專(zhuān)利名稱(chēng)：：抗病轉(zhuǎn)PgPGIP1基因小麥的培育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及抗病轉(zhuǎn)PgPGIPl基因小麥的培育方法。
背景技術(shù)：
：近年來(lái)，真菌病害已成為制約小麥高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)的重要因素之一。我國(guó)小麥發(fā)生的主要真菌病害包括白粉病、條銹病、紋枯病、赤霉病和全蝕病等。小麥紋枯病又稱(chēng)小麥尖眼斑病(wheatsharpeyespot)，是由禾谷絲核菌(Rhizoctoniacerealis)和立枯絲核菌(Rhizoctoniasolani)等引起的土傳真菌病害，我國(guó)小麥紋枯病主要由禾谷絲核菌引起。70年代以來(lái)小麥紋枯病逐漸加重，到80年代已成為長(zhǎng)江流域麥區(qū)的重大病害，后蔓延到黃淮麥區(qū)，目前已成為我國(guó)江蘇、四川、安徽、河南、山東、河北、陜西、北京等麥區(qū)的主要病害。20052010年，我國(guó)每年遭受小麥紋枯病危害的麥田面積大約在670800萬(wàn)hm2，經(jīng)濟(jì)損失在10億元以上。紋枯病一般可使小麥減產(chǎn)10%-30%，嚴(yán)重地塊減產(chǎn)50%以上。不僅如此，受害小麥的品質(zhì)和商品價(jià)值也有很大損失。小麥全蝕病又稱(chēng)立枯病、黑腳病，是由子囊真菌一禾頂囊殼禾谷變種Gaeumannomycesgraminisvar.graminis(Sacc.)Walker禾口禾頂囊殼小麥變禾中Gaeumannomycesgraminis(Sacc.)ArxetOlivervar.tritici(Sacc.)Walker弓丨起的典型根部病害，是小麥上的毀滅性病害，引起植株成簇或大片枯死，降低有效穗數(shù)、穗粒數(shù)及千粒重，造成嚴(yán)重的產(chǎn)量損失。該病在小麥苗期和成株期均可發(fā)生，以快成熟時(shí)病株癥狀最為明顯，表現(xiàn)點(diǎn)片麥芒和麥穗發(fā)白。該病與小麥其他根腐型病害區(qū)別在于種子根和次生根變黑腐敗，莖基部生有黑膏藥狀的菌絲體。該病原菌寄主范圍較廣，能侵染10多種栽培或野生的禾本科植物，如小麥、大麥、黑麥、燕麥、水稻等。由于小麥紋枯病和全蝕病屬于土傳病害，培育和利用抗病品種是防治小麥紋枯病和全蝕病最經(jīng)濟(jì)有效的措施之一。目前，生產(chǎn)上大面積推廣品種和育種材料對(duì)紋枯病、全蝕病的抗性普遍較差，常規(guī)抗病育種進(jìn)展緩慢，一方面是由于這些土傳病害的抗性鑒定和選擇比較困難，單株選擇很不可靠；另一方面是缺乏高抗紋枯病、全蝕病的小麥種質(zhì)資源。因此，通過(guò)常規(guī)育種手段很難有效進(jìn)行小麥紋枯病、全蝕病的抗性育種。分子生物學(xué)、植物基因工程與植物病理學(xué)的發(fā)展為解決上述問(wèn)題開(kāi)辟了一條新途徑。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供抗病轉(zhuǎn)PgPGIPl基因小麥的培育方法。本發(fā)明提供了一種培育轉(zhuǎn)基因植物的方法，是將PgPGIPl蛋白的編碼基因?qū)肽康闹参镏?，得到抗病性高于所述目的植物的轉(zhuǎn)基因植物；所述PgPGIPl蛋白是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列1的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物抗病性相關(guān)的由序列1衍生的蛋白質(zhì)。所述PgPGIPl蛋白的編碼基因可為如下1)至4)中任一所述的DNA分子1)序列表的序列2自5’末端第7至1104位核苷酸所示的DNA分子；2)序列表中序列2所示的DNA分子；3)在嚴(yán)格條件下與1)或2)限定的DNA序列雜交且編碼植物抗病性相關(guān)蛋白的DNA分子；4)與1)或2)限定的DNA序列具有90%以上同源性且編碼植物抗病性相關(guān)蛋白的DNA分子。