生物抗病毒劑及其制備方法
【專利摘要】生物抗病毒劑及其制備方法，涉及生物抗病毒劑制備領(lǐng)域，特別是屬于一種以海藻提取物為主要組分的生物抗病毒劑及其制備方法。其特征在于，其組分為：1）以能夠產(chǎn)生抗病毒活性物質(zhì)的海藻干粉，加入極性有機溶劑后經(jīng)提取、過濾、離心、蒸餾、冷凍干燥等程序獲得的水溶性有效成份；2）以上述步驟中過濾所得濾渣為原料，加入非極性有機溶劑，經(jīng)提取、過濾、離心、蒸餾、冷凍干燥所得脂溶性有效成分；3）極性溶劑與非極性溶劑；4）表面活性劑。本發(fā)明用水稀釋100-1000倍后實施葉面噴灑，可有效防治由煙草花葉病毒和黃瓜花葉病毒等引起的病毒病害，具有成本低、對環(huán)境無污染、無殘留的積極效果。
【專利說明】生物抗病毒劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物抗病毒劑制備領(lǐng)域，特別是屬于一種以海藻提取物為主要組分的生物抗病毒劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]海藻中的天然蛋白類及活性肽物質(zhì)活性成分是目前最為有效的生物抗病毒劑。其中，藍藻抗腫瘤活性物質(zhì)已成為海洋生物活性物質(zhì)研究的重點?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)海洋藍藻提取物中至少有6%具有抗腫瘤活性。在臨床上，來源于念珠藻的藍病毒素是一個101個氨基酸組成的多肽，具有很強的病毒殺滅作用，表明其在臨床上將有很好的應(yīng)用前景。
[0003]此外，海藻中的多糖也是很好的抗病毒活性物質(zhì)。1958年Gerber等首先報道了海藻多糖具有抗病毒活性。他們發(fā)現(xiàn)在海藻Gelidium cartiagenium中提取的多糖能保護雛雞胚胎不受流感病毒B和腮腺炎病毒的感染。岑穎洲等研究報道羊棲菜多糖及其分離產(chǎn)物對單純皰疹病毒I型(HSV-1)有明顯的抗病毒作用，且隨著純度的提高，樣品抗病毒作用隨之增強，對柯薩奇病毒CVB 3的抗病毒效果優(yōu)于病毒唑。在海藻中分離得到硫酸多糖911，能抑制HIV-1病毒對MT 4細胞的急性感染和對H 9細胞的慢性感染，主要作用機制是抑制病毒逆轉(zhuǎn)錄酶活性和干擾吸附。Partha Ghosh等在綠藻Caulerpa racemosa中得到一種硫酸多糖，主要由半乳糖、葡萄糖、醛糖、木糖組成，對單純皰疹病毒HSV-1和HSV-2表現(xiàn)出選擇性抑制活性。從褐藻類Sargassum提取的由果糖、半乳糖、甘露糖、木糖、葡萄糖和半乳糖胺組成的硫酸酯雜多糖，具有較好的抗單純皰疹病毒HSV-1和HSV-2的活性。從海洋微藻Cochlodinium polykrikoides中分離的硫酸多糖,體外能完全抑制包膜性病毒對宿主細胞的侵入，對宿主細胞無毒害，而且不引起抗凝血作用。
[0004]海藻中除了得到研究較多的硫酸多糖，還分離到了許多其它抗病毒活性物質(zhì)，如醣脂類、角叉膠、巖藻依聚糖`、烯職類等。在海帶Laminaria sp.中得到的褐藻糖膠對脊髓灰質(zhì)炎病毒III型、柯薩奇B3和A16型病毒、腺病毒III型、?？蒊V型病毒有明顯的抑制作用。從海藻Halimeda tuna中發(fā)現(xiàn)一種新的雙職類物質(zhì)Halitunal,具有體外抗鼠科冠狀病毒A59的活性。在巴西海藻Dictyota menstrualis中得到兩種雙職類物質(zhì):(6R) -6-hydroxydichotoma-3,14-diene-l,17-dial 和(6R) -6-acetox1-dichotoma_3,14-diene-l, 17_dial，具有劑量依賴性的抗HIV-1病毒的活性，能抑制HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶活性，阻止病毒復(fù)制。