專利名稱：一種富硒、富鉻鐵皮石斛原球莖的培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及鐵皮石斛原球莖的培養(yǎng)方法，具體涉及一種富硒、富鉻鐵皮石斛原球莖的培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
硒是人體和動物的一種必需微量元素，與機(jī)體健康密切相關(guān)，是一種強(qiáng)抗氧化劑，能將有毒的過氧化物還原為無害的物質(zhì)，能分解過氧化氫，對細(xì)胞和組織有保護(hù)作用，使之免受過氧化物的損害，對細(xì)胞膜和細(xì)胞器(線粒體、微粒體、溶酶體)膜具有特殊的保護(hù)作用。早在上世紀(jì)50年代初，鉻就被認(rèn)為在糖代謝中能起到一定作用，當(dāng)時(shí)被稱為“葡萄糖耐量因子”。從體外和動物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，鉻能改善胰島素抵抗，促使胰島素發(fā)揮最大的生物效應(yīng)。動物實(shí)驗(yàn)和臨床都證明，缺鉻可引發(fā)糖尿病，而補(bǔ)充足夠的鉻，可使糖尿病癥狀減輕、血糖控制平穩(wěn)、減少降糖藥用量。有專家指出，糖尿病患者普遍缺鉻，因此，補(bǔ)鉻對防治糖尿病有利。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國主要作物中含硒量低于0.05 μ g/g的縣有785個，即約有2/3地區(qū)屬國際上公認(rèn)的缺硒地區(qū)，約72%的人口需要科學(xué)補(bǔ)硒；目前我國20歲以上的糖尿病患者達(dá)2000萬以上，糖耐量低減病人不低于3000萬，而且還在不斷攀升，世界衛(wèi)生組織預(yù)測，到2025年中國糖尿病人數(shù)將達(dá)5000萬。這就使富硒、富鉻產(chǎn)品形成了一個巨大的潛在市場。目前，國內(nèi)一些發(fā)達(dá)城市的消費(fèi)群體，尤其是南方一些城市正掀起一股補(bǔ)硒、補(bǔ)鉻的熱潮，尤其是對富硒、富鉻食品、保健品特別親睞。硒、鉻 不能通過人體合成，必需通過膳食攝入，而我國傳統(tǒng)的飲食結(jié)構(gòu)中硒、鉻含量低，并不能滿足人體需求。營養(yǎng)學(xué)家推薦，正常人體硒攝入量為60 200 μ g/d，鉻為50 200 μ g/d。硒、鉻的低水平攝入對人體健康有著潛在的威脅，要保證人體健康，防治有關(guān)疾病，就應(yīng)該有充足的硒、鉻攝入。植物是人類和動物獲取硒、鉻的主要來源。研究發(fā)現(xiàn)，有機(jī)化合物的營養(yǎng)作用要大于無機(jī) 化合物，植物來源要優(yōu)于動物來源。目前，獲取有機(jī)硒、鉻的途徑主要是依靠植物轉(zhuǎn)化技術(shù)來實(shí)現(xiàn)，利用植物的生物轉(zhuǎn)化提高有機(jī)硒、鉻的含量，從而進(jìn)入食物鏈供人和動物食用是目前的主要富硒技術(shù)。雖然硒、鉻保健功效顯著，但自然界中大多以無機(jī)態(tài)存在，攝入會產(chǎn)生一些副作用，而一般動植物食品中，有機(jī)硒、鉻的含量甚微，難以滿足人體需求，因此生物富集已成為人類對微量元素硒、鉻開發(fā)利用的重要手段。鐵皮石斛(Dendrobium candidum)是傳統(tǒng)名貴中草藥，唐代醫(yī)學(xué)經(jīng)典《道藏》將其列為“中華九大仙草之首”，自唐宋以來，一直被列為皇室貢品。鐵皮石斛具有獨(dú)特的藥用價(jià)值，以其莖入藥，屬補(bǔ)益藥中的補(bǔ)陰藥，具有益胃生津、滋陰清熱之功效。