本發(fā)明涉及抗菌劑和飲食品中的細(xì)菌增殖抑制方法。
背景技術(shù)：
用于飲食品等的天然植物中已知有含有抗菌性成分的天然植物，從食品安全性的觀點(diǎn)出發(fā)，優(yōu)選使用這些天然植物作為飲食品的抗菌劑。例如，自古以來在啤酒制造中使用的蛇麻(大麻科)已知其提取物具有抗菌作用。蛇麻提取物的抗菌性源于作為蛇麻的苦味成分的α酸(律草酮)和β酸(蛇麻酮)(例如參考專利文獻(xiàn)1和2)。
另外，傘形科植物明日葉(angelicakeiskei)在味道方面具有獨(dú)特的特點(diǎn)，除了做成黃油炒菜、天婦羅等來食用以外，一直以來還作為中草藥使用，已知其還具有抗菌作用。明日葉的抗菌性源于查耳酮類(黃當(dāng)歸醇、4-羥基德里辛等)和香豆素類(例如參考專利文獻(xiàn)3和4)。
另外，藤黃科植物山竹(mangosteen：garciniamangostana)的果實(shí)可食用，特別是其果皮具有特有的強(qiáng)烈芳香，另外，已知有包括抗菌作用在內(nèi)的藥效。山竹的效果源于呫噸酮(xanthones)和呫噸酮衍生物(例如α-山竹黃酮)(例如參考專利文獻(xiàn)5)。
除此之外，作為植物的提取物，已知石榴(千屈菜科)的果實(shí)提取物也具有由多酚類產(chǎn)生的抗菌作用(參考專利文獻(xiàn)6和7)，在用于飲食品的情況下，作為提取物，認(rèn)為需要約100ppm。
但是，由于這些具有抗菌性的有效成分具有特有的苦味或異味，因此在風(fēng)味、鮮味受重視的飲食品或偏好淡口的飲食品中的使用受到量上的限制。
另一方面，如果考慮對飲食品的風(fēng)味、鮮味的影響而限制飲食品中的抗菌性成分的使用量，則有可能腐敗或變質(zhì)。另外，細(xì)菌之中，芽孢桿菌、特別是耐熱性芽孢桿菌有時在食品衛(wèi)生法規(guī)定的一般的加熱條件下無法充分滅菌，特別是對于在加熱后適合于芽孢桿菌增殖的條件下的飲食品而言，加熱以外的抗菌方法很重要。
作為在降低蛇麻提取物的臭氣的同時抑制革蘭氏陽性細(xì)菌的生長的方法，已知有與非油溶性唇形科植物提取物并用的方法(參考專利文獻(xiàn)8)。此外，已知有下述示例：通過對豆乳添加蛇麻0.1重量％和辣椒提取物0.1重量％，或者添加由辣根提取的抗菌性物質(zhì)0.1重量％、辣椒提取物0.1重量％和山竹果皮提取物0.1重量％，與單獨(dú)的蛇麻或單獨(dú)的辣根相比，提高了防腐性(專利文獻(xiàn)9、專利文獻(xiàn)10)。
現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
專利文獻(xiàn)
專利文獻(xiàn)1：日本特開2005-137241號
專利文獻(xiàn)2：日本專利第4395354號公報
專利文獻(xiàn)3：日本專利第4643934號公報
專利文獻(xiàn)4：日本特開平04-202130號公報
專利文獻(xiàn)5：日本特開平09-095453號公報
專利文獻(xiàn)6：日本特開2005-154323號
專利文獻(xiàn)7：日本特表平09-510190號公報
專利文獻(xiàn)8：日本專利第5554908號公報
專利文獻(xiàn)9：日本特開平06-098738號公報
專利文獻(xiàn)10：日本特開平06-153882號公報
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
發(fā)明所要解決的問題
本發(fā)明的目的在于提供不會由于添加抗菌性成分所帶來的苦味、異味等而損害飲食品本來的味道或香氣的、適合于飲食品中的細(xì)菌的增殖抑制的抗菌劑；使用該抗菌劑的飲食品中的細(xì)菌的增殖抑制方法；和細(xì)菌的增殖受到抑制的飲食品。
用于解決問題的手段
本發(fā)明包含下述(1)～(12)的發(fā)明。
(1)一種抗菌劑，其含有含β酸的蛇麻或其提取物以及石榴或其提取物作為有效成分。
(2)一種飲食品中的細(xì)菌的增殖抑制方法，其特征在于，在飲食品中，以使該飲食品中的β酸的含量為0.1ppm以上的方式含有含β酸的蛇麻或其提取物，并且，以使該飲食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量計為1ppm以上的方式含有石榴或其提取物。
