一種金挖耳的快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種金挖耳的快速繁殖方法，包括外植體的消毒、誘導培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和煉苗移栽。本發(fā)明的金挖耳組培方法操作簡便，生長周期短，成活率高，可以短期內(nèi)獲得大量的制藥原料。
【專利說明】一種金挖耳的快速繁殖方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及金挖耳組織培養(yǎng)的快繁方法，屬于植物【技術領域】。

【背景技術】
[0002]金挖耳，Carpesium divaricatum,菊科天名精屬的植物，生長于海拔100米至2000米的山坡那、荒地，多生于路旁或山坡灌叢中，分布在日本、朝鮮以及中國大陸的華東、華中、西南、華南、東北等地，清熱解毒，治感冒，頭風，泄瀉，咽喉腫痛，赤眼，癰腫瘡毒，痔核出血。目前金挖耳的利用皆為人工采集，采集難度達，尚未有人工引種栽培，使用率低，組培應用于金挖耳的繁殖技術，有利于其廣泛的推廣應用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種金挖耳的快速繁殖方法，由該方法所制備得到的金挖耳增殖系數(shù)高，成活率高，可以提高金挖耳的利用率。
[0004]本發(fā)明所要解決的技術問題是通過以下方案來實現(xiàn)的:
取金挖耳帶芽莖段，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污潰，流水沖洗lh，超凈工作臺上75%酒精處理30s，氯化汞處理9min，無菌水沖洗5遍。接入培養(yǎng)基配方為MS+NAA0.2mg/L+IBA0.5mg/l+VC誘導培養(yǎng)基中進行芽誘導培養(yǎng)，附加蔗糖30g/L，瓊脂
6.5g/L，PH5.8，光照 20001x，誘導出來的芽放入增殖培養(yǎng)基 MS+2，4-D0.15mg/L+TDZ0.3mg/L+15g/LPVP,附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，PH5.8，光照20001x，增殖培養(yǎng)出來的叢生芽放入生根培養(yǎng)基3/4MS+NAA0.3mg/L，將生根試管苗的玻璃瓶置于培養(yǎng)室中打開封口膜煉苗培養(yǎng)，然后小心取出試管苗，洗凈根部培養(yǎng)基，栽植于含水量為50%的珍珠巖的育苗盤中培養(yǎng)15d，移栽至室外，三層薄膜覆蓋，培養(yǎng)20天后，逐層掀開薄膜，進行野外栽培。
[0005]采用本發(fā)明制備的金挖耳成活率為94%，周期短，產(chǎn)量大，能耗少，利于大規(guī)模種植。
[0006]下面將結合【具體實施方式】對本發(fā)明作進一步闡述，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
[0007]實施例1
取金挖耳帶芽莖段，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污潰，流水沖洗lh，超凈工作臺上75%酒精處理30s，氯化汞處理9min，無菌水沖洗5遍。接入培養(yǎng)基配方為MS+NAA0.2mg/L+IBA0.5mg/l+VC誘導培養(yǎng)基中進行芽誘導培養(yǎng)，附加蔗糖30g/L，瓊脂
6.5g/L，PH5.8，光照20001x，誘導出來的芽放入增殖培養(yǎng)基MS+2，4-D0.lmg/L+TDZ0.2mg/L+15g/LPVP,附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，PH5.8，光照20001x，增殖培養(yǎng)出來的叢生芽放入生根培養(yǎng)基3/4MS+NAA0.lmg/L,生根后的金挖耳試管苗先移栽到溫室，然后移栽到大田進行煉苗培養(yǎng)，金挖耳成活率為91%。
[0008]實施例2
取金挖耳帶芽莖段，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污潰，流水沖洗lh，超凈工作臺上75%酒精處理30s，氯化汞處理9min，無菌水沖洗5遍。接入培養(yǎng)基配方為MS+NAA0.2mg/L+IBA0.5mg/l+VC誘導培養(yǎng)基中進行芽誘導培養(yǎng)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，PH5.8，光照20001x，誘導出來的芽放入增殖培養(yǎng)基MS+2，4-D0.2mg/L+TDZ0.4mg/L+15g/LPVP,附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，PH5.8，光照20001x，增殖培養(yǎng)出來的叢生芽放入生根培養(yǎng)基3/4MS+NAA0.5mg/L,生根后的金挖耳試管苗先移栽到溫室，然后移栽到大田進行煉苗培養(yǎng)，金挖耳成活率為90%。
[0009]實施例3
