專利名稱：團頭魴復合中草藥抗應激制劑、制備方法及其使用方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種團頭魴復合中草藥抗應激制劑、制備方法及其使用方法，屬于水產(chǎn)配合飼料技術領域。
背景技術：
團頭魚方{Megalobrama amblycephala ),隸屬于硬骨魚綱，鯉形目，鯉科，鳊亞科，魚方屬，現(xiàn)為我國主要的淡水養(yǎng)殖品種之一，近年來年產(chǎn)量已超過60萬噸，并有上升趨勢。團頭魴生理特點是身體大、內臟小，集中在南方地區(qū)養(yǎng)殖，易受高溫氣候影響，相對于鯉、鯽魚等魚類，團頭魴不耐低氧和運輸，因此在養(yǎng)殖生產(chǎn)過程當中經(jīng)常受到外界不利因素的影響產(chǎn)生應激，病害頻繁發(fā)生，團頭魴養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失。為防治病原菌，抗生素及抗菌藥物得到了大量使用，并造成藥物殘留、耐藥性增強、引起動物免疫力下降等一系列不良后果，影響人類食品安全，影響水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。隨著抗生素、抗菌藥物的逐漸禁用，一些綠色、安全、高效飼料添加劑的開發(fā)與應用應運而生。中草藥具有天然、高效、毒副作用少、資源豐富等優(yōu)點，含有與動物的免疫功能密切相關的生物堿、茶多酚、皂甙、低聚糖、黃酮類、揮發(fā)油類等，能促進機體健康，減少抗生素在動物生產(chǎn)中的使用，是我國傳統(tǒng)的防病治病藥物。五倍子(Galla Chinensis)又名百蟲倉、百藥煎、掊子,化學成分主要包括單寧酸、沒食子酸、五倍子油、樹脂、蛋白質、脂肪、淀粉、蠟質、礦物質等。其中主要有效成分單寧酸含量很高，最高可達70%以上，具有抗菌、抗病毒、清除自由基和抗氧化等作用。刺五加(Radix Acanthopanacis Senticosl)是五加科五加屬，化學成分主要包括多種醣類、氨基酸、脂肪酸、維生素A、B1、B2及多量的胡蘿卜素；另含有芝麻脂素、留醇、香豆精、黃酮、木栓酮、非芳香性不飽和有機酸、及多種微量礦物質等，具有調節(jié)機體紊亂，使之趨于正常的功能，提高耐缺氧能力，抗菌消炎等作用。黃柏(Cortex Phellodendri Chinensis)為蕓香科植物黃皮樹或黃檗的干燥樹皮。主要成分小檗堿、黃柏堿、木蘭花堿等多種生物堿及內酯、留醇、黏液質等，具有抗真菌、抗細菌、抗氧化、提高免疫機能等功效。蒲公英(Herba Taraxaci)屬菊科多年生草本植物。含有蒲公英醇、蒲公英素、膽堿、有機酸、菊糖等多種健康營養(yǎng)成分，同時含有蛋白質、脂肪、碳水化合物、微量元素及維生素等，有豐富的營養(yǎng)價值。具有有利尿、緩瀉、退黃疸、利膽、保肝等功效，同時具有抗真菌、抗細菌、抗氧化、提高免疫機能等作用。白頭翁(Pulsatilla chinensis (Bunge) Regel)是毛莨科植物，多年生草本,另lj名有奈何草、粉乳草、白頭草、老姑草、菊菊苗、老翁花、老冠花、貓爪子花等等，具有清熱解毒，涼血止痢，用于熱毒血痢，阿米巴痢疾，對腸粘膜有收斂作用，能止瀉，止血，對綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、痢疾桿菌有抑制作用。甘草(Radix Glycyrrhizae)是一種補益中草藥。含有多種化學成分,主要成分有甘草酸、甘草甙等。