香草醛在制備南方根結線蟲殺蟲抑制劑中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及香草醛在制備南方根結線蟲的殺蟲抑制劑中的應用。所述香草醛作為殺蟲抑制劑的活性成分，所述殺蟲抑制劑為香草醛的水溶液。所述殺蟲抑制劑中香草醛的濃度為0.2-8mM。采用本發(fā)明的殺蟲抑制劑防治南方根結線蟲，效果顯著。對南方根結線蟲二齡幼蟲的致死率達25.9-88.1%，對南方根結線蟲二齡幼蟲的孵化相對抑制率可達45.5%-89.9%，該濃度范圍內(nèi)香草醛可作為線蟲抑制劑使用。
【專利說明】香草醛在制備南方根結線蟲殺蟲抑制劑中的應用

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及香草醛在制備南方根結線蟲殺蟲抑制劑中的應用，屬于農(nóng)業(yè)技術領 域。

【背景技術】
[0002] 南方根結線蟲（Meloidogyne incognita)是世界范圍內(nèi)的重要病原 生物之一，它給世界農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來了嚴重損失，每年全世界因此而造成的經(jīng)濟 損失達 157 億美兀（Abad，P，Gouzy，J，Aury，J. M.，et al. Genome sequence of the metazoan plant-parasitic nematode Meloidogyne incognita.Nat. Biotechnol. 2008, 26, 909-915)。并且其寄主范圍廣泛，共計超過1700種植物，包括單子葉 植物，雙子葉植物，草本植物，木本植物，其中經(jīng)濟價值較高的葫蘆科、茄科、十字花科的蔬 菜作物，如番茄、黃瓜、葫蘆、甜瓜、苦瓜、白菜、菠菜等蔬菜作物受南方根結線蟲危害尤為嚴 重。受害后，一般可造成減產(chǎn)30%-40%，甚至絕產(chǎn)、絕收（彭德良.蔬菜線蟲病害的發(fā)生和防 治.中國蔬菜.1998, 4:57-58)。近年來，各類蔬菜栽培在我國發(fā)展迅速，由于種植時間長、 連作現(xiàn)象嚴重，為南方根結線蟲提供了適宜環(huán)境。南方根結線蟲寄主范圍廣，生活史相對較 短，繁殖迅速，加之傳播方式多樣，給我國造成巨大經(jīng)濟損失。南方根結線蟲病害已經(jīng)成為 我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的一大障礙。
[0003] 南方根結線蟲的二齡幼蟲具備侵染能力，它在土壤中向著寄主根尖部位遷移。遷 移至寄主根尖進行侵染，鉆入寄主根部，并在根系維管組織引起部分根系細胞再分化成多 核、新陳代謝活躍、膨大的細胞，即巨大細胞。與此同時，由于巨大細胞周圍的細胞不斷 受到擠壓，致使寄主植物根系結構發(fā)生變化，形成大小不一的瘤狀根結（Williamson，V. M. and Kumar, A. Nematode resistance in plants: the battle underground. Trends in Grenetics，2006, 22:396-403)。由5-7個巨大細胞構成一條線蟲的取食位點，線蟲從取食 位點獲得大量養(yǎng)分，經(jīng)過3次蛻皮成長為成蟲。南方根結線蟲的二齡期成為線蟲防治的關 鍵時期，因此可以通過殺死南方根結線蟲二齡幼蟲或抑制南方根結線蟲二齡幼蟲孵化的方 式來防治南方根結線蟲。
