一種促進(jìn)東方百合雜交種子萌發(fā)的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種促進(jìn)東方百合雜交種子萌發(fā)的方法。本發(fā)明提供了一種促進(jìn)百合雜交種子萌發(fā)的方法，包括如下步驟：1)將百合雜交種子的胚剪切去除其周圍的胚乳和翅得到剩余部分的胚；2)培養(yǎng)所述剩余部分的胚，實(shí)現(xiàn)促進(jìn)百合雜交種子萌發(fā)。本發(fā)明對加速東方百合育種過程提供了技術(shù)參考，對百合種子組培快繁具有一定的參考意義。
【專利說明】一種促進(jìn)東方百合雜交種子萌發(fā)的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種促進(jìn)東方百合雜交種子萌發(fā)的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 百合（Lilium spp.)屬多年生球根類植物，是國內(nèi)外著名的觀賞花卉?，F(xiàn)在市場 流行的四大類百合中東方百合所占栽培比例最大，屬于百合雜種系中花朵最大最美麗的一 個(gè)品種群。東方百合生產(chǎn)中的常規(guī)分球、分珠芽、鱗片扦插、鱗片包埋等繁殖方法，繁殖量較 小，易造成種苗退化。百合生長周期較長，從種子到開花需2-3年的時(shí)間。組織培養(yǎng)不僅縮 短百合生長周期、大大提高繁殖系數(shù)，還解決了種苗退化、帶病毒多的問題。東方百合雜交 種子自然萌發(fā)時(shí)間少則需30d，多則90-110d，容易引起種子發(fā)霉腐爛，且發(fā)芽不整齊、萌發(fā) 率極低，制約著百合產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的進(jìn)程。常規(guī)采用的胚拯救方法，多為授粉60d后陸續(xù)有白 色胚根長出，不僅操作繁瑣，且對處理時(shí)期要求嚴(yán)格。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 為縮短百合雜交種子萌發(fā)時(shí)間，提高種子萌發(fā)力，使其出苗整齊，本發(fā)明提供一種 促進(jìn)百合雜交種子萌發(fā)的方法。
[0004] 本發(fā)明提供的方法，包括如下步驟：
[0005] 1)將百合雜交種子的胚剪切去除其周圍的胚乳和翅得到剩余部分的胚；
[0006] 2)培養(yǎng)所述剩余部分的胚，實(shí)現(xiàn)促進(jìn)百合雜交種子萌發(fā)；
[0007] 上述方法中，步驟2)中，所述培養(yǎng)所需的培養(yǎng)基為含有蔗糖的萌發(fā)培養(yǎng)基；
[0008] 所述含有蔗糖的萌發(fā)培養(yǎng)基中的蔗糖終濃度為20_40g/l。
[0009] 上述培養(yǎng)條件是光強(qiáng)1000-12001x，光照時(shí)間12h，溫度控制在（25±1) °C之間。
[0010] 上述方法中，所述含有蔗糖的萌發(fā)培養(yǎng)基按照包括如下步驟的方法制備：將蔗糖、 凝固劑、MS粉和水混合，得到萌發(fā)培養(yǎng)基，所述蔗糖在所述萌發(fā)培養(yǎng)基中的終濃度為20g/ l、30g/l或40g/l，所述凝固劑在所述萌發(fā)培養(yǎng)基中的終濃度為9g/l ;所述MS粉在所述萌 發(fā)培養(yǎng)基中的終濃度為4. 43g/l ;
[0011] 所述凝固劑具體為瓊脂。
