一種菜豆直接再生體系的建立方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種菜豆直接再生體系的建立方法，主要包括菜豆無菌苗的獲得方法、直接再生培養(yǎng)基配方、生根培養(yǎng)基配方、組培苗移栽方法等，針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中菜豆組織培養(yǎng)體系技術(shù)方案不完整、不明確，甚至方法本身重復(fù)再現(xiàn)性差的缺陷，本發(fā)明通過篩選各種功能培養(yǎng)基中不同激素種類及其配比，最終建立高頻、高效的菜豆直接再生體系，為菜豆組培快繁及轉(zhuǎn)基因育種的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
【專利說明】一種菜豆直接再生體系的建立方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及以菜豆子葉節(jié)為外植體，獲得高頻、高效的菜豆直接再生體系的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 菜豆L.]又稱蕓豆，四季豆，玉豆、扁豆等，屬豆科菜豆屬菜 豆種植物。菜豆起源于中南美洲的熱帶地區(qū)，主要分布于墨西哥南部和中美洲，15世紀(jì)經(jīng)美 洲引入我國(guó)。通過不斷的演化和變異，出現(xiàn)了以嫩莢供食用的軟莢菜豆，因此中國(guó)被認(rèn)為是 菜豆的次級(jí)起源中心，在中國(guó)已有500多年的栽培歷史。菜豆在我國(guó)各省市均有栽培，面積 十分廣泛。據(jù)聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織統(tǒng)計(jì)（FA0,2012年)，中國(guó)粒用菜豆總栽培面積為1456. 5萬 畝，食莢菜豆栽培面積為939萬畝。栽培面積僅次于巴西和印度，位居世界第三。
[0003] 菜豆是嚴(yán)格閉花授粉作物，繁種過程中種性退化嚴(yán)重。加上人工雜交成功率低，知 識(shí)產(chǎn)權(quán)無法保護(hù)，因此菜豆品種更新極為緩慢。種性退化對(duì)產(chǎn)量和商品性影響很大，菜農(nóng)急 需新品種更新。隨著分子生物學(xué)和植物基因工程的發(fā)展，人們開始借助生物技術(shù)手段建立 高頻、高效的菜豆再生體系并對(duì)其進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，可大幅度縮短育種周期，提高育種效率。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明公開的一種菜豆直接再生體系的建立方法，針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中菜豆組織培養(yǎng) 體系技術(shù)方案不完整、不明確，甚至方法本身重復(fù)再現(xiàn)性差的缺陷，本發(fā)明提供了一種以菜 豆子葉節(jié)為外植體建立高頻、高效再生體系的方法。
[0005] 本發(fā)明目的是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，通過篩選培養(yǎng)基中不同激素種類及其用量 的配比（篩選的培養(yǎng)基包括再生培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，再生培養(yǎng)基激素包括6-BA，用量在 I.Omg/L-6.Omg/L;IAA，0.Img/L-1.Omg/L。生根培養(yǎng)基激素是IBA，用量為 0mg/L-1.Omg/ U最終建立高頻、高效的菜豆直接再生體系的方法，為菜豆組培快繁及轉(zhuǎn)基因育種的應(yīng)用 奠定基礎(chǔ)。