專利名稱：冠菌素作為新型棉花脫葉劑的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及脫葉劑領(lǐng)域，特別是涉及新型物質(zhì)冠菌素作為一種脫葉劑在棉花作物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
冠菌素(Coronatine，簡(jiǎn)稱C0R)作為茉莉酸甲酯(MeJA)的環(huán)戊烷結(jié)構(gòu)類似物， 是由植物病原菌丁香假單胞菌的幾個(gè)致病變種產(chǎn)生的一種非寄主?；远舅?Benderet al.，1999 ；Palmer et al.，1993)。目前，關(guān)于COR的生理作用研究已經(jīng)取得了一定的研究進(jìn)展，研究表明，COR具有多種生理功能，它的活性是JA類物質(zhì)的100-10000倍左右，在抗脅迫方面尤其顯著，可作為一種新型的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑(Uppalapati etal. ,2005 ；Block et al. ,2005 ；Brooks et al.，2005)。除此之外，COR作為一種新型環(huán)境友好型物質(zhì)，其潛在的其他生理作用有待于進(jìn)一步研究。隨著棉花采收機(jī)械化的發(fā)展，機(jī)械采收前棉花脫葉劑的使用較為廣泛，目前，國(guó)內(nèi)外使用的棉花脫葉劑種類較多，效果各不相同，但仍舊需要不斷研究和發(fā)現(xiàn)新的效果好、成本低、毒性小、殘留少的環(huán)境友好型脫葉劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供冠菌素的新用途。本發(fā)明所提供的一個(gè)新用途是冠菌素在制備植物脫葉劑中的應(yīng)用。所述植物脫葉劑具體可為棉花脫葉劑。本發(fā)明所提供的另一個(gè)新用途是冠菌素在制備增強(qiáng)棉花脫葉和吐絮的產(chǎn)品中的應(yīng)用。所述冠菌素可通過(guò)發(fā)酵冠菌素產(chǎn)生菌獲得。上述棉花脫葉劑可按照包括如下步驟的方法制備在液體培養(yǎng)基中發(fā)酵冠菌素產(chǎn)生菌，收集發(fā)酵液，從得到的發(fā)酵液中提取冠菌素，得到的冠菌素即為棉花脫葉劑。所述冠菌素產(chǎn)生菌可包括以下幾種丁香假單胞菌絳紅致病變種(P. s. PV. atropurpruea)、丁香假單胞菌大豆致病變種(P. s. pv. glycinea)、丁香假單胞菌番茄致病變種(P. s. pv. tomato)、丁香假單胞菌李死致病變種(P. s. pv. morsprunorum)、丁香假單胞菌斑生致病變種(P. s.pv.maculicola)、丁香假單胞菌獼猴桃致病變種(P. s. pv. actinidiae)、野油菜黃單胞菌棲新西蘭麻致病變種(X. c. pv. Phormiicola) (Palmer D A, Bender C L.Effects of environmental andnutritional factors on production of the polyketide phytotoxin coronatine byPseudomonas syringae pv. glycinea. App1. Environ. Microbiol. 1993，59，1619—1626.)。其中的丁香假單胞菌大豆致病變種(P. s. pv. glycinea)具體可為保藏號(hào)為 CGMCC1412的丁香假單胞菌大豆致病變種，或?yàn)楸２靥?hào)為CGMCC1276的丁香假單胞菌大豆致病變種，或?yàn)楸２鼐幪?hào)為CGMCC No. 2533的丁香假單胞菌大豆致病變種(I^eudomonassyringae pv.glycinea)MW1230可用現(xiàn)有的培養(yǎng)丁香假單胞菌的液體培養(yǎng)基培養(yǎng)上述冠菌素產(chǎn)生菌，如由A、B液分開(kāi)進(jìn)行滅菌后，混合得到的培養(yǎng)基。其中，A液可為氯化銨l.Og，KH2PO4 4. lg, K2HPO4 3. 6g, MgSO4 · 7H20 0. 2g, KNO3 0. 3g,2mM FeCl3 10ml，水 890ml, pH 6. 8 ；B 液可為葡萄糖 20g，水 IOOmlo所述發(fā)酵中采用的溫度為適宜丁香假單胞菌生長(zhǎng)的溫度，如18°C 14°C。