(3)一種飲食品的制造方法，其特征在于，包括在飲食品中以使該飲食品中的β酸的含量為0.1ppm以上的方式含有含β酸的蛇麻或其提取物，并且，以使該飲食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量計為1ppm以上的方式含有石榴或其提取物的工序。
(4)一種飲食品，其通過上述(3)的方法得到。
(5)一種抗菌劑，其含有含查耳酮類的明日葉或其提取物以及石榴或其提取物作為有效成分。
(6)一種飲食品中的細(xì)菌的增殖抑制方法，其特征在于，在飲食品中，以使該飲食品中的查耳酮的含量為0.1ppm以上的方式含有含查耳酮類的明日葉或其提取物，并且，以使該飲食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量計為1ppm以上的方式含有石榴或其提取物。
(7)一種飲食品的制造方法，其特征在于，包括在飲食品中以使該飲食品中的查耳酮的含量為0.1ppm以上的方式含有含查耳酮類的明日葉或其提取物，并且，以使該飲食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量計為1ppm以上的方式含有石榴或其提取物的工序。
(8)一種飲食品，其通過上述(7)的方法得到。
(9)一種抗菌劑，其含有含α-山竹黃酮的山竹或其提取物以及石榴或其提取物作為有效成分。
(10)一種飲食品中的細(xì)菌的增殖抑制方法，其特征在于，在飲食品中，以使該飲食品中的α-山竹黃酮的含量為0.05ppm以上的方式含有含α-山竹黃酮的山竹或其提取物，并且，以使該飲食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量計為1ppm以上的方式含有石榴或其提取物。
(11)一種飲食品的制造方法，其特征在于，包括在飲食品中以使該飲食品中的α-山竹黃酮的含量為0.05ppm以上的方式含有含α-山竹黃酮的山竹或其提取物，并且，以使該飲食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量計為1ppm以上的方式含有石榴或其提取物的工序。
(12)一種飲食品，其通過上述(11)的方法得到。
本申請要求2014年12月22日提交的日本專利申請2014-258844號的優(yōu)先權(quán)，包含該專利申請的說明書中記載的內(nèi)容。
發(fā)明效果
根據(jù)本發(fā)明，提供適合于飲食品中的細(xì)菌的增殖抑制的抗菌劑、使用該抗菌劑的飲食品中的細(xì)菌的增殖抑制方法、和細(xì)菌的增殖受到抑制的飲食品。本發(fā)明的抗菌劑即使減少作為有效成分的抗菌性成分的含量，也可對芽孢桿菌等細(xì)菌發(fā)揮優(yōu)良的抗菌活性，因此不會由于來源于抗菌性成分的苦味、異味等而損害飲食品本來的味道或香氣。因此，本發(fā)明的抗菌劑能夠適合使用特別重視風(fēng)味、鮮味的飲食品或偏好淡口的飲食品。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明的第一方式的抗菌劑為含有含β酸的蛇麻或其提取物以及石榴或其提取物作為有效成分的組合物。
本發(fā)明中使用的蛇麻只要是至少含有β酸的蛇麻，則可以使用任意一種蛇麻，其品種沒有特別限定，可以列舉例如比侖(bullion)、金釀(brewersgold)、卡斯卡特(cascade)、奇努克(chinook)、格林特斯(cluster)、東肯特格爾丁(eastkentgolding)、福格爾(fuggles)、哈拉道爾(hallertau)、胡德峰(mounthood)、北釀(northanbrewer)、佩勒(perle)、薩茲(saaz)、斯蒂萊恩(styrian)、泰特楠捷(tettnanger)和威廉麥特(willamette)等。
作為蛇麻的部位，也可以使用葉、莖、根等，但通常使用球花。球花可以直接使用，也可以使用進(jìn)行干燥處理、粉碎處理等物理處理而得到的干燥物、粉碎物。以下，在本說明書中，將它們合并起來簡稱為“蛇麻”。