[0012] 上述MS粉由具有如下質(zhì)量份數(shù)的物質(zhì)組成：1650質(zhì)量份數(shù)NH4N03、1900質(zhì)量份數(shù) KN0 3、440 質(zhì)量份數(shù) CaCl2 ? 2H20、370 質(zhì)量份數(shù) MgSO4 ? 7H20、170 質(zhì)量份數(shù) KH2P04、0. 83 質(zhì)量 份數(shù)KI、6. 2質(zhì)量份數(shù)H3B03、22. 3質(zhì)量份數(shù)MnSO4 MH2OJ. 6質(zhì)量份數(shù)ZnSO4 WH2CKO. 25質(zhì) 量份數(shù) Na2MoO4 ? 2H20、0. 025 質(zhì)量份數(shù) CuSO4 ? 5H20、0. 025 質(zhì)量份數(shù) CoCl2 ? 6H20、27. 8 質(zhì)量 份數(shù)鐵鹽FeSO4 ? 7H20、37. 3質(zhì)量份數(shù)Na2-EDTA ? 2H20、100質(zhì)量份數(shù)肌醇、0. 5質(zhì)量份數(shù)煙 酸、0. 5質(zhì)量份數(shù)鹽酸吡哆醇、0. 1質(zhì)量份數(shù)鹽酸硫胺素和2質(zhì)量份數(shù)甘氨酸組成。
[0013] 上述方法中，在步驟1)的剪切前，還包括如下步驟：將所述百合雜交種子在水中 浸泡。
[0014] 上述方法中，所述浸泡的時(shí)間為24h。
[0015] 上述方法中，所述百合雜交種子為干種子。
[0016] 上述方法中，所述百合雜交種子為東方百合雜交種子，所述東方百合雜交種子由 '卡薩布蘭卡'和'索邦'雜交得到的雜交子代種子或由'馬可波羅'和'索邦'雜交得到的 雜交子代種子。
[0017] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種用于促進(jìn)百合雜交種子萌發(fā)的培養(yǎng)基。本發(fā)明提 供的培養(yǎng)基，按照包括如下步驟的方法制備：將蔗糖、凝固劑、MS粉和水混合，得到萌發(fā)培 養(yǎng)基，所述蔗糖在所述萌發(fā)培養(yǎng)基中的終濃度為20g/l-40g/l，所述凝固劑在所述萌發(fā)培養(yǎng) 基中的終濃度為9g/l ;所述MS粉在所述萌發(fā)培養(yǎng)基中的終濃度為4. 43g/l
[0018] 上述培養(yǎng)基中，所述蔗糖在所述萌發(fā)培養(yǎng)基中的終濃度為20g/l、30g/l或40g/l。
[0019] 所述含有蔗糖的萌發(fā)培養(yǎng)基pH值為5. 80-5. 8。
[0020] 上述培養(yǎng)基中，所述凝固劑為瓊脂。
[0021] 上述培養(yǎng)基的配置方法為：將各原料按配比溶于水，在100-120°C高溫滅菌 15_20min，冷卻凝固即可。
[0022] 本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明以東方百合'卡薩布蘭卡' X '索邦'和'馬可波 羅' X '索邦'雜交種子為試驗(yàn)材料，通過種子浸泡處理、切割處理以及不同蔗糖濃度處理， 觀察其對發(fā)芽勢、萌發(fā)率及存活率的影響，篩選出最佳種子處理方法和最適培養(yǎng)基，種子切 割處理能夠縮短東方百合雜交種子的萌發(fā)時(shí)間，并且顯著提高萌發(fā)率，切割處理的'卡薩布 蘭卡' X '索邦'種子發(fā)芽勢和萌發(fā)率均極顯著地高于對照，發(fā)芽勢達(dá)到75. 56%，萌發(fā)率達(dá) 到80. 00%;'馬可波羅' X '索邦'種子的發(fā)芽勢為100.00%，萌發(fā)率為100. 00%。切割 處理后的'卡薩布蘭卡' X '索邦'種子和'馬可波羅' X '索邦'種子的最適培養(yǎng)基均為 MS+20g/l蔗糖+9g/l瓊脂。本發(fā)明的方法提高了百合種子萌發(fā)力和整齊度，縮短萌發(fā)期，且 簡便，可操作性強(qiáng)，處理時(shí)間無嚴(yán)格要求，大大縮短了百合生長周期，增大了繁殖系數(shù)，達(dá)到 了高效快繁育種的目的。本發(fā)明對加速百合育種過程提供了技術(shù)參考，對百合種子組培快 繁具有一定的參考意義。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0023] 圖1為不同處理下的'卡薩布蘭卡' X '索邦'種子0d-98d下的萌發(fā)率
