專利名稱：一種脫落細(xì)胞保存液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種脫落細(xì)胞保存液及其制備方法，尤其涉及一種適合ACP酶顯示的 脫落細(xì)胞保存液及其制備方法。
背景技術(shù)：
目前對(duì)婦女宮頸細(xì)胞的篩查，大多采用液基薄層細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)。具體方法使用專 門的取樣器，在婦女宮頸移行區(qū)刷取脫落細(xì)胞，再將細(xì)胞洗入液基細(xì)胞保存液中，經(jīng)保存液 消化后，將脫落細(xì)胞轉(zhuǎn)移到載玻片上制成均勻的細(xì)胞涂片，涂片上有5000-50000個(gè)宮頸脫 落細(xì)胞，經(jīng)過巴氏或者HF染色后，病理醫(yī)生在顯微鏡下觀察這些細(xì)胞的形態(tài)，尋找異常的 細(xì)胞，并根據(jù)TBS報(bào)告要求作出診斷報(bào)告，供婦科臨床醫(yī)生參考。液基薄層細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)采用的是巴氏或HE染色，雖然一張優(yōu)良的細(xì)胞涂片能夠 做到細(xì)胞薄層、均勻，便于醫(yī)師閱片，但相對(duì)于需要從數(shù)萬個(gè)細(xì)胞中找出陽性細(xì)胞，對(duì)鏡檢 醫(yī)師仍然存在工作量大和要求經(jīng)驗(yàn)水平高的問題，因人為因素造成漏檢的現(xiàn)象非常常見， 因此，尋找一種能夠提示陽性細(xì)胞的染色方法將具有十分重大的社會(huì)意義。經(jīng)最新研究發(fā) 現(xiàn)，當(dāng)細(xì)胞遭受HPV病毒感染或鱗狀細(xì)胞表現(xiàn)CIN變化時(shí)，一種叫ACP的酶可以出現(xiàn)顯著的 活性，而正常的細(xì)胞不出現(xiàn)這種酶的表達(dá)。利用這一研究發(fā)現(xiàn)，通過特殊的方法將陽性細(xì)胞 ACP酶顯示出來，可以大大減少誤診率。在液基薄層細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)中加入ACP酶的顯示技術(shù)，符合目前用戶的使用習(xí)慣， 但這一技術(shù)對(duì)脫落細(xì)胞保存液要求更高，除了保存細(xì)胞、消化雜質(zhì)外，還必須對(duì)ACP酶具有 良好的保存效果。脫落細(xì)胞的液基保存，并不適合用完全固定細(xì)胞的方法，否則可能影響去 除沒有診斷價(jià)值的紅細(xì)胞、粘液和細(xì)胞碎片等雜質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種適合ACP酶顯示的脫落細(xì)胞保存液，用于解決目 前的液基細(xì)胞保存液不能有效的保存ACP酶的問題。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，發(fā)明人通過大量試驗(yàn)研究，終于獲得了如下技術(shù)方案—種脫落細(xì)胞保存液，含有氯化鈉、氯化鉀、葡萄糖、乙醇、1-3丙二醇、甘油、甘氨 酸、粘液溶解劑、細(xì)胞保護(hù)劑、肝素鈉，各成分的重量百分比分別為氯化鈉0. 6%
氯化鉀0. 06%
葡萄糖2%
乙醇20%
