專(zhuān)利名稱(chēng)：飼料產(chǎn)品中黃曲霉毒素的解毒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及解毒受到真菌毒素黃曲霉毒素(mycotoxin aflatoxin)污染的飼料產(chǎn) 物的方法。
背景技術(shù)：
黃曲霉毒素是天然存在的真菌毒素，其由曲霉屬多個(gè)種，特別是黃曲霉 (Aspergillus flavus)禾口寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)產(chǎn)生。黃曲霉毒素有毒并 致癌。曲霉屬的產(chǎn)生黃曲霉毒素的成員在自然界是常見(jiàn)的和廣泛的。它們可在收獲前或 儲(chǔ)藏過(guò)程中在谷物上形成菌落并污染谷物。宿主作物在長(zhǎng)期暴露于高濕度環(huán)境后或在由應(yīng) 激條件，如干旱(其為降低了進(jìn)入的障礙的條件)造成損傷后，特別易受曲霉屬的感染，經(jīng)常受影響的作物包括谷類(lèi)，如玉米(maize)、高粱(sorghum)、黍(millet)、 稻(rice)和小麥(wheat),以及油籽(oilseeds)，如油菜(rape)、花生(peanut)、大豆 (soybean)、向曰葵(sunflower)禾口棉花(cotton)。當(dāng)在乙醇產(chǎn)生中使用谷粒和消耗淀粉時(shí)，黃曲霉毒素在發(fā)酵副產(chǎn)物中，例如， 在用作飼料產(chǎn)物的蒸餾干酒糟(distillers’ dried grain)中富集，且在發(fā)酵副產(chǎn)物 中黃曲霉毒素可相對(duì)于在谷粒中增加為三倍。因此，受黃曲霉毒素污染的蒸餾酒糟 (distillers' grain)可對(duì)消耗這些產(chǎn)物的動(dòng)物的安全造成風(fēng)險(xiǎn)，而且隨著蒸餾酒糟在乳 牛飼料中的廣泛應(yīng)用，還存在由于牛奶中的黃曲霉毒素殘余物導(dǎo)致潛在的對(duì)人類(lèi)安全的擔(dān) 憂。使用微生物使黃曲霉毒素失活公開(kāi)于W02006053357。酶法滅活其他真菌毒素公開(kāi) 于W09612414。需要對(duì)受真菌毒素黃曲霉毒素污染的動(dòng)物飼料，如發(fā)酵副產(chǎn)物，包括濕和干 的蒸餾酒糟(distillers’ wet and dried grain)進(jìn)行解毒的其它方法。

發(fā)明內(nèi)容
在第一個(gè)方面，本發(fā)明提供了從植物材料產(chǎn)生飼料產(chǎn)物的方法，所述方法包括用 降解黃曲霉毒素的酶處理所述植物材料，以產(chǎn)生黃曲霉毒素水平降低的飼料產(chǎn)物。在第二個(gè)方面，本發(fā)明提供了在植物材料中降解黃曲霉毒素的方法，該方法包括 用酶處理所述植物材料。在第三個(gè)方面，本發(fā)明提供了酶用于降解黃曲霉毒素的用途。所述酶優(yōu)選選自下組漆酶、角質(zhì)酶和羧肽酶(carboxyp印tidase)。發(fā)明詳述黃曲霉毒素
在本發(fā)明的語(yǔ)境中，術(shù)語(yǔ)“黃曲霉毒素”包括任何類(lèi)型的黃曲霉毒素。術(shù)語(yǔ)“黃曲 霉毒素”還包括黃曲霉毒素的任何衍生物，其對(duì)于酶(例如漆酶、角質(zhì)酶或羧肽酶)的修飾 是易感的(susceptible)。在自然界中產(chǎn)生了至少13中不同類(lèi)型的黃曲霉毒素。被認(rèn)為是最毒的黃曲霉毒 素 Bi，以及 B2 由黃曲霄(Aspergillus flavus)禾口寄生曲霄(Aspergillus parasiticus) 兩者產(chǎn)生。黃曲霉毒素Gl和G2僅完全由寄生曲霉產(chǎn)生。黃曲霉毒素Ml和M2起初在以發(fā)霉谷粒飼養(yǎng)的母牛所產(chǎn)的奶中發(fā)現(xiàn)。這些化合物 是動(dòng)物肝臟中轉(zhuǎn)換過(guò)程的產(chǎn)物。然而，黃曲霉毒素Ml亦存在于寄生曲霉的發(fā)酵液中。