一種營養(yǎng)飼料添加劑產(chǎn)品的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種營養(yǎng)飼料添加劑產(chǎn)品，本發(fā)明屬于飼料領(lǐng)域，尤其涉及飼料添加劑。本發(fā)明提供一種營養(yǎng)飼料添加劑產(chǎn)品；重量份數(shù)組成如下：水蘇糖1-3，大豆多肽3-10，當歸萃取物3-5，香菇多糖2-6,枯草芽孢桿菌粉16-23,植物乳桿菌菌粉15-25,生姜粉2-5，靈芝菌固體發(fā)酵培養(yǎng)物3-8。本發(fā)明通過科學復配，將枯草芽孢桿菌、植物乳桿菌、靈芝菌實現(xiàn)了有機組合，強化了益生菌組分在其中的含量，特別是靈芝菌培養(yǎng)中添加了中藥成分，本發(fā)明產(chǎn)品可以有效降低抗生素類藥物在飼養(yǎng)動物中的使用量，提高動物肉制品的安全性，提高動物的飼料利用效率，增強動物的免疫力，提高飼養(yǎng)效益。CGMCC NO.940520140702
【專利說明】一種營養(yǎng)詞料添加劑產(chǎn)品

【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明屬于飼料領(lǐng)域，尤其涉及飼料添加劑。

【背景技術(shù)】：
[0002] 現(xiàn)代畜禽養(yǎng)殖過程中，為了預(yù)防和治療動物疾病，常使用過量抗生素產(chǎn)品來確保 動物健康，但過量抗生素的使用常導致動物肉制品及其產(chǎn)物的品質(zhì)下降和抗生素耐性增 強，通過食物鏈的傳遞導致人類健康也受到抗生素問題的嚴重影響。
[0003] 源自自然界的一些天然物質(zhì)不僅具有良好的營養(yǎng)特性，同時還具有抗病毒、消炎、 抗氧化、調(diào)節(jié)機體免疫功能等作用，具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0004] 大豆多肽易消化吸收性，促進能量代謝，從而顯現(xiàn)出抗肥胖作用；促過度疲勞恢復 精神、體力的效果；增加肌肉的耐力，促進肌紅蛋白恢復；有低抗原、低過敏性等作用；
[0005] 靈芝[Ganoderema lucidum (Leyss ex Fr. ) karst]，又稱靈芝草，屬擔子菌亞門、 多孔菌目、靈芝科、靈芝屬。歷代的醫(yī)典把靈芝歸位于"上上藥"，其排位在人參之前?！渡褶r(nóng) 本草經(jīng)》、《本草綱目》記載，靈芝可明目、補肝氣、安神、益精、益心氣、益脾氣、益肺氣、益腎 氣、通九竅、耳聰、目明、利關(guān)節(jié)、利尿、養(yǎng)顏美容，是上好的滋補佳品。靈芝多糖能促進蛋白 質(zhì)、核酸的合成，對血清、肝臟及骨髓細胞蛋白質(zhì)或核酸的更新、合成有促進作用，它是靈 芝扶正固本的主要有效成分之一。靈芝多糖主要存在于靈芝真菌子實體、菌核、菌絲體或發(fā) 酵液中；存在于靈芝中的靈芝酸有止痛、鎮(zhèn)靜、抑制組織胺釋放、解毒、保肝、毒殺腫瘤細胞 的功用，是靈芝的主要有效成分之一。
[0006] 復合植物提取物飼料添加劑專利號為201210143338. 3,發(fā)明公開了一種復合植物 提取物飼料添加劑，本發(fā)明屬于飼料領(lǐng)域，特別涉及飼料添加劑。本發(fā)明飼料添加劑組成 為：牛膝多糖，紫蘇提取物，酵母細胞壁提取物，枯草芽孢桿菌凍干菌粉，低聚果糖；枯草芽 孢桿菌為CGMCC6012,上述比例為質(zhì)量百分比。本發(fā)明產(chǎn)品可以有效降低抗生素類藥物在飼 養(yǎng)動物中的使用數(shù)量，提高飼養(yǎng)動物的免疫力，提高動物肉制品的安全性，提高動物的飼料 利用效率，減少常規(guī)飼養(yǎng)中抗生素及藥品的使用，增強動物的抵抗能力，提高飼養(yǎng)效益。
[0007] 如何有效開發(fā)以天然植物或真菌獲得綠色飼料添加劑產(chǎn)品對飼料添加劑行業(yè)發(fā) 展具有重要意義。


【發(fā)明內(nèi)容】
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[0008] 本發(fā)明提供一種營養(yǎng)飼料添加劑產(chǎn)品；