1-3丙二醇3%
甘油2%
甘氨酸0. 15%
粘液溶解劑0. 1%
細(xì)胞保護(hù)劑 0.2%肝素鈉0.1%所述脫落細(xì)胞保存液的PH為5. 8。上述的脫落細(xì)胞保存液，它還含有0.05N苯甲酸鈉-苯甲酸緩沖液。上述的脫落細(xì)胞保存液，優(yōu)選用1 %的氫氧化鈉或鹽酸溶液調(diào)整PH至5. 8。上述的脫落細(xì)胞保存液，所述氯化鈉、氯化鉀、葡萄糖、乙醇、1-3丙二醇、甘油、甘 氨酸、粘液溶解劑、細(xì)胞保護(hù)劑、肝素鈉為離子狀。上述任一一種的脫落細(xì)胞保存液，其中所述粘液溶解劑優(yōu)選為二硫蘇糖醇(DTT)。上述任一一種的脫落細(xì)胞保存液，其中所述細(xì)胞保護(hù)劑優(yōu)選為多聚甲醛。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述脫落細(xì)胞保存液的制備方法，該方法包括如下步 驟(1)用去離子水分別溶解氯化鈉、氯化鉀、葡萄糖、甘氨酸、粘液溶解劑、細(xì)胞保護(hù) 劑、肝素鈉，備用；(2)將乙醇、1-3丙二醇、甘油混合，并用去離子水稀釋一倍；(3)配制0. 05N苯甲酸鈉-苯甲酸緩沖液濃縮液；(4)在步驟C3)的苯甲酸鈉-苯甲酸緩沖液濃縮液中，依次加入氯化鈉、氯化鉀、葡 萄糖、甘氨酸、粘液溶解劑、細(xì)胞保護(hù)劑、肝素鈉溶液，混勻后加入步驟O)的混合溶液，混 勻后用去離子水稀釋至終濃度，邊稀釋邊攪拌，并用1 %的氫氧化鈉或鹽酸溶液調(diào)整PH值 至 5. 8。本發(fā)明提供的脫落細(xì)胞保存液，以科學(xué)合理的比例增加了多種化學(xué)成分，細(xì)胞保 存率高，細(xì)胞核清晰、細(xì)胞質(zhì)舒展，能有效去除紅細(xì)胞和粘液，使細(xì)胞分散平鋪的同時(shí)，更能 很好地保存ACP酶，適合做ACP酶染色。


圖1經(jīng)過本發(fā)明的細(xì)胞保存液保存后制成細(xì)胞涂片的顯微照片1、異常細(xì)胞 2、正常細(xì)胞
具體實(shí)施例方式以下是本發(fā)明的具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步作描述，但是本發(fā)明 的保護(hù)范圍并不限于這些實(shí)施例。凡是不背離本發(fā)明構(gòu)思的改變或等同替代均包括在本發(fā) 明的保護(hù)范圍之內(nèi)。宮頸脫落細(xì)胞保存液的制備1、根據(jù)最終溶液的容量，計(jì)算出各組分的用量，氯化鈉0. 6%，氯化鉀0. 06%，葡 萄糖2 %，乙醇20 %，1-3丙二醇3 %，甘油2 %，甘氨酸0.15%，粘液溶解劑0.1%，細(xì)胞保護(hù) 劑0. 2 %，肝素鈉0.1%，保持終濃度達(dá)到所需要求；2、用去離子水分別溶解氯化鈉、氯化鉀、葡萄糖、甘氨酸、粘液溶解劑、細(xì)胞保護(hù) 劑、肝素鈉備用；3、將乙醇、1-3丙二醇、甘油混合，并用去離子水稀釋一倍；4、配制0. 05N苯甲酸鈉-苯甲酸緩沖液濃縮液；