研究證明甘草能抗病毒、抗細菌、抗氧化、抗應激，且能調節(jié)免疫機能，如增強巨噬細胞吞噬能力，促進輔助性T淋巴細胞的增殖與激活等。最近的一些專利喻運珍等申請了專利“一種魚用復方中草藥制劑及其制備方法”(201010162861.1 );張其中等申請了專利“一種魚用復方中草藥免疫增強劑及其制備方法”(201110201424.0 );張璐等申請了專利“一種淡水養(yǎng)殖魚類通用復合中草藥免疫增強劑”(201110186183. 7 );徐維娜等申請了專利“一種團頭魴免疫增強劑飼料及其生產(chǎn)方法”(20210033844. 7 )等，都是提高魚類的免疫力復方中草藥制劑，但是有關提高魚體抗應激復合中草藥的論文與專利還少見，特別是能提高團頭魴專用的復合中草藥制劑還少見。目前已有一些關于五倍子、刺五加、黃柏、蒲公英、白頭翁、甘草的在水產(chǎn)養(yǎng)殖的使用，但是有關五倍子、刺五力卩、黃柏、蒲公英、白頭翁、甘草配伍使用，還未見報道。因此研制復合中草藥抗應激制劑，提高團頭魴抗病能力，抗應激能力，對水產(chǎn)養(yǎng)殖的健康發(fā)展和可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于從中醫(yī)的理論出發(fā)，以五倍子為君，刺五加、黃柏為臣，蒲公英、
白頭翁、甘草等為使，研制中草復合物，從而提供一種團頭魴復合中草藥抗應激制劑及制備方法，其能耗低、工藝簡單、生產(chǎn)成本低，能提高魚體免疫與抗氧化能力，提高魚體抗高密度以及抵抗嗜水性氣單胞菌感染能力，且可促進魚體生長。本發(fā)明提供一種團頭魴復合中草藥抗應激制劑，其組成包括(重量份)五倍子22 28份、刺五加15 19份、黃柏5 20份、蒲公英12 19份、白頭翁10 16份和甘草10-15份。制備方法為按上述配方分別稱取各組份，分別烘干后粉碎，混勻即得。所述烘干至水分〈12%，烘干溫度范圍為50-60°C。上述團頭魴復合中草藥抗應激制劑在魚飼料中的添加量為1%-5. 0%。優(yōu)選地，添加量與使用的周期有關，當使用周期在30d以上，在飼料中添加量為1. 0%-2. 0% ;當使用周期在7-30d以內，在飼料中添加量為2. 0%-3. 0%。當使用周期在7d以內，在飼料中添加量為
3.0%-5. 0%。此復合中草藥抗應激制劑可直接清除機體內的自由基，消除自由基對機體組織器官正常功能的負面影響，加快修復被破壞的免疫系統(tǒng)，減緩機體對應激條件的反應，能提高團頭魴的免疫與抗氧化能力、抗高密度以及抵抗嗜水性氣單胞菌感染能力，改善飼料適口性，促進團頭魴生長。本發(fā)明的團頭魴復合中草藥抗應激制劑，從中醫(yī)的理論出發(fā)，以五倍子為君，刺五加、黃柏為臣，蒲公英、白頭翁、甘草等為使，研制復合中草藥抗應激制劑，能克服某一種產(chǎn)品的不足之處，相互補充，既有抗應激的功效，又具有一定的抗病原菌的功效，促進魚體生長；本發(fā)明原料來源穩(wěn)定，制備簡單，取材廣泛，成本低廉。
具體實施例方式
下面結合實施例進一步描述本發(fā)明。實施例1
配制I kg復合中草藥抗應激制劑，其各原料組成五倍子280g、刺五加150g、黃柏200g、蒲公英120g、白頭翁為100g、甘草150g份；將上述各組份進行烘干，烘干至水分〈12% ;烘干后的各組分進行粗粉碎，粉碎機(WKX-160型中草藥粉碎機，青州市富爾康制藥機械有限公司)內粉碎后為粗物料，并通過40目篩網(wǎng)，粉碎機粉碎速度200轉/分；后經(jīng)超微粉碎機(ZNC-300小型超微粉碎機，北京興時利和科技發(fā)展有限公司)進行第二次粉碎，并通過200目篩網(wǎng)，粉碎機粉碎速度500轉/分；再將上述各組分在混合機(V型混合機，上海華夏漁業(yè)機械有限公司)內充分混勻，制成200目干粉的復合中草藥抗應激制劑，混合機投料轉速18轉/分。