雖然在飼料產(chǎn)物中存在曲霉屬并非總是表明還存在有害水平的黃曲霉毒素，但其 確實(shí)暗示食用該產(chǎn)物具有顯著的風(fēng)險(xiǎn)。棺物材料植物材料可包括谷類(lèi)，例如，玉米(corn)、小麥、大麥、黑麥、稻、高粱和黍中的一種 或多種；豆類(lèi)，例如大豆、豌豆和花生中的一種或多種；油籽，例如，油菜、大豆、向日葵和棉 花。所述植物材料可經(jīng)磨制，例如，濕磨或干磨的谷粒，包括含有谷蛋白/面筋(gluten)、蛋 白質(zhì)、淀粉、糠(bran)和/或油的磨制級(jí)分。所述植物材料可為除具有不受歡迎水平(unwanted level)的黃曲霉毒素外適于 產(chǎn)生動(dòng)物飼料產(chǎn)物的植物材料。所述植物材料亦可為懷疑其包含不受歡迎水平的黃曲霉毒 素的植物材料，和/或具有未知水平黃曲霉毒素的植物材料，其中包括未包含可檢測(cè)水平 黃曲霉毒素的植物材料。本發(fā)明的方法可與如下的任何方法組合，該方法中產(chǎn)生適合作為動(dòng)物飼料產(chǎn)物的 產(chǎn)物，或者作為主產(chǎn)物，或者作為副產(chǎn)物。因此本發(fā)明的植物材料可為用于產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的 方法的醪液(mash)。所述發(fā)酵產(chǎn)物優(yōu)選為乙醇產(chǎn)物，例如，啤酒、飲用乙醇、燃料乙醇和/ 或工業(yè)乙醇。本發(fā)明的方法可在發(fā)酵步驟之前，過(guò)程中或之后實(shí)施，其目的為降解醪液中包 含的存在于植物材料中的黃曲霉毒素，以產(chǎn)生黃曲霉毒素量減少的產(chǎn)物，例如，酒糟(spend grain)或者濕或干的蒸餾酒糟。類(lèi)似的，本發(fā)明的植物材料可為在濕磨方法中的浸漬步驟 中的谷粒，在所述方法亦產(chǎn)生適合作為動(dòng)物飼料產(chǎn)物的產(chǎn)物。植物材料可為除具有不受歡迎水平或未知水平的黃曲霉毒素之外，適于動(dòng)物食用 的材料，即，根據(jù)如下定義的動(dòng)物飼料產(chǎn)物。動(dòng)物飼料產(chǎn)物術(shù)語(yǔ)“動(dòng)物”包括所有動(dòng)物，包括人。動(dòng)物的實(shí)例是牛(cattle)，(包括但不限于乳 牛/母牛(cow)和小牛(calf))；單胃動(dòng)物，例如豬(pig or swine)(包括，但不限于，小豬 (piglet)、飼育豬(growing pig)和母豬(sow))；家禽如火雞(turkey)和雞(chicken)(包 括但不限于雛雞(broiler chick)、蛋雞(layer))；和魚(yú)(包括但不限于鮭魚(yú)(salmon))。術(shù)語(yǔ)“飼料”或“飼料產(chǎn)物”意指任何適于或意圖用于由動(dòng)物攝取的化合物、制備 物、混合物或組合物。所述飼料產(chǎn)物可以是除具有不受歡迎水平的黃曲霉毒素外適合于由動(dòng)物食用 (consumption)的產(chǎn)物。所述飼料產(chǎn)物也可以是懷疑其包含不受歡迎水平的黃曲霉毒素的 產(chǎn)物和/或具有未知水平黃曲霉毒素的產(chǎn)物，其中包括未包含可檢測(cè)水平黃曲霉毒素的產(chǎn) 物。
所述飼料產(chǎn)物優(yōu)選包含谷類(lèi)，例如，玉米、小麥、大麥、黑麥、稻、高粱和黍中的一種 或多種；豆類(lèi)，例如，大豆、豌豆和花生中的一種或多種；油籽，例如，油菜、大豆、向日葵和 棉花。所述飼料產(chǎn)物可經(jīng)磨制，例如，濕磨或干磨的谷粒，包括含有谷蛋白/面筋、蛋白質(zhì)、 淀粉、糠和/或油的磨制級(jí)分。Mfi在本發(fā)明的語(yǔ)境中，術(shù)語(yǔ)“漆酶”包括由酶類(lèi)別E. C. 1. 10. 3. 2所包含的酶。優(yōu)選 的是下述的酶以及具有同源序列的酶，特別是重組的和/或基本上純化的酶。所述漆酶可源自任何來(lái)源，優(yōu)選來(lái)自微生物，如真菌或細(xì)菌。優(yōu)選地，所用的漆 酶源自多孔菌屬菌種(Polyporus sp.)