[0024] 圖2為不同處理下的'馬可波羅' X '索邦'種子0d-98d下的萌發(fā)率
[0025] 圖3為不同處理的生長圖
[0026] A為馬 X 索（切割）0天，15d，30d，60d
[0027] B為馬X索（切割+浸泡）0天，15d，30d，60d
[0028] C 為馬 X 索（浸泡）0 天，15d，30d，60d
[0029] D 為馬 X 索對照 0 天，15d，30d，60d
[0030] E為卡X索切割蔗糖濃度20、30、40 (60d)
[0031] F為馬X索切割蔗糖濃度20、30、40(60d)

【具體實(shí)施方式】
[0032] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0033] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0034] 實(shí)施例1、剪切對促進(jìn)東方百合雜交種子萌發(fā)的影響 [0035] 1、樣品的制備
[0036] 2012年6月于北京市輻射中心種質(zhì)資源圃分別以東方百合品種'卡薩布蘭卡'、馬 可波羅'為母本，'索邦'為父本進(jìn)行雜交授粉，10月采收雜交子代種子，4°C冷藏，得到樣品。 雜交親本材料均購自荷蘭，雜交后代種子來源于常規(guī)雜交授粉。
[0037] 2、剪切處理
[0038] 2013年選擇其中顆粒飽滿、胚清晰（在日光燈下可看到胚乳中間的細(xì)長部分）、成 熟的雜交子代種子進(jìn)行如下3種處理：
[0039] 處理一（CK):干種子，消毒濾干后，接入含有培養(yǎng)基（MS+30g/l蔗糖+9g/l瓊脂） 的三角瓶中，編號Ml ;
[0040] 處理二：將干種子在自來水中浸泡24h，消毒濾干后，接入含有培養(yǎng)基（MS+30g/l 蔗糖+9g/l瓊脂）的三角瓶中，編號M2。
[0041] 處理三：干種子先在自水中浸泡24h，再剪掉胚周圍的胚乳和翅，將剩余部分的 胚，消毒濾干后，接入含有培養(yǎng)基（MS+30g/l蔗糖+9g/l瓊脂）的三角瓶中，編號M3。
[0042] 處理四：剪掉干種子胚周圍的胚乳和翅，將剩余部分的胚，消毒濾干后，接入含有 培養(yǎng)基（MS+30g/l蔗糖+9g/l瓊脂）的三角瓶中，編號M4。
[0043] 上述每種處理分別采用'卡薩布蘭卡' X '索邦'的雜交子代種子和'馬可波 羅' X '索邦'的雜交子代種子，每個(gè)雜交組合選取有胚種子240粒，每個(gè)處理15粒，重復(fù) 三次，結(jié)果取平均值。
[0044] 上述培養(yǎng)基為含有蔗糖的萌發(fā)培養(yǎng)基，其pH值為5. 80-5. 89,培養(yǎng)基配方為：MS 粉4. 43g/l、蔗糖30g/l、瓊脂粉9g/l，配置方法為：將各原料按上述終濃度菌溶于水，在 100-120°C高溫滅菌15-20min，冷卻凝固即可。
[0045] 上述MS粉由具有如下質(zhì)量份數(shù)的物質(zhì)組成：1650質(zhì)量份數(shù)NH4N03、1900質(zhì)量份數(shù) KN0 3、440 質(zhì)量份數(shù) CaCl2 ? 2H20、370 質(zhì)量份數(shù) MgSO4 ? 7H20、170 質(zhì)量份數(shù) KH2P04、0. 83 質(zhì)量 份數(shù)KI、6. 2質(zhì)量份數(shù)H3B03、22. 3質(zhì)量份數(shù)MnSO4 MH2OJ. 6質(zhì)量份數(shù)ZnSO4 WH2CKO. 25質(zhì) 量份數(shù) Na2MoO4 ? 2H20、0. 025 質(zhì)量份數(shù) CuSO4 ? 5H20、0. 025 質(zhì)量份數(shù) CoCl2 ? 6H20、27. 8 質(zhì)量 份數(shù)鐵鹽FeSO4 ? 7H20、37. 3質(zhì)量份數(shù)Na2-EDTA ? 2H20、100質(zhì)量份數(shù)肌醇、0. 5質(zhì)量份數(shù)煙 酸、0. 5質(zhì)量份數(shù)鹽酸吡哆醇、0. 1質(zhì)量份數(shù)鹽酸硫胺素和2質(zhì)量份數(shù)甘氨酸組成。