冠菌素可按照I^lmer D A工藝制備，其主要方法如下發(fā)酵液經(jīng)離心后棄去沉淀， 用有機(jī)溶劑提取上清液，提取液減壓濃縮得冠菌素粗品，該粗品含有大量脂溶性物質(zhì)，需要精制，進(jìn)一步精制一般將粗品溶解于溶劑中，然后用硫酸銨溶液反萃，再用溶劑提取，然后減壓濃縮直接干燥得至Ij產(chǎn)品(Palmer D A and C L Bender. Effects ofenvironmental and nutritional factors on production of the polyketidephytotoxin coronatine by Pseudomonas syringae pv. glycinea. App1. Environ. Microbiol. 1993,59,1619-1626.)。冠菌素還可按照專利號(hào)為ZL200710099033. 6中的方法得到純度為95%以上的純
P
ΡΠ O本發(fā)明所提供的另一個(gè)用途是利用冠菌素進(jìn)行棉花脫葉的一種方法。本發(fā)明所提供的棉花脫葉的方法，包括如下步驟向吐絮率達(dá)到35%-75% (具體可為40% -50% )的棉花植株的莖葉噴施冠菌素水溶液或上述方法制備的棉花脫葉劑水溶液，所噴施的冠菌素水溶液的濃度為10-1000mg/L (如100-300mg/L)，所噴施的棉花脫葉劑水溶液的濃度以冠菌素計(jì)為10-1000mg/L (如100-300mg/L)。本發(fā)明所提供的再一個(gè)用途是利用冠菌素提高棉花脫葉率和吐絮率的一種方法。本發(fā)明所提供的提高棉花脫葉率和吐絮率的方法，包括如下步驟向吐絮率達(dá)到 35% -75% (具體可為40% -50% )的棉花植株的莖葉噴施冠菌素水溶液或上述方法制備的棉花脫葉劑水溶液，所噴施的冠菌素水溶液的濃度為10-1000mg/L (如100-300mg/L)，所噴施的棉花脫葉劑水溶液的濃度以冠菌素計(jì)為10-1000mg/L (如100-300mg/L)。本發(fā)明利用冠菌素進(jìn)行脫葉，具有用量少、效果好、環(huán)境污染小的特性。本發(fā)明的冠菌素來(lái)自于微生物發(fā)酵液，當(dāng)其噴到棉株14天后脫葉率達(dá)到80%以上，棉鈴?fù)滦趼士蛇_(dá) 78%左右。通過(guò)試驗(yàn)比較，處理后7天，100mg/L的COR與300mg/L的目前廣泛使用的脫葉劑噻苯隆(TDZ)處理效果等同，200-300mg/L的COR脫葉效果優(yōu)于300mg/L的TDZ處理。處理后14天，100mg/L的COR處理脫葉率可達(dá)80 %，較清水對(duì)照高41.9%，效果與300mg/L的 TDZ相近。同時(shí)，處理后7天，COR處理的吐絮率顯著增加，TDZ處理與清水對(duì)照無(wú)顯著差異。 處理后14天，COR處理的吐絮率可達(dá)72. 7-77. 5%，較對(duì)照高6. 8-13. 8%。
具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。下述實(shí)施例中冠菌素的純度均用高效液相色譜法檢測(cè)。高效液相色譜檢測(cè)中用到的流動(dòng)相由0.05%的三氟乙酸(pH2. 9)和乙腈按1 9的體積比混合而成。檢測(cè)波長(zhǎng)為 208nm、流速2mL/min、進(jìn)樣量20yL、樣品保留lOmin。用冠菌素標(biāo)準(zhǔn)品(廣州偉伯化工有限公司)進(jìn)行定量。
實(shí)施例1、利用COR進(jìn)行棉花脫葉一、制備 COR1、發(fā)酵挑取冷凍保存的丁香假單胞菌大豆致病變種MW123 CGMCC 2533(記載在中國(guó)專利 200810119153. 2中)于斜面培養(yǎng)基(溶質(zhì)為甘露醇1%,L~谷氨酸鈉0.2%，KH2PO4 0. 05%, NaCl 0.02%, MgSO4 · 7H20 0. 02 %，1. 3 %的瓊脂粉，溶劑為水；該培養(yǎng)基的pH 7.0)上，
