專利名稱：一種橡皮樹組培快繁方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物的繁殖方法，尤其是一種橡皮樹組培快繁方法。
背景技術(shù)：
橡皮樹原產(chǎn)印度和馬來西亞，因其革質(zhì)葉片寬厚，觀賞價值極高，栽培管理容易而深受人們的喜愛，是著名的室內(nèi)觀葉及園林綠化樹種。橡皮樹常采用扦插或高壓，成活率較高，但繁殖速度慢，所需母本材料較多，造成資源的極大浪費。2005年《甘肅農(nóng)業(yè)科技》第I期陳韜等撰寫的《橡皮樹的組織培養(yǎng)和快速繁殖》以橡皮樹莖段為試驗外植體材料，其誘導(dǎo)叢生芽及叢生芽增殖系數(shù)相對較低，生根培養(yǎng)方法較復(fù)雜。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種橡皮樹組培快繁方法，可以克服現(xiàn)有技術(shù)中外植體誘導(dǎo)叢生芽增殖系數(shù)較低及生根培養(yǎng)方法復(fù)雜的缺點，簡化了生根煉苗程序，達到繁殖速度快、節(jié)約生產(chǎn)成本并適用于工廠化規(guī)模育苗的目的。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是一種橡皮樹組培快繁方法，該方法包括以下步驟
1)選取外植體取橡皮樹莖尖為外植體，消毒后備用；
2)莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)將 橡皮樹莖尖最外層去除苞葉后消毒，剝?nèi)デo尖苞葉及至第4片葉片，將下切口至節(jié)處留O. 5cm并切成45度角后，接種在莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，將接種的外植體置于溫度22土1°C、光照14h/d、光照強度1500-20001x的培養(yǎng)室內(nèi)，培養(yǎng)10天后橡皮樹莖尖下切口處周圍形成團狀黃色愈傷組織，連續(xù)培養(yǎng)20天后愈傷組織逐漸膨大，培養(yǎng)至愈傷組織長至F2-3cm ；
3)叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)將長至F2-3cm的愈傷組織切除基部疏松的愈傷組織后，轉(zhuǎn)接到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，置于溫度25土 1°C、光照12h/d、光照強度2000-30001x的培養(yǎng)室內(nèi)，30天后愈傷組織上分化叢生芽(通過30天培養(yǎng)誘導(dǎo)單芽平均誘導(dǎo)叢生芽增殖系數(shù)達到20. 2)，橡皮樹組培苗開始形成；
4)叢生芽增殖繼代將叢生芽接入?yún)采吭鲋忱^代培養(yǎng)基上，置于溫度25土1°C、光照12h/d、光照強度2000-30001x的培養(yǎng)室內(nèi)，每30-40天繼代轉(zhuǎn)管一次，繼代5次生成生長健壯的試管苗(在繼代第5次時其叢生芽增殖系數(shù)平均達到28. 5)；
5)壯苗生根將生長健壯的試管苗采用MS培養(yǎng)基進行生根培養(yǎng)，30天后長成帶根的橡皮樹幼苗；
6)煉苗移栽將帶根的橡皮樹幼苗進行煉苗移栽，即培養(yǎng)成橡皮樹組培苗。步驟2)的莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基+6-BA1. O mg/L +ΝΑΑ0.1 mg/L +蔗糖30g/L+瓊脂粉6g/L。步驟3)所用的叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基和步驟4)所用的叢生芽增殖繼代培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基 +ZT2. O mg/L +NAAO.1 mg/L + 蔗糖 30g/L+ 瓊脂粉 6g/L。本發(fā)明提供的一種橡皮樹組培快繁方法，有益效果如下1、橡皮樹以莖尖為外植體，將下切口切成45度角，便于外植體與培養(yǎng)基充分接觸，增大吸收面積，充分供應(yīng)叢生芽分化所需營養(yǎng)成份。