一種鱘魚玻璃化凍精的解凍方法
【專利摘要】一種鱘魚玻璃化凍精的解凍方法，是將杜瓦罐內盛裝有凍精的膠囊從液氮中取出，放入水浴鍋中，保持水浴鍋中水的溫度為28℃，時間40-42秒，然后取出裝有解凍精液的膠囊，將膠囊中的解凍精液倒入盛精瓶內，即可對鱘魚母本進行體外授精。本發(fā)明采取恒定水浴的方式對鱘魚凍精進行解凍，讓解凍的精子適用適宜的使用環(huán)境，能夠有效提高凍精的生存活力。解凍后精子的活力接近鮮精，用其授精于鮮卵，其鮮卵受精率可達80-90%，且胚胎發(fā)育良好，降低了產業(yè)化應用的生產成本，提高了凍精保存的使用價值。
【專利說明】一種鱘魚玻璃化凍精的解凍方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種魚類雜交育種的深低溫融凍技術，特別是一種鱘魚玻璃化凍精的解凍方法。
【背景技術】
[0002]保全生物遺傳多樣性及雜交育種的應用，在水產養(yǎng)殖中選擇一 170°C以下深低溫凍存精子進行魚類的繁衍，是生物技術創(chuàng)新應用的發(fā)展趨勢。但目前，深低溫保存魚類精子也只是高度發(fā)達國家用于實驗室的方法，實際應用范圍卻非常有限，其主要原因，是由于許多種魚類精子在冷凍和解凍過程中會發(fā)生重大損害。損害的程度取決于冷凍速率、冷凍保護液以及融凍方法。
[0003]不少學者提出，在深低溫保存凍精的過程中若能實現(xiàn)玻璃化，將更有利于生物遺傳多樣性保全和雜交育種的研究及應用，利于珍稀動物的保存。運用玻璃化冷凍的方法，如果能成功地實現(xiàn)低溫保存遺傳物質，將造福于人類。
[0004]現(xiàn)有的精液冷凍保護方法一緩慢冷凍方法容易形成冰晶，會導致形成胞外冰與胞內冰而損傷細 胞，加之凍融過程中的晶化再結晶，影響其成活率，使得這一生物凍存技術成本昂貴，應用效率極低。

【發(fā)明內容】

[0005]本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術的不足，而提供一種鱘魚玻璃化凍精的解凍方法。
[0006]本發(fā)明的技術方案是:一種鱘魚玻璃化凍精的解凍方法，將盛裝有凍精的膠囊從杜瓦罐內的液氮中取出，放入水浴鍋中，保持水浴鍋中水的溫度為28V -36°C，時間40-50秒，然后取出裝有解凍精液的膠囊，將膠囊中的解凍精液倒入盛精瓶內，即可對鱘魚母本進行體外授精。
[0007]本發(fā)明再進一步的技術方案是:解凍的鱘魚凍精是采用如下方法冷凍的:將需凍存的鱘魚精子與抗凍保護液按體積份100:90—110的比例均勻稀釋后，加入8-10體積份的鮮雞蛋黃、46-48體積份的花生四烯酸、6-8體積份的脂質，混勻后用冷凍膠囊盛裝，置于抽屜式冷凍室中冷凍，凍速為-58至-68°C /min,冷凍到-56至_70°C后，再將盛有凍精的膠囊卸載在盛有液氮的杜瓦罐內，控制凍速為-148至-152°C /min，冷凍到-190至_196°C后凍存。
[0008]本發(fā)明再進一步的技術方案是:抗凍保護液的制備方法是:按照配比將10%的二甲基酚加入到醫(yī)用生理鹽水中混和均勻，再加入甘露糖醇，混和均勻即可；抗凍保護液的重量配比為:醫(yī)用生理鹽水:10%的二甲基酚:甘露糖醇=100:8-10:6-8。
[0009]本發(fā)明由于采用如上方法，與現(xiàn)有技術相比，具有如下優(yōu)點:
1、采取恒定水浴的方式對鱘魚凍精進行解凍，讓解凍的精子適用適宜的使用環(huán)境。解凍后的精子活力接近鮮精，授精于鮮卵，其鮮卵受精率可達80-90%。且胚胎發(fā)育良好，降低了產業(yè)化應用的生產成本，提高了凍精保存的使用價值。[0010]2、由于解凍的鱘魚凍精是采用快速降溫的方法冷凍，用抗凍保護液作為防凍劑，使冰相變化時有效地改變冰微粒的面積，極大地改變了精子凍存過程中形成的冰狀形態(tài)，既削弱和抑制凍精冰粒的產生，又更有效地減小冰微粒在水介質中的可溶性，避免了結晶和重結晶，避免了凍精形成胞內冰與胞外冰的傷害，有效提聞了凍精的生存活力。
