專利名稱：一種松材線蟲性誘劑的收集加工方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于昆蟲防治技術(shù)領(lǐng)域，具體為ー種松材線蟲性誘劑的收集加工方法。
背景技術(shù)：
松材線蟲病是世界性的檢疫性病害，在我國發(fā)生嚴(yán)重。線蟲在樹體內(nèi)的快速繁殖是該病害嚴(yán)重發(fā)生的ー個重要原因，而高效頻繁的交配行為是松材線蟲快速繁殖的基礎(chǔ)。當(dāng)前，雖然國內(nèi)外對松材線蟲開展了大量的研究，但對其行為學(xué)的研究相當(dāng)少見，大多數(shù)研究只是對其行為學(xué)進(jìn)行簡單的現(xiàn)象描述，并沒 有對行為本身的規(guī)律、相關(guān)分子遺傳機(jī)制和理化條件等影響因素開展深入系統(tǒng)的研究。松材線蟲對寄主植物的侵染行為可以分為侵入前、侵入中和侵入后三個時期。在侵入前期，松材線蟲依靠傳媒昆蟲將自身帶到健康的松樹，并附著在天牛取食過程中造成的傷口處；在侵入中期，線蟲在寄主植物的傷ロ處蛻皮，而后進(jìn)入寄主植物體內(nèi)，在此過程中，松材線蟲的行為方式如何、怎樣克服樹脂引起的滯留作用等尚未見報道；在侵入后期，松材線蟲開始從侵入點(diǎn)周圍向皮層樹脂道遷移，井能夠殺死皮層細(xì)胞。當(dāng)前對松材線蟲在寄主植物體內(nèi)的運(yùn)動遷移行為研究主要是測定了不同接種時間后的遷移距離、松材線蟲在寄主植物體內(nèi)的分布狀況，以及影響線蟲遷移的理化因子等。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)蛹室內(nèi)α-薇烯、β -菔烯和長葉烯三者之間的比例α -菔烯β -菔烯長葉烯=1:2. 7:1. I時,松材線蟲蛹室聚集達(dá)到高峰，而當(dāng)濕度大于80%時，松材線蟲在切枝上的遷移運(yùn)動比較活躍。另夕卜，低溫可以抑制松材線蟲的運(yùn)動。性信息素引誘交配現(xiàn)象在許多線蟲中均有報道，但針對松材線蟲的研究極為少見。Kiyohara觀察了松材線蟲的交配行為，發(fā)現(xiàn)處女雌蟲對雄蟲具有明顯的性吸引，但已受精或交配過的雌蟲不再具有吸引力；進(jìn)ー步研究發(fā)現(xiàn)，松材線蟲雄蟲對雌蟲分泌物及處女雌蟲釋放的揮發(fā)性物質(zhì)具有強(qiáng)烈的性反應(yīng)，同樣雌蟲也可以被雄蟲所吸引。因此，一般認(rèn)為松材線蟲的性引誘方式為雌雄相互吸引。我們研究發(fā)現(xiàn)，雖然松材線蟲的雄蟲對雌蟲也有一定的吸引作用，但處女雌蟲對雄蟲的引誘在交配行為中起主導(dǎo)作用。對于松材線蟲來說，松材線蟲性信息素的化學(xué)組分、化學(xué)結(jié)構(gòu)、化學(xué)性質(zhì)和釋放量等方面，國內(nèi)外尚無相關(guān)的報道，如何影響其交配行為尚有待于進(jìn)一歩研究。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的各種問題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計提供ー種松材線蟲性誘劑的收集加工方法的技術(shù)方案，所得的性誘劑安全可靠、簡便易行、對松材線蟲雄性成蟲的召喚和誘集效果好，能干擾松材線蟲的交配行為，使用安全、對環(huán)境不造成任何污染。所述的ー種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于包括以下步驟
O顯微鏡下，挑選處于IV齡已經(jīng)開始生殖分化但性器官尚不成熟的幼蟲期的松材線蟲，并對雌蟲和雄蟲進(jìn)行分離，然后在培養(yǎng)皿中分別飼養(yǎng)，可獲得所需的處女雌蟲，備用；
2)培養(yǎng)至處女雌蟲有明顯求偶召喚行為時，將其移至室溫為18-30°C的環(huán)境下，根據(jù)蟲體在培養(yǎng)皿中的位置，用支架將固相微萃取手柄固定于適宜的高度和角度，將固相微萃取針頭接近正在求偶召喚的雌蟲陰門附近，然后推出針頭，使其盡可能接近雌蟲腺體部位，持續(xù)收集雌蟲腺體釋放的性信息素2-4h，取出后立即在含有性信息素的萃取頭上滴加C18、C20、C21和C22正構(gòu)烷烴混合標(biāo)樣O. 8-1. 2μ ，然后再在GC進(jìn)樣器中熱解析、脫附2_5min，色譜儀進(jìn)樣ロ溫度230-260°C，最后將所得物質(zhì)放入-18°C -22°C冰箱中保存，即得松材線蟲性誘劑。所述的ー種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟I)中所述松材線蟲為未交配過的處女雌蟲。所述的ー種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟2)中收集雌蟲腺體釋放性信息素時間為2. 5-3h。所述的ー種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟2)中收集室溫為 20 0C -28°C，優(yōu)選 22°C -25 °C。所述的ー種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟2)中脫附時間為