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明公開了一種菜豆直接再生體系的建立方法，其特征在于 按如下的步驟進(jìn)行： (1) 菜豆無菌苗的獲得方法： 挑選籽粒均勻、飽滿的菜豆種子，置于玻璃容器內(nèi)，將濃度為10%_30%的次氯酸鈉溶液 緩緩倒入容器內(nèi)，使菜豆種子完全浸泡在次氯酸鈉溶液中，整個(gè)消毒過程用時(shí)l〇_2〇min，并 每隔l-2min攪拌一次，使種子表面與溶液充分接觸，以保證消毒徹底，消毒后的菜豆種子 用無菌水清洗4-5次，整個(gè)消毒過程在超凈工作臺(tái)內(nèi)完成；將清洗后的菜豆種子插入萌發(fā) 培養(yǎng)基內(nèi)，種子插入一半即可，種子萌發(fā)環(huán)境為溫度20°C-25°C，光周期為16h/8h光照/黑 暗； (2) 直接再生培養(yǎng)基培養(yǎng)基配方及操作方法： 將萌發(fā)5-6天的菜豆無菌苗在超凈工作臺(tái)中取出，放在滅菌后的培養(yǎng)皿里，切除頂 端生長(zhǎng)點(diǎn)及胚根，留下子葉節(jié)上下各I. 5-3. 5mm的下胚軸，順著下胚軸將外植體縱向平 均分開，得到兩個(gè)對(duì)稱的帶子葉的子葉節(jié)，用刀片對(duì)縱切面進(jìn)行劃傷，傷口長(zhǎng)3-4mm，深度 0. 3-0. 5mm;將處理好的外植體近軸面向上與培養(yǎng)基成45度角斜插入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，密 封并置于培養(yǎng)室中培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境為溫度20°C-25°C，光周期為16h/8h光照/黑暗；培養(yǎng) 基每隔5-10天更換一次，15-20天后可獲得再生植株；所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基指的是=MSB5+ 6-BAI. 0-6. 0mg/L+IAA0? 1-1. 0mg/L+ 活性炭 10-50mg/L; (3)再生芽的生根培養(yǎng)基配方及操作方法：將長(zhǎng)到4-5cm的不定芽延基部從外植體上 切下，插入1/2MSB5+IBA0. 1-1.0mg/L+活性炭5-30mg/L生根培養(yǎng)基內(nèi)，密封好后置于培 養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境為溫度20-25°C，光周期為16h/8h光照/黑暗，7-10天順利生根； (4) 組培苗的移栽方法：生根后的組培苗，在培養(yǎng)室內(nèi)開蓋煉苗3-5天，然后移栽到裝 有基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)缽內(nèi)，將移栽好的組培苗放在塑料拱棚內(nèi)生長(zhǎng)，保證拱棚內(nèi)的溫度25-28°C， 相對(duì)濕度60%，拱棚內(nèi)生長(zhǎng)5天逐漸給拱棚放風(fēng)，直至幼苗適應(yīng)溫室環(huán)境，再將拱棚撤去； (5) 成活的組培苗便可移栽入露地進(jìn)行正常管理。
[0007] 本發(fā)明所述的菜豆直接再生體系的建立方法，其中的菜豆品種指的是雙豐3號(hào)。
[0008] 本發(fā)明更進(jìn)一步公開了菜豆直接再生體系的建立方法在提高菜豆生芽率、生根 率、植株成苗率方面的應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：菜豆直接再生體系的建立方法易于誘導(dǎo)再生 芽， 再生芽率提高、生根率提高，再生植株成苗率提高。直接再生周期短，直接再生易于操 作，重現(xiàn)性好。
[0009] 本發(fā)明建立的菜豆直接再生體系其中的關(guān)鍵在于： (1)明確了菜豆種子消毒的最佳方法，此方法易操作，效果最好。
[0010] (2)摸索出菜豆子葉節(jié)直接再生的最佳培養(yǎng)基配方及操作方法，再生頻率高，重復(fù) 性好。
[0011] (3)篩選出再生植株生根的最佳培養(yǎng)基配方及操作方法，使生根速度快，質(zhì)量好， 有利于再生苗的移栽。
