一種高粱轉(zhuǎn)基因植株的潮霉素涂葉鑒定法
【專利摘要】一種高粱轉(zhuǎn)基因植株的潮霉素涂葉鑒定法，屬于農(nóng)作物遺傳育種【技術(shù)領(lǐng)域】。在高粱3葉期，將潮霉素溶液涂抹在高粱幼苗的第2片葉子上，分別于3天和7天后觀察葉片有無灰色斑點(diǎn)或死亡，以此確認(rèn)其是否為轉(zhuǎn)基因植株。方法簡(jiǎn)單，操作容易，無需設(shè)備，費(fèi)用低廉。
【專利說明】一種高粱轉(zhuǎn)基因植株的潮霉素涂葉鑒定法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]一種高粱轉(zhuǎn)基因植株的潮霉素涂葉鑒定法屬于農(nóng)作物遺傳育種領(lǐng)域，更具體地說是一種對(duì)高粱群體中轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行篩選鑒定的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]由于高粱轉(zhuǎn)基因的效率較低，往往需要培育大量的苗，從中篩選檢測(cè)轉(zhuǎn)基因成功的植株，因此需要一種高效的鑒定方法。目前植物轉(zhuǎn)基因鑒定方法主要是采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法。PCR鑒定的準(zhǔn)確性很高，但在時(shí)間和精力方面投入較多，并且需要專門的儀器，代價(jià)高，效率低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明提供了一種利用潮霉素涂抹葉片鑒定高粱轉(zhuǎn)基因苗的高效方法。相對(duì)于PCR法，該方法不但操作簡(jiǎn)便，所需費(fèi)用少，準(zhǔn)確性高，而且不需要專用設(shè)備。利用PCR法對(duì)潮霉素涂葉鑒定法印證表明，該方法的鑒定準(zhǔn)確率高達(dá)95%以上。
[0004]本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的:
1.一種高粱轉(zhuǎn)基因植株的潮霉素涂葉鑒定法，其特征在于，用潮霉素溶液涂抹葉片，目測(cè)葉片是否產(chǎn)生灰色斑點(diǎn)或死亡，以此確認(rèn)是否為轉(zhuǎn)基因植株。
[0005]2.本發(fā)明的操作有以下要點(diǎn):所述的潮霉素溶液為1%。潮霉素溶液；所述的用潮霉素溶液涂抹葉片于高粱幼苗的3葉期進(jìn)行；所述的用潮霉素溶液涂抹葉片是涂抹高粱幼苗第2片葉的正面；所述的用潮霉素溶液涂抹葉片是用脫脂棉蘸取1%。潮霉素溶液進(jìn)行；所述的用潮霉素溶液涂抹葉片須戴一次性薄膜`手套進(jìn)行；所述的目測(cè)葉片是否產(chǎn)生灰色斑點(diǎn)和死亡分別于涂抹后3天和7天進(jìn)行；所述的確認(rèn)是否轉(zhuǎn)基因苗的方法是:3天后觀察到處理過的葉片有灰色斑點(diǎn)且7天后該葉片發(fā)生死亡的苗定為非轉(zhuǎn)基因苗；3天后觀察到處理過的葉片無灰色斑點(diǎn)且7天后也未發(fā)生死亡的苗定為轉(zhuǎn)基因苗。
[0006]本發(fā)明的有益效果:采用本發(fā)明的方法鑒定高粱轉(zhuǎn)基因苗，與傳統(tǒng)的PCR法相比，操作簡(jiǎn)單，無需昂貴的設(shè)備，費(fèi)用低廉。用PCR方法印證表明，本發(fā)明的準(zhǔn)確率高達(dá)95%以上，可謂精準(zhǔn)高效。
【具體實(shí)施方式】
[0007]具體實(shí)施實(shí)例1:將S1390載體轉(zhuǎn)入到高粱品系U68中的轉(zhuǎn)基因鑒定
通過將S1390載體轉(zhuǎn)入到高粱品系U68中的操作，獲得了高粱轉(zhuǎn)基因的待測(cè)群體，在待測(cè)群體中檢測(cè)鑒定轉(zhuǎn)基因植株。方法是，在高粱幼苗3葉期，雙手戴一次性塑料薄膜手套，用脫脂棉球蘸取1%。潮霉素溶液均勻地涂抹在高粱幼苗第2片葉的正面，第2天再如法涂抹一次。涂抹后第3天觀測(cè)到有23株經(jīng)涂抹潮霉素的葉片上未出現(xiàn)灰色斑點(diǎn)且第7天也未發(fā)生異常。這23株即為潮霉素涂葉法鑒定出的轉(zhuǎn)基因苗。用PCR方法對(duì)這23株苗進(jìn)行檢測(cè)，共有22株擴(kuò)增出目的片斷，證實(shí)潮霉素涂葉法的鑒定準(zhǔn)確率達(dá)95.6%。[0008]具體實(shí)施例2:將SRnai載體轉(zhuǎn)入到高粱品系3042B中的轉(zhuǎn)基因鑒定