[0009] 重量份數(shù)組成如下：
[0010] 水蘇糖1-3,大豆多肽3-10,當歸萃取物3-5,香菇多糖2-6,枯草芽孢桿菌粉 16-23,植物乳桿菌菌粉15-25,生姜粉2-5,靈芝菌固體發(fā)酵培養(yǎng)物3-8。
[0011] 植物乳桿菌為 CGMCC 9405,枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)為 CGMCC6012。
[0012] 靈芝菌固體發(fā)酵培養(yǎng)物制備方法如下：
[0013] 斜面菌種活化培養(yǎng)：將保藏的靈芝斜面菌種轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上，22-28?培養(yǎng) 96-120小時左右，至菌絲長滿斜面即可；最佳培養(yǎng)溫度25°C。
[0014] 1.液體一級種子培養(yǎng)：將上述靈芝斜面菌種挑取一塊接入裝有100毫升培養(yǎng)基 的500毫升搖瓶中進行一級種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：旋轉(zhuǎn)式搖床80-180轉(zhuǎn)/分，22-28?培養(yǎng) 96-130小時左右；旋轉(zhuǎn)式搖床150轉(zhuǎn)/分為宜，培養(yǎng)溫度以25°C為宜。
[0015] 2.液體二級種子培養(yǎng)：將一級搖瓶種子以5-20 %接種量接入裝有100暈升培養(yǎng)基 的500毫升搖瓶中進行二級種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：旋轉(zhuǎn)式搖床80-180轉(zhuǎn)/分，22-28?培養(yǎng) 96-130小時左右；合適接種量為10%，旋轉(zhuǎn)式搖床150轉(zhuǎn)/分為宜，培養(yǎng)溫度以25°C為宜。
[0016] 3.固體發(fā)酵培養(yǎng)：將二級搖瓶種子以5-10%接種量接入裝有滅菌后固體發(fā)酵培 養(yǎng)基的500L固體發(fā)酵罐中，培養(yǎng)條件：裝料量50%，培養(yǎng)溫度20-27 °C，濕度75-90%，通風 量0. 3-1. 0(V/V)，培養(yǎng)時間15-40天。每隔3-10天開啟攪拌10分鐘。采用SGF固體發(fā)酵 罐。
[0017] 4.發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，選擇流化床等多種干燥方法，將物料干燥到水分含量在7%以 下。對固體發(fā)酵物料進行粉碎。
[0018] 本發(fā)明固體發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源主要選擇麩皮、葡萄糖、蔗糖、淀粉、玉米粉、玉米芯 (粉碎后）等常用原料，氮源可以選擇花生餅粉、蛋白胨、脫脂大豆蛋白粉、豆餅粉、酵母粉 等；需要添加的無機鹽有磷酸二氫鉀，硫酸鎂。
[0019] 在上述固體發(fā)酵培養(yǎng)基中添加有質(zhì)量比為2-6%粉碎后，過40-50目的生姜。
[0020] 所述當歸萃取物制備方法如下：
[0021] 當歸粉碎，過40-50目篩后，添加當歸3-6倍重量無水乙醇浸漬提取，控制溫度 30-45°C，2-4小時后調(diào)整溫度為55-60°C 1-2小時，提取液濃縮、干燥得到乙醇提取物；乙 醇提取后的當歸殘渣中添加75-85°C熱水，熱水添加量為當歸殘渣重量的2-4倍，處理時間 30-50分鐘，連續(xù)提取2-3次，將提取液真空濃縮后噴霧干燥，得到熱水提取物；將上述乙醇 提取物和熱水提取物合并粉碎，過60目篩，即得當歸提取物。
[0022] 所述枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌CGMCC6012,凍干菌粉中活菌數(shù)量為4-8 X IO8 個/g。所述復合飼料添加劑由以下方法制得：
[0023] 粉碎后靈芝菌培養(yǎng)物、水蘇糖、大豆多肽、當歸萃取物和枯草芽孢桿菌凍干菌粉等 組分按照比例混合得到飼料添加劑。