所述編碼基因可通過(guò)含有所述PgPGIPl蛋白的編碼基因的重組表達(dá)載體導(dǎo)入所述目的植物中。所述重組表達(dá)載體可為將所述PgPGIPl蛋白的編碼基因插入單子葉植物表達(dá)載體PAHC25的多克隆位點(diǎn)得到的重組質(zhì)粒。所述重組表達(dá)載體優(yōu)選為將所述PgPGIPl蛋白的編碼基因插入單子葉植物表達(dá)載體PAHC25的SmaI和MeI酶切位點(diǎn)間得到的重組質(zhì)粒。所述目的植物可為單子葉植物或雙子葉植物。所述單子葉植物優(yōu)選為小麥(如揚(yáng)麥18)。所述抗病可為抗紋枯病和/或抗全蝕病。所述紋枯病菌的致病菌具體可為禾谷1^MM(Rhizoctoniacerealis)R0301。白勺Gaeumarmomycesgraminisvar.tritici(Ggt)。本發(fā)明還保護(hù)PgPGIPl蛋白或PgPGIPl蛋白的編碼基因在培育抗病植物中的應(yīng)用；所述PgPGIPl蛋白是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列1的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物抗病性相關(guān)的由序列1衍生的蛋白質(zhì)。所述PgPGIPl蛋白的編碼基因可為如下1)至4)中任一所述的DNA分子1)序列表的序列2自5’末端第7至1104位核苷酸所示的DNA分子；2)序列表中序列2所示的DNA分子；3)在嚴(yán)格條件下與1)或2)限定的DNA序列雜交且編碼植物抗病性相關(guān)蛋白的DNA分子；4)與1)或2)限定的DNA序列具有90%以上同源性且編碼植物抗病性相關(guān)蛋白的DNA分子。所述植物可為單子葉植物或雙子葉植物。所述單子葉植物優(yōu)選為小麥(如揚(yáng)麥18)。所述抗病可為抗紋枯病和/或抗全蝕病。所述紋枯病菌的致病菌具體可為禾谷絲核菌(Rhizoctoniacerealis)R0301。所述全燭病的致病菌具體可為Gaeumannomycesgraminisvar.tritici(Ggt)。本發(fā)明還保護(hù)一種重組表達(dá)載體，為將所述PgPGIPl蛋白的編碼基因插入單子葉植物表達(dá)載體PAHC25的多克隆位點(diǎn)得到的重組質(zhì)粒。所述重組表達(dá)載體優(yōu)選為將所述PgPGIPl蛋白的編碼基因插入單子葉植物表達(dá)載體pAHC25的SmaI和McI酶切位點(diǎn)間得到的重組質(zhì)粒。發(fā)明人人工合成了PgPGIPl基因，構(gòu)建了單子葉高效表達(dá)載體，轉(zhuǎn)入小麥，獲得了抗紋枯病、全蝕病的轉(zhuǎn)基因小麥。本發(fā)明對(duì)于抗病植物的育種均有重大價(jià)值。圖1為重組質(zhì)粒pUPgPGIPl的結(jié)構(gòu)示意圖。圖2為部分成活的再生植株的PCR鑒定電泳圖。圖3為接種禾谷絲核菌R0301后轉(zhuǎn)PgPGIPl基因植株和揚(yáng)麥18的表型。圖4為接種小麥全蝕病致病菌后轉(zhuǎn)PgPGIPl基因植株和揚(yáng)麥18的表型。具體實(shí)施例方式以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為自常規(guī)生化試劑商店購(gòu)買(mǎi)得到的。以下實(shí)施例中的定量試驗(yàn)，均設(shè)置三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平均值。小麥品種揚(yáng)麥18購(gòu)自江蘇里下河地區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所。實(shí)施例中所用的小麥紋枯病菌致病菌為禾谷絲核菌(lihizoctoniacerealis)R0301，購(gòu)自江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院。