一種防治由鐮刀菌引起辣椒土傳病害的sy-17菌株及其生防菌劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種防治由鐮刀菌引起辣椒土傳病害的SY-17菌株及其生防菌劑，其特點(diǎn)是該菌株已在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏編號(hào)：CGMCC No:7985；將可溶性淀粉10～30克/升，蛋白胨5～15克/升，NaCl為5～15克/升，其余為水，配成母液；將母液按裝液量為67～400克/升，發(fā)酵溫度5～50℃，接種量5～30克/升，pH值1～12，轉(zhuǎn)數(shù)80～200轉(zhuǎn)/分鐘；解淀粉芽孢桿菌SY-17菌株種子量按每平方厘米0.3～15個(gè)菌落數(shù)；轉(zhuǎn)速80～200轉(zhuǎn)/分鐘，振蕩發(fā)酵培養(yǎng)12～120小時(shí)即成SY-17生防菌劑。本發(fā)明的生防菌劑對(duì)辣椒枯萎病具有較好的防治效果。
CGMCC No：7985
20130808
【專利說(shuō)明】-種防治由鐮刀菌引起辣椒土傳病害的SY-17菌株及其生 防菌劑

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種有益微生物及其制備的生防菌劑，特別是涉及一種防治由鐮刀菌 引起辣椒土傳病害的SY-17生防菌株及其制備的生防菌劑，屬于生物制劑【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 辣椒枯萎病由尖孢鐮刀菌引起，該病分布廣泛，在吉林、甘 肅、陜西、北京、四川、湖南、浙江、山西、廣西等地均有發(fā)生，并造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。該病發(fā)病 率一般為15%?30%，危害嚴(yán)重時(shí)可達(dá)70%?80%，甚至全田枯萎死亡。目前，對(duì)于辣椒 枯萎病的防治主要以化學(xué)藥劑為主，但隨著化學(xué)農(nóng)藥的大量使用，產(chǎn)生了環(huán)境污染、農(nóng)藥抗 性及農(nóng)藥殘留等問(wèn)題。
[0003] 植物病害生物防治是指在農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)中通過(guò)控制改變寄主植物的微生態(tài)環(huán)境， 創(chuàng)造有利于寄主而不利于病原物或者在寄主與病原物的相互作用過(guò)程中有利于寄主而不 利于病原物的環(huán)境，最終達(dá)到防治病害的目的。生物防治具有許多特點(diǎn)優(yōu)于化學(xué)防治，如 不污染環(huán)境，不產(chǎn)生抗性，對(duì)人畜安全，能參與調(diào)控生態(tài)環(huán)境，保持生態(tài)平衡，起到長(zhǎng)效的作 用。許多細(xì)菌存在于植物根際和地上部分，與植物存在密切聯(lián)系，因此生防細(xì)菌在植物病害 防治中占有非常重要的地位。生防細(xì)菌的主要優(yōu)勢(shì)包括：①生防細(xì)菌因其生防機(jī)制的復(fù)雜 多樣化而使病原菌很難產(chǎn)生抗藥性；②生防細(xì)菌大多分離自農(nóng)田生態(tài)系統(tǒng)中，通常與病原 菌具有相同或者相近的生態(tài)適應(yīng)性，而且與寄主植物的親和性也較高，定殖較其它微生物 更容易，加之其繁殖速度快，使得應(yīng)用生防細(xì)菌的活體防治植物病害成為可能。③與真菌或 放線菌相比，生防細(xì)菌的繁殖速度相當(dāng)驚人，在適宜的環(huán)境條件下，迅速發(fā)生分裂繁殖，一 天便可產(chǎn)生數(shù)以千萬(wàn)的后代(何禮遠(yuǎn)，1985)，更有利于它們占領(lǐng)空間及生存競(jìng)爭(zhēng)；④生防細(xì) 菌的應(yīng)用有利于植物根圍有益微生物的生態(tài)平衡。我國(guó)最早使用生防菌劑乳酶生來(lái)治療腸 道疾患，80年代初大連醫(yī)科大學(xué)康白教授首先研制成功促菌生(蠟桿芽胞桿菌）以來(lái)，此后 各種活菌生防菌劑相繼研制成功。1999年孔建研究發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌B-903通過(guò)其產(chǎn)生的 抗菌物質(zhì)使病菌畸形、細(xì)胞壁崩潰和胞內(nèi)物質(zhì)外泄等作用，可有效防治菠菜枯萎病的發(fā)生； 1996年Tang W.H研究表明，枯草芽孢桿菌產(chǎn)生的脂膚抗生素Iturin A2濃度為lOOiig-gH 時(shí)，可以有效防治枯萎病菌對(duì)番茄的侵染。