由蛇麻進(jìn)行的提取物的制備例如可以通過使用水、甲醇、乙醇、丙醇和丁醇等碳原子數(shù)1～4的低級醇、乙酸乙酯等低級烷基酯、乙二醇、丁二醇、丙二醇、甘油等二醇類、以及丙酮、乙酸等極性溶劑、苯、環(huán)己烷等烴、乙醚、石油醚等醚類等非極性溶劑的公知的有機(jī)溶劑、超臨界二氧化碳等的常規(guī)方法來進(jìn)行。這些溶劑可以單獨(dú)使用，也可以組合使用兩種以上。
作為溶劑，可以使用上述中的任意一種，但優(yōu)選乙醇和超臨界二氧化碳。在使用乙醇的情況下，通常使用水和乙醇的任意比率的混合溶劑。該混合溶劑中的乙醇濃度為1～99.9容量％、優(yōu)選為2～60容量％、更優(yōu)選為5～30容量％。
對于提取中使用的溶劑量、提取溫度、提取時間等沒有特別限制，按照β酸在提取操作后得到的提取物中含有1重量％以上、優(yōu)選10重量％以上的方式適當(dāng)設(shè)定條件即可。
提取操作后得到的蛇麻提取物可以直接使用，也可以供于濃縮處理、干燥處理等，分別制成濃縮物和干燥物來使用。
本發(fā)明中，蛇麻提取物可以通過上述方法來制備，也可以使用市售的蛇麻提取物。作為市售的蛇麻提取物，可以列舉例如“betastab”(ベータテック公司制；含有10重量％的β酸)、“betaaromextract”(斯丹納酒花公司制；含有41重量％的β酸)。
作為石榴的部位，可以使用葉、莖、根等，但優(yōu)選使用果實(shí)部分。以下，在本說明書中，將它們合并起來簡稱為“石榴”。
石榴可以直接用于本發(fā)明，也可以使用進(jìn)行干燥處理、粉碎處理等物理處理而得到的干燥物、粉碎物。
由石榴進(jìn)行的提取物的制備可以按照由蛇麻進(jìn)行的提取物的制備來進(jìn)行，作為提取中使用的溶劑，優(yōu)選水、乙醇和超臨界二氧化碳。在使用乙醇的情況下，通常使用水和乙醇的任意比率的混合溶劑。該混合溶劑中的乙醇濃度為1～99.9容量％、優(yōu)選為2～60容量％、更優(yōu)選為5～30容量％。
對于提取中使用的溶劑量、提取溫度、提取時間等沒有特別限制，按照提取操作后得到的提取物中的總多酚類以干燥重量計含有10重量％以上、優(yōu)選含有30重量％、更優(yōu)選含有40重量％以上的方式設(shè)定條件即可。
提取操作后得到的石榴提取物可以直接使用，也可以供于濃縮處理、干燥處理等，分別制成濃縮物和干燥物來使用。
本發(fā)明中，石榴提取物可以通過上述方法制備，也可以使用市售的石榴提取物。作為市售的石榴提取物，可以列舉例如石榴果實(shí)提取物“ポメラ”(omnica公司制)、“石榴提取物粉末”(ヴィディヤ·ジャパン公司制)。
作為本發(fā)明的抗菌劑中的有效成分的蛇麻或其提取物與石榴或其提取物的含有比例只要能發(fā)揮本發(fā)明的效果，則沒有特別限定，以重量比計為99:1～1:99、優(yōu)選為90:10～10:90、更優(yōu)選為70:30～50:50。
本發(fā)明的第二方式的抗菌劑為含有含查耳酮類的明日葉或其提取物以及石榴或其提取物作為有效成分的組合物。
本發(fā)明中使用的明日葉只要是至少含有查耳酮類的明日葉，則任意一種明日葉均可以使用，其品種沒有特別限定。作為明日葉的部位，可以使用葉、莖、根等，也可以使用其加工物、例如進(jìn)行干燥處理、粉碎處理等物理處理而得到的干燥物、粉碎物。以下，在本說明書中，將它們合并起來簡稱為“明日葉”。
由明日葉進(jìn)行的提取物的制備例如可以通過使用水、甲醇、乙醇、丙醇和丁醇等碳原子數(shù)1～4的低級醇、乙酸乙酯等低級烷基酯、乙二醇、丁二醇、丙二醇、甘油等二醇類、以及丙酮、乙酸等極性溶劑、苯、環(huán)己烷等烴、乙醚、石油醚等醚類等非極性溶劑的公知的有機(jī)溶劑、超臨界二氧化碳等的常規(guī)方法來進(jìn)行。這些溶劑可以單獨(dú)使用，也可以組合使用兩種以上。
對于提取中使用的溶劑量、提取溫度、提取時間等沒有特別限制，按照查耳酮類在提取操作后得到的提取物中含有1重量％以上、優(yōu)選3重量％以上的方式適當(dāng)設(shè)定條件即可。
提取操作后得到的明日葉提取物可以直接使用，也可以供于濃縮處理、干燥處理等，分別制成濃縮物和干燥物來使用。
本發(fā)明中，明日葉提取物可以通過上述方法來制備，也可以使用市售的明日葉提取物。作為市售的明日葉提取物，可以列舉例如“明日葉多酚chalsap-p8”(日本生物科學(xué)研究所公司制；總查耳酮類含量8重量％以上)。