2、橡皮樹在叢生芽誘導(dǎo)中外源分裂素采用ZT比6-BA增殖速度快，隨著繼代的次數(shù)增加，在繼代第5次時增殖系數(shù)達到28. 5，且試管苗生長健壯，縮短培養(yǎng)時間，節(jié)約生產(chǎn)成本。3、隨著繼代次數(shù)逐漸增加，橡皮樹叢生芽內(nèi)源激素不斷積累，導(dǎo)致生根率大大增力口，所以橡皮樹生根培養(yǎng)不需添加生長激素，僅采用基本培養(yǎng)基MS即可，經(jīng)過30天的生根培養(yǎng)單株平均粗度增加1. 83mm,平均高度增加1. 59cm,平均節(jié)間長度增加3. 33mm,生根率達到100%且主根平均達到5. 6條側(cè)根明顯。煉苗移栽采用園土 +蛭石，園土和蛭石的質(zhì)量比為2 :1，移栽成活率高達99. 5%。3、可以克服現(xiàn)有技術(shù)中外植體誘導(dǎo)叢生芽增殖系數(shù)較低及生根培養(yǎng)方法復(fù)雜的缺點，簡化了生根煉苗程序，達到繁殖速度快、節(jié)約生產(chǎn)成本并適用于工廠化規(guī)模育苗的目的。
具體實施例方式一種橡皮樹組培快繁方法，該方法包括以下步驟
1)選取外植體選取當(dāng)年生生長健壯無病蟲害的橡皮樹枝條莖尖為外植體，用自來水沖洗切口處白色膠狀物質(zhì)，然后用O. 1%PVP浸泡lOmin，最后晾干材料表面水分備用；
2)莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)將橡皮樹莖尖最外層去除苞葉后，置于質(zhì)量濃度為5%的洗衣液中攪拌清洗lOmin，置于流水沖洗lh，在超凈工作臺上將去除苞葉的橡皮樹莖尖先用質(zhì)量濃度為75%酒精浸泡30s，再用質(zhì)量濃度為O. 1%升汞消毒12min，最后用無菌水沖洗3次，再將莖尖置于無菌濾紙上吸干表面多余水分，剝?nèi)デo尖苞葉及至第4片葉片，將下切口至節(jié)處留O. 5cm并切成45度角后，接種在莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，將接種的外植體置于溫度22±1°C、光照14h/d、光照強度1500-20001x的培養(yǎng)室內(nèi)，培養(yǎng)10天后橡皮樹莖尖下切口處周圍形成團狀黃色愈傷組織，連續(xù)培養(yǎng)20天后愈傷組織逐漸膨大，培養(yǎng)至愈傷組織長至F2-3cm ；
3)叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)將長至F2-3cm的愈傷組織切除基部疏松的愈傷組織后，轉(zhuǎn)接到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，置于溫度25土1°C、光照12h/d、光照強度2000-30001x的培養(yǎng)室內(nèi)，30天后愈傷組織上分化叢生芽(通過30天培養(yǎng)誘導(dǎo)單芽平均誘導(dǎo)叢生芽增殖系數(shù)達到20. 2)，橡皮樹組培苗開始形成；
4)叢生芽增殖繼代將叢生芽接入?yún)采吭鲋忱^代培養(yǎng)基上，置于溫度25土1°C、光照12h/d、光照強度2000-30001x的培養(yǎng)室內(nèi)，每30-40天繼代轉(zhuǎn)管一次，繼代5次生成生長健壯的試管苗(在繼代第5次時其叢生芽增殖系數(shù)平均達到28. 5)；
5)壯苗生根將生長健壯的試管苗采用MS培養(yǎng)基進行生根培養(yǎng)，30天后長成帶根的橡皮樹幼苗；
6)煉苗移栽將帶根的橡皮樹幼苗進行煉苗移栽，即培養(yǎng)成橡皮樹組培苗。

步驟2)的莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基+6-BA1. O mg/L +NAAO.1 mg/L +蔗糖30g/L+瓊脂粉6g/L。
步驟3)所用的叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基和步驟4)所用的叢生芽增殖繼代培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基+ZT2.0 mg/L +NAAO.1 mg/L + 蔗糖 30g/L+瓊脂粉 6g/L。
