利用定位的抗黃萎病QTLs輔助回交聚合優(yōu)質(zhì)育種方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及作物分子育種領(lǐng)域，具體涉及一種利用定位的抗黃萎病QTLs輔助回 交聚合優(yōu)質(zhì)育種方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 新疆棉花生產(chǎn)中存在黃萎病危害嚴(yán)重，尤其是落葉型黃萎病已進(jìn)入重發(fā)期，頻發(fā) 期，嚴(yán)重影響了棉花生產(chǎn)，抗黃萎病性狀為復(fù)雜的數(shù)量遺傳性狀，傳統(tǒng)的表型育種對(duì)棉花抗 黃萎病性狀改良耗時(shí)長(zhǎng)、效率低，投入大。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種利用定位的抗黃萎病QTLs輔助回交聚合優(yōu) 質(zhì)育種方法，利用已標(biāo)記的抗黃萎病性狀基因，通過(guò)分子標(biāo)記輔助選擇回交后代群體，聚合 產(chǎn)量、品質(zhì)性狀，可以解決田間盲目篩選，提高選擇效率，加快新疆棉花抗黃萎病遺傳改良 和高產(chǎn)的品種培育進(jìn)程。使陸地棉的抗黃萎病性進(jìn)一步提高，實(shí)現(xiàn)新疆棉花品質(zhì)和產(chǎn)量同 步提尚。
[0004] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：
[0005] 利用定位的抗黃萎病QTLs輔助回交聚合優(yōu)質(zhì)育種方法，包括如下步驟：
[0006] S1、遺傳圖譜構(gòu)建
[0007] S11、應(yīng)用920對(duì)SSR引物對(duì)試驗(yàn)組合的親本進(jìn)行分子標(biāo)記的多態(tài)性篩選，得到多 態(tài)性引物85對(duì)；
[0008] S12、利用Mapmaker/Exp3. Ob軟件構(gòu)建遺傳連鎖圖譜，68個(gè)標(biāo)記位點(diǎn)中，41個(gè)位點(diǎn) 分布在12個(gè)連鎖群上，總長(zhǎng)495. 9cM，覆蓋棉花基因組9. 8%，標(biāo)記間平均距離12. lcM，最長(zhǎng) 連鎖群為86. 5cM，包含4個(gè)標(biāo)記；最短連鎖群為8. 5cM，包含2個(gè)標(biāo)記，標(biāo)記之間遺傳距離最 小為3. 4cM，最大為49. 7cM ;其余27個(gè)標(biāo)記未進(jìn)入任何連鎖群；
[0009] S2、抗黃萎病QTLs定位
[0010] S21、構(gòu)建抗枯萎病高感黃萎病品系A(chǔ)Y4抗黃萎病陸地棉品系TH23雜交的F2、F2 : 3代群體，共180個(gè)株系；
[0011] S22、利用完備區(qū)間作圖法，構(gòu)建11個(gè)遺傳連鎖群，對(duì)棉花抗黃萎病相關(guān)性狀進(jìn)行 了 QTL定位，總共檢測(cè)到了 4個(gè)與纖維品質(zhì)相關(guān)的QTL，分布于第12、20、21、24染色體上， LOD值變異范圍為2. 79~8. 39, 2個(gè)抗黃萎病性狀相關(guān)主效QTL，qVVl、qVV2定位在第21、 24染色體上；
[0012] S3、針對(duì)AY4XTH23抗黃萎病回交群體，利用與抗黃萎病緊密連鎖分子標(biāo)記輔助 選擇目標(biāo)基因，得到2個(gè)與抗黃萎病緊密連鎖的SSR標(biāo)記TMB2295, NAU913,在此13(：3回交 群體的生育早期，采用上述標(biāo)記對(duì)各個(gè)單株進(jìn)行檢測(cè)，選取帶型與TH23帶型一致的單株， 在苗期和花鈴期詳細(xì)鑒定黃萎病病指；
[0013] S4、篩選獲得不同核心種質(zhì)資源材料20份
[0014] 通過(guò)分子標(biāo)記輔助選擇優(yōu)質(zhì)、抗病回交群體，將優(yōu)質(zhì)、抗逆境優(yōu)良性狀進(jìn)行聚合， 獲得抗黃萎病材料1份，耐枯黃萎病材料4份，其中B7為抗黃萎病材料，B13、B28、B34、B78 耐黃萎病，抗枯萎病材料6份，其中B7、B78為高抗枯萎病。
[0015] 其中，所述多態(tài)性引物85對(duì)中共顯性標(biāo)記68個(gè)，占多態(tài)標(biāo)記的80. 0%。