另外，作為另一種有效成分的石榴的定義和石榴的提取物的制備方法如上所述。
本發(fā)明的第三方式的抗菌劑為含有含α-山竹黃酮的山竹或其提取物以及石榴或其提取物作為有效成分的組合物。
本發(fā)明中使用的山竹只要是至少含有α-山竹黃酮的山竹，則任意一種山竹均可以使用，其品種沒有特別限定。作為山竹的部位，也可以使用果實(shí)、果皮、葉、莖、根等，優(yōu)選為含有大量α-山竹黃酮的果皮。另外，可以使用山竹的任意部位，也可以使用其加工物、例如進(jìn)行干燥處理、粉碎處理等物理處理而得到的干燥物、粉碎物。以下，在本說明書中，將它們合并起來簡稱為“山竹”。
由山竹進(jìn)行的提取物的制備例如可以通過使用水、甲醇、乙醇、丙醇和丁醇等碳原子數(shù)1～4的低級醇、乙酸乙酯等低級烷基酯、乙二醇、丁二醇、丙二醇、甘油等二醇類、以及丙酮、乙酸等極性溶劑、苯、環(huán)己烷等烴、乙醚、石油醚等醚類等非極性溶劑的公知的有機(jī)溶劑、超臨界二氧化碳等的常規(guī)方法來進(jìn)行。這些溶劑可以單獨(dú)使用，也可以組合使用兩種以上。
對于提取中使用的溶劑量、提取溫度、提取時間等沒有特別限制，按照α-山竹黃酮在提取操作后得到的提取物中含有2重量％以上、優(yōu)選5重量％以上、更優(yōu)選10重量％以上的方式適當(dāng)設(shè)定條件即可。
提取操作后得到的山竹提取物可以直接使用，也可以供于濃縮處理、干燥處理等，分別制成濃縮物和干燥物來使用。
本發(fā)明中，山竹提取物可以通過上述方法來制備，也可以使用市售的山竹提取物。作為市售的山竹提取物，可以列舉例如“山竹提取物”(バイオアクティブズジャパン公司制；α-山竹黃酮含量10重量％和20重量％)。
另外，作為另一種有效成分的石榴的定義和石榴的提取物的制備方法如上所述。
本發(fā)明的抗菌劑的制備除了含有上述有效成分以外，可以通過常規(guī)方法進(jìn)行。另外，只要不妨礙其效果，除了上述有效成分以外，本發(fā)明的抗菌劑可以根據(jù)需要含有食品衛(wèi)生學(xué)上可接受的添加劑等。作為該添加劑，可以列舉例如防腐劑、抗氧化劑、增稠穩(wěn)定劑、乳化劑(甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯等)、食物纖維、ph調(diào)節(jié)劑、以及保存性改良劑(甘氨酸、乙醇等)等。
本發(fā)明的抗菌劑的形態(tài)可以為液狀、半液體狀、固體狀的任意一種形態(tài)。作為固體狀，可以為粉體、粒體和粉粒體的任意一種。
本發(fā)明的抗菌劑可發(fā)揮抑制導(dǎo)致飲食品腐敗、變質(zhì)的細(xì)菌、特別是芽孢桿菌的增殖的效果，因此能夠用于飲食品中的細(xì)菌的增殖抑制方法。本發(fā)明的飲食品中的細(xì)菌的增殖抑制方法只要是使期望抑制細(xì)菌、特別是芽孢桿菌的增殖的飲食品中含有本發(fā)明的抗菌劑的方法，則可以為任意的方法，可以列舉在制造上述飲食品時作為原料的一部分進(jìn)行添加的方法、在使用(包括流通、銷售階段)上述飲食品時進(jìn)行添加的方法等。
增殖受到本發(fā)明的抗菌劑的抑制的細(xì)菌是導(dǎo)致飲食品發(fā)生腐敗、變質(zhì)的芽孢桿菌(產(chǎn)孢菌)、特別是耐熱性芽孢桿菌，厭氧性芽孢桿菌和需氧性芽孢桿菌均包含在內(nèi)。作為芽孢桿菌，可以列舉屬于芽孢桿菌(bacillus)屬、芽孢乳桿菌(sporolactobacillus)屬、梭菌(clostridium)屬、芽孢八疊球菌(sporosarcina)屬、脂環(huán)酸芽孢桿菌(alicyclobacillus)屬等的微生物，優(yōu)選列舉屬于芽孢桿菌(bacillus)屬的微生物。作為屬于芽孢桿菌屬的微生物，可以列舉蠟樣芽孢桿菌(bacilluscereus)、地衣芽孢桿菌(bacilluslicheniformis)、巨大芽孢桿菌(bacillusmegaterium)、斯密氏芽孢桿菌(bacillussmithii)、嗜熱脂肪芽孢桿菌(bacillusstearothermophilius)、枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)、沙氏芽孢桿菌(bacillusshackletonii)、解淀粉芽孢桿菌(bacillusamyloliquefaciens)、凝結(jié)芽孢桿菌(bacilluscoagulans)等。