[0024] 大豆多肽采用市售大豆多肽產(chǎn)品，分子量在500Da?700Da之間。
[0025] 本發(fā)明提供一種飼料生產(chǎn)用枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)菌種，該菌株已 經(jīng)于2012年4月16日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址 位于北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，（郵編100101)，保藏編號為CGMCC No. 6012。
[0026] 本發(fā)明中植物乳桿菌CGMCC 9405菌株特點如下：在顯微鏡下觀察，該菌株為短桿 狀，革蘭氏染色呈陽性，無鞭毛，不產(chǎn)芽孢；在固體培養(yǎng)基上，該菌菌落為白色，表面光滑，致 密，形態(tài)為圓形，邊緣較整齊。
[0027] 理化特征為：過氧化氫酶（_)，明膠液化（_)，吲哚實驗（+)，運動性（_)，發(fā)酵產(chǎn)氣 (-)，亞硝酸鹽還原（-)，發(fā)酵產(chǎn)氣（-)，產(chǎn)硫化氫氣體（-)，pH4. OMRS培養(yǎng)基中生長（+)。
[0028] 本發(fā)明植物乳桿菌采用下述流程進行選育：
[0029] 原始出發(fā)菌種一試管活化一硫酸二乙酯（DES)誘變一亞硝基胍（NTG)誘變一等離 子體誘變一平板初篩一搖瓶復篩一傳代穩(wěn)定性試驗。
[0030] 本發(fā)明所采用的出發(fā)菌株在MRS葡萄糖培養(yǎng)基中，其乳酸的生產(chǎn)速率為I. 5g/L/ d，當培養(yǎng)基pH為3. 5時幾乎停止生長，對亞硝酸鈉的分解速率為0. 34mg/h/kg白菜。出發(fā) 菌株為李政采集于寧夏鹽池縣育肥羊場的青儲飼料，采集時間2013年9月15日。
[0031] 為了提高其乳酸生產(chǎn)速率、耐酸能力和亞硝酸鹽的分解速率，依次采用DES和NTG 技術(shù)對該菌種進行誘變，誘變后菌株采用MRS碳酸鈣平板進行初篩，然后采用500mL搖瓶發(fā) 酵，生物傳感器分析儀對高產(chǎn)菌進行復篩，選育優(yōu)良的植物乳桿菌菌株，然后做傳代實驗， 評價其遺傳穩(wěn)定性。
[0032] 植物乳桿菌tlj-2014遺傳穩(wěn)定性結(jié)果表明：經(jīng)過連續(xù)傳代十次，各項性能指標都 比較穩(wěn)定，遺傳性較好，性狀沒有回復，因此把植物乳桿菌tlj-2014作為選育得到的目的 菌株。
[0033] 經(jīng)驗證發(fā)現(xiàn)：該誘變菌株的乳酸生產(chǎn)速率可以達到35g/L/d，該菌株經(jīng)過71小時 發(fā)酵后乳酸濃度達到95g/L ;能夠在pH為1. 80的條件下存活。降解亞硝酸鹽速度快，分解 能力達到9. 8mg/h/kg (自然發(fā)酵過程亞硝酸鹽積累的速率大約為I. lmg/h/kg)，能夠耐1 % 膽鹽。
[0034] 因此采用該菌種生產(chǎn)泡菜，整個發(fā)酵過程中亞硝酸鹽濃度在5mg/kg以下，遠低于 國家標準GB2714-2003中規(guī)定的含量（20mg/kg)。
[0035] 植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum) tl j-2014,該菌株已于 2014 年 7 月 2 日 保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（簡稱CGMCC，地址為：中國北京市 朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，郵編：100101)，保藏號為CGMCC NO. 9405。
[0036] I. DES誘變選育
[0037] 1)在超凈臺上取試管斜面上的植物乳桿菌L 一環(huán)，接入裝有50mL培養(yǎng)基MRS (無 瓊脂，葡萄糖20g/L)培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，200rpm，37°C培養(yǎng)12h左右，使菌體處于對 數(shù)生長前期。