培養(yǎng)48-60h使其活化，然后挑取一環(huán)活化好的菌體，接入含有l(wèi)Oug/ml的卡那霉素和 30ug/ml的鏈霉素的液體培養(yǎng)基(含有甘露醇1%，L-谷氨酸鈉0. 2%,KH2PO4 0. 05%,NaCl 0. 02%,MgSO4 ·7Η20 0. 02%,ρΗ 7· O ;121°C滅菌 30min)中，28°C培養(yǎng) 36_48h，到對(duì)數(shù)期時(shí)， 取培養(yǎng)菌液按2% (體積比)接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基(該發(fā)酵培養(yǎng)基由A液和B液混合而成。A 液氯化銨 1. Og, KH2PO4 4. lg, K2HPO4 3. 6g, MgSO4 · 7H20 0. 2g, KNO3 0. 3g, 2mM FeCl3 10ml，蒸餾水890ml，pH 6. 8 ；B液葡萄糖20g，蒸餾水100ml。A、B液分開(kāi)進(jìn)行115°C滅菌 20min，接種前混合)中，在溫度為18°C _M°C、轉(zhuǎn)速為^Orpm/min的條件下發(fā)酵7天，即得到成熟發(fā)酵液，經(jīng)高效液相色譜法檢測(cè)冠菌素產(chǎn)量達(dá)到100mg/L。2、純化取5000ml上述發(fā)酵液離心棄菌體沉淀，得到發(fā)酵液上清液。將25克HPD300大孔吸附樹(shù)脂用乙醇充分浸泡溶脹后，用蒸餾水洗滌至無(wú)乙醇，裝入吸附柱中，用水平衡；用鹽酸將上述收集得到的發(fā)酵液上清液的PH值調(diào)節(jié)至pH2. 5，加入到上述裝有大孔吸附樹(shù)脂的吸附柱中，以5. 5升/小時(shí)的吸附速率過(guò)柱；吸附完畢后，用蒸餾水沖洗吸附柱至流出液無(wú)色后，再用丙酮洗脫，洗脫速率為7. 5升/小時(shí)；將丙酮洗脫液在溫度為45°C，0. 06-0. 09Mpa Mpa的條件下減壓濃縮得到浸膏，干燥后得到冠菌素產(chǎn)品。用高效液相色譜法方法檢測(cè)該冠菌素產(chǎn)品的純度，結(jié)果表明該冠菌素產(chǎn)品中冠菌素的質(zhì)量百分含量為96%。二、植物實(shí)驗(yàn) 供試棉花品種國(guó)欣棉3號(hào)。實(shí)驗(yàn)處理將步驟一得到的COR配成COR的濃度分別為50mg/L、100mg/L、200mg/ L、300mg/L、400mg/L的水溶液，分別作為5個(gè)處理，另外設(shè)清水對(duì)照(CK)和300mg/L的噻苯隆(TDQ水溶液對(duì)照。共7個(gè)處理。試驗(yàn)于2010年9月在河北省河間市國(guó)欣農(nóng)研會(huì)試驗(yàn)田進(jìn)行。采用隨機(jī)區(qū)組實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，小區(qū)實(shí)驗(yàn)隨機(jī)排列，7個(gè)處理，重復(fù)3次，每小區(qū)面積為6mX4m = 24m2。施藥當(dāng)天晴， 試驗(yàn)期間無(wú)大風(fēng)。采用微型噴霧器對(duì)吐絮率達(dá)45%的棉株進(jìn)行莖葉噴施處理，每小區(qū)噴藥液量為0. 8L。7天后和14天后統(tǒng)計(jì)脫葉率和吐絮率。每小區(qū)選取6株掛牌，在施藥前調(diào)查各小區(qū)葉片數(shù)、總鈴數(shù)和吐絮數(shù)，在施藥后7 天和施藥后14天分別調(diào)查各小區(qū)葉片數(shù)和吐絮數(shù)，以計(jì)算各處理葉片脫落率和棉鈴?fù)滦趼省Ｆ渲?，脫葉率(％)=(施藥前葉片數(shù)-施藥后7天或14天的葉片數(shù))/施藥前葉片數(shù) X 100%施藥前吐絮率(％ )=施藥前吐絮數(shù)/總鈴數(shù)X 100%施藥后吐絮率(％ )=施藥后7天或14天吐絮數(shù)/總鈴數(shù)X 100%7天后統(tǒng)計(jì)脫葉率和吐絮率，結(jié)果顯示，清水對(duì)照的脫葉率為28. 6士2. 3%,50mg/ LCOR水溶液的脫葉率為36.4 士 4. 1 %,100mg/L COR水溶液的脫葉率為47.2 士 4.5%，4/8 200mg/L COR水溶液的脫葉率為51. 3 士 3. 9 %，300mg/L COR水溶液的脫葉率為
52.4士3. 2%,400mg/L COR水溶液的脫葉率為50. 9士2. 8%,300mg/L的噻苯隆(TDZ)水溶液的脫葉率為48. 6士2.4%。噴施7天后，清水對(duì)照的吐絮率為50.8士4.1%，501^/1 COR 水溶液的吐絮率為47. 8 士 2. 3 %，100mg/L COR水溶液的吐絮率為53. 9 士 3. 2 %，200mg/ LCOR水溶液的吐絮率為63. 8 士 3. 3%，300mg/L COR水溶液的吐絮率為66.0 士 3.5%， 400mg/L COR水溶液的吐絮率為66. 8士4. l%,300mg/L的噻苯隆(TDZ)水溶液的吐絮率為