在飲食品中含有本發(fā)明的第一方式的抗菌劑的情況下，以使飲食品中的β酸的含量為0.1ppm以上、優(yōu)選為0.5ppm以上的方式含有蛇麻或其提取物，并且，以使飲食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量計為1ppm以上的方式含有石榴或其提取物。
另一方面，飲食品中含有的蛇麻或其提取物以及石榴或其提取物量的上限量從細(xì)菌的增殖抑制效果的觀點(diǎn)出發(fā)沒有特別限定，但優(yōu)選為不會給本發(fā)明的特長之一、即重視風(fēng)味、鮮味的飲食品或偏好淡口的飲食品的風(fēng)味帶來不良影響的量。例如，蛇麻或其提取物優(yōu)選為使飲食品中的β酸的含量小于10ppm的量，石榴或其提取物優(yōu)選為使飲食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量計小于50ppm的量。
因此，本發(fā)明的抗菌劑中的蛇麻或其提取物以及石榴或其提取物的含量根據(jù)本發(fā)明的抗菌劑向飲食品中的添加量進(jìn)行適當(dāng)設(shè)定即可。例如，在假設(shè)相對于飲食品100重量份添加本發(fā)明的抗菌劑1重量份的情況下，該抗菌劑中的蛇麻或其提取物為使該抗菌劑中的β酸的含量為10ppm以上、優(yōu)選為50ppm以上的量，該抗菌劑中的石榴或其提取物的含量為以干燥重量計為100ppm以上的量。
在飲食品中含有本發(fā)明的第二方式的抗菌劑的情況下，以使飲食品中的查耳酮類的含量為0.1ppm以上、優(yōu)選為0.5ppm以上的方式含有明日葉或其提取物，并且，以使飲食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量計為1ppm以上的方式含有石榴或其提取物。
另一方面，飲食品中含有的明日葉或其提取物以及石榴或其提取物量的上限量從細(xì)菌的增殖抑制效果的觀點(diǎn)出發(fā)沒有特別限定，但優(yōu)選為不會給本發(fā)明的特長之一、即重視風(fēng)味、鮮味的飲食品或偏好淡口的飲食品的風(fēng)味帶來不良影響的量。例如，明日葉或其提取物優(yōu)選為使飲食品中的查耳酮類的含量小于200ppm的量，更優(yōu)選為使飲食品中的查耳酮類的含量小于150ppm的量，進(jìn)一步優(yōu)選為使飲食品中的查耳酮類的含量小于100ppm的量，石榴或其提取物優(yōu)選為使飲食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量計小于50ppm的量。
因此，本發(fā)明的抗菌劑中的明日葉或其提取物以及石榴或其提取物的含量根據(jù)本發(fā)明的抗菌劑向飲食品中的添加量進(jìn)行適當(dāng)設(shè)定即可。例如，在假設(shè)相對于飲食品100重量份添加本發(fā)明的抗菌劑1重量份的情況下，該抗菌劑中的明日葉或其提取物為使該抗菌劑中的查耳酮類的含量為10ppm以上、優(yōu)選為50ppm以上的量，該抗菌劑中的石榴或其提取物的含量為以干燥重量計為100ppm以上的量。
在飲食品中含有本發(fā)明的第三方式的抗菌劑的情況下，以使飲食品中的α-山竹黃酮的含量為0.05ppm以上、優(yōu)選為0.1ppm以上、更優(yōu)選為0.15ppm以上的方式含有山竹或其提取物，并且，以使飲食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量計為1ppm以上的方式含有石榴或其提取物。
另一方面，飲食品中含有的山竹或其提取物以及石榴或其提取物量的上限量從細(xì)菌的增殖抑制效果的觀點(diǎn)出發(fā)沒有特別限定，但優(yōu)選為不會給本發(fā)明的特長之一、即重視風(fēng)味、鮮味的飲食品或偏好淡口的飲食品的風(fēng)味帶來不良影響的量。例如，山竹或其提取物優(yōu)選為使飲食品中的α-山竹黃酮的含量小于200ppm的量，更優(yōu)選為使飲食品中的α-山竹黃酮的含量小于150ppm的量，進(jìn)一步優(yōu)選為使飲食品中的α-山竹黃酮的含量小于100ppm的量，石榴或其提取物優(yōu)選為使飲食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量計小于50ppm的量。