的菌株，特別是Polyporus pinisitus或雜色多 孔菌(Polyporus versicolor)的菌株，或毀絲霉屬菌種(Myceliophthera sp·)，例如嗜 熱毀絲霉(Mthermophila)的菌株，或絲核菌屬菌種(Rhizoctonia sp.)的菌株，特別是 Rhizoctonia praticola或立枯絲核菌(Rhizoctonia solani)的菌株,或鹽膚木屬物種 (Rhus sp·)，特別是木蠟樹(shù)(Rhusvernicifera)的株。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，氧化還原酶是WO 96/00290中描述的Polyporus pinisitus漆酶(也稱(chēng)長(zhǎng)絨毛栓菌(Trametes villosa)漆酶)、W095/33836中描述的嗜熱 毀絲霉漆酶，或者具有與這些序列中任一同源的氨基酸序列的漆酶。進(jìn)一步，漆酶可以是柱頂孢屬菌種(Scytalidium sp.)漆酶，如WO 95/33837中描 述的嗜熱柱頂孢(S. thermophilium)漆酶，或梨孢屬菌種(Pyricularia sp.)漆酶，如能夠 以商品名SIGMA no. L5510購(gòu)自SIGMA的稻梨孢/稻瘟病菌(Pyricularia oryzae)漆酶， 或鬼傘屬菌種(Coprinus sp.)漆酶，如灰蓋鬼傘(C. cinereus)漆酶，特別是灰蓋鬼傘IFO 30116漆酶，或絲核菌屬菌種漆酶，如立枯絲核菌漆酶，特別是WO 95/07988中描述的中性 立枯絲核菌漆酶。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，漆酶是來(lái)自嗜熱毀絲霉(Myceliophthorathermophila) (MtL)的、具有作為GENESEQP :AAR88500保藏并在本文顯示為SEQ ID NO 3的氨基酸序列 的漆酶，來(lái)自Polyporuspinsitus(PpL)的、具有作為UNIPR0T :Q99044保藏并在本文顯示 為SEQ ID NO :4的氨基酸序列的漆酶，來(lái)自天藍(lán)色鏈霉菌(Sti^ptomyces coelicolor) ScL 的、具有作為SWISSPROT :Q9XAL8保藏并在本文顯示為SEQ ID NO 5的氨基酸序列的漆酶， 或具有與這些序列中的任一同源的氨基酸序列的漆酶。漆酶必需以有效量存在于要解毒的介質(zhì)中。漆酶優(yōu)選以0. Ol-IOOmg酶蛋白每kg 干物質(zhì)，優(yōu)選0. I-IOmg酶蛋白每kg干物質(zhì)，或更優(yōu)選l_5mg酶蛋白每kg干物質(zhì)的濃度存在。介體(mediator)在施用漆酶的一個(gè)實(shí)施方案中，充當(dāng)電子的介體可與漆酶一起使用。所述介體應(yīng) 該以有效量存在于要解毒的介質(zhì)中。已知多種介體；參見(jiàn)例如 W09412620、W09412621、W09501626、W09600179 和 W09923887。將其中的介體通過(guò)提述并入本文。優(yōu)選用于本發(fā)明的是選自以下的介體丁香酸甲酯(methylsyringate) (MES)、吩 噻嗪-10-丙酸(phenothiazine-10-propionicacid) (PPT)、η- (4-氰基苯基)乙酰氧廂酸 (n-(4-cyanophenyl)acetohydroxamic acid) (NCPA)、乙酉先丁香酮(acetosyringone)、丁
