理的使用技術(shù)。
本實(shí)施例的供試靶標(biāo)為番茄黃萎病菌(verticillium dahlia)，單孢純化后保存于4℃冰箱，在PDA平板培養(yǎng)基于25℃恒溫箱活化培養(yǎng)7天后備用。
本實(shí)施例的培養(yǎng)條件如下：選用由北京碩源種子有限公司生產(chǎn)(市購(gòu))的奧賽特968的番茄品種。整個(gè)實(shí)驗(yàn)在日光溫室內(nèi)開展，白天溫度控制在25-32℃，晚間溫度控制在15-22℃。晴天用遮陽(yáng)網(wǎng)遮陰，陰天用日光燈補(bǔ)光，保證番茄植株的正常生長(zhǎng)。育苗基質(zhì)選用壽光市農(nóng)豐育苗基質(zhì)廠生產(chǎn)的富養(yǎng)基質(zhì)。
本實(shí)施例的供試藥劑為利用枯草芽孢桿菌HMB19198生產(chǎn)的微生物菌劑，該微生物菌劑的活性成分為枯草芽孢桿菌HMB19198芽孢和它的胞外代謝產(chǎn)物。本實(shí)施例使用科綠豐生化科技有限公司以枯草芽孢桿菌HMB19198芽孢生產(chǎn)的10億活芽孢/克枯草芽孢桿菌可濕性粉劑；對(duì)照藥劑選用由山東綠豐農(nóng)藥有限公司生產(chǎn)的50％多·福可濕性粉劑。
本實(shí)施例的試驗(yàn)處理如下：
該試驗(yàn)設(shè)7個(gè)處理，其中供試藥劑10億活芽孢/克枯草芽孢桿菌可濕性粉劑設(shè)置5個(gè)劑量，對(duì)照藥劑50％多·?？蓾裥苑蹌┰O(shè)置1個(gè)劑量，另設(shè)空白對(duì)照，各處理及劑量見表1。
表7枯草芽孢桿菌可濕性粉劑防治番茄黃萎病盆栽試驗(yàn)處理及使用劑量
本實(shí)施例每個(gè)處理重復(fù)4次，每個(gè)重復(fù)30棵番茄苗，均為在番茄苗生長(zhǎng)至3-4片復(fù)葉移栽時(shí)一次性穴施給藥。
接下來(lái)進(jìn)行試驗(yàn)準(zhǔn)備及處理：首先為育苗，選用富養(yǎng)基質(zhì)育苗土，高壓蒸汽滅菌2小時(shí)，以鋪滿育苗土的育苗盤作為底盤，育苗盤內(nèi)每穴定制1株番茄苗，培養(yǎng)至3-4片復(fù)葉時(shí)備用。其次是帶菌土壤的準(zhǔn)備，將番茄黃萎病菌菌絲塊接種在PDB培養(yǎng)皿中，在28℃，170轉(zhuǎn)/分培養(yǎng)4天，過(guò)濾菌絲得到分生孢子，接入無(wú)菌育苗基質(zhì)中，混勻，使得土壤中黃萎病菌分生孢子含量達(dá)到106個(gè)/克土壤。最后是試驗(yàn)處理，將帶菌土壤裝入直接15厘米的花盆，按照處理劑量在花盆中定植番茄苗的位置施入10億活芽孢/克枯草芽孢桿菌可濕性粉劑或50％多·?？蓾裥苑蹌?，每盆中定植一株番茄苗。移栽時(shí)托起錐形育苗盤使番茄苗根梢斷掉以利于病原菌侵染，然后覆蓋帶菌土壤，并保持溫室正常溫濕度和光照培養(yǎng)，
本實(shí)施例采用的調(diào)查方法如下：參照農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則(二)殺菌劑防治棉花黃萎病田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則方法和農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則(二)殺菌劑種子處理防治棉花苗期病害田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則方法，按如下5級(jí)分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行調(diào)查并計(jì)算病情指數(shù)和相對(duì)防病效果。
0級(jí)：無(wú)病植株；
1級(jí)：病株葉片有1/4以下表現(xiàn)典型癥狀；
3級(jí)：病株葉片有1/4-1/2表現(xiàn)典型癥狀；
5級(jí)：病株葉片有1/2-3/4表現(xiàn)典型癥狀；
7級(jí)：病株葉片有3/4以上表現(xiàn)典型癥狀或整株枯死。
病情指數(shù)＝×100
防治效果(％)＝×100
本實(shí)施例的調(diào)查時(shí)間是在當(dāng)空白對(duì)照發(fā)病較重時(shí)(接種后30-50天)對(duì)各處理及空白對(duì)照進(jìn)行黃萎病分級(jí)調(diào)查。然后根據(jù)調(diào)查結(jié)果再計(jì)算病情指數(shù)和相對(duì)防治效果。具體數(shù)據(jù)如下表：
表8枯草芽孢桿菌可濕性粉劑穴施防治番茄黃萎病盆栽試驗(yàn)數(shù)據(jù)
從上述的本實(shí)施例數(shù)據(jù)中表明，10億活芽孢/克枯草芽孢桿菌可濕性粉劑5個(gè)處理(按照0.5、1.0、1.5、2.0、2.5g/穴應(yīng)用“枯草芽孢桿菌”可濕性粉劑進(jìn)行穴施)和對(duì)照藥劑50％多·?？蓾裥苑蹌┑?.0g/穴穴施處理都能顯著降低番茄黃萎病的病情指數(shù)。其中應(yīng)用0.5g/穴和1g/穴的藥劑穴施處理防病效果為61.66％和65.00％，與化學(xué)藥劑對(duì)照(防效62.54％)之間差異不顯著；1.5g/穴、2.0g/穴和2.5g/穴的藥劑穴施處理防病效果分別為73.63％、74.50％和77.87％，三者之間差異不顯著，但是顯著高于0.5g/穴、1.0g/穴兩個(gè)劑量和化學(xué)藥劑對(duì)照。該結(jié)果表明10億活芽孢/克枯草芽孢桿菌可濕性粉劑在番茄移栽時(shí)穴施處理能夠有效防治黃萎病，故最佳使用劑量為1.5g/穴和2.5g/穴。
雖然，上文中已經(jīng)用一般性說(shuō)明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明的基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。