所用五倍子、刺五加、黃柏、蒲公英、白頭翁、甘草等中草藥均購自江蘇中草藥貿易有限公司，下同。生長實驗團頭魴由中國水產(chǎn)科學院淡水漁業(yè)研究中心漁場提供。試驗選擇健康、規(guī)格、重量基本一致的團頭魴，個體初均重約30g。隨機分組，設有試驗組與對照組，每組設3個平行試驗，每平行組50尾試驗魚，共6個網(wǎng)箱(規(guī)格為250cmX 150cmX 100cm)。團頭魴馴化30d后投喂O、1. 0%兩個劑量復合中草藥抗應激制劑56d，測定其生長的影響。應激試驗飼養(yǎng)試驗結束后，選取個體基本一致的魚進行應激試驗。采用高密度(100 g/L)應激，每個劑量組分三個平行組，每個平行組均為20尾左右，放養(yǎng)于同樣規(guī)格容積為40 L塑料桶中。采用流水系統(tǒng)，水溫25± 1°C，流速為2 L/min,并保證充足的氧氣，減少人為干擾，保持安靜，防止額外應激。每12觀察魚體死亡情況，觀察4d，統(tǒng)計死亡率，采集血液、肝臟樣品等。攻毒實驗飼養(yǎng)試驗結束后，每個劑量組分三個平行組，每個平行組均為10尾魚。病原菌采用淡水魚類細菌-嗜水性氣單胞菌，將兩次活化后的嗜水性氣單胞菌用無菌生理鹽水稀釋，使終濃度約為5X106cells/ml。按每100 g魚重腹腔注射菌液1. O ml，后放養(yǎng)于同樣規(guī)格容積的水泥池網(wǎng)箱中(規(guī)格為IOOcmX IOOcmX 100cm),并保證充足的氧氣，每天觀察魚體死亡情況，觀察7d，統(tǒng)計死亡率。結果表明與對照組相比，1. 0%復合中草藥抗應激制劑增重率顯著(P〈0. 05)分別提高了 12. 58% ;病原菌感染魚體7d，對照組死亡率為90. 0%，1. 0%復合中草藥抗應激制劑魚死亡率為28. 0% ;高密度應激Id試驗后，與對照組相比，1. 0%免疫增強劑顯著(P〈0. 05)降低血液皮質醇濃度9. 21%，血糖水平5. 54%及丙二醛濃度8. 11%，增加了血液過氧化氫酶15. 34%、超氧化物歧化酶活性11. 238%以及應激蛋白HSP70濃度6. 33%，因此，該復合中草藥抗應激制劑能提高魚體免疫與抗氧化能力，提高魚體抗高密度以及抵抗嗜水性氣單胞菌感染能力，提高魚體抗應激能力，促進魚體生長。實施例2
配制I kg復合中草藥抗應激制劑,其各原料組成五倍子250g、刺五加170g、黃柏170g、蒲公英150g、白頭翁為160g、甘草IOOg份；將上述各組份進行烘干，烘干至水分〈12% ;烘干后的各組分進行粗粉碎，粉碎機(WKX-160型中草藥粉碎機，青州市富爾康制藥機械有限公司)內粉碎后為粗物料，并通過50目篩網(wǎng)，粉碎機粉碎速度250轉/分；后經(jīng)超微粉碎機(ZNC-300小型超微粉碎機，北京興時利和科技發(fā)展有限公司)進行第二次粉碎，并通過250目篩網(wǎng)，粉碎機粉碎速度550轉/分；再將上述各組分在混合機(V型混合機，上海華夏漁業(yè)機械有限公司)內充分混勻，制成250目干粉的復合中草藥抗應激制劑，混合機投料轉速19轉/分。生長實驗團頭魴由中國水產(chǎn)科學院淡水漁業(yè)研究中心漁場提供。試驗選擇健康、規(guī)格、重量基本一致的團頭魴，個體初均重約30g。隨機分組，設有試驗組與對照組，每組設3個平行試驗，每平行組50尾試驗魚，共6個網(wǎng)箱(規(guī)格為250cmX 150cmX 100cm)。