由此可見，國(guó)內(nèi)外有關(guān)各種枯萎病的研究很多， 但對(duì)辣椒枯萎病的研究卻很少，有關(guān)尖孢鐮刀菌的生防菌劑種類也較少，且防治效果不穩(wěn) 定。因此，利用生防菌劑高效、穩(wěn)定地防治辣椒枯萎病的技術(shù)將具有廣闊的開發(fā)前景。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的就是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問(wèn)題，自主從土壤中分離篩選得到微 生物SY-17菌株，經(jīng)鑒定為解淀粉芽孢桿菌;并提供一種 用于預(yù)防和治療由尖孢鐮刀菌引起辣椒土傳病害的SY-17生防菌 劑。
[0005] 本發(fā)明給出的這種對(duì)辣椒枯萎菌具有較好的防治作用的生防菌株，其特點(diǎn)是從土 壤中分離篩選得到微生物SY-17菌株。
[0006] 微生物（株）：解淀粉芽抱桿菌SY-17。
[0007] 保藏單位：中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。
[0008] 保藏單位地址：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)。
[0009] 保藏時(shí)間：2013年08月08日。
[0010] 保藏編號(hào)：CGMCC N0:7985。
[0011] SY-17菌株為解淀粉芽孢桿菌(ifeciB)，經(jīng)盆栽及田間 試驗(yàn)結(jié)果表明，該菌株對(duì)辣椒枯萎菌具有較好的防治作用，且作用穩(wěn)定、持效期長(zhǎng)。盆栽 試驗(yàn)防治效果可達(dá)70. 83?85. 91%，在田間試驗(yàn)中，本發(fā)明的生防菌劑防治效果也達(dá)到了 78. 76?83. 15%，高于25%腈菌唑乳油800倍兩種化學(xué)藥劑的防治效果。本發(fā)明給出的這 種能防治由尖孢鐮刀菌引起辣椒土傳病害的生防菌劑是涉及有益 微生物制成SY-17生防菌劑，本發(fā)明可為辣椒枯萎病的生物防治提供新的材料與途徑，具 有廣闊的開發(fā)與應(yīng)用前景。
[0012] 為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明給出的技術(shù)方案為：這種防治由鐮刀菌引起辣椒土 傳病害的SY-17生防菌劑，采用解淀粉芽孢桿菌（feciWtts SY-17菌 株制備，其特點(diǎn)是將可溶性淀粉10?30克/升，蛋白胨5?15克/升，NaCl為5?15克 /升，其余為水，配成母液；將母液按裝液量為67?400克/升，發(fā)酵溫度5?50°C，接種量 5 ?30 克 / 升，pH 值 1 ?12 ;解淀粉芽抱桿菌 菌株 種子量按每平方厘米0. 3?15個(gè)菌落數(shù)（cfu/cm2);轉(zhuǎn)速80?200轉(zhuǎn)/分鐘，振蕩發(fā)酵培 養(yǎng)12?120小時(shí)即成。
[0013] 為更好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，優(yōu)選的防治由鐮刀菌引起辣椒土傳病害的SY-17生 防菌劑，其特點(diǎn)是：將可溶性淀粉20克/升，蛋白胨20克/升，NaCl為10克/升，其余為 水，裝液量為267克/升，將解淀粉芽孢桿菌a〃以〇7i^/e/acieas)SY-17生防菌 株種子培養(yǎng)液接種量20克/升接入母液中，發(fā)酵溫度30°C，pH7 ;SY-17菌株種子量按每平 方厘米7個(gè)菌落數(shù)（cfu/cm2)，轉(zhuǎn)速140轉(zhuǎn)/分鐘，振蕩發(fā)酵培養(yǎng)24小時(shí)即成。
[0014] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的SY-17生防菌劑的有益效果。