實(shí)施例中所用的小麥全t蟲(chóng)病致病菌為Gaeumannomycesgraminisvar.tritici(Ggt)，購(gòu)自西北農(nóng)林科技大學(xué)。單子葉植物表達(dá)載體pAHC25(pAHC25由pUC8改造而成，含有2個(gè)表達(dá)盒，第1個(gè)表達(dá)盒具有玉米Ubiquitin啟動(dòng)子、Exon,Intron,⑶S、Nos終止子，⑶S兩端具有SmaI和SacI酶切位點(diǎn)，第2個(gè)表達(dá)盒具有玉米W^iquitin啟動(dòng)子、Exon、htron、Bar、Nos終止子；又禾爾pAHC25質(zhì)粒)參考文獻(xiàn)ChristensenandQuail,1996；Ubiquitinpromoter-basedvectorsforhigh-levelexpressionofselectableand/orscreenablemarkergenesinmonocotyledonousplants.TransgenicResearch,5,213-218；由作者之一贈(zèng)送，公眾可以從中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所獲得。實(shí)施例1、PgPGIPl基因的獲得和重組表達(dá)載體的構(gòu)建一、PgPGIPl基因的獲得Sathiyaraj等最近從人參分離出1個(gè)多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(polygalacturcuase-inhibitingprotein,PGIP)，如序列表的序列1所示，其編碼基因的開(kāi)放閱讀框如序列表的序列2自5’末端第7至1104位核苷酸所示。合成序列表的序列2所示的雙鏈DNA，該DNA自5’末端第1至6位核苷酸為限制內(nèi)切酶SmaI的識(shí)別序列，第7至1104位核苷酸為PgPGIPl基因的開(kāi)放閱讀框(編碼序列表的序列1所示的PgPGIPl蛋白)，第1105至1107位核苷酸為終止密碼子，第1107至1112位核苷酸為限制內(nèi)切酶MeI的識(shí)別序列。二、重組表達(dá)載體的構(gòu)建1、用限制內(nèi)切酶SmaI和McI雙酶切步驟一合成的雙鏈DNA，回收約1.Ikb的DNA片段。2、用限制內(nèi)切酶SmaI和McI雙酶切單子葉植物表達(dá)載體pAHC25，回收載體骨架(約77OObp)。3、將步驟1的DNA片段與步驟2的載體骨架連接，得到重組質(zhì)粒pUPgPGIPl。根據(jù)測(cè)序結(jié)果，對(duì)重組質(zhì)粒pUPGPGIPl進(jìn)行結(jié)構(gòu)描述如下將單子葉植物表達(dá)載體PAHC25的SmaI和MeI酶切位點(diǎn)之間的小片段取代為了序列表的序列2自第7至1107位核苷酸所示的PgPGIPl基因)。重組質(zhì)粒pUPgPGIPl的結(jié)構(gòu)示意圖見(jiàn)圖1。重組質(zhì)粒pUPgPGIPl中PgPGIPl基因表達(dá)受W^i啟動(dòng)子(組成性啟動(dòng)子)控制，另外還具有1個(gè)受W^i啟動(dòng)子控制的Bar基因表達(dá)盒，可為后續(xù)選擇利用雙丙胺膦(Bialaphos)篩選轉(zhuǎn)化再生植株提供抗性。實(shí)施例2、轉(zhuǎn)PgPGIPl基因小麥植株的獲得及其抗病性分析一、轉(zhuǎn)PgPGIPl基因小麥植株的獲得1、將1200塊揚(yáng)麥18的幼胚愈傷組織作為基因槍轟擊的受體，用基因槍將重組質(zhì)粒pUPgPGIPl轟擊到愈傷組織。2、將愈傷組織在高滲透培養(yǎng)基(SD2培養(yǎng)基+0.2mol/L甘露醇+0.2mol/L山梨醇)上進(jìn)行滲透處理4-(25°C，暗培養(yǎng))將愈傷組織放置在培養(yǎng)皿中央直徑約2.5cm范圍內(nèi)，每盤(pán)培養(yǎng)皿50塊愈傷組織。3、用重組質(zhì)粒pUPgPGIPl包裹直徑110μm金粉，采用PDS-1000/He基因槍(Βο-Red公司生產(chǎn))，選擇llOOI^si的可裂膜，載樣距靶材料6cm進(jìn)行轟擊。