團頭魴馴化30d后投喂0、2. 5%兩個劑量復合中草藥抗應激制劑25d，測定其生長的影響。應激試驗飼養(yǎng)試驗結束后，選取個體基本一致的魚進行應激試驗。采用高密度(100 g/L)應激，每個劑量組分三個平行組，每個平行組均為20尾左右，放養(yǎng)于同樣規(guī)格容積為40 L塑料桶中。采用流水系統(tǒng)，水溫25± 1°C，流速為2 L/min,并保證充足的氧氣，減少人為干擾，保持安靜，防止額外應激。每12h觀察魚體死亡情況，觀察4d，統(tǒng)計死亡率，采集血液、肝臟樣品等。攻毒實驗飼養(yǎng)試驗結束后，每個劑量組分三個平行組，每個平行組均為10尾魚。病原菌采用淡水魚類細菌-嗜水性氣單胞菌，將兩次活化后的嗜水性氣單胞菌用無菌生理鹽水稀釋，使終濃度約為5X106cells/ml。按每100 g魚重腹腔注射菌液1. O ml，后放養(yǎng)于同樣規(guī)格容積的水泥池網(wǎng)箱中(規(guī)格為IOOcmX IOOcmX 100cm),并保證充足的氧氣，每天觀察魚體死亡情況，觀察7d，統(tǒng)計死亡率。結果表明與對照組相比，2. 5%復合中草藥抗應激制劑增重率顯著(P〈0. 05)分別提高了 11. 21% ;病原菌感染魚體7d，對照組死亡率為94. 0%, 2. 5%復合中草藥抗應激制劑魚死亡率為24. 0%;高密度應激Id試驗后，與對照組相比，2. 5%復合中草藥抗應激制劑顯著(P〈0. 05)降低血液皮質醇濃度9. 54%，血糖水平6. 99%及丙二醛濃度12. 857%，增加了血液過氧化氫酶8. 99%、超氧化物歧化酶活性8. 44%以及應激蛋白HSP70濃度12. 45%，因此，該免疫增強劑能提高魚體免疫與抗氧化能力，提高魚體抗高密度以及抵抗嗜水性氣單胞菌感染能力，提高魚體抗應激能力，促進魚體生長。實施例3
配制I kg復合中草藥抗應激制劑其各原料組成五倍子220g、刺五加190g、黃柏150g、蒲公英190g、白頭翁130g、甘草120g份；將上述各組份進行烘干，烘干至水分〈12% ;烘干后的各組分進行粗粉碎，粉碎機(WKX-160型中草藥粉碎機，青州市富爾康制藥機械有限公司)內粉碎后為粗物料，并通過60目篩網(wǎng)；粉碎機粉碎速度300轉/分；后經(jīng)超微粉碎機(ZNC-300小型超微粉碎機，北京興時利和科技發(fā)展有限公司)進行第二次粉碎，并通過300目篩網(wǎng)；粉碎機粉碎速度600轉/分；再將上述各組分在混合機(V型混合機，上海華夏漁業(yè)機械有限公司)內充分混勻，制成300目干粉的復合中草藥抗應激制劑，混合機投料轉速:20轉/分。生長實驗團頭魴由中國水產(chǎn)科學院淡水漁業(yè)研究中心漁場提供。試驗選擇健康、規(guī)格、重量基本一致的團頭魴，個體初均重約30g。隨機分組，設有試驗組與對照組，每組設3個平行試驗，每平行組50尾試驗魚，共6個網(wǎng)箱(規(guī)格為250cmX 150cmX 100cm)。團頭魴馴化15d后投喂0、4. 0%復合中草藥抗應激制劑7d，測定其生長的影響。應激試驗飼養(yǎng)試驗結束后，選取個體基本一致的魚進行應激試驗。采用高密度(100 g/L)應激，每個劑量組分三個平行組，每個平行組均為20尾左右，放養(yǎng)于同樣規(guī)格容積為40 L塑料桶中。采用流水系統(tǒng)，水溫25± 1°C，流速為2 L/min,并保證充足的氧氣，減少人為干擾，保持安靜，防止額外應激。每12h觀察魚體死亡情況，觀察2d，統(tǒng)計死亡率，采集血液、肝臟樣品等。