[0038] 2)取5mL菌液，5000rpm離心IOmin收集菌體，用生理鹽水洗絳2次。
[0039] 3)用pH7. 0磷酸緩沖液稀釋成IO7個/mL菌懸液。
[0040] 4)取32mL pH7. 0的磷酸鉀緩沖液、8mL菌懸液、0. 4mL DES在預(yù)先放入轉(zhuǎn)子的 150mL三角瓶中充分混合，使DES最終濃度為1 % (v/v)。
[0041] 5)在37°C搖床中150rpm反應(yīng)30min，取ImL混合液，加入0· 5mL 25%似25203溶 液中止反應(yīng)。
[0042] 6)適當稀釋，取最后稀釋度的菌液0. 2mL，涂布于碳酸鈣篩選培養(yǎng)基（含100g/L 葡萄糖的碳酸鈣MRS培養(yǎng)基）平皿中。在37°C培養(yǎng)2?3天后，采用影印法將該篩選平板 的菌株轉(zhuǎn)印到pH為1. 5、1. 8和2. 0的LPHMRS培養(yǎng)基（低pH值改性MRS培養(yǎng)基）上和亞 硝酸鈉篩選培養(yǎng)基（單一氮源為2g/L亞硝酸鈉的改性MRS篩選培養(yǎng)基）上。
[0043] 7)在37°C培養(yǎng)2?3天后，挑選菌落較大，分別能在LPHMRS培養(yǎng)基、亞硝酸鈉篩 選培養(yǎng)基上生長并且在碳酸鈣篩選培養(yǎng)基上。經(jīng)初步篩選，挑取出的菌落命名為植物乳桿 菌L1。
[0044] 2.亞硝基胍誘變
[0045] 1)在超凈臺上取試管斜面上的植物乳桿菌Ll 一環(huán)，接入裝有50mL培養(yǎng)基MRS (無 瓊脂）培養(yǎng)基（葡萄糖濃度為60g/L)的250mL三角瓶中，200rpm，37°C培養(yǎng)12h左右，使菌 體處于對數(shù)生長前期。
[0046] 2)取5mL菌液5000rpm離心IOmin收集菌體，用生理鹽水洗絳2次。
[0047] 3)用pH6. 0磷酸緩沖液稀釋成IO7個/mL菌懸液。
[0048] 4)取IOmL菌懸液轉(zhuǎn)移至IOOmL三角瓶中，加入IOmg的NTG，配制成終濃度為IOmg/ mL的NTG溶液，并加入4-5滴丙酮，以利于NTG溶解。
[0049] 5)在37°C下200rpm振蕩反應(yīng)30min，5000rpm離心IOmin收集菌體，用無菌生理 鹽水洗滌數(shù)次，中止反應(yīng)。
[0050] 6)適當稀釋，取最后稀釋度的菌液0. 2mL，涂布于碳酸鈣篩選培養(yǎng)基（含100g/L 葡萄糖的碳酸鈣MRS培養(yǎng)基）平皿中。在37°C培養(yǎng)2?3天后，采用影印法將該篩選平板 的菌株轉(zhuǎn)印到pH為1. 5、1. 8和2. 0的LPHMRS培養(yǎng)基（低pH值改性MRS培養(yǎng)基）上和亞 硝酸鈉篩選培養(yǎng)基（單一氮源為2g/L亞硝酸鈉的改性MRS篩選培養(yǎng)基）上。
[0051] 7)挑選菌株方法：挑選菌落較大，分別能在LPHMRS培養(yǎng)基、亞硝酸鈉篩選培養(yǎng)基 上生長并且在碳酸鈣篩選培養(yǎng)基上。經(jīng)初步篩選，挑取100支符合以上條件的菌落。
[0052] 3.搖瓶復篩
[0053] 1)在超凈臺上分別取各試管斜面上的植物乳桿菌一環(huán)，接入裝有50mL培養(yǎng)基 MRS (無瓊脂）培養(yǎng)基（葡萄糖濃度為100g/L)的250mL三角瓶中，200rpm，37°C培養(yǎng)15h左 右，使菌體處于對數(shù)生長中期。
[0054] 2)分別取5mL菌液，接入裝有50mL碳酸鈣篩選液體培養(yǎng)基（含250g/L葡萄糖的 碳酸鈣MRS培養(yǎng)基）平皿中、pH為L 5、L 8和2. 0的LPHMRS液體培養(yǎng)基（低pH值改性MRS 培養(yǎng)基）和亞硝酸鈉液體篩選培養(yǎng)基（單一氮源為2g/L亞硝酸鈉的改性MRS篩選培養(yǎng)基） 上（注：采用250mL三角瓶）。200rpm，37°C培養(yǎng)3-4天，每天分別檢測碳酸鈣篩選液體培 養(yǎng)基中L-乳酸產(chǎn)生速率、LPHMRS液體培養(yǎng)基中的生物量和亞硝酸鈉液體篩選培養(yǎng)基中亞 硝酸鹽的消耗速率。發(fā)酵結(jié)束后，比較100株菌種的碳酸鈣篩選液體培養(yǎng)基中L-乳酸產(chǎn)生 速率、LPHMRS液體培養(yǎng)基中的生物量和亞硝酸鈉液體篩選培養(yǎng)基中亞硝酸鹽的消耗速率。
