專利名稱：日本冬蟲夏草的人工栽培技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
生物技術(shù)
背景技術(shù)：
蟲草屬Cordyceps (Fr. ) Link.是ー種營腐寄生菌。冬蟲夏草寄生于蝙蝠蛾幼蟲，這種蟲被感染此菌后，就會(huì)得病死亡，到一定的時(shí)侯從蟲體頭上長出子座(即蟲草)。蟲草的人工培養(yǎng)包括液體發(fā)酵和固體栽培兩種。液體發(fā)酵技術(shù)簡単，成本低，可在短時(shí)間內(nèi)富集發(fā)酵液和菌絲體，并提取其中的活性產(chǎn)物，目前應(yīng)用較廣泛。然而從我國傳統(tǒng)中藥學(xué)角度來看，野生蟲草的藥學(xué)性質(zhì)表現(xiàn)為草性寒，蟲性熱，一寒ー熱，分用各有利弊，合用則可調(diào)和陰陽，因此藥性溫和，一年四季均可食用，老、少、病、弱、虛者皆宜。由此可見，蟲草最重要的醫(yī)學(xué)價(jià)值在于蟲草復(fù)合體的聯(lián)用，而人工栽培的實(shí)現(xiàn)和栽培技術(shù)的推廣使用便是蟲草資源深度開發(fā)利用的必然途徑。蟲草屬真菌的人工栽培是指使用無性型菌絲體人工感染寄生昆蟲 (或培養(yǎng)基)，在特定的培養(yǎng)條件下誘發(fā)形成具有成熟子囊殼的子實(shí)體。近年來，眾多研究表明，人工栽培的蟲草在化學(xué)成分和藥理活性方面與野生蟲草相似，但價(jià)格卻遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于野生蟲草。因此，蟲草屬真菌子實(shí)體誘發(fā)及生長條件成為國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。自19世紀(jì)60年代起，國內(nèi)外就開始了對蟲草子實(shí)體人工培養(yǎng)的研究，但由于蟲草屬真菌種類繁多，不同種的蟲草生長條件不盡相同，而每種蟲草的子實(shí)體形成和生長所需的條件往往都很苛刻，各種條件難于同時(shí)滿足，導(dǎo)致許多蟲草無法進(jìn)行人工栽培，已有的蟲草人工栽培技術(shù)也難以大范圍推廣應(yīng)用。這成為蟲草資源開發(fā)利用的瓶頸，亟待解決。至今為止正式報(bào)道栽培成功的蟲草僅有布氏蟲草、挪威蟲草、蛹蟲草、高雄山蟲草、粉被蟲草、蟬花、球孢蟲草等少數(shù)幾種，且多數(shù)處于實(shí)驗(yàn)階段，尚不能進(jìn)行批量生產(chǎn)。目前，僅有蛹蟲草實(shí)現(xiàn)了規(guī)?；a(chǎn)。日本冬蟲夏草具有廣泛的生理活性和藥效成分，人工栽培可以獲得大量的蟲草資源，應(yīng)用于醫(yī)藥保健行業(yè)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供日本冬蟲夏草(Cordyceps japonica)進(jìn)行人工栽培的方法，本發(fā)明是將源于青島崎山風(fēng)景區(qū)采集的日本冬蟲夏草(Cordyceps japonica),寄主為鱗翅目大蠶蛾科的昨蠶蛹(Antherea pernyi Guerin-MeneviIIe)蟲草,將其進(jìn)行表面消毒以無菌操作的方法在PDA培養(yǎng)基上進(jìn)行組織分離，獲得日本冬蟲夏草(Cordyc印sjaponica)的菌種，將該菌種接種在人工配置的培養(yǎng)基上或寄主昆蟲體內(nèi)，經(jīng)過培養(yǎng)，獲得日本蟲草。栽培方法簡單，栽培條件易與控制，可進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化栽培，提供了人工培養(yǎng)日本蟲草的技木。


圖I :人工培養(yǎng)子實(shí)體圖片。圖2 :柞蠶蛹為寄主培養(yǎng)全草圖片。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例II.日本蟲草菌株的分離純化采集青島崎山風(fēng)景區(qū)的日本蟲草(Cordyceps japonica),用升萊進(jìn)行表面消毒，從蟲草體表無菌切子座成米粒大小塊，取無菌部位組織塊壓入培養(yǎng)基(土豆200g，蔗糖20g，蛋白胨lg，配置1000ml)中；將其培養(yǎng)在26°C，培養(yǎng)時(shí)間為7天。在培養(yǎng)基表面出現(xiàn)蟲草菌落時(shí)，挑取單個(gè)菌落置試管斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)。