[0004] 目前，南方根結線蟲的防治主要以化學藥品防治為主，大部分用于根結線蟲防治 的殺線劑由于其高毒性，對環(huán)境、人畜安全存在嚴重危害。部分殺線劑由于其高毒性已經(jīng)被 明令禁止使用。因此，研發(fā)利用安全、有效、低毒的殺線劑對南方根結線蟲進行防治迫在眉 睫。而分離鑒定抗性植物能夠抑制線蟲侵染的關鍵和特異的根系分泌物，進一步研制開發(fā) 低毒無害的殺線蟲制劑并在田間進行應用，將為有針對性和專一性地采取有效的生物學方 法創(chuàng)建低成本和環(huán)境友好的防治線蟲病害問題開辟新的技術途徑，其應用前景非常廣闊。
[0005] 通過利用GS-MS分離和鑒定發(fā)現(xiàn)抗根結線蟲效果明顯的番茄品種其根系能夠分 泌關鍵和特異的活性分泌物一香草醛。香草醛在自然界中廣泛存在，許多植物中都存在 香草醛。香草醛無毒，在食品添加劑、醫(yī)藥、香料工業(yè)等方面有諸多應用。但目前未見有香 草醛在南方根結線蟲防治上的報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供香草醛在制備南方根結線蟲殺蟲抑制劑中的應用。
[0007] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案。
[0008] 香草醛在制備南方根結線蟲的殺蟲抑制劑中的應用。
[0009] 其中，香草醛可以單獨作為殺蟲抑制劑的活性成分，也可與其他具有防治南方根 結線蟲活性成分進行配伍共同作為活性成分。
[0010] 所述殺蟲抑制劑為香草醛的水溶液；
[0011] 所述殺蟲抑制劑中香草醛的濃度為〇. 2-8mM ;當殺蟲抑制劑作用為抑制南方根結 線蟲二齡幼蟲的孵化時，殺蟲抑制劑中香草醛濃度為0. 2-4mM ;殺蟲抑制劑作用為殺死南 方根結線蟲二齡幼蟲時，殺蟲抑制劑中香草醛濃度為4-8mM。
[0012] 本發(fā)明還提供上述殺蟲抑制劑的制備方法，將香草醛溶于水后得到香草醛的水溶 液。
[0013] 本發(fā)明還提供一種防治南方根結線蟲的方法，包括如下步驟：將所述殺蟲抑制劑 用于防治南方根結線蟲；所述防治南方根結線蟲為致死南方根結線蟲二齡幼蟲或抑制南方 根結線蟲二齡幼蟲的孵化。
[0014] 采用本發(fā)明的殺蟲抑制劑防治南方根結線蟲，效果顯著：對南方根結線蟲二 齡幼蟲的致死率達2 5. 9%-8 8. 1 % ;對南方根結線蟲二齡幼蟲的孵化相對抑制率可達 45. 5%-89. 9%，使用香草醛的水溶液防治南方根結線蟲，安全、無毒、有效。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0015] 圖1為本發(fā)明對南方根結線蟲二齡幼蟲的致死效果。
[0016] 圖2為本發(fā)明對南方根結線蟲二齡幼蟲的孵化抑制效果。

【具體實施方式】
[0017] 實施例1、不同濃度香草醛對南方根結線蟲二齡幼蟲死亡率的影響
[0018] ⑴試驗材料
[0019] 1?番爺（Lycopersicon esculentum cv.)佳粉19,種子購自北京蔬菜花舟研究所。
[0020] 2.南方根結線蟲（Meloidogyne incognita)從山東壽光溫室大棚中分離獲得。
[0021] (2)南方根結線蟲的培養(yǎng)及收集
[0022] 植物種植：將佳粉19號番爺種子用15% (V/V)過氧化氫溶液浸泡消毒IOmin后， 用清水洗凈。隨之將種子均勻鋪在覆有兩層濾紙的培養(yǎng)皿上，避光置于28°C條件下。種子 根系露白后將其播種于育苗板內(nèi)，以蛭石為基質進行培育。佳粉19號番茄在育苗板上長至 三葉一心期后將幼苗移栽至裝有滅菌土的塑料盆內(nèi)定植，土壤理化性狀為pH :7. 43 ;速效 鉀：106.9mg/kg ;有機質含量 8.68g/kg;總氮：277mg/kg，01sen 磷：155mg/kg。定植一星期 后即可接種線蟲。