[0055] 3)選擇兼具高L-乳酸產(chǎn)生速率、耐受低pH (該菌種僅能在最低為pHl. 8的培養(yǎng)基 中生長）和亞硝酸鹽的消耗速率高的菌株，將其命名為L2菌。
[0056] 4.遺傳穩(wěn)定性試驗
[0057] 將L2菌在斜面上連續(xù)十次傳代，并用搖瓶復篩的方法檢測每次傳代后的發(fā)酵 情況。實驗發(fā)現(xiàn)，在斜面上連續(xù)十次傳代，該菌種性狀沒有明顯變化，各項性能指標都正 常，說明該菌種的遺傳穩(wěn)定性較強。菌株命名為植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum) tlj-2014。
[0058] 5. 5L發(fā)酵罐試驗
[0059] 1)取斜面上的植物乳桿菌L2 -環(huán)，接入裝有50mL培養(yǎng)基MRS (無瓊脂）（葡萄糖 濃度為150g/L)培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，200rpm，37°C培養(yǎng)12h左右，使菌體處于對數(shù)生 長中期。
[0060] 2)將對數(shù)期的菌種接入裝有3L MRS液體培養(yǎng)基（初始葡萄糖為150g/L)的5L發(fā) 酵罐中。接種量為10%，37°c下IOOrpm培養(yǎng)8小時，對數(shù)前期溶氧控制10% (通氣0.5L/ min)，后期厭氧培養(yǎng)63小時。發(fā)酵結(jié)束后，植物乳桿菌L2的乳酸產(chǎn)量達到95g/L。這樣的 產(chǎn)乳酸速率利于泡菜的快速發(fā)酵。
[0061 ] 3)將對數(shù)期的菌種接入裝有3L pH為I. 8的LPHMRS液體培養(yǎng)基（初始葡萄糖為 50g/L)的5L發(fā)酵罐中。接種量為10%，37°C下IOOrpm培養(yǎng)8小時，對數(shù)前期溶氧控制10% (通氣0. 5L/min)，后期厭氧，整個過程用0. 5mol/L的氫氧化鈉將發(fā)酵液pH控制在1. 8,總 培養(yǎng)時間為48小時。發(fā)酵結(jié)束后，檢測植物乳桿菌L2的生物量為2. 5g/L，說明植物乳桿菌 L2能夠在pHl. 8的環(huán)境中生存。
[0062] 4)將對數(shù)期的菌種接入裝有3L亞硝酸鈉液體篩選培養(yǎng)基（單一氮源為2g/L亞 硝酸鈉的改性MRS篩選培養(yǎng)基）的5L發(fā)酵罐中。接種量為10%，37°C下IOOrpm培養(yǎng)8小 時，對數(shù)前期溶氧控制10% (通氣〇.5L/min)，后期厭氧，發(fā)酵過程根據(jù)亞硝酸鹽的消耗速 率流加20g/L的亞硝酸鈉溶液，培養(yǎng)2-3天。發(fā)酵結(jié)束后，計算發(fā)酵過程植物乳桿菌L2對 亞硝酸鈉的降解速率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在該條件下，L2對亞硝酸鈉的降解速率可以達到563mg/ h/L〇
[0063] 5)將對數(shù)期的菌種IOmL接入裝有2kg預(yù)處理過的白菜中，按照傳統(tǒng)泡菜方法進行 加工，每12小時測定泡菜中的亞硝酸鹽含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在整個發(fā)酵過程中，L2菌對亞硝 酸鈉的分解速率為9. 8mg/h/kg白菜。泡菜中的亞硝酸鈉含量始終低于5mg/kg，遠低于國家 標準GB2714-2003中規(guī)定的含量（20mg/kg)。
[0064] 有益效果：