因此，本發(fā)明的抗菌劑中的山竹或其提取物以及石榴或其提取物的含量根據(jù)本發(fā)明的抗菌劑向飲食品中的添加量進(jìn)行適當(dāng)設(shè)定即可。例如，在假設(shè)相對于飲食品100重量份添加本發(fā)明的抗菌劑1重量份的情況下，該抗菌劑中的山竹或其提取物優(yōu)選為使該抗菌劑中的α-山竹黃酮的含量為5ppm以上、優(yōu)選為10ppm以上、更優(yōu)選為15ppm以上的量，該抗菌劑中的石榴或其提取物的含量為以干燥重量計為100ppm以上的量。
作為使用本發(fā)明的抗菌劑的對象的飲食品只要是期望抑制細(xì)菌的增殖的飲食品，則沒有特別限定，可以列舉例如豆醬、醬油、味醂、湯底(關(guān)東煮湯底、火鍋湯底、面條湯底等)、含醇發(fā)酵調(diào)味料、蛋黃醬、調(diào)味醬、柚子醋等調(diào)味料、烤肉的醬汁等醬汁、番茄肉醬、番茄醬、奶油醬等醬料、濃湯、法式清湯等湯、燉牛肉、咖喱、拉面、大醬湯、佃煮、煮菜、肉包、餃子、漢堡等調(diào)理食品、辣白菜、醬菜、魚糕、香腸、冷凍食品、蒸煮袋食品、糕點(diǎn)、面包、米飯、炒飯等加工食品等飲食品。其中，優(yōu)選重視風(fēng)味、鮮味的飲食品、偏好淡口的飲食品、或長時間暴露于適合芽孢桿菌增殖的條件的飲食品。作為長時間暴露于適合芽孢桿菌增殖的條件中的飲食品，可以列舉例如熱飲售貨機(jī)中提供的飲料、湯汁(大醬湯、豬肉醬湯、關(guān)東煮等)、咖喱、燉菜等。
作為本發(fā)明的飲食品中的細(xì)菌的增殖抑制方法，除了如上所述在飲食品中含有本發(fā)明的抗菌劑的方法以外，還可以按照在飲食品中共存有蛇麻或其提取物以及石榴或其提取物的方式、或者在飲食品中共存有明日葉或其提取物以及石榴或其提取物的方式、在飲食品中共存有山竹或其提取物以及石榴或其提取物的方式分別進(jìn)行添加。
作為本發(fā)明的飲食品的制造方法，可以列舉下述方法：包括在飲食品中含有本發(fā)明的抗菌劑、或分別含有蛇麻或其提取物以及石榴或其提取物的工序；或者在飲食品中分別含有明日葉或其提取物以及石榴或其提取物的工序；或者在飲食品中分別含有山竹或其提取物以及石榴或其提取物的工序，除此以外，依照各飲食品的通常的制造方法來制造。在飲食品中含有本發(fā)明的抗菌劑的工序中，該抗菌劑在飲食品中的含量以上述的飲食品中的細(xì)菌的增殖抑制方法的情況為基準(zhǔn)。
以下，利用實(shí)施例更具體地對本發(fā)明進(jìn)行說明，但這些實(shí)施例不對本發(fā)明進(jìn)行限定。
實(shí)施例
(實(shí)施例1)
在nb培養(yǎng)基(在水1l中含有細(xì)菌蛋白胨5g、牛肉提取物粉末3g)中添加葡萄糖以使其達(dá)到1重量％，制備培養(yǎng)基。在滅菌后的5ml用l型管中各分裝該培養(yǎng)基4.85ml，加入預(yù)先制備的蛇麻提取物(ベータテック公司制“betastab”；含有10％的β酸)和石榴提取物(omnica公司制“ポメラ”；多酚總量50％)的水溶液各50μl，制備表1所示組成的培養(yǎng)基1～8。對照設(shè)定為未添加蛇麻提取物和石榴提取物的培養(yǎng)基(對照培養(yǎng)基)。
[表1]
各培養(yǎng)基中的蛇麻提取物和石榴提取物含量
另外，將枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)nbrc3134株在yna培養(yǎng)基(在1l水中含有difco營養(yǎng)肉湯10g、細(xì)菌用酵母提取物3g、瓊脂20g、a液10ml、b液10ml。a液：由氯化錳四水合物2.5g、硫酸錳七水合物25g、硫酸鐵七水合物30mg、0.01當(dāng)量鹽酸1l構(gòu)成。b液：由氯化鈣二水合物15g、0.01當(dāng)量鹽酸1l構(gòu)成。)中在37℃下培養(yǎng)3天，使其形成芽孢。從板上刮取生長的菌體，懸浮到滅菌水中后，在75℃下溫浴30分鐘。熱水浴后，進(jìn)行離心分離，用新的滅菌水將所得到的沉淀物通過離心分離清洗幾次。將所得到的沉淀物作為芽孢，懸浮在滅菌水中，得到1×107個/ml的芽孢懸濁液(以下稱為芽孢液)。
