一種綠藻糖基微膠囊生物菌劑及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種綠藻糖基微膠囊生物菌劑及其制備方法和應(yīng)用。所述綠藻糖基微膠囊生物菌劑由嗜熱脂肪地芽孢桿菌、花域芽孢桿菌、甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌、西姆芽孢桿菌四株菌按比例混合復(fù)配，并采用對菌體活力保護最為有效和實用的微膠囊技術(shù)，將活性菌包裹在以滸苔多糖為主要組分的囊壁物質(zhì)中，制成綠藻糖基微膠囊生物菌劑，并具體提供了所述綠藻糖基微膠囊生物菌劑的制備方法。本發(fā)明提供的綠藻糖基微膠囊生物菌劑無污染，能夠達到肥料和農(nóng)藥的配合使用功效，工藝簡單、成本低，實現(xiàn)有利于保護環(huán)境、抗病性和抗逆性強、提高存活率、易于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點。CGMCC No.728520130306CGMCC No.757220130508CGMCC No.757120130508CGMCC No.757020130508
【專利說明】一種綠藻糖基微膠囊生物菌劑及其制備方法和應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種綠藻糖基微膠囊生物菌劑及其制備方 法和應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 我國是一個農(nóng)業(yè)大國，農(nóng)作物的產(chǎn)量及質(zhì)量關(guān)系著國計民生。目前，促進和保護作 物生長主要靠使用農(nóng)藥、化肥，但農(nóng)藥、化肥的過量濫用，造成土壤板結(jié)、土壤鹽漬化和重金 屬污染，嚴(yán)重污染農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境，危害人類的健康。
[0003] 近年來，在國家政策允許下，一部分農(nóng)藥、化肥逐步被微生態(tài)合劑代替，微生態(tài)制 劑既有肥料的效果，又有農(nóng)藥的功效，把植物保護與植物營養(yǎng)合二為一，同時，微生物肥料 也存在著多種菌株共生性較差、無法適應(yīng)脅迫環(huán)境、與無機肥料復(fù)配存活率較低等弊端。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：針對我國化學(xué)肥料過量濫用、生物肥料使用的多 種弊端，本發(fā)明提供了一種綠藻糖基微膠囊生物菌劑及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明所述綠 藻糖基微膠囊生物菌劑無污染，能夠達到肥料和農(nóng)藥的配合使用功效，工藝簡單、成本低， 具有有利于保護環(huán)境、抗病性和抗逆性強、提高存活率、易于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點。
[0005] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)： 一種綠藻糖基微膠囊生物菌劑，它包括囊內(nèi)物質(zhì)和囊壁物質(zhì)：所述囊內(nèi)物質(zhì)包括嗜熱 脂肪地芽孢桿菌、花域芽孢桿菌、甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌和西姆芽孢桿菌，所述四株菌均保 藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏編號為：嗜熱脂肪地芽孢桿 菌為CGMCC No. 7572、花域芽孢桿菌為CGMCC No. 7571、甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌菌株為CGMCC NO. 7570、西姆芽孢桿菌為CGMCC No. 7285 ;所述囊壁物質(zhì)主要組分是滸苔多糖。
