專利名稱：孕前開始的維生素a缺乏母鼠及其仔鼠動物模型的構建方法
技術領域：
本發(fā)明屬于動物模型的建立方法，尤其是一種孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其 仔鼠動物模型的構建方法。
背景技術：
維生素A (vitamin Α)缺乏在世界范圍內廣泛存在，并與鐵(Fe)缺乏、碘(I)缺乏 一同被WHO、聯(lián)合國兒童基金會(UNICEF)確定為世界性三大微量營養(yǎng)素缺乏性疾病。流行 病學調查顯示目前全球患維生素A缺乏性疾病的學齡前兒童高達2. 5億，其中300萬為臨 床型維生素A缺乏。我國本世紀初進行的14省市0-5歲兒童的調查顯示，我國屬于維生素 A缺乏中度流行地區(qū)，其發(fā)病率為11. 7 %，并且39. 2 %為可疑邊緣型維生素A缺乏。西部及 邊遠地區(qū)尤為嚴重，農村及小年齡兒童缺乏更為常見，而孕齡期婦女維生素A缺乏狀況比 兒童更加突出。因此，降低維生素A缺乏的患病率已納入“2015年全球戰(zhàn)略目標”和“中國 兒童發(fā)展規(guī)劃綱要”。維生素A是全反式視黃醇的一組有活性的β-紫香酮(β-ionone)的衍生物， 包括視黃醇(retinol)、視黃醛(retinal)、視黃酸(retinoic acid)及視黃酯(retinyl ester)。臨床上將血清中視黃醇濃度低于0. 7 μ mol/L稱為維生素A缺乏癥，同時伴有夜盲 癥和干眼病等經典維生素A缺乏癥狀的稱為臨床型維生素A缺乏癥，反之稱為亞臨床維生 素A缺乏癥；當血清中視黃醇濃度在0. 7-1. 05 μ mol/L稱為可疑亞臨床維生素A缺乏癥。 營養(yǎng)界又常將亞臨床維生素A缺乏和可疑亞臨床維生素A缺乏稱為邊緣型維生素A缺乏癥 或者輕度維生素A缺乏癥。維生素A對兒童視覺、免疫功能、生殖系統(tǒng)、生長發(fā)育等均有重要作用。目前研究 表明維生素A缺乏對貧血、學習記憶、腦發(fā)育，甚至老年期的認知功能等均有影響，所以維 生素A缺乏是一個公共健康問題。經文獻檢索，國際上有關維生素A缺乏動物模型的研究 文章有204篇，其中孕期維生素A缺乏動物模型有25篇(Dev. Biol 2008 Apr 15 ；316(2) 171-90 ；Ann Otol Rhinol Laryngol 2007 Oct ；116(10) :785_92)，但這些研究文獻中維生 素A缺乏多數(shù)發(fā)生在孕中晚期，或是建立輕度維生素A缺乏的動物模型，而維生素A嚴重缺 乏動物模型則導致胎盤功能低下、畸形和死胎。因此，從臨床前研究方面，建立孕期開始的 維生素A缺乏動物模型，通過動物實驗研究維生素A缺乏對機體健康的影響、調節(jié)機制及其 補充干預時間的探索是非常必要的。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動物模型的 構建方法，便于利用該動物模型在體研究維生素A缺乏對機體生長發(fā)育的調節(jié)機制，為更 好地應用于臨床提供實驗工具。本發(fā)明所述的孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動物模型的構建方法，其步驟如下第一步，配制基礎飼料；基礎飼料成分的重量百分比為，動物蛋白質20%、植物脂肪5 %、葡萄糖 68. 005%、無機鹽組合物6. 750%、維生素組合物0. 245% ；按照上述配方混勻后，再加入視黃醇200-400IU/kg，與其它成分充分混勻，加入蒸 餾水制成塊狀，室溫干燥，_20°C保存，作為維生素A缺乏母鼠實驗組的飼料；按照上述配方混勻后，再加入視黃醇6500IU/kg，與其它成分充分混勻，加入蒸餾 水制成塊狀，室溫干燥，-20°C保存，作為維生素A正常母鼠對照組及健康雄性大鼠的飼料。