將該芽孢液向所制備的對照培養(yǎng)基和培養(yǎng)基1～8中分別添加各50μl，設(shè)置于顯微組織光密度記錄器(bio-photorecorder)(advantec公司制“tvs062ca”)中后，在30℃以40rpm進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，以30分鐘的間隔測定o.d.660nm。
將結(jié)果示于表2。表中，“+”表示明顯確認(rèn)到由菌的增殖導(dǎo)致的培養(yǎng)基濁度的升高，“-”表示未明顯確認(rèn)到由菌的增殖導(dǎo)致的培養(yǎng)基濁度的升高。另外，在第20小時與第60小時之間，結(jié)果沒有變動，因此省略了記載。
[表2]
蛇麻提取物和石榴提取物對芽孢桿菌(枯草芽孢桿菌，b.subtilis)的增殖抑制效果
如表2所示，在石榴提取物的情況下，即使在100ppm下也未確認(rèn)到芽孢桿菌的增殖抑制效果(培養(yǎng)基1)，通過與即使為少量(1～5ppm)的蛇麻提取物并用，也確認(rèn)到協(xié)同性的芽孢桿菌的增殖抑制效果(培養(yǎng)基3～5)，其效果在通過增加蛇麻提取物的量所帶來的效果(培養(yǎng)基6～8)之上。
(實(shí)施例2)
(1)芽孢桿菌的增殖抑制試驗
與實(shí)施例1的培養(yǎng)基制備程序同樣地制備培養(yǎng)基中的蛇麻提取物和石榴提取物的濃度為表3所示濃度的培養(yǎng)基2、9、10。
[表3]
各培養(yǎng)基中的蛇麻提取物和石榴提取物含量
使用上述培養(yǎng)基，替代枯草芽孢桿菌(b.subtilis)，通過與實(shí)施例1同樣的方法考察對地衣芽孢桿菌(b.licheniformis)nbrc12200株的增殖抑制效果。將結(jié)果示于表4。
[表4]
蛇麻提取物和石榴提取物對芽孢桿菌(地衣芽孢桿菌，b.licheniformis)的增殖抑制效果
如表4所示，對于枯草芽孢桿菌(b.subtilis)以外的作為芽孢桿菌屬微生物的地衣芽孢桿菌(b.licheniformis)，也同樣地確認(rèn)到通過蛇麻提取物和石榴提取物的并用而產(chǎn)生的協(xié)同性的增殖抑制效果。
(2)風(fēng)味評價試驗
將市售的面條湯底(yamaki公司制；兩倍濃縮型)40ml用水稀釋5倍，填充到帶夾子的塑料袋中。將上述(1)中使用的蛇麻提取物和石榴提取物按照表5記載的含量添加到各面條湯底中。
[表5]
面條湯底中的蛇麻提取物和石榴提取物含量
添加各提取物后，將塑料袋密封，在水浴中加熱至達(dá)到70℃為止后開封，對于剛開封后的味道和香氣，以未添加蛇麻提取物和石榴提取物的面條湯底作為對照進(jìn)行比較。比較試驗由7位熟練的評審員進(jìn)行。將結(jié)果示于表6。表中的數(shù)字表示選擇了各評價的評審員的人數(shù)。
[表6]
各面條湯底的味道和香氣的評價
單位(人)
如表6所示，與無添加的面條湯底相比，對含有10ppm蛇麻的面條湯底1的味道和香氣均感覺到差異的評審員較多，與此相對，蛇麻降低至7ppm并與3ppm的石榴并用的面條湯底3的情況下，未感覺到與無添加的面條湯底的差異評審員較多。
由實(shí)施例1和上述(1)的結(jié)果表明，通過并用蛇麻提取物和石榴提取物，能夠降低各提取物的使用量，結(jié)果，能夠在抑制對面條湯底的味道和香氣的影響的同時，進(jìn)行芽孢桿菌的增殖抑制。
(實(shí)施例3)
作為與蛇麻提取物并用的其他提取物成分，對綠茶提取物粉末和葡萄籽多酚粉末的效果進(jìn)行了考察。與實(shí)施例1的培養(yǎng)基制備程序同樣地制備培養(yǎng)基中的蛇麻提取物、石榴提取物、綠茶提取物粉末(バイオアクティブズジャパン公司制；多酚總量80％)和葡萄籽多酚粉末(バイオアクティブズジャパン公司制；多酚總量70％)的濃度為表7所示濃度的培養(yǎng)基2、9、10、11、12、13、14(各粉末的添加量調(diào)節(jié)為使多酚總量大致等量的量)。
[表7]
各培養(yǎng)基中的蛇麻提取物和其他提取物含量