[0012] 本方法更加詳細(xì)的描述如下： 主要包括菜豆無菌苗的獲得方法、直接再生培養(yǎng)基配方及操作方法、生根培養(yǎng)基配方 及操作方法、組培苗的移栽方法等，具體步驟如下： 1、菜豆無菌苗的獲得方法 挑選籽粒均勻、飽滿的菜豆種子，置于玻璃容器內(nèi)。將濃度為10%-30%的次氯酸鈉溶液 緩緩倒入容器內(nèi)，使菜豆種子完全浸泡在次氯酸鈉溶液中。整個(gè)消毒過程用時(shí)l〇_2〇min，并 每隔l-2min攪拌一次，使種子表面與溶液充分接觸，以保證消毒徹底。消毒后的菜豆種子 用無菌水清洗4-5次。整個(gè)消毒過程在超凈工作臺(tái)內(nèi)完成。將清洗后的菜豆種子插入萌發(fā) 培養(yǎng)基內(nèi)，種子插入一半左右即可。種子萌發(fā)環(huán)境為溫度20°C_25°C，光周期為16h/8h光 照/黑暗。
[0013] 2、直接再生培養(yǎng)基配方及操作方法 將萌發(fā)5-6天的菜豆無菌苗在超凈工作臺(tái)中取出，放在滅菌后的培養(yǎng)皿里，切除頂端 生長(zhǎng)點(diǎn)及胚根，留下子葉節(jié)上下各1. 5-3. 5_左右的下胚軸，順著下胚軸將外植體縱向平 均分開，得到兩個(gè)對(duì)稱的帶子葉的子葉節(jié)，用刀片對(duì)縱切面進(jìn)行劃傷，傷口長(zhǎng)3-4mm，深度 0. 3-0. 5mm。將處理好的外植體近軸面向上與培養(yǎng)基成45度角斜插入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，密 封并置于培養(yǎng)室中培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境為溫度20°C-25°C，光周期為16h/8h光照/黑暗。培養(yǎng) 基每隔5-10天更換一次，15-20天后可獲得再生植株。
[0014] 3、生根培養(yǎng)基配方及操作方法 當(dāng)再生芽長(zhǎng)到4_5cm時(shí)，將再生植株從外植體上切下，插入到生根培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng) 環(huán)境為溫度20°C-25°C，光周期為16h/8h光照/黑暗，7-15天左右便可順利生根。
[0015] 4、組培苗的移栽方法 生根后，將瓶蓋打開在培養(yǎng)室內(nèi)煉苗3-10天，移苗至裝有基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)缽中，將移栽好 的組培苗放在塑料拱棚內(nèi)生長(zhǎng)，保證拱棚內(nèi)的溫度25-28 °C，相對(duì)濕度60%左右。拱棚內(nèi)生 長(zhǎng)5-10天，逐漸給拱棚放風(fēng)，直至幼苗適應(yīng)溫室環(huán)境，再將拱棚撤去。
[0016] 該方法菜豆種子消毒效果達(dá)100%，不定芽再生頻率為11. 2個(gè)/外植體，不定芽生 根率達(dá)到95. 3%，生根數(shù)量為13. 6根/植株，組培苗移栽成活率達(dá)97%。
[0017] 本發(fā)明公開的菜豆直接再生體系的建立方法與現(xiàn)有技術(shù)相比所具有的積極效果 在于： (1)種子消毒方法更規(guī)范，消毒效果更好，且易于操作。
[0018] (2)直接再生更易于得到再生植株，重復(fù)性好。
[0019] (3)提高了再生植株生根率，進(jìn)而提高成苗率。

【具體實(shí)施方式】
[0020] 本發(fā)明實(shí)施例公開了菜豆直接再生體系的建立方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本 文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù) 人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的產(chǎn)品、方法和應(yīng)用已經(jīng)通過 較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述 的產(chǎn)品、方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0021] 其中所述的MS培養(yǎng)基以及縮寫的MSB5培養(yǎng)基指的是（MS和B5培養(yǎng)基是組培上常 用的培養(yǎng)基，配方及用量都是已知的。另外MSB5、6-BA、IAA、活性炭、雙豐3號(hào)菜豆品種 均由市售。