第二步，選擇實驗動物；選擇10-12周齡，體重230_250g的清潔級健康的Wistar大鼠，雌性20只，雄性10 只，隨機分成實驗組和對照組。第三步，構建維生素A缺乏母鼠模型；實驗組的雌性大鼠給予維生素A缺乏飼料喂養(yǎng)，在喂養(yǎng)過程中以25g/天/只的進 食量均衡喂養(yǎng)，以維生素A缺乏飼料喂養(yǎng)雌性大鼠21天后，尾靜脈采血檢測血清中視黃醇 濃度低于0. 7 μ mol/L時，維生素A缺乏母鼠模型構建成功；第四步，構建維生素A缺乏仔鼠模型；將第三步得到的維生素A缺乏母鼠2只與一只健康的雄性大鼠按照2 1雌雄合 籠，使維生素A缺乏母鼠懷孕并產仔，母鼠產仔量一般為6-14只。在懷孕及哺乳期間，均以維生素A缺乏飼料喂養(yǎng)孕鼠和母鼠，直至21天斷奶，獲得 從孕期開始的維生素A缺乏的仔鼠。所述的孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動物模型的構建方法，其配制基礎 飼料所用的動物蛋白為雞蛋蛋白，制作方法是將熟雞蛋去殼和蛋黃，蒸餾水清洗蛋白3次 后切碎，于80°C烘箱烤干后碎成粉。所述的孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動物模型的構建方法，其配制基礎 飼料所用的植物脂肪為一級大豆油。所述的孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動物模型的構建方法，其配制基礎 飼料所用的無機鹽組合物為碳酸鈉18. 000g/kg、三水磷酸氫二鉀25. 550g/kg、二水磷酸氫 鈣4. 550g/kg、氯化鈣10. 080g/kg、七水硫酸鐵1. 500g/kg、七水硫酸鎂7. 500g/kg、碘化鉀 0. 015g/kg、七水硫酸鋅0. 252g/kg、五水硫酸銅0. 018g/kg、一水硫酸錳0. 138g/kg。所述的孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動物模型的構建方法，其配制基礎 飼料所用的維生素組合物為維生素Bl 5.0mg/kg、維生素B2 5. Omg/kg、維生素B6 5. Omg/ kg、維生素 B12 0. 2mg/kg、生物素 0. 5mg/kg、葉酸 0. 5mg/kg、煙酸 50. 0mg/kg、泛酸鈣 50. 0mg/kg、肌醇 100. 0mg/kg、氯化膽堿 1000. 0mg/kg、維生素 D (IU) 2176. 0mg/kg、維生素 Kl 0. 6mg/kg、維生素 E 45. 5mg/kg。本發(fā)明的有益效果(1)本模型的構建可完全模擬目前維生素A缺乏多數(shù)集中在孕婦和生后早期嬰幼 兒的發(fā)病機理，為維生素A缺乏機理的研究、尋找最佳補充干預時間及維生素A強化食品的 開發(fā)和鑒定提供了技術平臺；(2)構建模型的成功率高，成模效果好，提高了科研經費的使用效率；
4
(3)構建模型流程簡單，價格低廉，便于推廣應用。
具體實施例方式下面通過具體實施例對本發(fā)明做進一步的描述。本發(fā)明所述的孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動物模型的構建方法，其步 驟如下第一步，配制基礎飼料；基礎飼料成分的重量百分比稱取動物蛋白質200. 00g、植物脂肪50. 00g、葡萄糖 680. 05g、無機鹽組合物67. 50g、維生素組合物2. 45g ；所用的動物蛋白為雞蛋蛋白，制作方法是將熟雞蛋去殼和蛋黃，蒸餾水清洗蛋白3 次后切碎，于80°C烘箱烤干后碎成粉；所用的植物脂肪為一級大豆油；所用的無機鹽組合 物為碳酸鈉18. 000g/kg、三水磷酸氫二鉀25. 550g/kg、二水磷酸氫鈣4. 550g/kg、氯化鈣 10. 080g/kg、七水硫酸鐵1. 