專(zhuān)利名稱(chēng)：一種櫻桃蘿卜種質(zhì)抗黑腐病的快速鑒定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明為園藝作物抗病育種領(lǐng)域，具體涉及一種櫻桃蘿卜中質(zhì)抗黑腐病的快速鑒定方法。
背景技術(shù)：
發(fā)展特菜生產(chǎn)是有效促進(jìn)都市經(jīng)濟(jì)和農(nóng)業(yè)增收的重要途徑。蘿卜是人們倍受喜歡的一種根類(lèi)蔬菜之一，其肥壯的肉質(zhì)根長(zhǎng)圓錐形，富含糖類(lèi)、蛋白質(zhì)和多種維生素，其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值極高，故又有“小人參”之稱(chēng)。櫻桃蘿卜學(xué)名Raphanus sativus L. var. radculus pers， 十字花科蘿卜屬，一二年生草本。櫻桃蘿卜具有品質(zhì)細(xì)嫩，生長(zhǎng)迅速，外形、色澤美觀等特點(diǎn)，適于生吃。蘿卜起源于歐洲、亞洲溫暖海岸，是世界上古老的栽培作物之一；以其外觀小巧玲瓏、口感甜脆、貨架期長(zhǎng)的袖珍櫻桃蘿卜非常受消費(fèi)者的歡迎。黑腐病是櫻桃蘿卜的容易發(fā)生的一種主要病害，也是多種十字花科蔬菜的常見(jiàn)病害，分布廣泛，發(fā)生普遍，以露地種植發(fā)病嚴(yán)重。病情嚴(yán)重時(shí)對(duì)袖珍櫻桃蘿卜生產(chǎn)影響較大。 黑腐病主要發(fā)生在葉片、葉柄及莖上。葉片受害，多形成暗褐色不規(guī)則形壞死斑，相互連接成壞死大斑，最后造成葉片枯死。葉柄和莖上病斑為梭形至長(zhǎng)條形，邊緣初期不明顯，后期呈暗褐色，空氣潮濕病斑表面產(chǎn)生黑色霉層，既病菌的分生孢子梗和分生孢子。貯藏期往往引起塊根黑褐色腐爛。病斑初期為近圓形凹陷斑，后期變成不規(guī)則形壞死大斑并深入內(nèi)部使塊根變黑腐爛，潮濕時(shí)病斑表面易產(chǎn)生黑霉。從抗病育種工作的角度出發(fā)，如果能夠從櫻桃蘿卜主產(chǎn)區(qū)分離出病原菌，建立鑒別寄主并鑒別優(yōu)勢(shì)生理小種，篩選抗病品種是有效而又迫切的防控蔬菜病害的主要方法之一，將大大提高我國(guó)櫻桃蘿卜產(chǎn)區(qū)種植的經(jīng)濟(jì)效益。在抗病育種過(guò)程中，苗期在室內(nèi)進(jìn)行則環(huán)境條件較易控制，鑒定周期短、速度快，建立櫻桃蘿卜苗期室內(nèi)抗黑腐病抗病性鑒定方法有利于抗病育種工作的開(kāi)展，填補(bǔ)國(guó)內(nèi)櫻桃蘿卜黑腐病抗病育種研究空白。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種櫻桃蘿卜種質(zhì)抗黑腐病的快速鑒定方法，與大田成株期接種相比，避免了氣候條件不適宜、環(huán)境中病蟲(chóng)害等因素的影響，苗期在室內(nèi)進(jìn)行抗病性篩選則條件較易控制，鑒定周期短、速度快，能節(jié)省大量人力物力；確定了適宜的黑腐病懸浮液濃度、 櫻桃蘿卜抗病性篩選苗齡。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是—種櫻桃蘿卜種質(zhì)抗黑腐病的快速鑒定方法，其特征在于按以下步驟依次組成(1)供試材料準(zhǔn)備供試的黑腐病菌種為根生鏈格孢(Alternaria radicina)，活體接種；供試的櫻桃蘿卜(為市售產(chǎn)品，購(gòu)買(mǎi)于湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院)，染色體數(shù)2n = h = 18 ；將供試的種子播種在裝有滅菌基質(zhì)的花盆(8cm*8cm)內(nèi)，出苗后每盆留1_3株。(2)接種
直接采用孢子懸浮液噴霧接種，接種后將供試植株放入塑料盒內(nèi)，用保鮮膜保濕 48h。每供試材料設(shè)置3次重復(fù)，每次重復(fù)30株苗，以清水為對(duì)照，設(shè)置液孢子濃度5. 0 X IO4 個(gè)/mL、5. OX IO5個(gè)/mL、5. OX IO6個(gè)/mL、5. OX IO7個(gè)/mL四種接種濃度的孢子懸浮液和 2-4、5-7、8-9葉期三種苗齡，在20-25°C、相對(duì)濕度(RH) 95%以上誘導(dǎo)發(fā)病，置于光照培養(yǎng)室中，接種后第7d、第14d與第20d調(diào)查病情指數(shù)；(3)病情指數(shù)分級(jí)病情指數(shù)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)以葉片為單位，按0-4級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行發(fā)病程度調(diào)查。a.剪葉法分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)0級(jí)無(wú)癥；0. 1級(jí)病斑從接種傷口處向內(nèi)擴(kuò)展深度小于Imm ；0. 