通過將SRnai載體轉(zhuǎn)入到高粱品系3042B中的操作，獲得了高粱轉(zhuǎn)基因的待測(cè)群體，在待測(cè)群體中檢測(cè)鑒定轉(zhuǎn)基因植株。方法是，在高粱幼苗3葉期，雙手戴一次性塑料薄膜手套，用脫脂棉球蘸取1%。潮霉素溶液均勻地涂抹在高粱幼苗第2片葉的正面，第2天再如法涂抹一次。涂抹后第3天觀測(cè)到有87株經(jīng)涂抹潮霉素的葉片上未出現(xiàn)灰色斑點(diǎn)且第7天也未出現(xiàn)異常。這87株即為潮霉素涂葉法鑒定出的轉(zhuǎn)基因苗。用PCR方法對(duì)這87株苗進(jìn)行檢測(cè)，共有84株擴(kuò)增出目的片斷，證實(shí)`潮霉素涂葉法的鑒定準(zhǔn)確率達(dá)96.5%。
【權(quán)利要求】
1.一種高粱轉(zhuǎn)基因植株的潮霉素涂葉鑒定法，利用高粱幼苗的葉片進(jìn)行，其特征在于，用潮霉素溶液涂抹高粱葉片，目測(cè)葉片是否產(chǎn)生灰色斑點(diǎn)或死亡，以此確認(rèn)是否為轉(zhuǎn)基因植株。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高粱轉(zhuǎn)基因植株的目測(cè)鑒定法，其特征在于，所述的潮霉素溶液為I %。潮霉素溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高粱轉(zhuǎn)基因植株的目測(cè)鑒定法，其特征在于，所述的用潮霉素溶液涂抹葉片于高粱幼苗3葉期進(jìn)行。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高粱轉(zhuǎn)基因植株的目測(cè)鑒定法，其特征在于，所述的用潮霉素溶液涂抹葉片是涂抹高粱幼苗第2葉片。
5.根據(jù)權(quán)利要求1和權(quán)利要求4所述的一種高粱轉(zhuǎn)基因植株的目測(cè)鑒定法，其特征在于，所述的用潮霉素溶液涂抹葉片是涂抹在第2葉片的正面。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高粱轉(zhuǎn)基因植株的目測(cè)鑒定法，其特征在于，所述的用潮霉素溶液涂抹葉片是用脫脂棉蘸取1%。潮霉素溶液進(jìn)行。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高粱轉(zhuǎn)基因植株的目測(cè)鑒定法，其特征在于，所述的用潮霉素溶液涂抹葉片須戴一次性薄膜手套進(jìn)行。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高粱轉(zhuǎn)基因植株的目測(cè)鑒定法，其特征在于，所述的目測(cè)葉片是否產(chǎn)生灰色斑點(diǎn)和死亡分別于涂抹后3天和7天進(jìn)行。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高粱轉(zhuǎn)基因植株的目測(cè)鑒定法，其特征在于，所述的確認(rèn)是否轉(zhuǎn)基因苗的方法是:3天后觀察到處理過的葉片有灰色斑點(diǎn)，或7天后發(fā)生死亡的苗定為非轉(zhuǎn)基因苗。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種 高粱轉(zhuǎn)基因植株的目測(cè)鑒定法，其特征在于，所述的確認(rèn)是否轉(zhuǎn)基因苗的做法是:3天后觀察到處理過的葉片無灰色斑點(diǎn)，且7天后也未發(fā)生死亡的苗定為轉(zhuǎn)基因苗。
【文檔編號(hào)】A01G7/06GK103843602SQ201210522496
【公開日】2014年6月11日 申請(qǐng)日期:2012年12月7日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月7日
【發(fā)明者】李杰勤, 王麗華, 詹秋文, 陸景標(biāo), 張俊, 林平, 趙庭, 萬海波, 周青, 王茂輝, 劉井良, 李萬祥 申請(qǐng)人:安徽科技學(xué)院