500g/kg、七水硫酸鎂7. 500g/kg、碘化鉀0. 015g/kg、七水硫酸 鋅 0. 252g/kg、五水硫酸銅 0. 018g/kg、一水硫酸錳 0. 138g/kg ；所用的維生素組合物為維生素Bl 5.0mg/kg、維生素B2 5. 0mg/kg、維生素B6 5. Omg/kg、維生素 B12 0. 2mg/kg、生物素 0. 5mg/kg、葉酸 0. 5mg/kg、煙酸 50. 0mg/kg、泛酸 鈣 50. 0mg/kg、肌醇 100. 0mg/kg、氯化膽堿 1000. 0mg/kg、維生素 D (IU) 2176. Omg/kg、維生素 K10. 6mg/kg、維生素 E 45. 5mg/kg。按照上述配方混勻后，再加入視黃醇400IU/kg，與其它成分充分混勻，加入蒸餾水 制成塊狀，室溫干燥，-20°C保存，作為邊緣性維生素A缺乏母鼠實驗組的飼料；按照上述配方混勻后，再加入視黃醇200IU/kg，作為維生素A完全缺乏母鼠實驗 組的飼料；按照上述配方混勻后，再加入視黃醇6500IU/kg，作為維生素A正常母鼠對照組及 健康雄性大鼠的飼料。第二步，選擇實驗動物；選擇10-12周齡，體重230_250g的清潔級健康的Wistar大鼠，雌性20只，雄性10 只，隨機分成實驗組和對照組。第三步，構建維生素A缺乏母鼠模型；實驗組的雌性大鼠給予維生素A缺乏飼料喂養(yǎng)，在喂養(yǎng)過程中以25g/天/只的進 食量均衡喂養(yǎng)，以維生素A缺乏飼料喂養(yǎng)雌性大鼠21天后，尾靜脈采血檢測血清中視黃醇 濃度低于0. 7 μ mol/L時，維生素A缺乏母鼠模型構建成功；第四步，構建維生素A缺乏仔鼠模型；將第三步得到的維生素A缺乏母鼠2只與一只健康的雄性大鼠按照2 1雌雄合 籠，使維生素A缺乏母鼠懷孕并產仔，母鼠產仔量一般為6-14只。在懷孕及哺乳期間，均以維生素A缺乏飼料喂養(yǎng)孕鼠和母鼠，直至21天斷奶，獲得 從孕期開始的維生素A缺乏的仔鼠。實施例一邊緣性維生素A缺乏大鼠模型動物模型清潔級Wistar大鼠基礎飼料組成雞蛋蛋白200g/kg，一級大豆油50g/kg，葡萄糖680. 05g/kg，無機鹽 67. 50g/kg,維生素 2. 45g/kg。維生素A添加量視黃醇400IU/kg。維生素A正常對照組上述同樣基礎飼料配方中添加視黃醇6500IU/kg。表2孕鼠血清中維生素A水平 表3仔鼠血清中維生素A水平 外觀觀察維生素A缺乏大鼠的皮毛較粗糙、色澤偏黃，活動頻繁，偶爾易于激怒， 但無仔鼠死亡。實施例二 維生素A完全缺乏大鼠模型動物模型清潔級Wistar大鼠?；A飼料組成雞蛋蛋白200g/kg，一級大豆油50g/kg，葡萄糖680. 05g/kg，無機 鹽 67. 50g/kg,維生素 2. 45g/kg。維生素A添加量視黃醇200IU/kg。維生素A正常對照組上述同樣基礎飼料配方中添加視黃醇6500IU/kg。表4孕鼠血清中維生素A水平 表5仔鼠血清中維生素A水平
外觀觀察維生素A缺乏大鼠的皮毛較粗糙、色澤偏黃，活動頻繁，偶爾易于激怒， 但無仔鼠死亡。
權利要求
孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動物模型的構建方法，其步驟如下第一步，配制基礎飼料；基礎飼料成分的重量百分比為，動物蛋白質20％、植物脂肪5％、葡萄糖68.005％、無機鹽組合物6.750％、維生素組合物0.245％；按照上述配方混勻后，再加入視黃醇200 400IU/kg，與其它成分充分混勻，加入蒸餾水制成塊狀，室溫干燥， 20℃保存，作為維生素A缺乏母鼠實驗組的飼料；按照上述配方混勻后，再加入視黃醇6500IU/kg，與其它成分充分混勻，加入蒸餾水制成塊狀，室溫干燥， 20℃保存，作為維生素A正常母鼠對照組及健康雄性大鼠的飼料。