4、轟擊后的愈傷組織繼續(xù)在原培養(yǎng)基上培養(yǎng)16-1(25°C，暗培養(yǎng))。5、將愈傷組織轉(zhuǎn)移到SD2培養(yǎng)基(MS培養(yǎng)基+lmg/LVB^lSOmg/L天冬門(mén)酰胺+2mg/L2，4-D)上，恢復(fù)培養(yǎng)2周(25°C，暗培養(yǎng))。6、將愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化篩選培養(yǎng)基(1/2MS培養(yǎng)基+lmg/La_萘乙酸+lmg/L激動(dòng)素+^ig/L雙丙胺膦)中，24-°C光照培養(yǎng)14-21d。7、將愈傷組織分化小苗后轉(zhuǎn)移到生長(zhǎng)篩選培養(yǎng)基中(1/2MS培養(yǎng)基+2mg/L雙丙胺膦)，24j6°C光照培養(yǎng)14-天，獲得了100株生根的再生植株。8、將再生植株轉(zhuǎn)移到壯苗培養(yǎng)基(1/2MS培養(yǎng)基+0.5mg/La_萘乙酸)上，2446°C光照培養(yǎng)約21天。9、將苗高7-8cm且根系發(fā)達(dá)的植株移栽到花盆，在移栽到溫室3周以后，有95株植株成活。10、分子鑒定在4葉期，每株成活的再生植株取1個(gè)葉片提取基因組DNA，將基因組DNA作為模板，利用Ubi啟動(dòng)子中的一段序列作為上游引物(UBI-F)，PgPGIPl基因的一段序列作為下游引物(PgPGIPl-TR)，進(jìn)行PCR鑒定(目標(biāo)條帶為460bp)。UBI-F:5，-GCTCTGCCTTCATACGCTA-3，；PgPGIPl-TR:5，-TCCAATCCGCCATAGTGCT-3，。PCR擴(kuò)增體系(20ul)10XBuffer2ul,dNTP(100μΜ)2ul，25mMMgCl21.5ul,UBI-F(IOyM)O.75ul,PgPGIPl-TR(IOyM)O.75ul,ddH2012.7ul,rTaq酶0.3ul。PCR擴(kuò)增程序94°C5min—[94°C40s，58°C40s，72°C45s]X5—[94°C40s,56°C40s,72°C45s]Xll—[94°C40s，54°C40s,72°C45s]X22—72°CIOmin0PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，紫外拍照。部分結(jié)果見(jiàn)圖2。圖2中，泳道1-12為PCR鑒定陽(yáng)性植株，N為揚(yáng)麥18(受體，陰性對(duì)照)，P為重組質(zhì)粒pUPgPGIPl(陽(yáng)性對(duì)照)。從95株成活的再生植株中篩選得到12株P(guān)CR鑒定陽(yáng)性的植株，即為T(mén)O代轉(zhuǎn)PgPGIPl基因植株，轉(zhuǎn)化率為1.00%。11、植株的傳代將TO代轉(zhuǎn)PGPGIP1基因植株進(jìn)行自交，獲得的種子及其長(zhǎng)成的植株為T(mén)l代植株。獲得89株Tl代植株。二、轉(zhuǎn)空載體植物的獲得用單子葉植物表達(dá)載體pAHC25代替重組質(zhì)粒pUPgPGIPl，其它同步驟一，得到轉(zhuǎn)空載體植株，作為轉(zhuǎn)PgPGIPl基因植株的對(duì)照。三、轉(zhuǎn)基因植物的紋枯病菌抗性鑒定1、在網(wǎng)室田間種植T1代轉(zhuǎn)PgPGIPl基因植株(3行，每行20株)、\代轉(zhuǎn)空載體植株(1行，20株)和揚(yáng)麥18行，每行20株)。2、8周后(拔節(jié)期)，采用蔡士賓等的牙簽培養(yǎng)法(蔡士賓，任麗娟，顏偉，吳紀(jì)中，陳懷谷，吳小有，張仙義·2006,Germplasmdevelopmentandmappingofresistancetosharpeyespot(Rhizoctoniacerealis)inwheat.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),39(5):汜8_934)接種禾谷絲核菌R0301的菌絲到小麥葉鞘部，澆水保濕5-7天，隔一周?chē)?