該菌株在培養(yǎng)基(土豆200g，蔗糖20g，酵母膏3g，K2HPO4L 5g，MgSO4O. 5g，VB1適量)上26°C避光培養(yǎng)7天后，菌落直徑25_30mm，平展，由致密的菌絲體組成。培養(yǎng)初期菌落表面呈白色，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，表面變?yōu)樵咨q毛狀，布滿孢子，菌落背面淡棕色，呈放射狀。菌落與培養(yǎng)基結(jié)合緊密。2.制備菌種將液體培養(yǎng)基(土豆200g，蔗糖 20g，酵母膏 3g，K2HPO4 I. 5g，MgSO4 0. 5g，VB1 適量，配制1000ml)分裝于500ml三角瓶中，每瓶加培養(yǎng)液200ml，滅菌后接種，24°C搖瓶培養(yǎng)10天，獲得栽培用菌種。3.蟲草子實(shí)體人工培養(yǎng)小麥(小麥可以由大米、玉米、大麥代替)合成培養(yǎng)基配方培養(yǎng)液(蔗糖1%,K2HPO4O. 15%, MgSO4O. 05%，蛋白胨0. 3% 1000ml)，優(yōu)質(zhì)麥粒。配置時(shí)，用500ml罐頭瓶裝30g麥粒，加入45mL培養(yǎng)液。滅菌后至室溫，按無菌操作規(guī)程接種，置培養(yǎng)室24°C培養(yǎng)。避光培養(yǎng)12天。待菌絲布滿米飯培養(yǎng)基表面時(shí)，采用22-26°C光照培養(yǎng)，繼續(xù)培養(yǎng)30-35天。
4.采收子實(shí)體生長至5-7厘米，輕輕完整采收，采收后即避光風(fēng)干或低溫烘干，獲得日本蟲草人工培養(yǎng)基的子實(shí)體(圖I)。實(shí)施例2I 制備菌種將分離菌株在PDA培養(yǎng)基上活化后,接種于無菌培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基(土豆200g，蔗糖20g, K2HPO4 I. 5g，MgSO4 0. 5g，配制1000ml，分裝于500ml三角瓶中，每瓶加培養(yǎng)液200ml，封ロ滅菌)，24°C搖瓶培養(yǎng)3天，菌絲長成粘稠糊狀，無污染，既得栽培用菌種。2 接種和培養(yǎng)將栽培用菌種按無菌操作注射于新鮮柞蠶蛹體內(nèi)，每只柞蠶蛹接種約0. 1ml，接種后將蛹體放入500ml玻璃廣ロ瓶中，每瓶8只蛹體，聚丙烯薄膜封ロ。至于22-24°C避光10天，蛹體僵化后移入培養(yǎng)室，然后至于22°C光照培養(yǎng)。IOOOLux每天光照10小時(shí)?？諝庀鄬穸?5% 90%。誘導(dǎo)子實(shí)體原基產(chǎn)生，培養(yǎng)30-40天。3.采收子實(shí)體生產(chǎn)至6-8厘米，采收后即風(fēng)干或低溫烘干，獲得日本蟲草的蟲草復(fù)合體(圖2)。
權(quán)利要求
1.日本冬蟲夏草(Cordycepsjaponica)子實(shí)體栽培技術(shù),其特征是采集天然日本冬蟲夏草通過無菌操作進(jìn)行組織分離獲得菌種，用分離得到的菌種進(jìn)行人工栽培，在合成培養(yǎng)上生產(chǎn)日本冬蟲夏草子實(shí)體。
2.日本冬蟲夏草(Cordycepsjaponica)寄主栽培技術(shù),其特征是采集天然日本冬蟲夏草通過無菌操作進(jìn)行組織分離獲得菌種，用分離得到的菌種，通過注射接種在柞蠶蛹體內(nèi)，培養(yǎng)日本冬蟲夏草。
全文摘要
本發(fā)明的目的是提供日本冬蟲夏草(Cordyceps iaponica)進(jìn)行人工栽培的方法，本發(fā)明是將源于青島嶗山風(fēng)景區(qū)采集的日本冬蟲夏草(Cordyceps iaponica)，寄主為鱗翅目大蠶蛾科的柞蠶蛹(Antherea pernyi Guerin-Meneville)蟲草樣品，將其進(jìn)行表面消毒以無菌操作的方法在PDA培養(yǎng)基上進(jìn)行組織分離，獲得日本冬蟲夏草(Cordyceps japonica)的菌種，將該菌種接種在人工配置的培養(yǎng)基上或寄主昆蟲體內(nèi)，經(jīng)過培養(yǎng)，獲得日本蟲草。栽培方法簡單，栽培條件易與控制，可進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化栽培，提供了人工培養(yǎng)日本蟲草的技術(shù)。
文檔編號A01G1/04GK102754562SQ20111011340
公開日2012年10月31日 申請日期2011年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月24日
發(fā)明者陳大宮 申請人:陳大宮