第二步，選擇實驗動物；選擇10 12周齡，體重230 250g的清潔級健康的Wistar大鼠，雌性20只，雄性10只，隨機分成實驗組和對照組。第三步，構建維生素A缺乏母鼠模型；實驗組的雌性大鼠給予維生素A缺乏飼料喂養(yǎng)，在喂養(yǎng)過程中以25g/天/只的進食量均衡喂養(yǎng)，以維生素A缺乏飼料喂養(yǎng)雌性大鼠21天后，尾靜脈采血檢測血清中視黃醇濃度低于0.7μmol/L時，維生素A缺乏母鼠模型構建成功；第四步，構建維生素A缺乏仔鼠模型；將第三步得到的維生素A缺乏母鼠2只與一只健康的雄性大鼠按照2∶1雌雄合籠，使維生素A缺乏母鼠懷孕并產仔，母鼠產仔量一般為6 14只；在懷孕及哺乳期間，均以維生素A缺乏飼料喂養(yǎng)孕鼠和母鼠，直至21天斷奶，獲得從孕期開始的維生素A缺乏的仔鼠。
2.如權利要求1所述的孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動物模型的構建方法， 其特征是配制基礎飼料所用的動物蛋白為雞蛋蛋白，制作方法是將熟雞蛋去殼和蛋黃，蒸 餾水清洗蛋白3次后切碎，于80°C烘箱烤干后碎成粉。
3.如權利要求1所述的孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動物模型的構建方法， 其特征是配制基礎飼料所用的植物脂肪為一級大豆油。
4.如權利要求1所述的孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動物模型的構建方 法，其特征是配制基礎飼料所用的無機鹽組合物為碳酸鈉18. 000g/kg、三水磷酸氫二鉀 25. 550g/kg、二水磷酸氫鈣4. 550g/kg、氯化鈣10. 080g/kg、七水硫酸鐵1. 500g/kg、七水硫 酸鎂7. 500g/kg、碘化鉀0. 015g/kg、七水硫酸鋅0. 252g/kg、五水硫酸銅0. 018g/kg、一水硫 酸錳 0. 138g/kg。
5.如權利要求1所述的孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動物模型的構建 方法，其特征是配制基礎飼料所用的維生素組合物為維生素Bl 5. Omg/kg、維生素B2 5. Omg/kg、維生素 B6 5. Omg/kg、維生素 B12 0. 2mg/kg、生物素 0. 5mg/kg、葉酸 0. 5mg/kg、 煙酸 50. Omg/kg、泛酸鈣 50. Omg/kg、肌醇 100. Omg/kg、氯化膽堿 1000. Omg/kg、維生素 D (IU) 2176. Omg/kg、維生素 Kl 0. 6mg/kg、維生素 E 45. 5mg/kg。
全文摘要
本發(fā)明公開孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動物模型的構建方法，其步驟如下第一步，配制基礎飼料；其成分的重量百分比為，動物蛋白質20％、植物脂肪5％、葡萄糖68.005％、無機鹽組合物6.750％、維生素組合物0.245％；按照上述配方混勻后，加入視黃醇200-400IU/kg并充分混勻，再加入蒸餾水制成塊狀，室溫干燥，-20℃保存，作為維生素A缺乏母鼠實驗組的飼料；第二步，選擇實驗動物；第三步，構建維生素A缺乏母鼠模型；第四步，構建維生素A缺乏仔鼠模型；本發(fā)明構建模型流程簡單，成功率高，便于推廣應用；為維生素A缺乏機理的研究、尋找最佳補充干預時間及維生素A強化食品的開發(fā)和鑒定提供了技術平臺。
文檔編號A01K67/02GK101911923SQ20101023303
公開日2010年12月15日 申請日期2010年7月22日 優(yōu)先權日2010年7月22日
發(fā)明者劉友學, 張萱, 李廷玉, 江葦, 瞿平, 陳潔, 陳立, 魏華, 魏小平, 黃鴻眉 申請人:重慶醫(yī)科大學附屬兒童醫(yī)院