[0065] 枯草芽孢桿菌：具有如下功能：1.耗氧產(chǎn)酸，調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡，達到預(yù)防腹 瀉、下痢等疾??；2.分泌多種酶類，提高飼料消化利用率；3.產(chǎn)生多種營養(yǎng)素，參與機體新 陳代謝；4.提高動物免疫力。本發(fā)明當歸進行粉碎破壁處理，使當歸中功能因子實現(xiàn)全價 溶出和高效提取利用，分別采用有機溶劑和熱水實現(xiàn)其中不同功效成分的有效提取，特別 是控制溫度分段提取更是有效提高了當歸提取物的提取效率和質(zhì)量。
[0066] 水蘇糖除具有一般功能性低聚糖的物理化學性質(zhì)外，最引人注目的生理特性是它 能明顯改善腸道內(nèi)微生物種群比例，它是腸內(nèi)雙歧桿菌的活化增殖因子，可減少和抑制腸 內(nèi)腐敗物質(zhì)的產(chǎn)生，抑制有害細菌的生長，調(diào)節(jié)腸道內(nèi)平衡；能促進微量元素鐵、鈣的吸收 與利用，以防止骨質(zhì)疏松癥；可減少肝臟毒素，能在腸中生成抗癌的有機酸，有顯著的防癌 功能；
[0067] 本發(fā)明通過科學復配，將枯草芽孢桿菌、植物乳桿菌、靈芝菌實現(xiàn)了有機組合，強 化了益生菌組分在其中的含量，特別是靈芝菌培養(yǎng)中添加了中藥成分，本發(fā)明產(chǎn)品可以有 效降低抗生素類藥物在飼養(yǎng)動物中的使用量，提高動物肉制品的安全性，提高動物的飼料 利用效率，增強動物的免疫力，提高飼養(yǎng)效益。
[0068] 具體實施方法：
[0069] 本發(fā)明中靈芝菌培養(yǎng)物生產(chǎn)過程如下：
[0070] (1)斜面菌種活化培養(yǎng)：
[0071] (2)液體一級種子培養(yǎng)：
[0072] (3)液體二級種子培養(yǎng)：
[0073] (4)固體發(fā)酵培養(yǎng)：
[0074] (5)發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，選擇流化床等多種干燥方法，將物料干燥到水分含量在7%以 下。對固體發(fā)酵物料進行粉碎。
[0075] 本發(fā)明所用靈芝菌種購于中國工業(yè)微生物菌種保藏中心，菌號CICC14080。
[0076] 本發(fā)明中斜面培養(yǎng)基組成可以為PDA斜面培養(yǎng)基或其他合適培養(yǎng)基。
[0077] 本發(fā)明固體發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源主要選擇麩皮、葡萄糖、蔗糖、淀粉、玉米粉、玉米芯 (粉碎后）等常用原料，氮源可以選擇花生餅粉、蛋白胨、脫脂大豆蛋白粉、豆餅粉、酵母粉 等；需要添加的無機鹽有磷酸二氫鉀，硫酸鎂。
[0078] 在發(fā)酵培養(yǎng)基中還添加有質(zhì)量比為2-6%粉碎后過40-50目的生姜；
[0079] 本發(fā)明中液體發(fā)酵種子培養(yǎng)基組成：淀粉2-3%，蔗糖3-5%，葡萄糖1-3%，蛋 白胨0.5%，脫脂大豆蛋白粉2-3%，磷酸二氫鉀0. 13-0. 2%，硫酸鎂0. 1-0. 15%，維生素 BpPPm，PH6-7。
[0080] 本發(fā)明中靈芝培養(yǎng)方法適合同屬其它菌種通過發(fā)酵法進行大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)。
[0081] 菌種誘變
[0082] 采取紫外誘變方法：以CICC10023為出發(fā)菌株，制成菌懸液，涂布于培養(yǎng)基平皿 上，紫外照射90s后37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
[0083] 菌種篩選
[0084] 從90s平皿上挑30個長得強壯的單菌落，接種于斜面上，37°C培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24 小時，0--4°C冷藏保存；以原始菌種作為對照，采用常規(guī)選育條件，羧甲基纖維素鈉作為碳 源和蛋白水解圈方法篩選產(chǎn)纖維素酶和蛋白酶強的菌株，篩選獲得產(chǎn)纖維素酶和蛋白酶強 的菌株枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)Ll，此菌株產(chǎn)纖維素酶能力比原始菌株提高了 25%，產(chǎn)蛋白酶能力比原始菌株提高了 52%。將該菌種在中國普通微生物菌種保藏管理委 員會普通微生物中心保藏，保藏編號為CGMCC No 6012。
