專利名稱：：一種金針菇出菇育種方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于食用菌育種領(lǐng)域，具體的說涉及一種用試管出菇育種方法選育金針菇菌種的過程。
背景技術(shù)：
：金針菇是我國工廠化生產(chǎn)發(fā)展最快的食用菌種類。幾十年來，為了跟上產(chǎn)業(yè)發(fā)展的要求，國內(nèi)同行一直致力于金針菇新品種的選育。品種選育必然需要進(jìn)行栽培出菇試驗，以確定其子實體性狀的優(yōu)劣，進(jìn)而選擇優(yōu)質(zhì)的菌種。其中最常規(guī)的栽培出菇方法就是工廠化瓶栽和傳統(tǒng)袋料栽培。然而，這兩種方法的缺點(diǎn)在于，對于能源的消耗量非常大，而且人力方面的需求也很大，另外也比較容易造成不同菌株孢子間的相互附著，造成菌種遺傳表現(xiàn)的不穩(wěn)定。這些缺點(diǎn)會導(dǎo)致資源方面的浪費(fèi)，及研究經(jīng)費(fèi)的約束，大大降低了育種效率。所以，我們亟需尋找金針菇菌種選育中栽培出菇的新方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種金針菇試管出菇育種方法，應(yīng)用于金針菇優(yōu)秀新菌種的選育中。本發(fā)明的金針菇試管出菇育種方法，包括以下步驟(1)制備培養(yǎng)基及培養(yǎng)料；(2)培養(yǎng)料裝填將培養(yǎng)料填入試管，壓緊，用透氣性薄膜包上試管口，皮筋箍緊；(3)金針菇菌種的制備將要選育的金針菇菌種，由母種轉(zhuǎn)接為原種，原種再轉(zhuǎn)接為栽培種；(4)菌種接入在超凈工作臺上將金針菇栽培種接入試管中培養(yǎng)料上，用透氣性薄膜包上試管口，皮筋箍緊，貼上標(biāo)簽；(5)搔菌菌絲長滿試管時，將培養(yǎng)基表面的栽培種及老化菌絲挖去；(6)出菇、采收；篩選優(yōu)質(zhì)品種。所述的試管為30X250mm的試管，玻璃試管為佳(購自上海滬華玻璃儀器有限公司)。所述的透氣性薄膜是16X16cm的封口膜(購自上海鼎國生物技術(shù)有限公司)。在這一過程中還可以做生長速度的測量菌絲生長環(huán)境下，菌種接入疒10天后，在試管上菌絲生長處劃一條線，再經(jīng)過710天，劃第二條線，測量兩條線間的距離，除以天數(shù)即可得到日平均菌絲生長速度；按實驗需要可以繼續(xù)劃線測量速度，得到不同時間段的生長速度。金針菇子實體特征是1.相對其它食用菌子實體，例如香菇，金針菇子實體菌柄細(xì)長，菌柄直徑約為廣3毫米，長度為1(Γ20厘米；2.金針菇子實體菌蓋較小，菌蓋直徑約為1(Γ20毫米；3.金針菇子實體顏色分為白色和黃色，表現(xiàn)為不同部位、不同層次的顏色差另|J。4.金針菇在子實體成熟后產(chǎn)生孢子，孢子彈射容易造成菌株間相互污染，從而破壞遺傳穩(wěn)定；如果用試管進(jìn)行栽培，則可以避免這一污染，有助于遺傳穩(wěn)定。所以，金針菇子實體的尺寸與30X250mm玻璃試管較為合適，利用試管出菇是非常適合于考察金針菇子實體性狀的栽培方法。試管出菇栽培在金針菇菌種選育中有以下重要作用1.節(jié)約能源消耗，節(jié)省人力；2.栽培周期短，提高育種效率；3.穩(wěn)定遺傳性狀；4.實驗操作可控性強(qiáng)。目前還未見將試管栽培出菇的方法應(yīng)用到金針菇的選育研究。具體方法步驟為(1)培養(yǎng)基與培養(yǎng)料制備按育種需要制備培養(yǎng)基與培養(yǎng)料；培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基。配方去皮馬鈴薯200g煮汁，葡萄糖20g，瓊脂20g，蒸餾水IOOOmL,pH7。置于15X150mm小試管中，管口用硅膠塞塞住。PDA培養(yǎng)基采用高壓滅菌，滅菌溫度為121°C，保持30分鐘。栽培種培養(yǎng)料配方木屑30%，玉米芯20%，棉籽殼20%，麩皮15%，米糠15%，含水量61%62%。初始pH6.5。木屑一般使用闊葉樹木屑，其它原料必須保持新鮮、干燥，無蟲蛀和霉變現(xiàn)象，顆粒度符合設(shè)備和工藝要求。原料保存過程中應(yīng)通風(fēng)換氣，保持儲藏環(huán)境干燥。原料混合時，按配方要求準(zhǔn)確定量，使物料充分?jǐn)嚢杈鶆?，加水至含水量達(dá)到61%62%。根據(jù)季節(jié)變化調(diào)整攪拌時間，防止混合料酸敗。培養(yǎng)料在裝填后立即進(jìn)行滅菌處理，一般采用高壓滅菌。滅菌時間為料的中心溫度必須達(dá)到121°C，并保持120分鐘，必須徹底殺滅培養(yǎng)料中的所有微生物。滅菌后冷卻至管內(nèi)溫度25°C以下，方可接種。(2)培養(yǎng)料裝填將制備好的培養(yǎng)料填入試管，用透氣性薄膜包上試管口，皮筋箍緊；使用30X250mm玻璃試管，要求裝料緊實度均勻，料面距離試管底部約纊10厘米長，用透氣性薄膜包上試管口，皮筋箍緊。