[0006] 進一步的，所述綠藻糖基微膠囊生物菌劑中，四株菌的菌含量為：嗜熱脂肪地芽孢 桿菌20%、花域芽孢桿菌10%、甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌10%、西姆芽孢桿菌60%，按活菌數(shù)百分比 計算。
[0007] 本發(fā)明還提供了所述綠藻糖基微膠囊生物菌劑的制備方法，它包括以下步驟： (1) 制備一級種子液：將所述四菌株在溫度為35°C下恒溫?fù)u床培養(yǎng)得到一級種子液； (2) 制備二級種子液：將所述一級種子液按5%的接種量接種到二級發(fā)酵罐中培養(yǎng)得 到二級種子液，培養(yǎng)溫度與步驟（1)相同； (3) 發(fā)酵生產(chǎn)：將所述二級種子液分別轉(zhuǎn)接入生產(chǎn)發(fā)酵罐中，通氣量為100-150升/ 分鐘；以發(fā)酵液中芽孢含量超過80%為指標(biāo)，終止發(fā)酵； (4) 菌液復(fù)配：將四菌株的發(fā)酵液混合復(fù)配得到混合菌液； (5) 制備菌劑產(chǎn)品：將所述混合菌液過篩，加入滸苔多糖，復(fù)配得到綠藻糖基微膠囊生 物菌劑。
[0008] 進一步的，所述滸苔多糖的制備方法包括以下步驟： a. 預(yù)處理：將滸苔粉經(jīng)過熱水浸提得到可溶組分，將所述可溶組分進行過氧化氫預(yù)處 理； b. 提?。豪蒙锩阜▽λ霾襟E（a)所得產(chǎn)物進行提取； c. 分級洗脫：將所述步驟（b)所得產(chǎn)物和不同濃度NaCl經(jīng)DEAE Sepharose Fast Flow 分級洗脫，得到所述滸苔多糖。
[0009] 進一步的，上述綠藻糖基微膠囊生物菌劑的制備方法中，所述步驟（1)搖床轉(zhuǎn)速 150-220轉(zhuǎn)/分鐘，步驟（2)二級發(fā)酵罐轉(zhuǎn)速為100-150轉(zhuǎn)/分鐘，步驟（3)生產(chǎn)發(fā)酵罐 轉(zhuǎn)速為100-150轉(zhuǎn)/分鐘。
[0010] 所述步驟（2)中二級種子的發(fā)酵培養(yǎng)基分別為： 西姆芽孢桿菌：玉米粉2.0 g/L，葡萄糖10.0 g/L，豆餅粉10.0 g/L，蛋白胨4.0 g/L，碳酸鈣5. 0 g/L，磷酸氫二鉀0. 3 g/L，硫酸鎂0. 4 g/L，硫酸錳0. I g/L，pH值 7. 5-8. 0 ； 嗜熱脂肪地芽孢桿菌：淀粉3. 0 g/L，葡萄糖5. 0 g/L，豆柏25. 0 g/L，蛋白胨2. Og/L， 碳酸鈣5. 0 g/L，磷酸氫二鉀0. 3 g/L，硫酸鎂0. 4 g/L，硫酸錳0. I g/L，pH值7. 5-8. 0 ; 甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌：淀粉3.0 g/L，蔗糖5.0 g/L，豆柏10.0 g/L，蛋白胨2.0 g/L，碳 酸鈣5. 0 g/L，磷酸氫二鉀0. 3 g/L，硫酸鎂0. 4 g/L，硫酸錳0. I g/L，pH值7. 0-7. 5 ; 花域芽孢桿菌：玉米粉8. 0-10.0 g/L，淀粉2. 0-5.0 g/L，葡萄糖3. 0-5.0 g/L，蛋白 胨 1.0-3. 0 g/L，豆餅粉 8. 0-10. 0 g/L，蔗糖 2. 0-3. 0 g/L，磷酸氫二鉀 0. 5-1.0 g/L，碳酸 鈣 3. 0-5. 0 g/L，七水硫酸鎂 0. 8-1. 0 g/L，硫酸錳 0. 1-0. 5 g/L，消泡劑 1. 5-3. 0 g/L，pH 8. O-8. 5 〇
[0011] 所述步驟（3)中發(fā)酵培養(yǎng)前10小時轉(zhuǎn)速為100轉(zhuǎn)/分鐘，通氣量為100升/ 分鐘；10-16小時轉(zhuǎn)速為120轉(zhuǎn)/分鐘，通氣量為150升/分鐘；16小時后至發(fā)酵結(jié)束， 轉(zhuǎn)速為150轉(zhuǎn)/分鐘，通氣量200升/分鐘，四菌株發(fā)酵時間為18-24小時。