5級(jí)2-5mm以下； 1級(jí)5-10mm以下；2級(jí)10-15_以下；3級(jí)15-20_以下；4級(jí)20_以上。b.噴霧法分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)0級(jí)無(wú)?。?. 1級(jí)葉上有一個(gè)小斑；0. 5級(jí)葉上有幾個(gè)病斑，或一個(gè)較大的病斑； 1級(jí)葉上發(fā)病區(qū)占葉面積的1/4 ；2級(jí)葉上發(fā)病區(qū)占葉面積的1/2 ；3級(jí)葉上發(fā)病區(qū)占葉面積的3/4 ；4級(jí)病區(qū)占葉面積3/4以上至全葉。所述的光照培養(yǎng)室內(nèi)溫度優(yōu)化為15-20°C ；所述的黑腐病孢子懸浮液濃度優(yōu)選為 5. 0 X IO6個(gè)/mL ；所述的黑腐病孢子懸浮液噴霧接種植株為2 4葉期幼苗，保濕Mh，14天
后調(diào)查病情。本發(fā)明取得的有益效果1、按步驟進(jìn)行鑒定的方法與大田成株期接種相比，避免了氣候條件不適宜、環(huán)境中病蟲(chóng)害等因素的影響，苗期在室內(nèi)進(jìn)行抗病性篩選則條件較易控制，鑒定周期短、速度快，能節(jié)省大量人力物力。2、確定了適宜的黑腐病懸浮液濃度，該方法確定5. OX 106個(gè)/mL的黑腐病孢子懸浮液最為適宜。3、確定了適宜的櫻桃蘿卜抗病性篩選苗齡，該方法確定2 4葉期進(jìn)行抗病性篩選最為適宜。4、櫻桃蘿卜抗黑腐病室內(nèi)抗病性鑒定方法病級(jí)劃分沒(méi)有可以參考的標(biāo)準(zhǔn)，首次制定了櫻桃蘿卜抗黑腐爛病苗期室內(nèi)噴霧法接種病情指數(shù)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。
具體實(shí)施例方式下面對(duì)本發(fā)明作一詳細(xì)說(shuō)明實(shí)施例(1)供試材料準(zhǔn)備供試的黑腐病菌種為根生鏈格孢(Alternaria radicina)，為活體接種；供試的蘿卜品種為櫻桃蘿卜(為市售產(chǎn)品，購(gòu)買(mǎi)于湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院)，染色體數(shù)2n = 2x = 18 ；將
供試的種子播種在裝有滅菌基質(zhì)的花盆(8cm*8cm)內(nèi)，出苗后每盆留1_3株。(2)接種直接采用孢子懸浮液噴霧接種，接種后將供試植株放入塑料盒內(nèi)，用保鮮膜保濕 48h。每供試材料設(shè)置3次重復(fù)，每次重復(fù)30株苗，以清水為對(duì)照，設(shè)置液孢子濃度5. 0 X IO4 個(gè)/mL、5. OX IO5個(gè)/mL、5. OX IO6個(gè)/mL、5. OX IO7個(gè)/mL四種接種濃度的孢子懸浮液和 2-4、5-7、8-9葉期三種苗齡，在20-25°C、相對(duì)濕度(RH) 95%以上誘導(dǎo)發(fā)病，置于光照培養(yǎng)室中，接種后第7d、第14d與第20d調(diào)查病情指數(shù)；
(3)病情指數(shù)分級(jí)病情指數(shù)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)以葉片為單位，按0-4級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行發(fā)病程度調(diào)查。a.剪葉法分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)0級(jí)無(wú)癥；0. 1級(jí)病斑從接種傷口處向內(nèi)擴(kuò)展深度小于Imm ；0. 5級(jí)2-5mm以下； 1級(jí)5-10mm以下；2級(jí)10-15_以下；3級(jí)15-20_以下；4級(jí)20_以上。b.噴霧法分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)0級(jí)無(wú)?。?. 1級(jí)葉上有一個(gè)小斑；0. 5級(jí)葉上有幾個(gè)病斑，或一個(gè)較大的病斑； 1級(jí)葉上發(fā)病區(qū)占葉面積的1/4 ；2級(jí)葉上發(fā)病區(qū)占葉面積的1/2 ；3級(jí)葉上發(fā)病區(qū)占葉面積的3/4 ；4級(jí)病區(qū)占葉面積3/4以上至全葉。1. 4數(shù)據(jù)處理所有數(shù)據(jù)均采用SPSSl 1. 5 (LSD，ρ < 0. 05)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析處理，采用Microsoft Office Excel 2003 進(jìn)行制圖。2結(jié)果與分析2. 1不同接種濃度對(duì)抗病性的影響黑腐病的發(fā)病程度與接種物濃度呈正相關(guān)。