[0022] 實(shí)施例1 雙豐3號(hào)菜豆品種直接再生體系的建立，包括以下步驟： (1)種子的消毒：在超凈工作臺(tái)內(nèi)，將整齊一致的雙豐3號(hào)種子放入玻璃容器內(nèi)，倒入 10%次氯酸鈉溶液浸泡l〇min，每隔2min攪拌一次。將消毒的種子用滅菌水沖洗4次，倒干 容器內(nèi)的滅菌水后備用。
[0023] (2)無菌苗的獲得：在超凈工作臺(tái)內(nèi)，用鑷子取出消毒后的菜豆種子，將種臍朝下 插入萌發(fā)培養(yǎng)基內(nèi)，密封好后置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境為溫度20°C，光周期為16h/8h 光照/黑暗。
[0024] (3)再生芽的獲得：無菌苗培養(yǎng)5天后，在超凈工作臺(tái)內(nèi)取出無菌苗，置于滅菌后 的培養(yǎng)皿內(nèi)，切除植株的生長(zhǎng)點(diǎn)及胚根，留下子葉節(jié)上下各I. 5_左右的下胚軸，順著下胚 軸將外植體縱向平均分開，得到兩個(gè)對(duì)稱的帶子葉的子葉節(jié)，用刀片對(duì)縱切面進(jìn)行劃傷，傷 口長(zhǎng)3mm，深度0. 3mm。將處理好的外植體近軸面向上與培養(yǎng)基成45度角斜插入1/2MMSB5+ 6-BA1.0mg/L+IAA0.Img/L+活性炭10mg/L芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，密封好后置于培養(yǎng)室中培 養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境為溫度20°C，光周期為16h/8h光照/黑暗。培養(yǎng)基每隔5天更換一次，15天 可獲得再生芽。
[0025] (4)再生芽的生根：將長(zhǎng)到4-5cm的不定芽延基部從外植體上切下，插入1/2MSB5+ IBA0.lmg/L+活性炭5mg/L生根培養(yǎng)基內(nèi)，密封好后置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境為溫度 20°C，光周期為16h/8h光照/黑暗，7天左右便可順利生根。
[0026] (5)組培苗的移栽：生根后的組培苗，在培養(yǎng)室內(nèi)開蓋煉苗3天左右，然后移栽到 裝有基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)缽內(nèi)，將移栽好的組培苗放在塑料拱棚內(nèi)生長(zhǎng)，保證拱棚內(nèi)的溫度28°C，相 對(duì)濕度60%左右。拱棚內(nèi)生長(zhǎng)6天逐漸給拱棚放風(fēng)，直至幼苗適應(yīng)溫室環(huán)境，再將拱棚撤去。
[0027] (6)成活的組培苗便可移栽入露地進(jìn)行正常管理。
[0028] 實(shí)施例2 雙豐3號(hào)菜豆品種直接再生體系的建立，包括以下步驟： (1)種子的消毒：菜豆種子消毒相關(guān)文獻(xiàn)未見報(bào)道，試驗(yàn)對(duì)比了大豆等一些豆類種子消 毒方法，明確了菜豆種子最佳的消毒方法，具體操作如下：在超凈工作臺(tái)內(nèi)，將整齊一致的 雙豐3號(hào)種子放入玻璃容器內(nèi)，倒入30%次氯酸鈉溶液浸泡16min，每隔2min攪拌一次。將 消毒的種子用滅菌水沖洗5次，倒干容器內(nèi)的滅菌水后備用。
[0029] (2)無菌苗的獲得：在超凈工作臺(tái)內(nèi)，用鑷子取出消毒后的菜豆種子，將種臍朝下 插入萌發(fā)培養(yǎng)基內(nèi)，密封好后置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境為溫度20°C，光周期為16h/8h 光照/黑暗。
[0030] (3)再生芽的獲得：采用愈傷組織誘導(dǎo)再生芽率最高僅為90%，再生頻率低。采用 直接再生方法再生芽誘導(dǎo)率達(dá)100%，再生頻率高達(dá)11. 2個(gè)/外植體。直接再生是將無菌苗 培養(yǎng)6天后，在超凈工作臺(tái)內(nèi)取出無菌苗，置于滅菌后的培養(yǎng)皿內(nèi)，切除植株的生長(zhǎng)點(diǎn)及胚 根，留下子葉節(jié)上下各3. 5_左右的下胚軸，順著下胚軸將外植體縱向平均分開，得到兩個(gè) 對(duì)稱的帶子葉的子葉節(jié)，用刀片對(duì)縱切面進(jìn)行劃傷，傷口長(zhǎng)4mm，深度0. 5mm。將處理好的外 植體近軸面向上與培養(yǎng)基成45度角斜插入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，密封好后置于培養(yǎng)室中培養(yǎng)， 培養(yǎng)環(huán)境為溫度25°C，光周期為16h/8h光照/黑暗。培養(yǎng)基每隔10天更換一次，20天可 獲得再生芽。