含有豐富的石斛多糖，可增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗疲勞；鐵皮石斛對脾胃病中常見的致病菌幽門螺桿菌有較好的抑制作用，能促進(jìn)胃液的分泌，促進(jìn)胃排空助消化；鐵皮石斛有較好的護(hù)肝利膽作用，是治療各種肝膽病的要藥；鐵皮石斛能夠強(qiáng)筋健骨、潤滑關(guān)節(jié)、抵御風(fēng)濕；鐵皮石斛可增強(qiáng)胰島素活性，顯著降低血糖水平；鐵皮石斛具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性，還能減輕放、化療的副作用，提高生存質(zhì)量，延長生存時(shí)間。此外，鐵皮石斛還有滋陰養(yǎng)目、滋養(yǎng)肌膚、抗衰老之功效。最近，鐵皮石斛原球莖正在進(jìn)行新資源食品的申報(bào)，這必將使石斛市場進(jìn)一步加溫。近年來，已經(jīng)相繼開發(fā)出眾多的富硒、富鉻產(chǎn)品，如富硒玉米、富硒水果、富硒酵母、富硒黑木耳、富硒鐵皮石斛；富鉻酵母、富鉻黑小麥、富鉻蟲草等，不同生物生長條件不同，其微量元素富集培養(yǎng)方式也各不相同。鐵皮石斛本身具有栽培難度高，生長緩慢等特點(diǎn)，而硒、鉻元素對其生長又存在一些正面、及負(fù)面影響，所以目前研究較少，尤其是鐵皮石斛原球莖富硒、富鉻的研究，目前尚無報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服上述技術(shù)的不足，而提供一種培養(yǎng)周期短、無污染、富集能力強(qiáng)、易于大規(guī)模生產(chǎn)的富硒、富鉻鐵皮石斛原球莖的培養(yǎng)方法。本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案來完成的。這種富硒、富鉻鐵皮石斛原球莖的培養(yǎng)方法，包括以鐵皮石 斛種子、莖尖或根尖為外植體進(jìn)行原球莖的誘導(dǎo)、原球莖增殖培養(yǎng)，該方法具體步驟如下:(一)、原球莖的誘導(dǎo)培養(yǎng)(I)、種子為外植體的原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng):其培養(yǎng)基組成是在每IL的1/2MS培養(yǎng)基中含椰子汁IOOmL，蔗糖30g，瓊脂8g，pH5.6 5.8 ;選取成熟未開裂的鐵皮石斛蒴果，自來水沖洗表面污潰5min,無菌條件下,用75%的酒精消毒5 IOmin,然后用0.1 0.5%的升萊溶液消毒15 20min,最后用無菌水沖洗4 5次,并用無菌濾紙吸干水分；無菌條件下，用消過毒的刀片將果實(shí)剖開，用鑷子夾起一半果實(shí)，于培養(yǎng)瓶口輕輕抖動，將種子均勻播撒在1/2MS培養(yǎng)基表面；于251:，1500 20001ux光照強(qiáng)度，光照時(shí)間I 16h/d的條件下培養(yǎng);(2)、莖尖或根尖為外植體的原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng):其誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成是在每IL的1/2MS培養(yǎng)基中含椰子汁IOOmL,蔗糖30g，瓊脂8g，pH5.6 5.8 ;選取生長健壯的鐵皮石斛無菌苗，用無菌刀小心切取莖尖和根尖的分生組織，分別接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基，于25°C，1500 20001ux光照強(qiáng)度,光照時(shí)間I 16h/d的條件下培養(yǎng)；(二)、原球莖的增殖培養(yǎng):其增殖培養(yǎng)基組成是在每IL的1/2MS培養(yǎng)基中含椰子汁 1OOmL, NAA0.2mg, KTl.0mg,鹿糖 30g,亞硒酸鈉 0.3mg,三氯化鉻 0.35mg,瓊脂 8g,pH5.6 5.8 ;選取誘導(dǎo)培養(yǎng)30 40d、種胚萌發(fā)、芝麻粒大小的原球莖，將其轉(zhuǎn)接于增殖培養(yǎng)基中，每瓶約10顆；于25°C，1500 20001ux光照強(qiáng)度，光照時(shí)間I 16h/d的條件下培養(yǎng)。