盡管海藻中抗病毒活性物質(zhì)的研究在人體上已經(jīng)達到臨床應(yīng)用的水平，這些活性物質(zhì)對于植物病毒的效果卻不清楚。植物病毒類似人體病毒但是不完全等同于人體病毒，對于人體病毒有效的海藻提取物是否能夠在抑制植物病毒方面同樣有效，目前尚未有這方面的任何報道、專利或者產(chǎn)品。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種新型的生物抗病毒劑及其制備方法，達到利用海藻提取物制造生物抗病毒劑的目的。[0006]本發(fā)明所提供的生物抗病毒劑，其特征在于，其組分為:1)以能夠產(chǎn)生抗病毒活性物質(zhì)的海藻干粉，加入極性有機溶劑后經(jīng)提取、過濾、離心、蒸餾、冷凍干燥等程序獲得的水溶性有效成份。2)以上述步驟中過濾所得濾渣為原料，加入非極性有機溶劑，經(jīng)提取、過濾、離心、蒸餾、冷凍干燥所得脂溶性有效成分；3)極性溶劑與非極性溶劑；4)表面活性劑。
[0007]其中，所述的能夠產(chǎn)生抗病毒活性物質(zhì)的海藻為魚腥藻，束絲藻，簡孢藻，微囊藻，節(jié)球藻，念珠藻，飛氏藻，顫藻，裂須藻，偽枝藻，螺旋藻，單崎藻，束毛藻，藍藻中的銅綠微囊藻，其中的任意一種或幾種的組合。
[0008]所述的極性有機溶劑是甲醇、乙醇、乙酸；非極性有機溶劑是乙醚、丙酮、氯仿、石油醚、乙酰乙酯，表面活性劑是任何能夠增加活性成分穩(wěn)定性和分散度的天然物質(zhì)，例如氨基酸、油脂和軟磷脂、纖維素、木質(zhì)素、甲殼素等，或是上述物質(zhì)的衍生物。
[0009]本發(fā)明所提供的生物抗病毒劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:
步驟一，運用能夠產(chǎn)生抗病毒活性物質(zhì)的海藻，加入極性有機溶劑，經(jīng)提取、過濾、離
心、蒸餾、冷凍干燥，獲得水溶性有效成份備用。
[0010]步驟二，步驟一獲得的濾渣加入非極性溶劑，經(jīng)提取、過濾、離心、蒸餾、冷凍干燥，獲得脂溶性有效成份備用。
[0011]步驟三，將上述步驟所得水溶性有效成分溶于極性有機溶劑中，脂溶性有效成分溶于非極性溶劑中，所得兩種溶液混合，加入1-10%表面活性劑，調(diào)節(jié)濃度，使有效成分占重量的1-45%,即為本發(fā)明所公開的生物抗病毒劑。
[0012]本發(fā)明所公開的生物抗病毒劑，用水稀釋100-1000倍后實施葉面噴灑，可有效防治由煙草花葉病毒和黃瓜 花葉病毒等引起的病毒病害，具有成本低、對環(huán)境無污染、無殘留的積極效果。
【具體實施方式】
[0013]實例一，海藻抗病毒活性成分的提取:
分別選用魚腥藻，束絲藻，簡孢藻，微囊藻，節(jié)球藻，念珠藻，飛氏藻，顫藻，裂須藻，偽枝藻，螺旋藻，單崎藻，束毛藻，或藍藻中的銅綠微囊藻干料各5公斤，研磨成干粉，加入無水乙醇10升在室溫條件下提取4小時，過濾，用無水乙醇3升沖洗，合并濾液并在3000 rpm條件下離心5分鐘，離心液在70度下蒸餾，濃縮液經(jīng)冷凍干燥得水溶性有效成分。所得濾渣用倍量氯仿提取4小時，過濾，用氯仿沖洗三次，合并濾液在3000 rpm條件下離心5分鐘，離心液在50度下蒸餾，濃縮液經(jīng)冷凍干燥得脂溶性有效成分。
[0014]實例二生物抗病毒劑的配制方法:
用30毫升無水乙醇溶解實例一獲得的水溶性有效成份15克，用30毫升氯仿溶解實例一獲得的脂溶性活性成分15克，混合后加入脂肪酸甘油脂為主體的表面活性劑10克，最后用無水乙醇定容至100毫升。由此獲得活性成分占30%的生物抗病毒劑。
[0015]實例三生物抗病毒劑效果測定:
供試產(chǎn)品為以上獲得的生物抗病毒劑，供試病毒為煙草花葉病毒和黃瓜花葉病毒。
[0016]在隔離溫室內(nèi)分別種植消過毒的煙草和黃瓜。待幼苗產(chǎn)生6片完全伸展的葉片時，分別在伸展的6個葉片上接種病毒，每個葉片有6個接種斑。煙草接種煙草花葉病毒，黃瓜接種黃瓜花葉病毒。每個試驗處理12株。接種2天之后，用不同來源的30%生物抗病毒劑稀釋500倍實施葉面噴灑，以不含海藻提取物的表面活性劑和有機溶劑稀釋500倍葉面噴灑為對照。
[0017]施藥20天之后統(tǒng)計病斑數(shù)目，測量病斑直徑。
[0018]經(jīng)統(tǒng)計分析，供試產(chǎn)品對于煙草花葉病毒和黃瓜花葉病毒均有顯著效果，結(jié)果如下。
[0019]表一生物抗病毒劑對煙草花葉病毒的藥效試驗:
【權(quán)利要求】
1.一種生物抗病毒劑，其特征在于，其組分為:1)以能夠產(chǎn)生抗病毒活性物質(zhì)的海藻干粉，加入極性有機溶劑后經(jīng)提取、過濾、離心、蒸餾、冷凍干燥等程序獲得的水溶性有效成份；2)以上述步驟中過濾所得濾渣為原料，加入非極性有機溶劑，經(jīng)提取、過濾、離心、蒸餾、冷凍干燥所得脂溶性有效成分；3)極性溶劑與非極性溶劑；4)表面活性劑。
2.一種生物抗病毒劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟一，運用能夠產(chǎn)生抗病毒活性物質(zhì)的海藻，加入極性有機溶劑，經(jīng)提取、過濾、離心、蒸餾、冷凍干燥，獲得水溶性有效成份備用； 步驟二，步驟一獲得的濾渣加入非極性溶劑，經(jīng)提取、過濾、離心、蒸餾、冷凍干燥，獲得脂溶性有效成份備用； 步驟三，將上述步驟所得水溶性有效成分溶于極性有機溶劑中，脂溶性有效成分溶于非極性溶劑中，所得兩種溶液混合，加入1-10%表面活性劑，調(diào)節(jié)濃度，使有效成分占重量的1_45%，即為本發(fā)明所公開的生物抗病毒劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物抗病毒劑，其特征還在于，所述的能夠產(chǎn)生抗病毒活性物質(zhì)的海藻為魚腥藻，束絲藻，簡孢藻，微囊藻，節(jié)球藻，念珠藻，飛氏藻，顫藻，裂須藻，偽枝藻，螺旋藻，單崎藻，束毛藻，藍藻中的銅綠微囊藻。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物抗病毒劑，其特征還在于，所述的極性有機溶劑是甲醇、乙醇、乙酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物抗病毒劑，其特征還在于，所述的非極性有機溶劑是乙醚、丙酮、氯仿、石油醚、乙酰乙酯。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物抗病毒劑，其特征還在于，所述的表面活性劑是氨基酸、油脂、軟磷脂、纖維素、木質(zhì)素、甲殼素，或是上述物質(zhì)的衍生物。
【文檔編號】A01P1/00GK103548881SQ201310501694
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年10月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月23日
【發(fā)明者】鞠志國, 丁立孝, 李康均, 丁振, 李媛, 張慶娜 申請人:鞠志國