權(quán)利要求
1.一種橡皮樹組培快繁方法，其特征在于該方法包括以下步驟 1)選取外植體取橡皮樹莖尖為外植體，消毒后備用； 2)莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)將橡皮樹莖尖最外層去除苞葉后消毒，剝?nèi)デo尖苞葉及至第4片葉片，將下切口至節(jié)處留O. 5cm并切成45度角后，接種在莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，將接種的外植體置于溫度22土 1°C、光照14h/d、光照強度1500-20001x的培養(yǎng)室內(nèi)，培養(yǎng)10天后橡皮樹莖尖下切口處周圍形成團狀黃色愈傷組織，連續(xù)培養(yǎng)20天后愈傷組織逐漸膨大，培養(yǎng)至愈傷組織長至F2-3cm時； 3)叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)將長至F2-3cm的愈傷組織切除基部疏松的愈傷組織后，轉(zhuǎn)接到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，置于溫度25 ± I °C、光照12h/d、光照強度2000-30001x的培養(yǎng)室內(nèi)，30天后愈傷組織上分化叢生芽，橡皮樹組培苗開始形成； 4)叢生芽增殖繼代將叢生芽接入?yún)采吭鲋忱^代培養(yǎng)基上，置于溫度25土1°C、光照12h/d、光照強度2000-30001x的培養(yǎng)室內(nèi)，每30-40天繼代轉(zhuǎn)管一次，繼代5次生成生長健壯的試管苗； 5)壯苗生根將生長健壯的試管苗采用MS培養(yǎng)基進行生根培養(yǎng)，30天后長成帶根的橡皮樹幼苗； 6)煉苗移栽將帶根的橡皮樹幼苗進行煉苗移栽，即培養(yǎng)成橡皮樹組培苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種橡皮樹組培快繁方法，其特征在于步驟2)的莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基+6-BA1. O mg/L +ΝΑΑ0.1 mg/L +蔗糖30g/L+瓊脂粉6g/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種橡皮樹組培快繁方法，其特征在于步驟3)所用的叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基和步驟4)所用的叢生芽增殖繼代培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基+ZT2. O mg/L +NAAO.1 mg/L + 鹿糖 30g/L+ 瓊脂粉 6g/L。
全文摘要
一種橡皮樹組培快繁方法，該方法包括以下步驟1)選取外植體2)莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)；3)叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，橡皮樹組培苗開始形成；4)叢生芽增殖繼代繼代5次生成生長健壯的試管苗；5)壯苗生根將生長健壯的試管苗采用MS培養(yǎng)基進行生根培養(yǎng)，30天后長成帶根的橡皮樹幼苗；6)煉苗移栽將帶根的橡皮樹幼苗進行煉苗移栽，即培養(yǎng)成橡皮樹組培苗。本發(fā)明提供的一種橡皮樹組培快繁方法，可以克服現(xiàn)有技術(shù)中外植體誘導(dǎo)叢生芽增殖系數(shù)較低及生根培養(yǎng)方法復(fù)雜的缺點，簡化了生根煉苗程序，達到繁殖速度快、節(jié)約生產(chǎn)成本并適用于工廠化規(guī)模育苗的目的。
文檔編號A01H4/00GK103053416SQ20121057276
公開日2013年4月24日 申請日期2012年12月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月26日
發(fā)明者馬曉波, 張國禹, 黃桂云, 胡梅香, 邱利文, 吳笛, 張海波, 楊蘭芳, 汪磊 申請人:中國長江三峽集團公司, 長江三峽生態(tài)園林有限公司