本發(fā)明的有益效果為:1、鐵皮石斛原球莖作為富硒、富鉻載體，整個過程均在溫室條件下進(jìn)行，不受地區(qū)、季節(jié)及氣候限制，無污染，適合工廠化大規(guī)模生產(chǎn)；2、培養(yǎng)過程工藝簡單、易操作、周期短、后續(xù)投資少；3、鐵皮石斛原球莖增殖能力強(qiáng)、產(chǎn)量高、對微量元素富集率高(干品中有機(jī)硒2 5mg/kg，有機(jī)鉻4 6mg/kg) ;4、以鐵皮石斛原球莖為富集載體，將鐵皮石斛保健功效與微量元素硒、鉻的生理功能有機(jī)結(jié)合，使人們在服用鐵皮石斛的同時(shí)補(bǔ)充硒、鉻。
具體實(shí)施例方式下面通過具體實(shí)施方式
對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，實(shí)施例將幫助更好地理解本發(fā)明，但本發(fā)明并不僅僅局限于下述實(shí)施例。—:溶液配制(I)大量元素母液:大量元素母液(5種):硝酸銨33g，硝酸鉀38g，氯化鈣8.Sg,七水硫酸鎂7.4g，磷酸氫二鉀3.4g，分別用蒸餾水配成IL溶液。(2)微量元素母液(I種):碘化鉀0.166g,高猛酸鉀4.46g,硫酸銅1.72g,氯化鈷
0.005g，硫酸錳4.46g，硫酸鋅1.72g，硼酸1.24g，蒸餾水配成IL溶液。(3)有機(jī)母液(I種):肌醇20g，煙酸0.lg，鹽酸吡哆醇0.lg，鹽酸硫胺素0.02g,甘氨酸0.4g，配成IL溶液。(4)鐵鹽 母液(I種):七水硫酸亞鐵5.56g，EDTA7.46g，用蒸餾水配成IL溶液。二:培養(yǎng)基配制(I) 1/2MS培養(yǎng)基:大量元素母液(5種)各5mL/L，微量元素母液10mL/L，有機(jī)母液10mL/L,鐵鹽母液10mL/L。(2)種子為外植體的原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基:1/2MS培養(yǎng)基，椰子汁100mL/L，蔗糖30g/L，瓊脂 8g/L，pH5.6 5.8。(3)莖尖或根尖為外植體的原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng):1/2MS培養(yǎng)基，椰子汁100mL/L，蔗糖30g/L，瓊脂 8g/L，ρΗ5.6 5.8。(4)原球莖增殖培養(yǎng)基:1/2MS 培養(yǎng)基，椰子汁 100mL/L，NAA0.2mg/L, KTl.0mg/L,蔗糖30g/L，亞硒酸鈉200g/L，三氯化鉻180g/L，瓊脂8g/L，pH5.6 5.8。三:鐵皮石斛原球莖誘導(dǎo)及增殖方法取成熟未開裂的鐵皮石斛蒴果，自來水沖洗表面污潰5min，無菌條件下，用75%的酒精消毒5 IOmin,然后用0.1 0.5%的升萊溶液消毒15 20min,最后用無菌水沖洗4 5次，并用無菌濾紙吸干水分。無菌條件下，用消過毒的刀片將果實(shí)剖開，用鑷子夾起一半果實(shí)，于培養(yǎng)瓶口輕輕抖動，將種子均勻播撒在1/2MS培養(yǎng)基表面。于25°C，1500 20001ux光照強(qiáng)度,光照時(shí)間I 16h/d的條件下培養(yǎng)。選取誘導(dǎo)培養(yǎng)30 40d、種胚萌發(fā)、芝麻粒大小的原球莖，將其轉(zhuǎn)接于增殖培養(yǎng)基中，每瓶約10顆。于25°C，1500 20001UX光照強(qiáng)度，光照時(shí)間I 16h/d的條件下培養(yǎng)50 60d后可收獲。