從第10天表現(xiàn)典型癥狀的病情指數(shù)調(diào)查結(jié)果來(lái)看，以5. OX IO4個(gè)/mL、5. OX IO5個(gè)/mL接種發(fā)病慢，發(fā)病程度也較低，四種材料間發(fā)病差異不顯著；以、5. 0 X IO6個(gè)/mL、5. 0 X IO7個(gè)/mL兩個(gè)濃度接種時(shí)，四種材料間發(fā)病差異一致，濃度大、發(fā)病快。2. 2不同接種苗齡對(duì)抗病性的影響2 4葉期苗齡時(shí)，四種材料發(fā)病程度都比較重，病情指數(shù)值高，隨著苗齡的增加， 發(fā)病程度呈現(xiàn)減輕趨勢(shì)，說(shuō)明隨著苗齡的增加其抗病力也增強(qiáng)。5 6葉期、7 8葉期苗齡四種材料間發(fā)病差異一致，但從發(fā)病情況來(lái)看，苗齡大接種后發(fā)病較慢。3、結(jié)論研究結(jié)果表明，所述的光照培養(yǎng)室內(nèi)溫度優(yōu)化為15-20°C ；所述的黑腐病孢子懸浮液濃度優(yōu)選為5. 0 X IO6個(gè)/mL ；所述的黑腐病孢子懸浮液噴霧接種植株為2 4葉期幼苗， 14天后調(diào)查病情，該結(jié)論為櫻桃蘿卜抗黑腐病抗病育種工作打下了基礎(chǔ)。
權(quán)利要求
1.一種櫻桃蘿卜種質(zhì)抗黑腐病的快速鑒定方法，其特征在于按以下步驟依次組成(1)供試材料準(zhǔn)備供試的黑腐病菌種為根生鏈格孢(Alternaria radicina)，菌種接種采用活體接種方法；供試的蘿卜品種為櫻桃蘿卜；將供試的種子播種在裝有滅菌基質(zhì)的花盆(8cm*8cm)內(nèi)， 出苗后每盆留1-3株。(2)接種直接采用孢子懸浮液噴霧接種，接種后將供試植株放入塑料盒內(nèi)，用保鮮膜保濕48h。 每供試材料設(shè)置3次重復(fù)，每次重復(fù)30株苗，以清水為對(duì)照，設(shè)置液孢子濃度5. 0 X IO4個(gè)/ mL、5. OX IO5個(gè)/mL、5. OX IO6個(gè)/mL、5. OX IO7個(gè)/mL四種接種濃度的孢子懸浮液和2-4、 5-7,8-9葉期三種苗齡，在20-25°C、相對(duì)濕度(RH) 95%以上誘導(dǎo)發(fā)病，置于光照培養(yǎng)室中， 接種后第7d、第14d與第20d調(diào)查病情指數(shù)；(3)病情指數(shù)分級(jí)病情指數(shù)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)以葉片為單位，按0-4級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行發(fā)病程度調(diào)查。a.剪葉法分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)0級(jí)無(wú)癥；0. 1級(jí)病斑從接種傷口處向內(nèi)擴(kuò)展深度小于Imm ;0. 5級(jí)2-5mm以下；1級(jí) 5-10_以下；2級(jí)10_15_以下；3級(jí)15-20mm以下；4級(jí)20mm以上。b.噴霧法分級(jí)標(biāo)準(zhǔn) 0級(jí)無(wú)??；0. 1級(jí)葉上有一個(gè)小斑；0. 5級(jí)葉上有幾個(gè)病斑，或一個(gè)較大的病斑；1級(jí)葉上發(fā)病區(qū)占葉面積的1/4 ；2級(jí)葉上發(fā)病區(qū)占葉面積的1/2 ；3級(jí)葉上發(fā)病區(qū)占葉面積的 3/4 ；4級(jí)病區(qū)占葉面積3/4以上至全葉。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的光照培養(yǎng)室內(nèi)溫度優(yōu)化為15-20°C； 所述的黑腐病孢子懸浮液濃度優(yōu)選為5. OX IO6個(gè)/mL ；
3.如權(quán)利要求1或2的方法，所述的黑腐病孢子懸浮液噴霧接種植株為2 4葉期幼苗，保濕Mh，14天后調(diào)查病情。
全文摘要
本發(fā)明提供一種櫻桃蘿卜種質(zhì)抗黑腐病的快速鑒定方法，其特征在于按以下步驟依次組成(1)供試材料準(zhǔn)備、(2)接種和(3)病情指數(shù)分級(jí)，確定了適宜的黑腐病懸浮液濃度、櫻桃蘿卜抗病性篩選苗齡，與大田成株期接種相比，避免了氣候條件不適宜、環(huán)境中病蟲(chóng)害等因素的影響，苗期在室內(nèi)進(jìn)行抗病性篩選則條件較易控制，鑒定周期短、速度快，能節(jié)省大量人力物力。
文檔編號(hào)A01G1/00GK102217501SQ20111006548
公開(kāi)日2011年10月19日 申請(qǐng)日期2011年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月18日
發(fā)明者丁自立, 何云啟, 崔磊, 張興中, 梅時(shí)勇, 梅雪飛, 王晴芳, 甘彩霞, 高翔, 黃來(lái)春 申請(qǐng)人:湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所