專(zhuān)利名稱(chēng)：興仁金線蓮試管苗的培育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物組織培育技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及興仁金線蓮試管苗的培育方法。
背景技術(shù)：
興仁金線蓮(A幻‘/？從徹徹幻、Z. H. Tsi et X. H. Jin)是蘭科(Orchidaceae)、開(kāi)唇 蘭屬(Amwctochilus)多年生草本植物，同花葉開(kāi)唇蘭、臺(tái)灣金線蓮、高雄金線蓮等統(tǒng)稱(chēng)金 線蓮，在民間作藥用，可消炎、解毒、止血降壓、強(qiáng)心利尿，對(duì)急性肝炎、慢性肝炎、急慢性腎 炎、腎衰竭、高血壓、糖尿病、婦科疾病、癌癥等有非常明顯的療效，因此在民間有“藥王、神 藥、金草”之稱(chēng)。據(jù)報(bào)導(dǎo)，金線蓮中氨基酸組成、成分、含量及抗衰老活性微量元素的含量均 高于西洋參和野山參。金線蓮作為一種珍貴藥物，價(jià)格一直很高，2010年在國(guó)內(nèi)鮮草收購(gòu)價(jià) 達(dá)400-600元/ kg，干草價(jià)格更高達(dá)1500-2000元/ kg。另外興仁金線蓮株型小巧，葉型 美觀，具有極高的觀賞價(jià)值。興仁金線蓮種子只有在真菌共生的情況下才能萌發(fā)，萌發(fā)率低。在自然界，金線蓮 是許多蟲(chóng)、鳥(niǎo)、鼠、蛇等喜食的植物。由于人類(lèi)活動(dòng)，生態(tài)環(huán)境受到破壞，在利益驅(qū)使下，又遭 受毀滅性的采集，現(xiàn)已處于極度瀕危狀態(tài)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有野生興仁金線蓮種子萌發(fā)率低而瀕臨滅 絕的缺陷，提供一種興仁金線蓮試管苗的種培育方法，該方法經(jīng)過(guò)對(duì)培養(yǎng)基的篩選，優(yōu)選出 適合興仁金線蓮試管苗培育的培養(yǎng)基，繁殖系數(shù)達(dá)10倍以上，苗粗壯，移栽成活率在95%以 上。為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案
本發(fā)明興仁金線蓮試管苗的培育方法選擇帶腋芽的莖段作外植體，進(jìn)行從生芽 誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)，然后將從生芽轉(zhuǎn)接到壯苗生根培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗生根培養(yǎng)，即得試管苗， 其中
從生芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基為 MS + (2 5)mg/l 6-BA + (0. 2 0. 5)mg/l NAA + 8g/l 瓊月旨 + 30g/l 糖 ρΗ:5·7
6. 0 ；
壯苗生根培養(yǎng)基為
(1/2MS MS)+(0. 01 0. 05)mg/l 6-BA + (0· 05 0. 10)mg/l NAA + 8g/l 瓊月旨 + (15 25) g/1 糖 ρΗ :5· 7 6. 0。上述興仁金線蓮試管苗的培育方法中，在進(jìn)行壯苗生根培養(yǎng)時(shí)，其培養(yǎng)條件為光 照16h/d、光照強(qiáng)度500 12001UX，溫度23 27°C，每2個(gè)月對(duì)培養(yǎng)室進(jìn)行1次消毒。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過(guò)對(duì)試管苗培育時(shí)所采用的培養(yǎng)基的篩選，優(yōu)選出了 適合興仁金線蓮試管苗培育的培養(yǎng)基，使繁殖系數(shù)達(dá)10倍以上，所得試管苗粗壯，試管苗 的移栽成活率可達(dá)95%以上，另外，本發(fā)明采用的是常規(guī)的試管苗培育方法，該方法簡(jiǎn)單、成熟，非常適合推廣應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式
詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，興仁金線蓮試管苗的培育方 法
(1)外植體選擇與無(wú)菌體系的建立選擇生長(zhǎng)健壯的植株，取Icrn長(zhǎng)的帶腋芽的莖段作 外植體，將莖段清理干凈，先放入洗衣粉水中漂洗3 5分鐘，然后用流水沖洗30分鐘，在 超凈工作臺(tái)中，用75%酒精濕潤(rùn)5 8秒，放入0. 1 %的HgCl溶液中滅菌9 13分鐘后取 出，用無(wú)菌水沖洗5 6次；
(2)從生芽誘導(dǎo)及增殖培養(yǎng)將無(wú)菌處理后的外植體接種于從生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，進(jìn)行 從生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，一般接種7 10天開(kāi)始萌發(fā)，當(dāng)從生芽萌發(fā)到0. 5cm長(zhǎng)時(shí)，將其剖開(kāi)，轉(zhuǎn) 接至增殖培養(yǎng)基上作進(jìn)一步的增殖培養(yǎng)，轉(zhuǎn)接時(shí)清除增殖培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)的白化苗；