-3次水。3、在收獲時(shí)拍照并考察葉鞘和莖稈的發(fā)病情況。病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)按照李斯深等方法進(jìn)行(李斯深，李安飛，李憲彬等.1997，小麥種質(zhì)對(duì)紋枯病抗性鑒定初報(bào).作物品種資源.⑷31-33)=IT0:無(wú)??；1級(jí)第1、2葉鞘發(fā)病，但莖稈無(wú)?。?級(jí)第1、2葉鞘發(fā)病，但病斑繞莖稈小于1/3；3級(jí)第3、4葉鞘發(fā)病，或病斑繞莖稈1/3-2/3；4級(jí)第5、6葉鞘發(fā)病，或病斑繞莖稈2/3-1周；5級(jí)出現(xiàn)枯、白穗或整株枯死。60株轉(zhuǎn)PgPGIPl基因植株的平均IT為1.1，轉(zhuǎn)空載體植株的平均IT為2.69，揚(yáng)麥18的平均IT為2.68。圖3為二株轉(zhuǎn)PgPGIPl基因植株和二株揚(yáng)麥18的照片(1、2為轉(zhuǎn)PgPGIPl基因植株，3為轉(zhuǎn)空載體植株，4為揚(yáng)麥18)。四、轉(zhuǎn)基因小麥的全蝕病抗性鑒定將T1代轉(zhuǎn)PgPGIPl基因植株種子09粒)、T1代轉(zhuǎn)空載體植株種子(10粒)和揚(yáng)麥18種子(10粒)消毒、催芽后，移至已放入小麥全蝕病致病菌菌餅的花盆中(每粒種子一個(gè)花盆)，人工氣候箱培養(yǎng)3個(gè)星期后拍照并對(duì)如下指標(biāo)進(jìn)行鑒定黑莖比(BS%)、黑根比(B1R%)、黃葉比(YLR%)。根據(jù)以上數(shù)據(jù)，將植株的整體抗病性劃分為高抗(1級(jí))、中感0級(jí))、高感(3級(jí))三個(gè)等級(jí)。結(jié)果見(jiàn)表1。表1各個(gè)指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果(平均值)轉(zhuǎn)PgPGIPl基因植株轉(zhuǎn)空載體植株揚(yáng)麥18黑莖比0.051.821.85黑根比1.07%36.8%37%黃葉比7.0%24.5%25%病級(jí)12.92.9轉(zhuǎn)PgPGIPl基因植株的黑莖比、黑根比和黃葉比均顯著低于轉(zhuǎn)空載體植株，顯著低于揚(yáng)麥18。轉(zhuǎn)PgPGIPl基因植株的平均IT為1(表現(xiàn)高抗全蝕病)，而轉(zhuǎn)空載體植株表現(xiàn)感到高感(平均IT為2.9)，揚(yáng)麥18表現(xiàn)感到高感(平均IT為2.9)。圖4為一株轉(zhuǎn)PgPGIPl基因植株、一株轉(zhuǎn)空載體植株和一株揚(yáng)麥18的照片(1為轉(zhuǎn)PgPGIPl基因植株，2為轉(zhuǎn)空載體植株，3為揚(yáng)麥18)。因?yàn)槭荏w揚(yáng)麥18抗白粉病，所述轉(zhuǎn)基因植株還可以抗白粉病。因此獲得了抗紋枯病、全蝕病、白粉病等病害的轉(zhuǎn)PgPGIPl基因小麥揚(yáng)麥18。權(quán)利要求1.一種培育轉(zhuǎn)基因植物的方法，是將PgPGIPl蛋白的編碼基因?qū)肽康闹参镏校玫娇共⌒愿哂谒瞿康闹参锏霓D(zhuǎn)基因植物；所述PgPGIPl蛋白是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列1的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物抗病性相關(guān)的由序列1衍生的蛋白質(zhì)。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述PgPGIPl蛋白的編碼基因是如下1)至4)中任一所述的DNA分子1)序列表的序列2自5’末端第7至1104位核苷酸所示的DNA分子；2)序列表中序列2所示的DNA分子；3)在嚴(yán)格條件下與1)或幻限定的DNA序列雜交且編碼植物抗病性相關(guān)蛋白的DNA分子；4)與1)或2)限定的DNA序列具有90%以上同源性且編碼植物抗病性相關(guān)蛋白的DNA分子。