5香醛(syringaldehyde)、對(duì)香豆酸(p-coumaric acid),2,2'-聯(lián)氮雙(3-乙基苯并噻唑 啉-6-磺酸)(2，2' -Azinobis (3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonate))、1_羥基苯并三唑 (1-hydroxybenzotriazole) >2,4-戊二酮和吩噻嗪。所述介體是商業(yè)上可得到的或能夠通過(guò)本領(lǐng)域已知方法制備的。角質(zhì)酶在本發(fā)明的語(yǔ)境下，術(shù)語(yǔ)“角質(zhì)酶”包括酶分類(lèi)EC 3. 1. 1.74所包括的酶。優(yōu)選的 是下面提及的酶以及具有同源序列的酶，特別是重組的和/或基本上純化的酶。所述角質(zhì)酶可來(lái)自微生物，優(yōu)選來(lái)自真菌或細(xì)菌。具體而言，所述角質(zhì)酶可 來(lái)自腐質(zhì)霉屬(Humicola)，特別是特異腐質(zhì)霉(H. insolens)的菌株，更具體為特異 腐質(zhì)霉菌株DSM1800(US 5，827，719)，或來(lái)自鐮孢屬(Fusarium)，例如，大刀粉紅鐮孢 (F. roseum culmorum),或具體為腐皮鐮孢豌豆專(zhuān)化型(Fusarium solani f. sp. pisi)的 菌株(W090/09446 ;W094/14964，W094/03578)。所述真菌角質(zhì)酶亦可源自絲核菌屬的菌 株，例如，立枯絲核菌(R. solani)，或鏈格孢屬(Alternaria)的菌株，例如，蕓薹生鏈格孢 (A. brassicicola)(W094/03578)。優(yōu)選的是示于SEQ ID NO=I的角質(zhì)酶；特異腐質(zhì)霉角質(zhì)酶(對(duì)應(yīng)于US5，827，719 中SEQ ID NO 2的成熟部分，以及W 01/92502的SEQ ID NO 1的成熟部分)，以及示于 SEQ ID NO 2的角質(zhì)酶；根據(jù)WO 94/14964圖ID的腐皮鐮孢豌豆專(zhuān)化型，以及具有與這些 序列中的任一同源的氨基酸序列的漆酶。所述角質(zhì)酶亦可為親本角質(zhì)酶的變體，如描述于WO 00/34450或W001/92502中的 那些，其全部通過(guò)提述并入本文。所述角質(zhì)酶可為包含下述取代的特異腐質(zhì)霉角質(zhì)酶E6Q、 G8D、A14P、N15D、E47K、S48E、R51P、A88H、A91H、A130V、E179Q 和 R189V,其在 WO 2001/092502 的24頁(yè)11行中公開(kāi)，并用于本文的實(shí)施例1。所述角質(zhì)酶必須以有效量存在于要解毒的介質(zhì)中。所述角質(zhì)酶優(yōu)選以0. Ol-IOOmg 酶蛋白質(zhì)每kg干物質(zhì)，優(yōu)選0. I-IOmg酶蛋白質(zhì)每kg干物質(zhì)，或更優(yōu)選l_5mg酶蛋白質(zhì)每 kg干物質(zhì)的濃度存在。羧肽酶在本發(fā)明的語(yǔ)境下，術(shù)語(yǔ)“羧肽酶“指剪切肽或多肽鏈C-末端肽鍵的酶。該組酶 包括但不僅限于歸類(lèi)為酶亞類(lèi)EC 3.4. 16，絲氨酸型羧肽酶的酶。優(yōu)選的是下面提及的酶，特別是重組和/或基本上純化的酶。所述羧肽酶可源自 任何來(lái)源，優(yōu)選來(lái)自微生物，如真菌或細(xì)菌。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述羧肽酶源自米曲霉，優(yōu) 選如SEQ ID NO 5和SEQ ID NO 6中所示的羧肽酶。所述羧肽酶必須以有效量存在于要解毒的介質(zhì)中。所述羧肽酶優(yōu)選以每kg干物 質(zhì)0. Ol-IOOmg酶蛋白質(zhì)，優(yōu)選每kg干物質(zhì)0. I-IOmg酶蛋白質(zhì)，或更優(yōu)選每kg干物質(zhì)l-5mg 酶蛋白質(zhì)的濃度存在。介質(zhì)(medium)在一個(gè)實(shí)施方案中，酶降解包含飼料產(chǎn)物的介質(zhì)中的黃曲霉毒素。所述介質(zhì)優(yōu)選 是水性的并且可以是液體、糊劑(paste)或漿。為了形成合適的介質(zhì)，可以向飼料產(chǎn)物加入 水。酶以及(如果有關(guān)的話)介體可以分別或一起包含在適合施用于所述介質(zhì)的固態(tài)或液 態(tài)配制物中。