[0015] 本發(fā)明的SY-17生防菌劑對(duì)辣椒枯萎病具有較好的防治效果：盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明 施用SY-17生防菌劑后對(duì)辣椒枯萎病的防效為74. 90?81. 85%，比多菌靈800倍防效稍 低。但顯著高于25%腈菌唑乳油800倍。田間試驗(yàn)防治效果看出SY-17生防菌劑對(duì)辣椒疫 病防治效果為73. 09%?78. 76%，明顯高于25%腈菌唑乳油800倍。SY-17菌株來(lái)源于土壤， 因此對(duì)植物及人、畜安全，并且在土壤中具有較好的生長(zhǎng)與繁殖能力，該菌劑可以通過(guò)改變 土壤微生態(tài)區(qū)系及土壤酶活性，從而改善土壤微生態(tài)環(huán)境，調(diào)節(jié)微生態(tài)平衡，且避免了辣椒 植株產(chǎn)生抗藥性，提高了辣椒果實(shí)的品質(zhì)，保證了人體健康。應(yīng)用前景廣闊。

【具體實(shí)施方式】
[0016] 實(shí)施例1。
[0017] 1.種子培養(yǎng)液的制備。
[0018] 解淀粉芽孢桿菌SY-17菌株，由NA培養(yǎng)基活化培養(yǎng)，NA培養(yǎng)基成分：牛肉膏3克 /升、蛋白胨5克/升、酵母浸膏1克/升，葡萄糖10克/升，瓊脂18克/升、蒸餾水1. 0升， pH 7,在28°C培養(yǎng)箱中活化24小時(shí)后，用接種針接種于100毫升NB培養(yǎng)基的250毫升三 角瓶中，NB培養(yǎng)成分：牛肉膏3克/升、蛋白胨10克/升、葡萄糖2.5克/升，NaCl 10克 /升，蒸餾水1. 〇升，pH7, 28°C 120轉(zhuǎn)/分鐘，振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，此時(shí)培養(yǎng)液為種子培養(yǎng)液。
[0019] 2.SY-17生防菌劑A配比的制備。
[0020] 將可溶性淀粉10克/升，蛋白胨5克/升，NaCl為5克/升，其余為水，配成母 液；將母液按裝液量為67克/升，發(fā)酵溫度5°C，接種量5克/升，pH值1 ;解淀粉芽孢桿菌 SY-17菌株種子量按每平方厘米0. 3個(gè)菌落數(shù)（cfu/cm2); 轉(zhuǎn)速80轉(zhuǎn)/分鐘，振蕩發(fā)酵培養(yǎng)12小時(shí)即成。
[0021] 3.SY-17生防菌劑B配比的制備。
[0022] 本發(fā)明的SY-17生防菌劑的母液為可溶性淀粉20克/升，蛋白胨20克/ 升，NaCl為10克/升，其余為水，裝液量為267克/升，將解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyl 〇liquefaCienS)SY-17生防菌株種子培養(yǎng)液接種量2%接入母液中，發(fā)酵溫度30°C， pH7 ;SY-17菌株種子量按每平方厘米7個(gè)菌落數(shù)（cfu/cm2);轉(zhuǎn)速140轉(zhuǎn)/分鐘，振蕩發(fā)酵 培養(yǎng)24小時(shí)即成。
[0023] 4. SY-17生防菌劑C配比的制備。
[0024] 將可溶性淀粉30克/升，蛋白胨15克/升，NaCl為15克/升，其余為水，配成母 液；將母液按裝液量為400克/升，發(fā)酵溫度50°C，接種量30克/升，pH值12 ;解淀粉芽孢 桿菌(ifeciBys SY-17菌株種子量按每平方厘米15個(gè)菌落數(shù)（cfu/ cm2);SY-17菌株種子量按每平方厘米15個(gè)菌落數(shù)（cfu/cm2);轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)/分鐘，振蕩發(fā)酵 培養(yǎng)120小時(shí)即成。
[0025] 將制備的生防菌劑于盆栽條件進(jìn)行防治辣椒枯萎病試驗(yàn)。本試驗(yàn)每個(gè)配比（A、B 和C)設(shè)6個(gè)處理：①接種SY-17生防菌劑100倍，②接種SY-17生防菌劑300倍，③接種 SY-17生防菌劑600倍，④50%多菌靈可濕性粉劑800倍，⑤25%腈菌唑乳油800倍，⑥只 接種辣椒枯萎病菌（CK)。每個(gè)處理辣椒苗60株，3次重復(fù)。盆栽試驗(yàn)是將培養(yǎng)好的SY-17 生防菌劑和化學(xué)藥劑提前施植株根部土壤中，24小時(shí)將辣椒枯萎病菌接種辣椒植株根部土 壤中。接種25天后調(diào)查辣椒發(fā)病情況，調(diào)查病株數(shù)，計(jì)算發(fā)病率和防治效果。田間試驗(yàn)選 擇在往年辣椒設(shè)施生產(chǎn)上枯萎病發(fā)生較重的地塊進(jìn)行。
[0026] ( 1)盆栽防效試驗(yàn)結(jié)果分析。