[0012] 本發(fā)明還提供了綠藻糖基微膠囊生物菌劑在快速腐熟農(nóng)牧業(yè)廢棄物和滸苔中的 應(yīng)用。
[0013] 其中，所述綠藻糖基微膠囊生物菌劑對農(nóng)牧業(yè)廢棄物和滸苔進行有氧發(fā)酵腐熟。
[0014] 本發(fā)明還提供了綠藻糖基微膠囊生物菌劑在開發(fā)多種農(nóng)用系列產(chǎn)品中的應(yīng)用。
[0015] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果是：本發(fā)明所述綠藻糖基微膠囊生物 菌劑由嗜熱脂肪地芽孢桿菌、花域芽孢桿菌、甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌、西姆芽孢桿菌四株菌按 比例混合復(fù)配，并采用對菌體活力保護最為有效和實用的微膠囊技術(shù)，將活性菌包裹在以 滸苔多糖為主要組分的囊壁物質(zhì)中，制成綠藻糖基微膠囊生物菌劑，并具體提供了所述綠 藻糖基微膠囊生物菌劑的制備方法。通過采用本發(fā)明的技術(shù)方案，可以減少化肥農(nóng)藥的使 用率，減輕了農(nóng)藥對環(huán)境造成的污染；本發(fā)明所選用的四株菌，均是抗病促生耐鹽堿功能菌 株，抗病性和抗逆性強；滸苔多糖能夠保護生物細(xì)胞核生物活性物質(zhì)在不良環(huán)境下活性免 遭破壞，提高存活率；所述綠藻糖基微膠囊生產(chǎn)成本低、操作簡單方便、易于儲存和運輸， 便于工廠擴大化生產(chǎn)，實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化；以綠藻基微膠囊為主要活性成分通過技術(shù)集成與復(fù)配 可開發(fā)生物菌劑、土壤改良劑、生物肥料等多種農(nóng)用系列產(chǎn)品，產(chǎn)品有效活菌數(shù)最高可達到 2000億/克以上，保質(zhì)期長達18-24個月，具有良好的技術(shù)效果和市場應(yīng)用前景。
[0016] 結(jié)合附圖閱讀本發(fā)明的【具體實施方式】后，本發(fā)明的其他特點和優(yōu)點將變得更加清 楚。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0017] 圖1是本發(fā)明中綠藻糖基微膠囊生物菌劑的制備方法流程圖。

【具體實施方式】
[0018] 下面結(jié)合附圖和【具體實施方式】對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步詳細(xì)的說明。
[0019] 實施例1、綠藻糖基微膠囊生物菌劑的制備 本發(fā)明提供的綠藻糖基微膠囊生物菌劑中，包括嗜熱脂肪地芽孢桿菌、花域芽孢桿菌、 甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌和西姆芽孢桿菌，四株菌的菌含量為：嗜熱脂肪地芽孢桿菌20%、花域 芽孢桿菌10%、甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌10%、西姆芽孢桿菌60%，按活菌數(shù)百分比計算，將活性 菌包裹在以滸苔多糖為主要組分的囊壁物質(zhì)中，制成綠藻糖基微膠囊生物菌劑。
[0020] 滸苔多糖的提取與制備 滸苔原粉經(jīng)過熱水浸提，可分為可溶組分與不溶組分，其中可溶組分大部分為可溶性 多糖。將可溶組分進行過氧化氫預(yù)處理，預(yù)處理時間12 h，溫度為50°C，過氧化氫濃度為 0. 2%，pH原始。最佳條件：溫度90度，料液比1:60,反應(yīng)4小時；所得產(chǎn)物加入蛋白酶、纖 維素酶，利用生物酶法提取滸苔多糖，反應(yīng)條件：溫度50度，料液比1:60,反應(yīng)4小時，最高 提取率達95%以上，多糖分離率達到90%以上。經(jīng)DEAE S印harose Fast Flow分級，緩沖 液和不同濃度NaCl分級洗脫，收集到三個組分：？1、？213。？1組分有優(yōu)良成膜特性及較好 穩(wěn)定性的特點，HPLC檢測平均分子量分別為155萬。