5、在苯甲酸鈉-苯甲酸緩沖液濃縮液中，依次加入氯化鈉、氯化鉀、葡萄糖、甘氨 酸、二硫蘇糖醇、多聚甲醛、肝素鈉溶液混勻；6、將步驟3的混合溶液加入步驟5的溶液中混勻；7、用去離子水將6稀釋到終濃度，邊稀釋邊攪拌；8、測(cè)定PH值，用的氫氧化鈉或鹽酸溶液調(diào)整PH值到5. 8。9、各組分溶解，都呈現(xiàn)無色。經(jīng)過上述制備方法制備的細(xì)胞保存液保存的宮頸脫落細(xì)胞，在轉(zhuǎn)移到載玻片上 制成均勻的細(xì)胞涂片時(shí)，經(jīng)過酶染色后，異常細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中含有的大量ACP酶顆粒被染 成紅色，而正常細(xì)胞因不含ACP酶顆粒，故細(xì)胞質(zhì)不著色，從而使異常細(xì)胞被清晰的標(biāo)示出 來，具體效果參見圖1。
權(quán)利要求
1.一種脫落細(xì)胞保存液，其特征在于含有如下重量百分比的組分氧化鈉 0.6%氯化鉀 0.06%葡萄糖 2%乙醇 20%1-3丙二醇 3%甘油 2%甘氨酸 0.15%粘液溶解劑 0.1%細(xì)胞保護(hù)劑 0.2%肝素鈉 0.1%所述脫落細(xì)胞保存液的PH為5. 8。
2.如權(quán)利要求1所述的脫落細(xì)胞保存液，其特征在于還含有0.05Ν苯甲酸鈉-苯甲 酸緩沖液。
3.如權(quán)利要求2所述的脫落細(xì)胞保存液，其特征在于PH為5.8。
4.如權(quán)利要求2所述的脫落細(xì)胞保存液，其特征在于所述氯化鈉、氯化鉀、葡萄糖、乙 醇、1-3丙二醇、甘油、甘氨酸、粘液溶解劑、細(xì)胞保護(hù)劑、肝素鈉為離子狀。
5.如權(quán)利要求1-4任一所述的脫落細(xì)胞保存液，其特征在于所述粘液溶解劑為二硫 蘇糖醇。
6.如權(quán)利要求1-4任一所述的，其特征在于所述細(xì)胞保護(hù)劑為多聚甲醛。
7.權(quán)利要求1-4任一所述的脫落細(xì)胞保存液的制備方法，其特征在于包括如下步驟(1)用去離子水分別溶解氯化鈉、氯化鉀、葡萄糖、甘氨酸、粘液溶解劑、細(xì)胞保護(hù)劑、肝 素鈉，備用；(2)將乙醇、1-3丙二醇、甘油混合，并用去離子水稀釋一倍；(3)配制0.05Ν苯甲酸鈉-苯甲酸緩沖液濃縮液；(4)在步驟(3)的苯甲酸鈉-苯甲酸緩沖液濃縮液中，依次加入氯化鈉、氯化鉀、葡萄 糖、甘氨酸、粘液溶解劑、細(xì)胞保護(hù)劑、肝素鈉溶液，混勻后加入步驟O)的混合溶液，混勻 后用去離子水稀釋至終濃度，邊稀釋邊攪拌，并用1 %的氫氧化鈉或鹽酸溶液調(diào)整PH值至
全文摘要
本發(fā)明涉及一種脫落細(xì)胞保存液及其制備方法，該保存液的各組分的重量百分比分別為氯化鈉0.6％，氯化鉀0.06％，葡萄糖2％，乙醇20％，1-3丙二醇3％，甘油2％，甘氨酸0.15％，粘液溶解劑0.1％，細(xì)胞保護(hù)劑0.2％，肝素鈉0.1％，0.05N苯甲酸鈉-苯甲酸緩沖液，并用1％的氫氧化鈉或鹽酸溶液調(diào)整pH值，以確保保存液的pH＝5.8。本發(fā)明的脫落細(xì)胞保存液能較好的保存細(xì)胞，保存時(shí)間可達(dá)10天以上，細(xì)胞核清晰、細(xì)胞質(zhì)舒展，有效去除紅細(xì)胞和粘液，使細(xì)胞分散平鋪的同時(shí)，更能很好地保存ACP酶，適合做ACP酶染色。
文檔編號(hào)A01N1/02GK102113481SQ20101060895
公開日2011年7月6日 申請(qǐng)日期2010年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月24日
發(fā)明者黃生明 申請(qǐng)人:廈門邁威生物科技有限公司