[0085] 本產(chǎn)品所用枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)菌種，該菌株已經(jīng)于2012年4月 16日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址位于北京市朝陽區(qū) 北辰西路1號院3號，（郵編100101)，保藏編號為CGMCC N〇6012。
[0086] 通過實驗研宄表明：本發(fā)明產(chǎn)品具有良好的抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、等致 病菌的特性。采用杯碟法對靈芝飼料添加劑產(chǎn)品的抑菌效果進行了研宄，試驗采用飼料添 加劑的10倍水浸提液進行研宄。實驗結(jié)果見表1，結(jié)果表明本發(fā)明產(chǎn)品具有抑制致病菌生 長的良好特性。
[0087] 表1飼料添加劑產(chǎn)品的抑菌效果
[0088]

【權(quán)利要求】
1. 一種營養(yǎng)飼料添加劑產(chǎn)品，重量份數(shù)組成如下：水蘇糖1-3,大豆多肽3-10,當歸萃 取物3-5,香菇多糖2-6,枯草芽孢桿菌粉16-23,植物乳桿菌菌粉15-25,生姜粉2-5,靈芝 菌固體發(fā)酵培養(yǎng)物3-8。
2. 如權(quán)利要求1所述營養(yǎng)飼料添加劑產(chǎn)品，植物乳桿菌為CGMCC9405,枯草芽孢桿菌 (Bacillussubtilis)為CGMCC6012。
3. 如權(quán)利要求1所述營養(yǎng)飼料添加劑產(chǎn)品，靈芝菌固體發(fā)酵培養(yǎng)物制備方法如下：斜 面菌種活化培養(yǎng)：將保藏的靈芝斜面菌種轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上，22-28°C培養(yǎng)96-120小時 左右，至菌絲長滿斜面即可；最佳培養(yǎng)溫度25°C;液體培養(yǎng)接種到固體發(fā)酵培養(yǎng)，采用SGF 固體發(fā)酵罐；發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，選擇流化床等多種干燥方法，將物料干燥到水分含量在7%以 下。對固體發(fā)酵物料進行粉碎；在上述固體發(fā)酵培養(yǎng)基中添加有質(zhì)量比為2-6%粉碎后，過 40-50目的生姜。
4. 如權(quán)利要求1所述營養(yǎng)飼料添加劑產(chǎn)品，所述當歸萃取物制備方法如下：當歸粉碎， 過40-50目篩后，添加當歸3-6倍重量無水乙醇浸漬提取，控制溫度30-45°C，2-4小時后調(diào) 整溫度為55-60°C1-2小時，提取液濃縮、干燥得到乙醇提取物；乙醇提取后的當歸殘渣中 添加75-85°C熱水，熱水添加量為當歸殘渣重量的2-4倍，處理時間30-50分鐘，連續(xù)提取 2-3次，將提取液真空濃縮后噴霧干燥，得到熱水提取物；將上述乙醇提取物和熱水提取物 合并粉碎，過60目篩，即得當歸提取物。
5. 如權(quán)利要求1所述營養(yǎng)飼料添加劑產(chǎn)品，重量份數(shù)組成如下：水蘇糖2,大豆多肽5， 當歸萃取物4,香菇多糖4,枯草芽孢桿菌粉20,植物乳桿菌菌粉20,生姜粉4,靈芝菌固體 發(fā)酵培養(yǎng)物5。
6. 如權(quán)利要求1所述營養(yǎng)飼料添加劑產(chǎn)品，重量份數(shù)組成如下：水蘇糖1，大豆多肽 10,當歸萃取物5,香菇多糖2,枯草芽孢桿菌粉23,植物乳桿菌菌粉25,生姜粉2,靈芝菌 固體發(fā)酵培養(yǎng)物8。
【文檔編號】A23K1/16GK104509697SQ201410495005
【公開日】2015年4月15日 申請日期:2014年9月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月24日
【發(fā)明者】李建樹, 邵素英 申請人:邵素英