[0021] 本發(fā)明所述綠藻糖基微膠囊生物菌劑選用以下四株菌：嗜熱脂肪地芽孢桿菌 (Geobacillus stearothermophilus) LJ-2、花域芽抱桿菌（Bacillus vallismortis)、甲 基營養(yǎng)型芽抱桿菌菌株（Bacillus methylotrophicus) HD-1和西姆芽抱桿菌（Bacillus siamensis)，所述四株菌均已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地 址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，嗜熱脂肪地芽孢桿菌 (Geobacillus stearothermophilus)的保藏編號為 CGMCC No. 7572,它的保藏時間為 2013 年5月8日?；ㄓ蜓挎邨U菌（Bacillus vallismortis)的保藏編號為CGMCC No. 7571，它 的保藏時間為2013年5月8日。甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌（Bacillus methylotrophicus)的 保藏編號為CGMCC NO. 7570,它的保藏時間為2013年5月8日。西姆芽孢桿菌（Bacillus siamensis)的保藏編號為CGMCC No. 7285,它的保藏時間為2013年3月6日。
[0022] 所述嗜熱脂肪地芽孢桿菌菌株（Geobacillus stearothermophilus )LJ_2的菌 體為短桿狀，芽孢為圓形，芽孢端生。在營養(yǎng)瓊脂平板上37°C培養(yǎng)18h形成的菌落邊緣不 規(guī)則，直徑3. Omm-5. 0mm，呈白色，粉質(zhì)，干燥，無光澤，無凸起。
[0023] 花域芽孢桿菌菌株SJ，其特征在于：花域芽孢桿菌菌株SJ的菌落為圓形，邊緣整 齊，直徑3. Omm-8. 0mm，呈白色，有突起，表面呈膜，里面為粘液，挑起有拉絲，菌體呈短桿狀， 芽孢端生，圓形。
[0024] 甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌HD-I，菌落2-4 mm，邊緣整齊，易挑起，扁平，無突起，粉質(zhì)，呈 白色。
[0025] 西姆芽孢桿菌生物學(xué)特性：革蘭氏染色陰性，在平板培養(yǎng)基上形成的菌落直徑約3 _，邊緣整齊，濕潤光滑，高突起，黏稠，純白色。菌體形態(tài)呈短小桿狀，芽孢中生或端生。
[0026] 試管斜面種子：上述四株菌均以試管斜面形式保存于4°C冰箱，備用。菌株需定期 活化、復(fù)壯，均采用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。
[0027] 本發(fā)明所述綠藻糖基微膠囊生物菌劑的制備方法包括以下步驟： 1、制備一級種子液 分別將菌種的試管斜面接種于幾個1升三角瓶液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度分別為35°C， 搖床恒溫培養(yǎng)12-18小時，轉(zhuǎn)速150-220轉(zhuǎn)/分鐘。培養(yǎng)基均為LB培養(yǎng)基，配方為：胰蛋 白胨10g/L、酵母粉5g/L、氯化鈉10g/L，pH值7. 0。
[0028] 2、制備二級種子液 將上述一級種子按5%的接種量分別轉(zhuǎn)接入200升發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度與一級種子發(fā) 酵一致，轉(zhuǎn)速為100-150轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)時間為12小時。