53.5 士 3. 1%。噴施14天后，清水對(duì)照的脫葉率為55. 3士4. 8%，50mg/L COR水溶液的脫葉率為 68. 4士2. 7%,100mg/L COR水溶液的脫葉率為79. 8士3. 6%,200mg/L COR水溶液的脫葉率為83. 3士4. 2%,300mg/L COR水溶液的脫葉率為84. 8士3. 2%,400mg/L COR水溶液的脫葉率為83. 6士5. l%，300mg/L的噻苯隆(TDZ)水溶液的脫葉率為80. 4士3. 9%。噴施14天后， 清水對(duì)照的吐絮率為66. 1 士3. 3%,50mg/L COR水溶液的吐絮率為67. 6士2. 5%,100mg/L COR水溶液的吐絮率為73. 8士4. 2%,200mg/L COR水溶液的吐絮率為75. 8士2. 6%,300mg/ L COR水溶液的吐絮率為77. 3士3. 8%，400mg/L COR水溶液的吐絮率為77. 8士4. 7 %， 300mg/L的噻苯隆(TDZ)水溶液的吐絮率為71. 3士3. 5%。結(jié)果表明，處理7天后，100mg/L COR與300mg/L的TDZ脫葉效果等同，200mg/LC0R 脫葉效果優(yōu)于300mg/L的TDZ處理，較清水對(duì)照高79. 4% ；處理14天后，100mg/LC0R處理脫葉率可達(dá)79. 8%，較CK高44. 3%，效果與300mg/L的TDZ相近。同時(shí)，處理后14天，IOOmg/ L以上濃度COR處理的吐絮率可達(dá)75%左右，較清水對(duì)照高11.6-17.7%。實(shí)施例2、利用COR進(jìn)行棉花脫葉一、制備 COR1、發(fā)酵除菌種為丁香假單胞菌大豆致病變種CGMCC1276(記載在中國(guó)專利 ZL200510011466. 2中)，其它方法均與實(shí)施例1的步驟一相同。2、純化取5000ml上述發(fā)酵液離心棄菌體沉淀，得到發(fā)酵液上清液。將25克HPD300大孔吸附樹(shù)脂用乙醇充分浸泡溶脹后，用蒸餾水洗滌至無(wú)乙醇，裝入吸附柱中，用水平衡；用鹽酸將上述收集得到的發(fā)酵液上清液的PH值調(diào)節(jié)至pH2. 5，加入到上述裝有大孔吸附樹(shù)脂的吸附柱中，以5. 5升/小時(shí)的吸附速率過(guò)柱；吸附完畢后，用蒸餾水沖洗吸附柱至流出液無(wú)色后，再用丙酮洗脫，洗脫速率為7. 5升/小時(shí)；將丙酮洗脫液在溫度為45°C，0. 06-0. 09Mpa Mpa的條件下減壓濃縮得到浸膏，干燥后得到冠菌素產(chǎn)品。用高效液相色譜法方法檢測(cè)該冠菌素產(chǎn)品的純度，結(jié)果表明該冠菌素產(chǎn)品中冠菌素的質(zhì)量百分含量為96%。二、植物實(shí)驗(yàn)供試棉花品種國(guó)欣棉8號(hào)。實(shí)驗(yàn)處理將步驟一得到的冠菌素產(chǎn)品配成COR的濃度分別為50mg/L、100mg/L、 200mg/L、300mg/L、400mg/L的水溶液，分別作為5個(gè)處理，另外設(shè)清水對(duì)照(CK)和300mg/L 的噻苯隆(TDZ)水溶液對(duì)照。共7個(gè)處理。試驗(yàn)于2010年9月在河北省河間市國(guó)欣農(nóng)研會(huì)試驗(yàn)田進(jìn)行。采用隨機(jī)區(qū)組實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，小區(qū)實(shí)驗(yàn)隨機(jī)排列，7個(gè)處理，重復(fù)3次，每小區(qū)面積為6mX^i= 24m2。施藥當(dāng)天晴，試驗(yàn)期間無(wú)大風(fēng)。采用微型噴霧器對(duì)吐絮率達(dá)40%的棉株進(jìn)行莖葉噴施處理，每小區(qū)噴藥液量為0. 8L。7天后和14天后統(tǒng)計(jì)脫葉率和吐絮率。每小區(qū)選取6株掛牌，在施藥前調(diào)查各小區(qū)葉片數(shù)、總鈴數(shù)和吐絮數(shù)，在施藥后7 天和施藥后14天分別調(diào)查各小區(qū)葉片數(shù)和吐絮數(shù)，以計(jì)算各處理葉片脫落率和棉鈴?fù)滦趼?。