取金挖耳帶芽莖段，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污潰，流水沖洗lh，超凈工作臺上75%酒精處理30s，氯化汞處理9min，無菌水沖洗5遍。接入培養(yǎng)基配方為MS+NAA0.2mg/L+IBA0.5mg/l+VC誘導培養(yǎng)基中進行芽誘導培養(yǎng)，附加蔗糖30g/L，瓊脂
6.5g/L，PH5.8，光照 20001x，誘導出來的芽放入增殖培養(yǎng)基 MS+2，4-D0.15mg/L+TDZ0.2mg/L+15g/LPVP,附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，PH5.8，光照20001x，增殖培養(yǎng)出來的叢生芽放入生根培養(yǎng)基3/4MS+NAA0.5mg/L，生根后的金挖耳試管苗先移栽到溫室，然后移栽到大田進行煉苗培養(yǎng)，金挖耳成活率為89%。
[0010]實施例4
取金挖耳帶芽莖段，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污潰，流水沖洗lh，超凈工作臺上75%酒精處理30s，氯化汞處理9min，無菌水沖洗5遍。接入培養(yǎng)基配方為MS+NAA0.2mg/L+IBA0.5mg/l+VC誘導培養(yǎng)基中進行芽誘導培養(yǎng)，附加蔗糖30g/L，瓊脂
6.5g/L，PH5.8，光照 20001x，誘導出來的芽放入增殖培養(yǎng)基 MS+2，4-D0.15mg/L+TDZ0.4mg/L+15g/LPVP,附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，PH5.8，光照20001x，增殖培養(yǎng)出來的叢生芽放入生根培養(yǎng)基3/4MS+NAA0.lmg/L,生根后的金挖耳試管苗先移栽到溫室，然后移栽到大田進行煉苗培養(yǎng)，金挖耳成活率為92%。
【權利要求】
1.一種金挖耳的快速繁殖方法，包括無菌外植體的獲得、芽的誘導、芽的增殖、生根誘導、野外煉苗移栽，其主要步驟如下: (1)取金挖耳帶芽莖段，按照常規(guī)的消毒方法對其進行滅菌處理； (2)將步驟(I)滅菌處理過的金挖耳帶芽莖段接入培養(yǎng)基配方為MS+NAA0.2mg/L+IBA0.5mg/l+VC誘導培養(yǎng)基中進行芽誘導培養(yǎng)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，PH5.8，光照 2000IX ； (3)取步驟(2)誘導出來的芽放入增殖培養(yǎng)基MS+2，4-D0.1-0.2mg/L+TDZ0.2-0.4mg/L+15g/LPVP,附加蔗糖 30g/L，瓊脂 6.5g/L，PH5.8，光照 20001x ； (4)取步驟(3)增殖培養(yǎng)出來的叢生芽放入生根培養(yǎng)基3/4MS+NAA0.1-0.5mg/L ； (5)取步驟(4)生根后的金挖耳試管苗先移栽到溫室，然后移栽到大田進行煉苗培養(yǎng)。
2.按照權利要求1所述的一種金挖耳的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(I)中所述金挖耳無菌芽的獲得為，取金挖耳帶芽莖段，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污潰，流水沖洗lh，超凈工作臺上75%酒精處理30s，氯化汞處理9min，無菌水沖洗5遍。
3.按照權利要求1所述的一種金挖耳的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(2)誘導培養(yǎng)基MS+NAA0.2mg/L+IBA0.5mg/l中附加了 VC，能克服苗在增殖培養(yǎng)過程中褐化現(xiàn)象的出現(xiàn)。
4.按照權利要求1所述的一種金挖耳的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(3)中的增殖培養(yǎng)基MS+2，4-D0.1-0.2mg/L+TDZ0.2-0.4mg/L中附加了 15g/LPVP可以防止在增殖培養(yǎng)過程中幼苗的玻璃化現(xiàn)象。
5.按照權利要求1所述的一種金挖耳的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(4)中的生根培養(yǎng)條件為蔗糖20g/L，瓊脂5g/L，PH5.8，光照40001x，濕度60-70%。
6.按照權利要求1所述的一種金挖耳的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(5)中金挖耳的煉苗培養(yǎng)方法為將生根試管苗的玻璃瓶置于培養(yǎng)室中打開封口膜煉苗培養(yǎng)，然后小心取出試管苗，洗凈根部培養(yǎng)基，栽植于含水量為50%的珍珠巖的育苗盤中培養(yǎng)15d,移栽至室外，三層薄膜覆蓋，培養(yǎng)20天后，逐層掀開薄膜，進行野外栽培。
【文檔編號】A01H4/00GK104170736SQ201410449524
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年9月4日 優(yōu)先權日:2014年9月4日
【發(fā)明者】張金芳, 楊存 申請人:南京標科生物科技有限公司