[0029] 二級種子發(fā)酵培養(yǎng)基分別為： ①西姆芽孢桿菌：玉米粉2.0 g/L，葡萄糖10.0 g/L，豆餅粉10.0 g/L，蛋白胨4.0 g/L，碳酸鈣5. 0 g/L，磷酸氫二鉀0. 3 g/L，硫酸鎂0. 4 g/L，硫酸錳0. I g/L，pH值 7. 5-8. 0 〇
[0030] ②嗜熱脂肪地芽孢桿菌：淀粉3.0 g/L，葡萄糖5.0 g/L，豆柏25.0 g/L，蛋白胨 2. Og/L，碳酸鈣5. 0 g/L，磷酸氫二鉀0. 3 g/L，硫酸鎂0. 4 g/L，硫酸錳0. I g/L，pH值 7. 5-8. 0 〇
[0031] ③甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌：淀粉3.0 g/L，蔗糖5.0 g/L，豆柏10.0 g/L，蛋白胨2.0 g/L，碳酸鈣5. 0 g/L，磷酸氫二鉀0. 3 g/L，硫酸鎂0. 4 g/L，硫酸錳0. I g/L，pH值7. 0-7. 5 〇
[0032] ④花域芽孢桿菌：玉米粉8. 0-10. 0 g/L，淀粉2. 0-5. 0 g/L，葡萄糖3. 0-5. 0 g/L， 蛋白胨 1.0-3. 0 g/L，豆餅粉 8. 0-10. 0 g/L，蔗糖 2.0-3. 0 g/L，磷酸氫二鉀 0.5-1. 0 g/L， 碳酸鈣 3. 0-5. 0 g/L，七水硫酸鎂 0. 8-1. 0 g/L，硫酸錳 0. 1-0. 5 g/L，消泡劑 1. 5-3. 0 g/L， pH 8. 0-8. 5。
[0033] 3、發(fā)酵罐生產(chǎn) 同二級種子發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵溫度一致，將二級種子分別轉(zhuǎn)接入4噸生產(chǎn)發(fā)酵罐中， 發(fā)酵培養(yǎng)前10小時轉(zhuǎn)速為100轉(zhuǎn)/分鐘，通氣量為100升/分鐘；10-16小時轉(zhuǎn)速為 120轉(zhuǎn)/分鐘，通氣量為150升/分鐘；16小時后至發(fā)酵結(jié)束，轉(zhuǎn)速為150轉(zhuǎn)/分鐘，通 氣量200升/分鐘。以發(fā)酵液中芽孢含量超過80%為指標(biāo)，終止發(fā)酵，四菌株一般發(fā)酵時 間為18-24小時。
[0034] 菌液復(fù)配及菌劑產(chǎn)品： 4、菌液復(fù)配 本發(fā)明西姆芽孢桿菌、嗜熱脂肪地芽孢桿菌、甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌、花域芽孢桿菌分別 經(jīng)過單菌株深層高密度液體發(fā)酵，成芽孢狀態(tài)時，發(fā)酵液經(jīng)平板菌落計數(shù)，根據(jù)三菌株的活 菌數(shù)含量，按菌數(shù)進行復(fù)配，西姆芽孢桿菌、嗜熱脂肪地芽孢桿菌、甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌、花 域芽孢桿菌分別以60%、20%、10%、10%的含菌量配比得到混合菌液。
[0035] 5、制備菌劑產(chǎn)品 發(fā)酵結(jié)束放罐，發(fā)酵菌夜過40目網(wǎng)篩，加入提取的滸苔多糖，輔以乳化劑和穩(wěn)定劑，濃 縮后進行噴霧干燥，所得菌粉可達到2000億/g。
[0036] 實施例2、綠藻糖基微膠囊生物菌劑在農(nóng)牧業(yè)廢棄物和滸苔中的應(yīng)用 玉米秸桿：經(jīng)稀釋后5億/克的固體菌劑干粉撒施、噴施均可，每噸用原粉5g即可；配 合3kg尿素使用效果更佳。
[0037] 羊糞：經(jīng)稀釋后5億/克的固體菌劑干粉撒施、噴施均可，每噸用量500g。
[0038] 滸苔粉：經(jīng)稀釋后5億/克的固體菌劑干粉撒施、噴施均可，每噸用量500g。