其中，脫葉率(％)=(施藥前葉片數(shù)-施藥后7天或14天的葉片數(shù))/施藥前葉片數(shù) X 100%施藥前吐絮率(％ )=施藥前吐絮數(shù)/總鈴數(shù)X 100%施藥后吐絮率(％ )=施藥后7天或14天吐絮數(shù)/總鈴數(shù)X 100%7天后統(tǒng)計(jì)脫葉率和吐絮率，結(jié)果顯示，清水對(duì)照的脫葉率為30. 9士 1. 2%,50mg/ LCOR水溶液的脫葉率為39.4 士 2. 1 %,100mg/L COR水溶液的脫葉率為47.8 士 2.8%， 200mg/L COR水溶液的脫葉率為52. 4 士 3. 2 %，300mg/L COR水溶液的脫葉率為 52. 8士2. 3%,400mg/L COR水溶液的脫葉率為53. 6士2. 6%,300mg/L的噻苯隆(TDZ)水溶液的脫葉率為48. 1 士2.6%。噴施7天后，清水對(duì)照的吐絮率為48. 7士3. l%，50mg/L COR 水溶液的吐絮率為49. 1 士2. l%,100mg/L COR水溶液的吐絮率為50. 8士 1. 8 %，200mg/ LCOR水溶液的吐絮率為56. 7 士 2. 4 %，300mg/L COR水溶液的吐絮率為62. 3 士 3. 1 %， 400mg/L COR水溶液的吐絮率為63. 6士5. 4%，300mg/L的噻苯隆(TDZ)水溶液的吐絮率為 49. 9士2. 4%。噴施14天后，清水對(duì)照的脫葉率為55. 6士2. 8%,50mg/L COR水溶液的脫葉率為 72. 2士6. l%,100mg/L COR水溶液的脫葉率為78. 5士4. 2%,200mg/L COR水溶液的脫葉率為83. 6士5. 3%,300mg/L COR水溶液的脫葉率為83. 9士3. 7%,400mg/L COR水溶液的脫葉率為84. 2士4. 7%，300mg/L的噻苯隆(TDZ)水溶液的脫葉率為79. 1 士4. 9%。噴施14天后， 清水對(duì)照的吐絮率為61. 4士3. 2%,50mg/L COR水溶液的吐絮率為64. 5士3. 8%，100mg/L COR水溶液的吐絮率為72. 7士4. 5%,200mg/L COR水溶液的吐絮率為75. 3士3. 3%,300mg/ L COR水溶液的吐絮率為75. 7士5. l%，400mg/L COR水溶液的吐絮率為74. 8士4. 3 %， 300mg/L的噻苯隆(TDZ)水溶液的吐絮率為70. 4士3. 6%。結(jié)果表明，處理7天后，100mg/L COR與300mg/L的TDZ脫葉效果幾乎等同，200mg/ LCOR脫葉效果優(yōu)于300mg/L的TDZ處理，較清水對(duì)照高69. 5 %，處理14天后，100mg/LC0R 處理脫葉率可達(dá)78. 5%，較CK高41. 2%，效果與300mg/L的TDZ相近。同時(shí)，處理后14天， 100mg/L以上濃度COR處理的吐絮率可達(dá)72. 7-75. 7%，較清水對(duì)照高18. 4-23. 3%。實(shí)施例3、利用COR進(jìn)行棉花脫葉一、制備 COR1、發(fā)酵除菌種為丁香假單胞菌大豆致病變種(Pseudomonas syringae pv. glycinea) 麗123夕卜，其它方法均與實(shí)施例1的步驟一相同。其中的麗123菌株，已于2008年5月 30日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC，地址北京市朝陽(yáng)區(qū)大屯路，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編100101)，保藏編號(hào)為CGMCC No. 2533。丁香假單胞菌大豆致病變種(Pseudomonas syringae pv. glycinea)MW123已在中國(guó)專利ZL 200810119153. 2 得到授權(quán)。2、純化