[0031] (4)再生芽的生根：前人報(bào)道，再生植株生根率為90%，而通過調(diào)整培養(yǎng)基配方， 1/2MSB5+IBA1.0mg/L+活性炭30mg/L，生根率可達(dá)到95. 3%，效率大大提高。具體方法如 下：將長(zhǎng)到5cm的不定芽延基部從外植體上切下，插入生根培養(yǎng)基內(nèi)，密封好后置于培養(yǎng)室 內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境為溫度23°C，光周期為16h/8h光照/黑暗，15天左右便可順利生根。
[0032] (5)組培苗的移栽：生根后的組培苗，在培養(yǎng)室內(nèi)開蓋煉苗10天左右，然后移栽到 裝有基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)缽內(nèi)，將移栽好的組培苗放在塑料拱棚內(nèi)生長(zhǎng)，保證拱棚內(nèi)的溫度28°C，相 對(duì)濕度60%左右。拱棚內(nèi)生長(zhǎng)10天逐漸給拱棚放風(fēng)，直至幼苗適應(yīng)溫室環(huán)境，再將拱棚撤 去。
[0033] (6)成活的組培苗便可移栽入露地進(jìn)行正常管理。
[0034] 實(shí)施例3 (1)菜豆無菌苗的獲得： 挑選籽粒均勻、飽滿的菜豆種子，置于玻璃容器內(nèi)，將濃度為25%的次氯酸鈉溶液緩 緩倒入容器內(nèi)，使菜豆種子完全浸泡在次氯酸鈉溶液中，整個(gè)消毒過程用時(shí)14min，并每隔 2min攪拌一次，使種子表面與溶液充分接觸，以保證消毒徹底，消毒后的菜豆種子用無菌水 清洗5次，整個(gè)消毒過程在超凈工作臺(tái)內(nèi)完成；將清洗后的菜豆種子插入萌發(fā)培養(yǎng)基內(nèi)，種 子插入一半即可，種子萌發(fā)環(huán)境為溫度25°C，光周期為16h/8h光照/黑暗； (2) 直接再生培養(yǎng)基的篩選： 將萌發(fā)5天的菜豆無菌苗在超凈工作臺(tái)中取出，放在滅菌后的培養(yǎng)皿里，切除頂端生 長(zhǎng)點(diǎn)及胚根，留下子葉節(jié)上下各2. 5_的下胚軸，順著下胚軸將外植體縱向平均分開，得到 兩個(gè)對(duì)稱的帶子葉的子葉節(jié)，用刀片對(duì)縱切面進(jìn)行劃傷，傷口長(zhǎng)3. 5mm，深度0. 4mm;將處理 好的外植體近軸面向上與培養(yǎng)基成45度角斜插入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，密封并置于培養(yǎng)室中 培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境為溫度28°C，光周期為16h/8h光照/黑暗；培養(yǎng)基每隔8天更換一次，15天 后可獲得再生植株；所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基指的是=MSB5+ 6-BA5.Img/L+IAA0. 7mg/L+活 性炭35mg/L; (3) 再生芽的生根：將長(zhǎng)到4cm的不定芽延基部從外植體上切下，插入1/2MSB5+IBA 0. 7mg/L+活性炭25mg/L生根培養(yǎng)基內(nèi)，密封好后置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境為溫度 25°C，光周期為16h/8h光照/黑暗，10天順利生根； (4) 組培苗的移栽：生根后的組培苗，在培養(yǎng)室內(nèi)開蓋煉苗5天，然后移栽到裝有基質(zhì) 的營(yíng)養(yǎng)缽內(nèi)，將移栽好的組培苗放在塑料拱棚內(nèi)生長(zhǎng)，保證拱棚內(nèi)的溫度28°C，相對(duì)濕度 60%，拱棚內(nèi)生長(zhǎng)5天逐漸給拱棚放風(fēng)，直至幼苗適應(yīng)溫室環(huán)境，再將拱棚撤去； (5) 成活的組培苗便可移栽入露地進(jìn)行正常管理。