使用上述培養(yǎng)基，通過與實(shí)施例1同樣的方法考察對枯草芽孢桿菌(b.subtilis)的增殖抑制效果。將結(jié)果示于表8。
[表8]
蛇麻提取物與各提取物并用對芽孢桿菌(枯草芽孢桿菌，b.subtilis)的增殖抑制效果
如表8所示，石榴提取物、綠茶提取物和葡萄籽多酚在單獨(dú)使用的情況下均幾乎未確認(rèn)到枯草芽孢桿菌的增殖抑制效果(培養(yǎng)基9、11、12)。在蛇麻提取物與其他提取物并用的情況下，綠茶提取物顯示出協(xié)同性的效果(培養(yǎng)基14)，但與蛇麻提取物和石榴提取物的并用(培養(yǎng)基10)相比，效果較弱。
(實(shí)施例4)
(1)芽孢桿菌的增殖抑制試驗
與實(shí)施例1的培養(yǎng)基制備程序同樣地制備培養(yǎng)基中的明日葉提取物(總查耳酮類8％、日本生物科學(xué)研究所公司)和石榴提取物的濃度為表9所示濃度的培養(yǎng)基15、16、17。
[表9]
各培養(yǎng)基中的明日葉提取物和石榴提取物的含量
使用上述培養(yǎng)基，通過與實(shí)施例1同樣的方法考察增殖抑制效果。將結(jié)果示于表10。另外，在第10小時與第120小時之間、以及第140小時與第220小時之間，結(jié)果沒有變動，因此省略了記載。
[表10]
明日葉提取物和石榴提取物對芽孢桿菌(枯草芽孢桿菌，b.subtilis)的增殖抑制的果
如表10所示，通過將即使為少量(5ppm)的石榴提取物與明日葉提取物并用，也確認(rèn)到協(xié)同性的芽孢桿菌的增殖抑制效果(培養(yǎng)基17)。
(2)風(fēng)味評價試驗
將市售的面條湯底(yamaki公司制；兩倍濃縮型)40ml用水稀釋5倍，填充到帶夾子的塑料袋中。將上述(1)中使用的明日葉提取物和石榴提取物添加到塑料袋內(nèi)的面條湯底中，使明日葉提取物為10ppm、石榴提取物為5ppm的含量。添加提取物后，將塑料袋密封，在水浴中加熱至達(dá)到70℃為止后開封，對于剛開封后的味道和香氣，以未添加明日葉提取物和石榴提取物的面條湯底作為對照進(jìn)行比較。比較試驗按照實(shí)施例2的(2)來進(jìn)行。其結(jié)果，添加了明日葉提取物和石榴提取物的面條湯底與無添加的面條湯底相比，味道、香氣均未感覺到較大差異。
(實(shí)施例5)
(1)芽孢桿菌的增殖抑制試驗
與實(shí)施例1的培養(yǎng)基制備程序同樣地制備培養(yǎng)基中的山竹提取物(α-山竹黃酮20％、バイオアクティブズジャパン公司)和石榴提取物的濃度為表11所示濃度的培養(yǎng)基18、19、20。
[表11]
各培養(yǎng)基中的山竹提取物和石榴提取物的含量
使用上述培養(yǎng)基，通過與實(shí)施例1同樣的方法考察增殖抑制效果。將結(jié)果示于表12。另外，在第10小時與第25小時之間、以及第30小時與第140小時之間，結(jié)果沒有變動，因此省略了記載。
[表12]
山竹提取物和石榴提取物對芽孢桿菌(枯草芽孢桿菌，b.subtilis)的增殖抑制效果
如表12所示，通過將即使為少量(5ppm)的石榴提取物與山竹提取物并用，也確認(rèn)到協(xié)同性的芽孢桿菌的增殖抑制效果(培養(yǎng)基20)。
(2)風(fēng)味評價試驗
將市售的面條湯底(yamaki公司制；兩倍濃縮型)40ml用水稀釋5倍，填充到帶夾子的塑料袋中。將上述(1)中使用的山竹提取物和石榴提取物添加到塑料袋內(nèi)的面條湯底中，使山竹提取物為1ppm、石榴為5ppm的含量。添加提取物后，將塑料袋密封，在水浴中加熱至達(dá)到70℃為止后開封，對于剛開封后的味道和香氣，以未添加山竹提取物和石榴提取物的面條湯底作為對照進(jìn)行比較。比較試驗按照實(shí)施例2的(2)來進(jìn)行。其結(jié)果，添加了山竹提取物和石榴提取物的面條湯底與無添加的面條湯底相比，味道、香氣均未感覺到較大差異。
產(chǎn)業(yè)上的可利用性
本發(fā)明可以在重視風(fēng)味、鮮味的飲食品、偏好淡口的飲食品、或放置于芽孢桿菌容易增殖的環(huán)境中的飲食品等的制造領(lǐng)域中使用。
本說明書中引用的全部發(fā)行物、專利和專利申請直接以參考的形式并入本說明書中。