[0027] SY-17生防菌劑A配比盆栽防效試驗(yàn)結(jié)果表明(表1) :SY_17生防菌劑對(duì)辣椒枯萎 病有較好的防治效果。其防效為70. 83?80. 26%，其中SY-17生防菌劑100倍防效最高； 50 %多菌靈可濕性粉劑800倍的防效為86. 21 %，25%腈菌唑乳油800倍的防效為64. 80%。 在a =0.05水平上，各處理間均有顯著差異。
[0028] 表1 SY-17生防菌劑A配比防治辣椒枯萎病盆栽防效分析。

【權(quán)利要求】
1. 一種防治由鐮刀菌引起辣椒土傳病害的SY-17菌株，為從土壤中分離篩選得到，其 特征在于：SY-17菌株為解淀粉芽孢桿菌SY-17,已在中 國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏時(shí)間：2013年08月08日，保藏編 號(hào)：CGMCC N0:7985。
2. -種防治由鐮刀菌引起辣椒土傳病害的SY-17生防菌劑，采用權(quán)利要求1所述解淀 粉芽孢桿菌（feciBys SY-17菌株制備，其特征在于將可溶性淀粉 10?30克/升，蛋白胨5?15克/升，NaCl為5?15克/升，其余為水，配成母液；將母 液按裝液量為67?400克/升，發(fā)酵溫度5?50°C，接種量5?30克/升，pH值1?12， 轉(zhuǎn)數(shù)80?200轉(zhuǎn)/分鐘；解淀粉芽抱桿菌（Bacillus SY-17菌株種 子量按每平方厘米0. 3?15個(gè)菌落數(shù)（cfu/cm2);轉(zhuǎn)速80?200轉(zhuǎn)/分鐘，振蕩發(fā)酵培養(yǎng) 12?120小時(shí)即成。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種防治由鐮刀菌引起辣椒土傳病害的SY-17生防菌劑，其 特征在于將可溶性淀粉20克/升，蛋白胨20克/升，NaCl為10克/升，其余為水，裝液量 為267克/升，將解淀粉芽孢桿菌UaciBm 職e/acieas) SY-17生防菌株種子培 養(yǎng)液接種量20克/升接入母液中，發(fā)酵溫度30°C，pH7 ;SY-17菌株種子量按每平方厘米7 個(gè)菌落數(shù)（cfu/cm2);轉(zhuǎn)速140轉(zhuǎn)/分鐘，振蕩發(fā)酵培養(yǎng)24小時(shí)即成。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種防治由鐮刀菌引起辣椒土傳病害的SY-17生防菌劑，其 特征在于將可溶性淀粉20克/升，蛋白胨20克/升，NaCl為10克/升，其余為水，裝液量 為267克/升，將解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens) SY-17生防菌株種子培 養(yǎng)液接種量2%接入母液中，發(fā)酵溫度301：，？117;5￥-17菌株種子量按每平方厘米7個(gè)菌落 數(shù)（cfu/cm2);轉(zhuǎn)速140轉(zhuǎn)/分鐘，振蕩發(fā)酵培養(yǎng)24小時(shí)即成。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種防治由鐮刀菌引起辣椒土傳病害的SY-17生防菌劑，其 特征在于將將可溶性淀粉30克/升，蛋白胨15克/升，NaCl為15克/升，其余為水，配成 母液；將母液按裝液量為400克/升，發(fā)酵溫度50°C，接種量30克/升，pH值12 ;解淀粉芽 抱桿菌CfeciBys 菌株種子量按每平方厘米15個(gè)菌落數(shù)（cfu/ cm2);SY-17菌株種子量按每平方厘米15個(gè)菌落數(shù)（cfu/cm2);轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)/分鐘，振蕩發(fā)酵 培養(yǎng)120小時(shí)即成。
【文檔編號(hào)】A01N63/02GK104450546SQ201310615108
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2013年11月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月28日
【發(fā)明者】劉長(zhǎng)遠(yuǎn), 梁春浩, 關(guān)天舒, 王輝, 楊衛(wèi)娟, 劉麗, 于舒怡, 趙達(dá), 黃玉茜, 李柏宏 申請(qǐng)人:遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院