[0016] 本發(fā)明具有以下有益效果：
[0017] 通過(guò)抗病性狀QTLs輔助篩選回交聚合修飾群體株系的纖維品質(zhì)性狀，創(chuàng)制出具 有不同標(biāo)記性狀的核心種質(zhì)系，為棉花抗黃萎病遺傳改良提供更有價(jià)值的核心資源，驗(yàn)證 篩選抗病性狀穩(wěn)定的QTL位點(diǎn)，采用穩(wěn)定、快速的檢測(cè)技術(shù)，結(jié)合田間的性狀和實(shí)驗(yàn)室品質(zhì) 測(cè)試結(jié)果，進(jìn)行對(duì)比分析，大規(guī)模篩選后代材料。降低陸地棉抗病育種的經(jīng)濟(jì)成本，使分子 標(biāo)記輔助育種能夠大規(guī)模地和快速的應(yīng)用，改良新疆陸地棉抗黃萎病特性，創(chuàng)新棉花新材 料和新品種。
【附圖說(shuō)明】
[0018] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例一種利用定位的抗黃萎病QTLs輔助回交聚合優(yōu)質(zhì)育種方法 中步驟Sl和S2的流程圖。
[0019] 圖2為本發(fā)明實(shí)施例一種利用定位的抗黃萎病QTLs輔助回交聚合優(yōu)質(zhì)育種方法 中遺傳圖譜的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0020] 圖3為本發(fā)明實(shí)施例一種利用定位的抗黃萎病QTLs輔助回交聚合優(yōu)質(zhì)育種方法 中步驟S3的流程圖。
[0021] 圖4為本發(fā)明實(shí)施例一種利用定位的抗黃萎病QTLs輔助回交聚合優(yōu)質(zhì)育種方法 中與TH23帶型（TMB2295) -致的單株的示意圖。
[0022] 圖5為本發(fā)明實(shí)施例一種利用定位的抗黃萎病QTLs輔助回交聚合優(yōu)質(zhì)育種方法 中與TH23帶型（NAU913) -致的單株的示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 為了使本發(fā)明的目的及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步 詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā) 明。
[0024] 實(shí)施例
[0025] S1、如圖1所示，構(gòu)建遺傳圖譜
[0026] 應(yīng)用920對(duì)SSR引物對(duì)試驗(yàn)組合的親本進(jìn)行分子標(biāo)記的多態(tài)性篩選，得到多態(tài)性 引物85對(duì)。其中共顯性標(biāo)記68個(gè)，占多態(tài)標(biāo)記的80. 0%。進(jìn)一步利用Mapmaker/Exp3. Ob 軟件構(gòu)建遺傳連鎖圖譜。68個(gè)標(biāo)記位點(diǎn)中，41個(gè)位點(diǎn)分布在12個(gè)連鎖群上，總長(zhǎng)495. 9cM， 覆蓋棉花基因組9. 8%。標(biāo)記間平均距離12. lcM。最長(zhǎng)連鎖群為86. 5cM，包含4個(gè)標(biāo)記； 最短連鎖群為8. 5cM，包含2個(gè)標(biāo)記。標(biāo)記之間遺傳距離最小為3. 4cM，最大為49. 7cM。其 余27個(gè)標(biāo)記未進(jìn)入任何連鎖群。（見(jiàn)表1，圖3)
[0027] 表1 23 X AY4群體抗黃萎病性狀的QTL
[0028]
[0029] 表中，Add :加性效應(yīng)；dom :顯性效應(yīng)；D表示dom/|add| ;
[0030] S2、抗黃萎病QTLs定位
[0031] 構(gòu)建抗枯萎病高感黃萎病品系A(chǔ)Y4抗黃萎病陸地棉品系TH23雜交的F2、F2 :3代 群體（180個(gè)株系），利用完備區(qū)間作圖法，構(gòu)建了 11個(gè)遺傳連鎖群，對(duì)棉花抗黃萎病相關(guān)性 狀進(jìn)行了 QTL定位，總共檢測(cè)到了 4個(gè)與抗黃萎病相關(guān)的QTL，分布于第12、20、21、24染色 體上，LOD值變異范圍為2. 79~8. 39 ;2個(gè)抗黃萎病性狀相關(guān)主效QTL，qVVl、qVV2定位在 第21、24染色體上，這些在不同研宄群體和不同環(huán)境下檢