取5000ml上述發(fā)酵液離心棄菌體沉淀，得到發(fā)酵液上清液。將25克HPD300大孔吸附樹(shù)脂用乙醇充分浸泡溶脹后，用蒸餾水洗滌至無(wú)乙醇，裝入吸附柱中，用水平衡；用鹽酸將上述收集得到的發(fā)酵液上清液的PH值調(diào)節(jié)至pH2. 5，加入到上述裝有大孔吸附樹(shù)脂的吸附柱中，以5. 5升/小時(shí)的吸附速率過(guò)柱；吸附完畢后，用蒸餾水沖洗吸附柱至流出液無(wú)色后，再用丙酮洗脫，洗脫速率為7. 5升/小時(shí)；將丙酮洗脫液在溫度為45°C，0. 06-0. 09Mpa Mpa的條件下減壓濃縮得到浸膏，干燥后得到冠菌素產(chǎn)品。用高效液相色譜法方法檢測(cè)該冠菌素產(chǎn)品的純度，結(jié)果表明該冠菌素產(chǎn)品中冠菌素的質(zhì)量百分含量為96%。二、植物實(shí)驗(yàn)供試棉花品種魯棉研28號(hào)。實(shí)驗(yàn)處理將步驟一得到的冠菌素產(chǎn)品配成COR的濃度分別為50mg/L、100mg/L、 200mg/L、300mg/L、400mg/L的水溶液，分別作為5個(gè)處理，另外設(shè)清水對(duì)照(CK)和300mg/L 的噻苯隆(TDZ)水溶液對(duì)照。共7個(gè)處理。試驗(yàn)于2010年10月在北京市中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)上莊實(shí)驗(yàn)站進(jìn)行。采用隨機(jī)區(qū)組實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，小區(qū)實(shí)驗(yàn)隨機(jī)排列，7個(gè)處理，重復(fù)3次，每小區(qū)面積為6mX^i= 24m2。施藥當(dāng)天晴， 試驗(yàn)期間無(wú)大風(fēng)。采用微型噴霧器對(duì)吐絮率達(dá)45%的棉株進(jìn)行莖葉噴施處理，每小區(qū)噴藥液量為0. 8L。7天后和14天后統(tǒng)計(jì)脫葉率和吐絮率。每小區(qū)選取8株掛牌，在施藥前調(diào)查各小區(qū)葉片數(shù)、總鈴數(shù)和吐絮數(shù)，在施藥后7 天和施藥后14天分別調(diào)查各小區(qū)葉片數(shù)和吐絮數(shù)，以計(jì)算各處理葉片脫落率和棉鈴?fù)滦趼?。其中，脫葉率(％)=(施藥前葉片數(shù)-施藥后7天或14天的葉片數(shù))/施藥前葉片數(shù) X 100%施藥前吐絮率(％ )=施藥前吐絮數(shù)/總鈴數(shù)X 100%施藥后吐絮率(％ )=施藥后7天或14天吐絮數(shù)/總鈴數(shù)X 100%7天后統(tǒng)計(jì)脫葉率和吐絮率，結(jié)果顯示，清水對(duì)照的脫葉率為27. 9士 1. 4%,50mg/ LCOR水溶液的脫葉率為48. 6 士 2. 7%，100mg/L COR水溶液的脫葉率為50.2 士 2.6%， 200mg/L COR水溶液的脫葉率為52. 9 士 3. 8 %，300mg/L COR水溶液的脫葉率為 54. 5士4. 2%,400mg/L COR水溶液的脫葉率為55. 1 士2. 4%,300mg/L的噻苯隆(TDZ)水溶液的脫葉率為50. 4士3.2%。噴施7天后，清水對(duì)照的吐絮率為52.9士3.1%，501^/1 COR 水溶液的吐絮率為52. 7士2. 6%，100mg/L COR水溶液的吐絮率為61. 3士5. 4 %，200mg/ LCOR水溶液的吐絮率為63. 4 士 5. l%，300mg/L COR水溶液的吐絮率為65.2 士 4.3%， 400mg/L COR水溶液的吐絮率為64. 9士3. 5%，300mg/L的噻苯隆(TDZ)水溶液的吐絮率為 56. 7士4. 2%。噴施14天后，清水對(duì)照的脫葉率為59. 8士5. 6%,50mg/L COR水溶液的脫葉率為 69. 2士5. 4%，100mg/L COR水溶液的脫葉率為81. 4士6. 1 %, 200mg/L COR水溶液的脫葉率為83. 1 士3. 7%，300mg/L COR水溶液的脫葉率為84. 6士4. 2%，400mg/L COR水溶液的脫葉率為84. 7士4. 7%，300mg/L的噻苯隆(TDZ)水溶液的脫葉率為81. 6士6. 4%。噴施14天后， 對(duì)照的吐絮率為68. 4士3. 2%,50mg/L COR水溶液的吐絮率為70. 8士3. 5%,100mg/L COR 水溶液的吐絮率為73. 8士4. 2%，200mg/L COR水溶液的吐絮率為75. 2士3. 1 %, 300mg/L COR水溶液的吐絮率為77. 5士4. 4%,400mg/L COR水溶液的吐絮率為76. 6士3. 9%,300mg/ L的噻苯隆(TDZ)水溶液的吐絮率為72. 3士2. 8%。