[0023] 卵塊的獲得及二齡幼蟲的收集：接種后的佳粉19號番茄，經(jīng)過30?50天的培養(yǎng) 后便可見番茄根系外附有南方根結線蟲的卵塊，卵塊呈乳白色或褐黃色。將番茄根系用自 來水洗凈，用鑷子從根系上小心挑取南方根結線蟲卵塊。將挑取下的卵塊均勻鋪在覆有兩 層吸水紙的篩子上，篩子放置于玻璃培養(yǎng)皿中。在培養(yǎng)皿內(nèi)加入一定量清水，使清水恰好能 浸沒吸水紙，然后放置于28°C環(huán)境中。由于南方根結線蟲的二齡幼蟲有向水性，孵化后的二 齡幼蟲會鉆過篩子，聚集在玻璃培養(yǎng)皿的水環(huán)境中。28°C放置1?2天后收集培養(yǎng)皿中的 懸浮液，懸浮液內(nèi)富含南方根結線蟲的二齡幼蟲，可根據(jù)試驗需要調至不同濃度。調整南方 根結線蟲濃度可通過5000rpm離心2min,收集南方根結線蟲二齡幼蟲沉淀，加入相應體積 的水以調整線蟲溶液濃度；也可通過離心管靜置Ih收集沉淀后，收集南方根結線蟲沉淀， 加入相應體積的水以調整線蟲溶液濃度。
[0024] (3)對南方根結線蟲死亡率的影響
[0025] 將香草醒配成濃度為4mM、6mM、8mM的水溶液，以及去離子水(對照),分別浸泡南方 根結線蟲的二齡幼蟲，以線蟲死亡率為指標，考察不同濃度香草醛的殺蟲抑制劑對南方根 結線蟲的致死效果。
[0026] 考察方法：在實驗室條件下，按步驟（2)收集南方根結線蟲二齡幼蟲，制備濃度約 為50條/10 ii L的南方根結線蟲二齡幼蟲懸浮液。取一 24孔細胞培養(yǎng)板，在每個孔中加入 IOuL線蟲懸浮液，并用體式顯微鏡觀察、記錄各孔中所加入的線蟲總數(shù)。每個孔中加入不同 濃度的殺蟲抑制劑溶液lmL，蓋好蓋子，避光放入28°C培養(yǎng)箱內(nèi)。每隔lh，3h，6h，12h，24h 觀察記錄死亡線蟲數(shù)，計算死亡率?？疾旖Y果見表1、圖1。
[0027]

【權利要求】
1. 香草醛在制備南方根結線蟲的殺蟲抑制劑中的應用。
2. 根據(jù)權利要求1所述的應用，其特征在于，所述殺蟲抑制劑的活性成分為香草醛。
3. 根據(jù)權利要求1所述的應用，其特征在于，所述殺蟲抑制劑為香草醛的水溶液。
4. 根據(jù)權利要求3所述的應用，其特征在于，所述殺蟲抑制劑中香草醛的濃度為 0? 2_8mM〇
5. 根據(jù)權利要求4所述的應用，其特征在于，所述殺蟲抑制劑用于抑制南方根結線蟲 二齡幼蟲的孵化時，殺蟲抑制劑中香草醛濃度為0. 2-4mM。
6. 根據(jù)權利要求4所述的應用，其特征在于，所述殺蟲抑制劑用于致死南方根結線蟲 二齡幼蟲時，殺蟲抑制劑中香草醛濃度為4-8mM。
7. -種防治南方根結線蟲的殺蟲抑制劑，其特征在于，所述殺蟲抑制劑為香草醛的水 溶液。
8. 根據(jù)權利要求7所述的殺蟲抑制劑，其特征在于，所述香草醛水溶液的濃度為 0? 2_8mM〇
9. 一種權利要求7所述殺蟲抑制劑的制備方法，其特征在于，將香草醛溶于水得到香 草醛水溶液。
10. -種防治南方根結線蟲的方法，其特征在于，將權利要求7所述的殺蟲抑制劑用于 防治南方根結線蟲；所述防治南方根結線蟲為致死南方根結線蟲二齡幼蟲或抑制南方根結 線蟲二齡幼蟲的孵化。
【文檔編號】A01P5/00GK104412968SQ201310403748
【公開日】2015年3月18日 申請日期:2013年9月6日 優(yōu)先權日:2013年9月6日
【發(fā)明者】左元梅, 鐘麗娜, 董林林, 李曉林 申請人:中國農(nóng)業(yè)大學