從生芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)培養(yǎng)基的篩選
試驗(yàn)通過(guò)用MS、1/2MS、MS的改良培養(yǎng)基(大量元素減半、微量元素加倍)，6-BA的用量 從1 6mg/L，NAA的用量從0. 1 1. 5mg/L，經(jīng)過(guò)正交試驗(yàn)等大量的篩選試驗(yàn)。得出如下 較理想的培養(yǎng)基組合
MS + (2 5)mg/l 6-BA + (0. 2 0. 5)mg/l NAA + 8g/l 瓊脂 + 30g/l 糖 ρΗ:5·7
6. 0 ；
(3)壯苗生根培養(yǎng)在從生芽生長(zhǎng)過(guò)程中，同時(shí)也會(huì)長(zhǎng)不定根，當(dāng)從生芽長(zhǎng)成l-2cm高 的小苗時(shí)，轉(zhuǎn)接至生根壯苗培養(yǎng)基中進(jìn)行生根壯苗培養(yǎng)，每2個(gè)月對(duì)培養(yǎng)室進(jìn)行1次消毒， 如果光照過(guò)強(qiáng)，試管苗的白化現(xiàn)象嚴(yán)重，并且興仁金線蓮容易被污染，故每2個(gè)月對(duì)培養(yǎng)室 進(jìn)行消毒，可采用甲醛熏蒸，培養(yǎng)室也可采用臭氧殺菌機(jī)進(jìn)行殺菌；
生根壯苗培養(yǎng)基的篩選
生根壯苗培養(yǎng)基是從MSUAMSU/4MS，糖的用量從15 30g，6_BA的用量從0. 01 0. 1，NAA用量從0. 01 0. 5mg/L，通過(guò)正交試驗(yàn)等多次試驗(yàn)篩選出如下較理想的培養(yǎng)基組 合
(1/2MS MS)+(0. 01 0. 05)mg/l 6-BA + (0· 05 0. 10)mg/l NAA + 8g/l 瓊月旨 + (15 25) g/1 糖 ρΗ :5· 7 6. 0。(4)繼代培養(yǎng)壯苗生根后及時(shí)進(jìn)行繼代培養(yǎng)，保證培養(yǎng)基的養(yǎng)分供給，若培養(yǎng)基 出現(xiàn)污染，及時(shí)更換。(5)煉苗移栽將培養(yǎng)瓶置于常溫下煉苗1周后，取出小苗，洗凈培養(yǎng)基，用草炭、 珍珠巖、木屑、樹(shù)葉等種植對(duì)比試驗(yàn)，其中草炭種植金線蓮，存活率最高，可達(dá)95%以上。上述培養(yǎng)方法中的培養(yǎng)條件為光照16h/d、光照強(qiáng)度500 12001UX，溫度23 27 V。
權(quán)利要求
1.一種興仁金線蓮試管苗的培育方法，其特征在于選擇帶腋芽的莖段作外植體，進(jìn) 行從生芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)，然后將從生芽轉(zhuǎn)接到壯苗生根培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗生根培養(yǎng)，即 得試管苗，其中從生芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基為 MS + (2 5)mg/l 6-BA + (0. 2 0. 5)mg/l NAA + 8g/l 瓊月旨 + 30g/l 糖 ρΗ:5·7 6. 0 ；壯苗生根培養(yǎng)基為(1/2MS MS)+(0. 01 0. 05)mg/l 6-BA + (0· 05 0. 10)mg/l NAA + 8g/l 瓊月旨 + (15 25) g/1 糖 ρΗ :5· 7 6. 0。
2.按照權(quán)利要求1所述興仁金線蓮試管苗的培育方法，其特征在于壯苗生根培養(yǎng)的 培養(yǎng)條件為光照16h/d、光照強(qiáng)度500 12001uX，溫度23 27°C，每2個(gè)月對(duì)培養(yǎng)室進(jìn)行 1次消毒。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種興仁金線蓮試管苗的培育方法，選擇帶腋芽的莖段作外植體，進(jìn)行從生芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)，然后將從生芽轉(zhuǎn)接到壯苗生根培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗生根培養(yǎng)，即得試管苗，從生芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基為MS+(2～5)mg/l6-BA+(0.2～0.5)mg/lNAA+8g/l瓊脂+30g/l糖pH5.7～6.0；壯苗生根培養(yǎng)基為(1/2MS～MS)+(0.01～0.05)mg/l6-BA+(0.05～0.10)mg/lNAA+8g/l瓊脂+(15～25)g/l糖pH5.7～6.0，本發(fā)明使興仁金線蓮的繁殖系數(shù)達(dá)10倍以上，所得試管苗粗壯，試管苗的移栽成活率可達(dá)95%以上。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102144566SQ20111007838
公開(kāi)日2011年8月10日 申請(qǐng)日期2011年3月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月30日
發(fā)明者盧加舉, 張顯波, 查蘭松, 羅曉青, 蒙秋伊 申請(qǐng)人:貴州省亞熱帶作物研究所