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的原理和原則之內(nèi)所做的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種富硒、富鉻鐵皮石斛原球莖的培養(yǎng)方法，其特征在于:包括以鐵皮石斛種子、莖尖或根尖為外植體進(jìn)行原球莖的誘導(dǎo)、原球莖增殖培養(yǎng)，該方法具體步驟如下: (一)、原球莖的誘導(dǎo)培養(yǎng) (1)、種子為外植體的原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng):其培養(yǎng)基組成是在每IL的1/2MS培養(yǎng)基中含椰子汁lOOmL，蔗糖30g，瓊脂8g，pH5.6 5.8 ;選取成熟未開裂的鐵皮石斛蒴果，自來水沖洗表面污潰5min,無菌條件下,用75%的酒精消毒5 IOmin,然后用0.1 0.5%的升萊溶液消毒15 20min,最后用無菌水沖洗4 5次,并用無菌濾紙吸干水分；無菌條件下，用消過毒的刀片將果實(shí)剖開，用鑷子夾起一半果實(shí)，于培養(yǎng)瓶口輕輕抖動，將種子均勻播撒在1/2MS培養(yǎng)基表面；于25°C，1500 20001ux光照強(qiáng)度，光照時(shí)間1 16h/d的條件下培養(yǎng)； (2)、莖尖或根尖為外植體的原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng):其誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成是在每1L的1/2MS培養(yǎng)基中含椰子汁1OOmL,蔗糖30g，瓊脂8g，pH5.6 5.8 ;選取生長健壯的鐵皮石斛無菌苗，用無菌刀小心切取莖尖和根尖的分生組織，分別接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基，于25°C，1500 20001ux光照強(qiáng)度，光照時(shí)間1 16h/d的條件下培養(yǎng)； (二)、原球莖的增殖培養(yǎng):其增殖培養(yǎng)基組成是在每IL的1/2MS培養(yǎng)基中含椰子汁1OOmL, NAA0.2mg, KTl.0mg,鹿糖 30g,亞硒酸鈉 0.3mg,三氯化鉻 0.35mg,瓊脂 8g, pH5.6 .5.8 ;選取誘導(dǎo)培養(yǎng)30 40d、種胚萌發(fā)、芝麻粒大小的原球莖，將其轉(zhuǎn)接于增殖培養(yǎng)基中，每瓶約10顆；于25°C，1500 20001ux光照強(qiáng)度，光照時(shí)間1 16h/d的條件下培養(yǎng)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種富硒、富鉻鐵皮石斛原球莖的培養(yǎng)方法，包括以鐵皮石斛種子、莖尖或根尖為外植體進(jìn)行原球莖的誘導(dǎo)、原球莖增殖培養(yǎng)，其增殖培養(yǎng)基組成是在每1L的1/2MS培養(yǎng)基中含椰子汁100mL，NAA0.2mg，KT1.0mg，蔗糖30g，亞硒酸鈉0.3mg，三氯化鉻0.35mg，瓊脂8g，pH5.6～5.8；選取誘導(dǎo)培養(yǎng)30～40d、種胚萌發(fā)、芝麻粒大小的原球莖，將其轉(zhuǎn)接于增殖培養(yǎng)基中，每瓶約10顆；于25℃，1500～2000lux光照強(qiáng)度，光照時(shí)間1～16h/d的條件下培養(yǎng)。本發(fā)明的有益效果為1、整個過程均在溫室條件下進(jìn)行，不受地區(qū)、季節(jié)及氣候限制，無污染；2、培養(yǎng)過程工藝簡單、易操作、周期短、后續(xù)投資少；3、鐵皮石斛原球莖增殖能力強(qiáng)、產(chǎn)量高、對微量元素富集率高。
文檔編號A01H4/00GK103168691SQ20131010656
公開日2013年6月26日 申請日期2013年3月28日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月28日
發(fā)明者楊善巖, 王升貴, 狄志鴻, 李海龍 申請人:浙江亞林生物科技股份有限公司