結(jié)果表明，處理7天后，100mg/L COR與300mg/L的TDZ脫葉效果等同，200mg/LC0R 比300mg/L的TDZ處理效果要好，脫葉率較清水對(duì)照高89. 5% ；處理14天后，100mg/LC0R 處理脫葉率可達(dá)81.4%，較CK高36. 1%，效果與300mg/L的TDZ相近。同時(shí)，處理后14天， 100mg/L以上濃度COR處理的吐絮率可達(dá)73. 8-77. 5%，較清水對(duì)照高7. 9-13. 3%。實(shí)施例4、利用COR進(jìn)行棉花脫葉一、制備 COR1、發(fā)酵同實(shí)施例3的步驟1。2、純化取5000ml上述發(fā)酵液離心棄菌體沉淀，得到發(fā)酵液上清液。將25克HPD300大孔吸附樹(shù)脂用乙醇充分浸泡溶脹后，用蒸餾水洗滌至無(wú)乙醇，裝入吸附柱中，用水平衡；用鹽酸將上述收集得到的發(fā)酵液上清液的PH值調(diào)節(jié)至pH2. 5，加入到上述裝有大孔吸附樹(shù)脂的吸附柱中，以5. 5升/小時(shí)的吸附速率過(guò)柱；吸附完畢后，用蒸餾水沖洗吸附柱至流出液無(wú)色后，再用丙酮洗脫，洗脫速率為7. 5升/小時(shí)；將丙酮洗脫液在溫度為45°C，0. 06-0. 09Mpa Mpa的條件下減壓濃縮得到浸膏，干燥后得到500. 6mg冠菌素產(chǎn)品，收率為63. 5% ；用高效液相色譜法方法檢測(cè)該冠菌素產(chǎn)品的純度，結(jié)果表明該冠菌素產(chǎn)品中冠菌素的質(zhì)量百分含量為97%。二、植物實(shí)驗(yàn)供試棉花品種魯棉研28號(hào)。實(shí)驗(yàn)處理將步驟一得到的純度為97%的冠菌素產(chǎn)品配成COR的濃度分別為 50mg/L、100mg/L、200mg/L、300mg/L、400mg/L的水溶液，分別作為5個(gè)處理，另外設(shè)清水對(duì)照(CK)和300mg/L的噻苯隆(TDZ)水溶液對(duì)照。共7個(gè)處理。試驗(yàn)于2010年10月在北京市中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)上莊實(shí)驗(yàn)站進(jìn)行。采用隨機(jī)區(qū)組實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，小區(qū)實(shí)驗(yàn)隨機(jī)排列，7個(gè)處理，重復(fù)3次，每小區(qū)面積為6mX^i= 24m2。施藥當(dāng)天晴， 試驗(yàn)期間無(wú)大風(fēng)。采用微型噴霧器對(duì)吐絮率達(dá)50%的棉株進(jìn)行莖葉噴施處理，每小區(qū)噴藥液量為0. 8L。7天后和14天后統(tǒng)計(jì)脫葉率和吐絮率。每小區(qū)選取8株掛牌，在施藥前調(diào)查各小區(qū)葉片數(shù)、總鈴數(shù)和吐絮數(shù)，在施藥后7 天和施藥后14天分別調(diào)查各小區(qū)葉片數(shù)和吐絮數(shù)，以計(jì)算各處理葉片脫落率和棉鈴?fù)滦趼?。其中，脫葉率(％)=(施藥前葉片數(shù)-施藥后7天或14天的葉片數(shù))/施藥前葉片數(shù) X 100%施藥前吐絮率(％ )=施藥前吐絮數(shù)/總鈴數(shù)X 100%施藥后吐絮率(％ )=施藥后7天或14天吐絮數(shù)/總鈴數(shù)X 100%7天后統(tǒng)計(jì)脫葉率和吐絮率，結(jié)果顯示，清水對(duì)照的脫葉率為33. 8士 1. 3%,50mg/ LCOR水溶液的脫葉率為49. 2 士 2. 6%，100mg/L COR水溶液的脫葉率為52.2 士 3. 1%， 200mg/L COR水溶液的脫葉率為55. 9 士 3. 6 %，300mg/L COR水溶液的脫葉率為 56. 8士2. 4%,400mg/L COR水溶液的脫葉率為58. 7士3. 8%,300mg/L的噻苯隆(TDZ)水溶液的脫葉率為52. 5士2.7%。噴施7天后，清水對(duì)照的吐絮率為56. 9士2.4%，50mg/L COR 水溶液的吐絮率為57. 4士3. 2%，100mg/L COR水溶液的吐絮率為59. 9士3. 5 %，200mg/ LCOR水溶液的吐絮率為65. 3 士 3. 1 %，300mg/L COR水溶液的吐絮率為67.4 士 2.3%，400mg/L COR水溶液的吐絮率為67. 9士4. l%,300mg/L的噻苯隆(TDZ)水溶液的吐絮率為 60. 5士3. 7%。噴施14天后，清水對(duì)照的脫葉率為60. 5士3. 3%,50mg/L COR水溶液的脫葉率為 71. 2士3. 5%,100mg/L COR水溶液的脫葉率為80. 6士3. 