(3)金針菇菌種的制備將要選育的金針菇菌種，由母種轉(zhuǎn)接為原種，原種再轉(zhuǎn)接為栽培種；菌種均轉(zhuǎn)接于滅過菌的斜面上，選用15X150mm試管，試管口用硅膠塞塞住。培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基。(4)菌種接入在超凈工作臺上將金針菇栽培種接入試管中培養(yǎng)料上，用透氣性薄膜包上試管口，皮筋箍緊，貼上標(biāo)簽；接種時按無菌操作程序進(jìn)行。將經(jīng)過滅菌的30X250mm試管放進(jìn)接種室，超凈工作臺上，紫外滅菌20min，然后將菌種帶入接種室。先將的試管口移向酒精燈火焰上，去掉皮筋和透氣性薄膜，轉(zhuǎn)動試管口，使試管口的周圍都得到火焰滅菌。再靠近酒精燈火焰，去掉15X150mm試管口的硅膠塞，用鑷子或接種勺取菌種快，接到30X250mm試管培養(yǎng)料上。接種量要求蓋滿培養(yǎng)料表面至瓶口，這樣能使菌絲生長均勻，并能有效防止雜菌污染。試管口蓋上透氣性薄膜，箍上皮筋，貼上標(biāo)簽，送進(jìn)培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)室溫度控制在20°C22°C，濕度維持在60%70%。(5)生長速度的測量菌絲生長環(huán)境下，菌種接入疒10天后，在試管上菌絲生長處劃一條線，再經(jīng)過710天，劃第二條線，測量兩條線間的距離，除以天數(shù)即可得到日平均菌絲生長速度；按實驗需要可以繼續(xù)劃線測量速度，得到不同時間段的生長速度。(6)搔菌待菌絲長滿試管中的培養(yǎng)料后，去掉試管口透氣性薄膜，使用合適的搔菌工具，去掉表面接種塊及老化菌絲并使出菇表面平整，向瓶中注入廣2毫升水。催蕾控制溫度為13°C15°C，濕度為90%95%，直到形成魚籽般的菇蕾。(7)出菇栽培將試管至于金針菇出菇的適宜環(huán)境下出菇，采收及記錄，以便篩選優(yōu)質(zhì)品種。所述的適宜環(huán)境為溫度控制為4°C8°C，濕度為90%以上，CO2濃度為30003500ppmo子實體成熟時采收，并拍照。記錄子實體顏色、菌柄長度、直徑、菌蓋直徑及出菇期、栽培周期等數(shù)據(jù)。按照性狀篩選優(yōu)良菌株。運(yùn)用本發(fā)明的方法選育出的金針菇菌種具有選育速度快、周期短、能耗少、效率高、遺傳穩(wěn)定、可控性強(qiáng)等特點(diǎn)。實施例一菌株F3為中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心上海食用菌分中心保藏。(保藏號為4150)選用F3菌株，分別進(jìn)行工廠化栽培出菇和試管栽培出菇。從培養(yǎng)基和培養(yǎng)料的制備到菌種制備，以及菌絲培養(yǎng)和出菇栽培，條件步驟相同。不同點(diǎn)在于工廠化栽培出菇選用的是IlOOmL耐高溫塑料瓶，裝料至瓶口2cm左右，約800g，中間打孔至瓶底，接種時使用的是自動接種機(jī)接種；搔菌后去掉瓶蓋，子實體在瓶口上方生長；試管栽培出菇選用的是30X250mm玻璃試管，料面距離試管底部約纊10厘米長，用透氣性薄膜包上試管口；接種使用手工接種；搔菌后去掉透氣性薄膜，子實體還在試管中生長。然后在菌絲生長速度、子實體外觀、栽培周期、抗逆性等方面進(jìn)行觀察記錄，評價其菌種特性。金針菇試管栽培出菇與傳統(tǒng)工廠化金針菇栽培出菇方法的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>權(quán)利要求一種金針菇出菇育種方法，包括以下步驟(1)制備培養(yǎng)基及培養(yǎng)料；(2)培養(yǎng)料裝填將培養(yǎng)料填入試管，壓緊，用透氣性薄膜包上試管口，皮筋箍緊；(3)金針菇菌種的制備將要選育的金針菇菌種，由母種轉(zhuǎn)接為原種，原種再轉(zhuǎn)接為栽培種；(4)菌種接入在超凈工作臺上將金針菇栽培種接入試管中培養(yǎng)料上，用透氣性薄膜包上試管口，皮筋箍緊，貼上標(biāo)簽；(5)搔菌菌絲長滿試管時，將培養(yǎng)基表面的栽培種及老化菌絲挖去；(6)出菇、采收；篩選優(yōu)質(zhì)品種。全文摘要本發(fā)明公開了一種金針菇出菇育種方法，使用該方法選育金針菇菌株具有選育速度快、周期短、能耗少、效率高、遺傳穩(wěn)定、可控性強(qiáng)等特點(diǎn)。文檔編號A01G1/04GK101822172SQ201010183628公開日2010年9月8日申請日期2010年5月25日優(yōu)先權(quán)日2010年5月25日發(fā)明者尚曉冬,徐珍,譚琦申請人:上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院;上?？屏⑻剞r(nóng)科(集團(tuán))有限公司;上海國森生物科技有限公司