[0039] 利用本發(fā)明所述腐熟菌劑對農(nóng)牧業(yè)廢棄物和滸苔進行有氧發(fā)酵腐熟，可堆置長寬 高均大于1米的堆，4天左右翻堆一次，以便通氧。腐熟終點以發(fā)酵物發(fā)黑、軟化、發(fā)粘、液 化、無臭為準(zhǔn)。
[0040] 腐熟后得到的產(chǎn)物均可直接作為有機肥使用，可有效提高農(nóng)作物品質(zhì)如果實甜 度、葉菜色澤等；可提高農(nóng)作物產(chǎn)量。
[0041] 實施例3、綠藻糖基微生物菌劑與大量元素水溶肥料的復(fù)配 將菌粉與尿素、硫酸銨、硝酸鉀、磷酸二氫鉀，微量元素硼、錳、銅、鋅按一定比例制備出 氮、磷、鉀營養(yǎng)構(gòu)成為12-3-18,有效活菌數(shù)> 4億/g高效復(fù)合生物大量元素水溶肥料。將 該產(chǎn)品在室溫下放置，每隔一段時間對制劑進行平板計數(shù)，檢測活菌數(shù)的穩(wěn)定性，實驗結(jié)果 見表1。
[0042] 表1綠藻糖基微生物菌劑室溫下活性降解規(guī)律

【權(quán)利要求】
1. 一種綠藻糖基微膠囊生物菌劑，包括囊內(nèi)物質(zhì)和囊壁物質(zhì)，其特征在于：所述囊內(nèi) 物質(zhì)包括嗜熱脂肪地芽孢桿菌、花域芽孢桿菌、甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌和西姆芽孢桿菌，所述 四株菌均保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏編號為：嗜熱脂 肪地芽孢桿菌為CGMCC No. 7572、花域芽孢桿菌為CGMCC No. 7571、甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌菌 株為CGMCC NO. 7570、西姆芽孢桿菌為CGMCC No. 7285;所述囊壁物質(zhì)主要組分是滸苔多糖。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種綠藻糖基微膠囊生物菌劑，其特征在于：所述綠藻糖基 微膠囊生物菌劑中，四株菌的菌含量為：嗜熱脂肪地芽孢桿菌20%、花域芽孢桿菌10%、甲基 營養(yǎng)型芽孢桿菌10%、西姆芽孢桿菌60%，按活菌數(shù)百分比計算。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1-2所述的綠藻糖基微膠囊生物菌劑的制備方法，其特征在于它包 括以下步驟： (1) 制備一級種子液：將所述四菌株在溫度為35°C下恒溫?fù)u床培養(yǎng)得到一級種子液； (2) 制備二級種子液：將所述一級種子液按5%的接種量接種到二級發(fā)酵罐中培養(yǎng)得 到二級種子液，培養(yǎng)溫度與步驟（1)相同； (3) 發(fā)酵生產(chǎn)：將所述二級種子液分別轉(zhuǎn)接入生產(chǎn)發(fā)酵罐中，通氣量為100-150升/ 分鐘；以發(fā)酵液中芽孢含量超過80%為指標(biāo)，終止發(fā)酵； (4) 菌液復(fù)配：將四菌株的發(fā)酵液混合復(fù)配得到混合菌液； (5) 制備菌劑產(chǎn)品：將所述混合菌液過篩，加入滸苔多糖，復(fù)配得到綠藻糖基微膠囊生 物菌劑。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的綠藻糖基微膠囊生物菌劑的制備方法，其特征在于所述滸 苔多糖的制備方法包括以下步驟： a. 預(yù)處理：將滸苔粉經(jīng)過熱水浸提得到可溶組分，將所述可溶組分進行過氧化氫預(yù)處 理； b. 提?。豪蒙锩阜▽λ霾襟E（a)所得產(chǎn)物進行提??； c. 分級洗脫：將所述步驟（b)所得產(chǎn)物和不同濃度NaCl經(jīng)DEAE Sepharose Fast Flow 分級洗脫，得到所述滸苔多糖。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的綠藻糖基微膠囊生物菌劑的制備方法，其特征在于：所 述步驟（1)搖床轉(zhuǎn)速150-220轉(zhuǎn)/分鐘，步驟（2)二級發(fā)酵罐轉(zhuǎn)速為100-150轉(zhuǎn)/分 鐘，步驟（3)生產(chǎn)發(fā)酵罐轉(zhuǎn)速為100-150轉(zhuǎn)/分鐘。