【具體實施方式】
[0011]以下結合【具體實施方式】對本發(fā)明的詳細結構作進一步描述。
[0012]實施例1:
一種鱘魚玻璃化凍精的解凍方法，是將杜瓦罐內盛裝有凍精的膠囊從液氮中取出，放入水浴鍋中，保持水浴鍋中水的溫度為34-36°C，時間40-42秒，然后取出膠囊，將膠囊中的解凍精液倒入盛精瓶內，即可對鱘魚母本進行體外授精。
[0013]實施例2:
一種鱘魚玻璃化凍精的解凍方法，是將杜瓦罐內盛裝有凍精的膠囊從液氮中取出，放入水浴鍋中，保持水浴鍋中水的溫度為32-34°C，時間42-45秒，然后取出膠囊，將膠囊中的解凍精液倒入盛精瓶內，即可對鱘魚母本進行體外授精。
[0014]實施例3:
一種鱘魚玻璃化凍精的解凍方法，是將杜瓦罐內盛裝有凍精的膠囊從液氮中取出，放入水浴鍋中，保持水浴鍋中水的溫度為30-32°C，時間45-48秒；然后取出膠囊，將膠囊中的解凍精液倒入盛精瓶內，即可對鱘魚母本進行體外授精。
[0015]實施例4:
一種鱘魚玻璃化凍精的解凍方法，是將杜瓦罐內盛裝有凍精的膠囊從液氮中取出，放入水浴鍋中，保持水浴鍋中水的溫度為28-30°C，時間48-50秒；然后取出膠囊。將膠囊中的解凍精液倒入盛精瓶內，即可對鱘魚母本進行體外授精。
【權利要求】
1.一種鱘魚玻璃化凍精的解凍方法，其特征是將盛裝有凍精的膠囊從杜瓦罐內的液氮中取出，放入水浴鍋中，保持水浴鍋中水的溫度為28 V -36 V，時間40-50秒，然后取出裝有解凍精液的膠囊，將膠囊中的解凍精液倒入盛精瓶內，即可對鱘魚母本進行體外授精。
2.根據(jù)權利要求1所述的鱘魚玻璃化凍精的解凍方法，其特征是融凍的鱘魚精子是采用如下方法冷凍的:將需凍存的鱘魚精子與抗凍保護液按體積份100:90—110的比例均勻稀釋后，加入8-10體積份的鮮雞蛋黃、46-48體積份的花生四烯酸、6-8體積份的脂質，混勻成精液混合液，用冷凍膠囊盛裝，置于抽屜式冷凍室中冷凍，凍速為-58至-68°C /min,冷凍到-56至_70°C后，再將盛裝有精液混合液的膠囊卸載在盛有液氮的杜瓦罐內，控制凍速為-148至-152。。/min，冷凍到-190至_196°C后凍存。
3.根據(jù)權利要求2所述的鱘魚玻璃化凍精的解凍方法，其特征是按照配比將10%的二甲基酚加入到醫(yī)用生理鹽水中混和均勻，再加入甘露糖醇，混和均勻即可；抗凍保護液的重量配比為:醫(yī)用生理鹽水:10%的二甲基酚:甘露糖醇=100:8-10:6-8。
4.根據(jù)權利要求1所述的鱘魚玻璃化凍精的解凍方法，其特征是將杜瓦罐內盛裝有凍精的膠囊從液氮中取出，放入水浴鍋中，保持水浴鍋中水的溫度為34-36°C，時間40-42秒，然后取出裝有解凍精液的膠囊，將膠囊中的解凍精液倒入盛精瓶內，即可對鱘魚母本進行體外授精。
5.根據(jù)權利要求1所述的鱘魚玻璃化凍精的解凍方法，其特征是:將杜瓦罐內盛裝有凍精的膠囊從液氮中取出，放入水浴鍋中，保持水浴鍋中水的溫度為32-34°C，時間42-45秒，然后取出裝有解凍精液的膠囊，將膠囊中的解凍精液倒入盛精瓶內，即可對鱘魚母本進行體外授精。
6.根據(jù)權利要求1所述的鱘魚玻璃化凍精的解凍方法，其特征是:將杜瓦罐內盛裝有凍精的膠囊從液氮中取出，放入水浴鍋中，保持水浴鍋中水的溫度為30-32°C，時間45-48秒，然后取出裝有解凍精液的膠囊，將膠囊中的解凍精液倒入盛精瓶內，即可對鱘魚母本進行體外授精。
7.根據(jù)權利要求1所述的鱘魚玻璃化凍精的解凍方法，其特征是:將杜瓦罐內盛裝有凍精的膠囊從液氮中取出，放入水浴鍋中，保持水浴鍋中水的溫度為28-30°C，時間48-50秒，然后取出裝有解凍精液的膠囊，將膠囊中的解凍精液倒入盛精瓶內，即可對鱘魚母本進行體外授精。
【文檔編號】A01K61/00GK103947584SQ201410134054
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年4月4日 優(yōu)先權日:2014年4月4日
【發(fā)明者】趙智媛, 趙偉 申請人:湖南苗王生物科技有限公司