3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述編碼基因通過(guò)含有所述編碼基因的重組表達(dá)載體導(dǎo)入所述目的植物中。4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述重組表達(dá)載體為將所述PgPGIPl蛋白的編碼基因插入單子葉植物表達(dá)載體PAHC25的多克隆位點(diǎn)得到的重組質(zhì)粒；所述重組表達(dá)載體優(yōu)選為將所述PgPGIPl蛋白的編碼基因插入單子葉植物表達(dá)載體PAHC25的SmaI和McI酶切位點(diǎn)間得到的重組質(zhì)粒。5.如權(quán)利要求1至4中任一所述的方法，其特征在于所述目的植物為單子葉植物或雙子葉植物，所述單子葉植物優(yōu)選為小麥。6.如權(quán)利要求1至5中任一所述的方法，其特征在于所述抗病為抗紋枯病和/或抗全蝕病。7.PgPGIPl蛋白或PgPGIPl蛋白的編碼基因在培育抗病植物中的應(yīng)用；所述PgPGIPl蛋白是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列1的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物抗病性相關(guān)的由序列1衍生的蛋白質(zhì)。8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于所述PgPGIPl蛋白的編碼基因是如下1)至4)中任一所述的DNA分子1)序列表的序列2自5’末端第7至1104位核苷酸所示的DNA分子；2)序列表中序列2所示的DNA分子；3)在嚴(yán)格條件下與1)或幻限定的DNA序列雜交且編碼植物抗病性相關(guān)蛋白的DNA分子；4)與1)或2)限定的DNA序列具有90%以上同源性且編碼植物抗病性相關(guān)蛋白的DNA分子。9.如權(quán)利要求7或8所述的應(yīng)用，其特征在于所述目的植物為單子葉植物或雙子葉植物，所述單子葉植物優(yōu)選為小麥；所述抗病為抗紋枯病和/或抗全蝕病。10.一種重組表達(dá)載體，為將PgPGIPl蛋白的編碼基因插入單子葉植物表達(dá)載體PAHC25的多克隆位點(diǎn)得到的重組質(zhì)粒；所述PgPGIPl蛋白是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列1的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物抗病性相關(guān)的由序列1衍生的蛋白質(zhì)。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了抗病轉(zhuǎn)PgPGIP1基因小麥的培育方法。本發(fā)明提供的方法，是將PgPGIP1蛋白的編碼基因?qū)肽康闹参镏校玫娇共⌒愿哂谒瞿康闹参锏霓D(zhuǎn)基因植物；所述PgPGIP1蛋白是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列1的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物抗病性相關(guān)的由序列1衍生的蛋白質(zhì)。發(fā)明人人工合成了PgPGIP1基因，構(gòu)建了單子葉高效表達(dá)載體，轉(zhuǎn)入小麥，獲得了抗紋枯病、全蝕病的轉(zhuǎn)基因小麥。本發(fā)明對(duì)于抗病植物的育種均有重大價(jià)值。文檔編號(hào)A01H5/00GK102367452SQ20111031855公開(kāi)日2012年3月7日申請(qǐng)日期2011年10月19日優(yōu)先權(quán)日2011年10月19日發(fā)明者張?jiān)銎G,徐慧君,李釗,杜麗璞,楊麗華,王金鳳,王鵬申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所