6. 根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的綠藻糖基微膠囊生物菌劑的制備方法，其特征在于：所 述步驟（2)中二級種子的發(fā)酵培養(yǎng)基分別為： 西姆芽孢桿菌：玉米粉2.0 g/L，葡萄糖10.0 g/L，豆餅粉10.0 g/L，蛋白胨4.0 g/L，碳酸鈣5. 0 g/L，磷酸氫二鉀0. 3 g/L，硫酸鎂0. 4 g/L，硫酸錳0. 1 g/L，pH值 7. 5-8. 0 ； 嗜熱脂肪地芽孢桿菌：淀粉3. 0 g/L，葡萄糖5. 0 g/L，豆柏25. 0 g/L，蛋白胨2. 0g/L， 碳酸鈣5. 0 g/L，磷酸氫二鉀0. 3 g/L，硫酸鎂0. 4 g/L，硫酸錳0. 1 g/L，pH值7. 5-8. 0 ; 甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌：淀粉3.0 g/L，蔗糖5.0 g/L，豆柏10.0 g/L，蛋白胨2.0 g/L，碳 酸鈣5. 0 g/L，磷酸氫二鉀0. 3 g/L，硫酸鎂0. 4 g/L，硫酸錳0. 1 g/L，pH值7. 0-7. 5 ; 花域芽孢桿菌：玉米粉8. 0-10.0 g/L，淀粉2. 0-5.0 g/L，葡萄糖3. 0-5.0 g/L，蛋白 胨 1.0-3. 0 g/L，豆餅粉 8. 0-10. 0 g/L，蔗糖 2. 0-3. 0 g/L，磷酸氫二鉀 0. 5-1.0 g/L，碳酸 鈣 3. 0-5. 0 g/L，七水硫酸鎂 0. 8-1. 0 g/L，硫酸錳 0. 1-0. 5 g/L，消泡劑 1. 5-3. 0 g/L，pH 8. 0-8. 5 〇
7. 根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的微生物腐熟菌劑的制備方法，其特征在于：所述步驟 (3)中發(fā)酵培養(yǎng)前10小時轉(zhuǎn)速為100轉(zhuǎn)/分鐘，通氣量為100升/分鐘；10-16小時轉(zhuǎn) 速為120轉(zhuǎn)/分鐘，通氣量為150升/分鐘；16小時后至發(fā)酵結(jié)束，轉(zhuǎn)速為150轉(zhuǎn)/分 鐘，通氣量200升/分鐘，四菌株發(fā)酵時間為18-24小時。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1-2所述的綠藻糖基微膠囊生物菌劑在農(nóng)牧業(yè)廢棄物和滸苔中的應(yīng) 用。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的綠藻糖基微膠囊生物菌劑在農(nóng)牧業(yè)廢棄物和滸苔中的應(yīng) 用，其特征在于：所述綠藻糖基微膠囊生物菌劑對農(nóng)牧業(yè)廢棄物和滸苔進行有氧發(fā)酵腐熟。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1-2所述的綠藻糖基微膠囊生物菌劑在多種農(nóng)用系列產(chǎn)品中的應(yīng) 用。
【文檔編號】C05F17/00GK104480097SQ201410358141
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年7月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月25日
【發(fā)明者】單俊偉, 翟熙倫, 王鵬, 王海華, 王真真, 喬來艷 申請人:青島海大生物集團有限公司