[0046] 培養(yǎng)條件是光強(qiáng)1000-12001X，光照時(shí)間12h，溫度控制在（25±1) °C之間。
[0047] 上述4種處理方式如下表1所示。
[0048] 表1六種試驗(yàn)方法匯總表
[0049]

【權(quán)利要求】
1. 一種促進(jìn)百合雜交種子萌發(fā)的方法，包括如下步驟： 1) 將百合雜交種子的胚剪切去除其周圍的胚乳和翅得到剩余部分的胚； 2) 培養(yǎng)所述剩余部分的胚，實(shí)現(xiàn)促進(jìn)百合雜交種子萌發(fā)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于： 步驟2)中，所述培養(yǎng)所需的培養(yǎng)基為含有蔗糖的萌發(fā)培養(yǎng)基； 所述含有蔗糖的萌發(fā)培養(yǎng)基中的蔗糖終濃度為20-40g/l。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述含有蔗糖的萌發(fā)培養(yǎng)基按照包括如 下步驟的方法制備：將蔗糖、凝固劑、MS粉和水混合，得到萌發(fā)培養(yǎng)基，所述蔗糖在所述萌 發(fā)培養(yǎng)基中的終濃度為20g/l、30g/l或40g/l，所述凝固劑在所述萌發(fā)培養(yǎng)基中的終濃度 為9g/l ;所述MS粉在所述萌發(fā)培養(yǎng)基中的終濃度為4. 43g/l ; 所述凝固劑具體為瓊脂。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：所述含有蔗糖的萌發(fā)培養(yǎng)基pH值為 5. 80-5. 8〇
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：在步驟1)的剪切前，還包括如 下步驟：將所述百合雜交種子在水中浸泡。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于：所述浸泡的時(shí)間為24h。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：所述百合雜交種子為干種子。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于： 所述百合雜交種子為東方百合雜交種子，所述東方百合雜交種子為由'卡薩布蘭卡'和 '索邦'雜交得到的雜交子代種子或由'馬可波羅'和'索邦'雜交得到的雜交子代種子。
9. 一種用于促進(jìn)百合雜交種子萌發(fā)的培養(yǎng)基，按照包括如下步驟的方法制備：將蔗 糖、凝固劑、MS粉和水混合，得到萌發(fā)培養(yǎng)基，所述蔗糖在所述萌發(fā)培養(yǎng)基中的終濃度為 20g/l-40g/l，所述凝固劑在所述萌發(fā)培養(yǎng)基中的終濃度為9g/l ;所述MS粉在所述萌發(fā)培 養(yǎng)基中的終濃度為4.43g/l。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的培養(yǎng)基，其特征在于：所述蔗糖在所述萌發(fā)培養(yǎng)基中的終濃 度為 20g/l、30g/l 或 40g/l ; 所述凝固劑為瓊脂。
【文檔編號】A01H4/00GK104303637SQ201410433019
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年8月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月28日
【發(fā)明者】白錦榮, 郎利新, 孔瀅, 竇曉瑩, 包放, 尚宏忠, 霍晨思 申請人:北京市輻射中心