3-4min。所述的ー種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟2)中色譜儀進(jìn)樣ロ溫度 240-250°C。所述的ー種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟2)中C18、C20、C21和C22正構(gòu)烷烴混合標(biāo)樣O. 9-1. WL。所述的C18、C20、C21和C22正構(gòu)烷烴混合標(biāo)樣可以由市場上直接購得。上述ー種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，以松材線蟲處女雌性成蟲中提取的性信息化合物為活性成分，具有召喚和誘集松材線蟲雄性成蟲的功效，能有效干擾松材線蟲的交配行為，降低松材線蟲的繁殖速度，從而達(dá)到控制松材線蟲病的目的。其收集加工方法簡便，綠色環(huán)保、設(shè)備投資少，節(jié)約能耗，簡便易行，貯藏和應(yīng)用安全，成本低廉。本申請文件中涉及的百分含量除另有說明外，其它的均為純物質(zhì)的重量百分含量。
具體實(shí)施例方式現(xiàn)結(jié)合本發(fā)明的實(shí)施例和藥效試驗(yàn)，進(jìn)ー步說明本發(fā)明的有益效果。實(shí)施例I :
在松材線蟲處女雌蟲有明顯求偶召喚行為時，將其移至室溫為25°C的環(huán)境下，將微萃取針頭接近正在求偶召喚的雌蟲陰門附近，然后推出針頭，使其盡可能接近雌蟲腺體部位，持續(xù)收集雌蟲腺體釋放的性信息素2h。取出后立即在含有性信息素的萃取頭上滴加C18、C20、C21和C22正構(gòu)烷烴混標(biāo)lPL，然后再在GC進(jìn)樣器中熱解析、脫附3min，色譜儀進(jìn)樣ロ溫度250°C，最后將所得物質(zhì)(松材線蟲性誘劑)滴加到脫脂棉做成的誘芯上，每個誘芯含松材線蟲性誘劑600 μ g,置于松材線蟲飼養(yǎng)處，試驗(yàn)重復(fù)三次。試驗(yàn)統(tǒng)計松材線蟲雄性成蟲的平均累計誘蟲量、平均毎日每組誘蟲量、最高單日誘蟲量。所有調(diào)查數(shù)據(jù)采用Excel 2003和DPS 12.5進(jìn)行分析，方差分析采用Duncan新復(fù)極差法，原始調(diào)查數(shù)據(jù)不作任何轉(zhuǎn)換。表I實(shí)施例中性誘劑對松材線蟲成蟲的室內(nèi)召喚和誘集試驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于包括以下步驟 .1)顯微鏡下，挑選處于IV齡已經(jīng)開始生殖分化但性器官尚不成熟的幼蟲期的松材線蟲，并對雌蟲和雄蟲進(jìn)行分離，然后在培養(yǎng)皿中分別飼養(yǎng)，可獲得所需的處女雌蟲，備用； .2)培養(yǎng)至處女雌蟲有明顯求偶召喚行為時，將其移至室溫為18-30°C的環(huán)境下，根據(jù)蟲體在培養(yǎng)皿中的位置，用支架將固相微萃取手柄固定于適宜的高度和角度，將固相微萃取針頭接近正在求偶召喚的雌蟲陰門附近，然后推出針頭，使其盡可能接近雌蟲腺體部位，持續(xù)收集雌蟲腺體釋放的性信息素2-4h，取出后立即在含有性信息素的萃取頭上滴加C18、C20、C21和C22正構(gòu)烷烴混合標(biāo)樣0. 8-1. 2ML，然后再在GC進(jìn)樣器中熱解析、脫附2_5min，色譜儀進(jìn)樣口溫度230-260°C，最后將所得物質(zhì)放入-18°C -22°C冰箱中保存，即得松材線蟲性誘劑。
2.如權(quán)利I所述的一種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟I)中所述松材線蟲為未交配過的處女雌蟲。
3..如權(quán)利I所述的一種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟2)中收集雌蟲腺體釋放性信息素時間為2. 5-3h。
4.如權(quán)利I所述的一種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟2)中收集室溫為 20°C -28°C，優(yōu)選 22°C -25°C。
5.如權(quán)利I所述的一種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟2)中脫附時間為 3_4min。
6.如權(quán)利I所述的一種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟2)中色譜儀進(jìn)樣口溫度240-250°C。
7.如權(quán)利I所述的一種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，其特征在于步驟2)中C18、C20、C21和C22正構(gòu)烷烴混合標(biāo)樣0. 9-1. 1ML。
全文摘要
一種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，屬于昆蟲防治技術(shù)領(lǐng)域。其特征在于包括以下步驟1)顯微鏡下挑選處女雌蟲；2)用固相微萃取針頭持續(xù)收集雌蟲腺體釋放的性信息素2-4h，取出后立即滴加正構(gòu)烷烴混標(biāo)0.8-1.2μL，然后GC進(jìn)樣器中熱解析、脫附2-5min，色譜儀進(jìn)樣口溫度230-260℃，將所得物質(zhì)制備成正已烷溶液，放入-20℃冰箱中保存即可。上述一種松材線蟲性誘劑的收集加工方法，制得的性誘劑安全可靠、簡便易行、對松材線蟲雄性成蟲的召喚和誘集效果好，能干擾松材線蟲的交配行為，使用安全、對環(huán)境不造成任何污染。
文檔編號A01P19/00GK102630642SQ20121008508
公開日2012年8月15日 申請日期2012年3月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月28日
發(fā)明者白麗群, 胡加付, 郭愷, 黃小娟 申請人:浙江農(nóng)林大學(xué)