攻毒實驗飼養(yǎng)試驗結束后，每個劑量組分三個平行組，每個平行組均為10尾魚。病原菌采用淡水魚類細菌-嗜水性氣單胞菌，將兩次活化后的嗜水性氣單胞菌用無菌生理鹽水稀釋，使終濃度約為5X106cells/ml。按每100 g魚重腹腔注射菌液1. O ml，后放養(yǎng)于同樣規(guī)格容積的水泥池網(wǎng)箱中(規(guī)格為IOOcmX IOOcmX 100cm),并保證充足的氧氣，每天觀察魚體死亡情況，觀察7d，統(tǒng)計死亡率。結果表明與對照組相比，4. 0%復合中草藥抗應激制劑增重率顯著(P〈0. 05)分別提高了 10. 78% ;病原菌感染魚體7d，對照組死亡率為89. 0%，4. 0%復合中草藥抗應激制劑魚死亡率為36. 0%;高密度應激Id試驗后，與對照組相比，4. 0%復合中草藥抗應激制劑顯著(P〈0. 05)降低血液皮質醇濃度8. 39%，血糖水平4. 46%及丙二醛濃度9. 64%，增加了血液過氧化氫酶9. 66%、超氧化物歧化酶活性6. 76%以及應激蛋白HSP70濃度5. 76%，因此，該復合中草藥抗應激制劑能提高魚體免疫與抗氧化能力，提高魚體抗高密度以及抵抗嗜水性氣單胞菌感染能力，提高魚體抗應激能力，促進魚體生長。
權利要求
1.一種團頭魴復合中草藥抗應激制劑，其特征在于其組成包括(重量份):五倍子22 28份、刺五加15 19份、黃柏5 20份、蒲公英12 19份、白頭翁10 16份和甘草 10-15 份。
2.如權利要求1所述的團頭魴復合中草藥抗應激制劑的制備方法，其特征在于所述制備方法為按權利要求1所述配方分別稱取各組份，分別烘干后粉碎，混勻即得。
3.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于所述烘干的溫度為50-60°C，烘干至水分 <12%ο
4.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于所述粉碎的方法為粉碎，過40-60目篩網(wǎng)；二次粉碎，過200-300目篩網(wǎng)。
5.如權利要求1所述的團頭魴復合中草藥抗應激制劑的使用方法，其特征在于將所述復合中草藥抗應激制劑添加到團頭魴飼料中，添加量為1. 0%-5. 0%。
6.如權利要求5所述的使用方法，其特征在于當使用周期在30d以上，在飼料中添加量為1. 0%-2. 0% ;當使用周期在7-30d以內，在飼料中添加量為2. 0%-3. 0% ;當使用周期在 7d以內，在飼料中添加量為3. 0%-5. 0%。
全文摘要
本發(fā)明公布了一種團頭魴復合中草藥抗應激制劑，其組成包括(重量份)五倍子22～28份、刺五加15～19份、黃柏5～20份、蒲公英12～19份、白頭翁10～16份和甘草10-15份。制備方法為按上述配方分別稱取各組份，分別烘干后粉碎，混勻即得。所述復合中草藥抗應激制劑在魚飼料中的添加量為1.0%-5.0%。本發(fā)明的復合中草藥抗應激制劑可直接清除機體內的自由基，消除自由基對機體組織器官正常功能的負面影響，加快修復被破壞的免疫系統(tǒng)，減緩機體對應激條件的反應，能提高團頭魴的免疫與抗氧化能力、抗高密度以及抵抗嗜水性氣單胞菌感染能力，改善飼料適口性，促進團頭魴生長。
文檔編號A23K1/16GK102987164SQ20121057361
公開日2013年3月27日 申請日期2012年12月26日 優(yōu)先權日2012年12月26日
發(fā)明者劉波, 謝駿, 戈賢平, 周群蘭, 繆凌鴻, 任明春, 高啟平 申請人:中國水產(chǎn)科學研究院淡水漁業(yè)研究中心