2%,200mg/L COR水溶液的脫葉率為82. 7士4. 1 %, 300mg/L COR水溶液的脫葉率為85. 3士3. 8%，400mg/L COR水溶液的脫葉率為84. 9士4. 6%，300mg/L的噻苯隆(TDZ)水溶液的脫葉率為80. 4士3. 8%。噴施14天后， 清水對(duì)照的吐絮率為69. 5士2. 9%，50mg/L COR水溶液的吐絮率為71. 8士4. 5%,100mg/L COR水溶液的吐絮率為76. 8士3. 9%,200mg/L COR水溶液的吐絮率為77. 2士3. 6%,300mg/ L COR水溶液的吐絮率為78. 9士5. 2%，400mg/L COR水溶液的吐絮率為78. 4士4. 3 %， 300mg/L的噻苯隆(TDZ)水溶液的吐絮率為69. 7士3. 4%。結(jié)果表明，處理7天后，100mg/L COR與300mg/L的TDZ脫葉效果等同，200mg/LC0R 比300mg/L的TDZ處理效果要好，脫葉率較清水對(duì)照高65. 4% ；處理14天后，100mg/LC0R 處理脫葉率可達(dá)80. 6%，較CK高33. 2%，效果與300mg/L的TDZ相近。同時(shí)，處理后14天， 100mg/L以上濃度COR處理的吐絮率可達(dá)76. 8-78. 9%，較清水對(duì)照高10. 5-13. 5%。
權(quán)利要求
1.冠菌素在制備植物脫葉劑中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述植物脫葉劑為棉花脫葉劑。
3.冠菌素在制備增強(qiáng)棉花脫葉和吐絮的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的應(yīng)用，其特征在于所述冠菌素通過(guò)發(fā)酵冠菌素產(chǎn)生菌獲得。
5.制備棉花脫葉劑的方法，包括如下步驟在液體培養(yǎng)基中發(fā)酵冠菌素產(chǎn)生菌，收集發(fā)酵液，從得到的發(fā)酵液中提取冠菌素，得到的冠菌素即為棉花脫葉劑。
6.棉花脫葉的一種方法，包括如下步驟向吐絮率達(dá)到35%-75%的棉花植株的莖葉噴施冠菌素水溶液或權(quán)利要求5所述方法制備的棉花脫葉劑水溶液，所噴施的冠菌素水溶液的濃度為10-1000mg/L ；所噴施的棉花脫葉劑水溶液的濃度以冠菌素計(jì)為10-1000mg/L。
7.提高棉花脫葉率和吐絮率的一種方法，包括如下步驟向吐絮率達(dá)到35%-75%的棉花植株的莖葉噴施冠菌素水溶液或權(quán)利要求5所述方法制備的棉花脫葉劑水溶液，所噴施的冠菌素水溶液的濃度為10-1000mg/L ；所噴施的棉花脫葉劑水溶液的濃度以冠菌素計(jì)為 10-1000mg/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法，其特征在于權(quán)利要求6和權(quán)利要求7所述的所噴施的冠菌素水溶液的濃度均為100-300mg/L，權(quán)利要求6和權(quán)利要求7所述的所噴施的棉花脫葉劑水溶液的濃度以冠菌素計(jì)均為100-300mg/L。
9.根據(jù)權(quán)利要求6或7或8所述的方法，其特征在于權(quán)利要求6-8中所述吐絮率均為 40% -50%。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了冠菌素的新用途。該新用途是冠菌素在制備植物脫葉劑中的應(yīng)用，特別是在制備棉花脫葉劑中的應(yīng)用。本發(fā)明利用冠菌素進(jìn)行脫葉，具有用量少、效果好、環(huán)境污染小的特性。本發(fā)明的冠菌素來(lái)自于微生物發(fā)酵液，當(dāng)100mg/L冠菌素噴到棉株14天后脫葉率達(dá)到80％以上，與300mg/L噻苯隆處理效果等同，但冠菌素處理的吐絮率可達(dá)72.7-76.8％，明顯優(yōu)于噻苯隆處理。
文檔編號(hào)A01P21/00GK102239876SQ20111012839
公開(kāi)日2011年11月16日 申請(qǐng)日期2011年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月18日
發(fā)明者任曉明, 吳慧玲, 岳躍森, 張明才, 李召虎, 李藝, 杜明偉, 段留生, 田曉莉, 譚偉明 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)