[0035] 實(shí)施例4 對(duì)比試驗(yàn)

【權(quán)利要求】
1. 一種菜豆直接再生體系的建立方法，其特征在于按如下的步驟進(jìn)行： (1) 菜豆無菌苗的獲得： 挑選籽粒均勻、飽滿的菜豆種子，置于玻璃容器內(nèi)，將濃度為10%-30%的次氯酸鈉溶液 緩緩倒入容器內(nèi)，使菜豆種子完全浸泡在次氯酸鈉溶液中，整個(gè)消毒過程用時(shí)l〇_2〇min，并 每隔l-2min攪拌一次，使種子表面與溶液充分接觸，以保證消毒徹底，消毒后的菜豆種子 用無菌水清洗4-5次，整個(gè)消毒過程在超凈工作臺(tái)內(nèi)完成；將清洗后的菜豆種子插入萌發(fā) 培養(yǎng)基內(nèi)，種子插入一半即可，種子萌發(fā)環(huán)境為溫度20°C-25°C，光周期為16h/8h光照/黑 暗； (2) 直接再生培養(yǎng)基配方及操作方法： 將萌發(fā)5-6天的菜豆無菌苗在超凈工作臺(tái)中取出，放在滅菌后的培養(yǎng)皿里，切除頂 端生長(zhǎng)點(diǎn)及胚根，留下子葉節(jié)上下各1. 5-3. 5mm的下胚軸，順著下胚軸將外植體縱向平 均分開，得到兩個(gè)對(duì)稱的帶子葉的子葉節(jié)，用刀片對(duì)縱切面進(jìn)行劃傷，傷口長(zhǎng)3-4mm，深度 0. 3-0. 5mm ;將處理好的外植體近軸面向上與培養(yǎng)基成45度角斜插入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，密 封并置于培養(yǎng)室中培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境為溫度20°C -25°C，光周期為16h/8h光照/黑暗；培養(yǎng) 基每隔5-10天更換一次，15-20天后可獲得再生植株；所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基指的是：MSB5+ 6-BA 1. 0-6. 0 mg/L+IAA 0? 1-1. 0 mg/L+ 活性炭 10-50mg/L ; (3) 再生芽的生根培養(yǎng)基配方及操作方法：將長(zhǎng)到4-5cm的不定芽延基部從外植體上 切下，插入1/2MSB5+ IBA 0. 1-1.0 mg/L+活性炭5-30mg/L生根培養(yǎng)基內(nèi)，密封好后置于培 養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境為溫度20-25°C，光周期為16h/8h光照/黑暗，7-10天順利生根； (4) 組培苗的移栽方法：生根后的組培苗，在培養(yǎng)室內(nèi)開蓋煉苗3-5天，然后移栽到裝 有基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)缽內(nèi)，將移栽好的組培苗放在塑料拱棚內(nèi)生長(zhǎng)，保證拱棚內(nèi)的溫度25-28°C， 相對(duì)濕度60%，拱棚內(nèi)生長(zhǎng)5天逐漸給拱棚放風(fēng)，直至幼苗適應(yīng)溫室環(huán)境，再將拱棚撤去； (5) 成活的組培苗便可移栽入露地進(jìn)行正常管理。
2. 權(quán)利要求1所述的菜豆直接再生體系的建立方法，其中的菜豆品種指的是雙豐3號(hào)。
3. 權(quán)利要求所述菜豆直接再生體系的建立方法在提高菜豆生芽率、生根率、植株成苗 率方面的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104472352SQ201410661867
【公開日】2015年4月1日 申請(qǐng)日期:2014年11月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月19日
【發(fā)明者】古瑜, 韓啟厚, 于海龍 申請(qǐng)人:天津科潤(rùn)農(nóng)業(yè)科技股份有限公司