本發(fā)明的解毒效力依賴(lài)于例如介質(zhì)的氧的可用性、pH、溫度和緩沖液。例如，可以 在實(shí)際酶的相對(duì)活性為至少50 %、至少60 %、至少70 %、至少80 %或甚至至少90 %的pH值 進(jìn)行處理。同樣，例如，可以在實(shí)際酶的相對(duì)活性為至少50%、至少60%、至少70%、至少 80%或甚至至少90%的溫度進(jìn)行處理。相對(duì)活性是相對(duì)于觀察到最高活性的pH值的活性 計(jì)算的。介質(zhì)中的氧當(dāng)使用漆酶時(shí)，所需的氧的來(lái)源可以是來(lái)自大氣的氧或用于原位產(chǎn)生氧的氧前 體。來(lái)自大氣的氧會(huì)通常以充足的量存在。如果需要更多的02，可以加入額外的氧，例如， 作為加壓的大氣或作為加壓的純氧。介質(zhì)中的DH依賴(lài)于所采用的酶的特征及其他因素，所用介質(zhì)的PH應(yīng)通常在5-11的范圍內(nèi)，優(yōu) 選在6-10的范圍內(nèi)，例如6. 5-8.5。介質(zhì)中的溫度優(yōu)選使用接近于用于酶的最適溫度的反應(yīng)溫度。在本發(fā)明的多個(gè)實(shí)施方案中，應(yīng) 使用10-65°C，更優(yōu)選30-50°C范圍內(nèi)的溫度。處理持續(xù)時(shí)間處理的持續(xù)時(shí)間依賴(lài)于處理類(lèi)型、要處理的產(chǎn)物(item)的類(lèi)型、介質(zhì)的性質(zhì)(例 如溫度和PH)和所用的酶的類(lèi)型和量等。酶反應(yīng)持續(xù)進(jìn)行直到達(dá)到期望的結(jié)果，其后可以或可以不通過(guò)使酶失活(例如， 通過(guò)熱處理步驟)終止所述酶反應(yīng)。為了解毒的目的，可以使用范圍在1分鐘至1周的處理時(shí)間。在許多情況下，6-48 小時(shí)范圍內(nèi)的處理時(shí)間是合適的。通過(guò)本發(fā)明的方法，飼料產(chǎn)物中黃曲霉毒素的含量相對(duì)于采用該方法之前的水平 優(yōu)選減少到少于90%、少于80%、少于70%、少于60%、少于50%、少于40%、少于30%、少 于20%、少于15%、少于10%或甚至少于5%，如少于4、3、2或甚至1%。同一性?xún)蓚€(gè)氨基酸序列之間或兩個(gè)核苷酸序列之間的關(guān)聯(lián)性用參數(shù)“同一性”描述。就本發(fā)明而言，兩個(gè)氨基酸序列之間的同一性程度是使用如EMBOSS程序包 (EMBOSS :The European Molecular Biology Open Software Suite,Rice等，2000,Trends in Genetics 16 :276_277)(優(yōu)選版本3. 0. 0或更新的版本)的Needle程序中所執(zhí)行 的 Needleman-Wunsch 算法(Needleman 和 Wunsch，1970，J. Mol. Biol. 48 443-453)來(lái)確 定的。所用的任選參數(shù)是缺口產(chǎn)生罰分(gapopen penalty)為10，缺口延伸罰分(gap extension penalty)為 0· 5，和 EBL0SUM62 (BL0SUM62 的 EMBOSS 版本)取代矩陣。使用 Needle標(biāo)記為“l(fā)ongest identity"( “最長(zhǎng)同一性”)的輸出結(jié)果(使用-nobrief選項(xiàng)獲 得)作為百分比同一性并且該輸出結(jié)果是如下計(jì)算的(相同的殘基數(shù)χ100)/(比對(duì)的長(zhǎng)度-比對(duì)中的缺口總數(shù))就本發(fā)明而言，兩個(gè)脫氧核糖核苷酸序列之間的同一性程度是使用如EMBOSS程 序包(EMBOSS :The European Molecular Biology Open Software Suite, Rice 等，2000，見(jiàn) 上文)(優(yōu)選版本3. 0. 0或更新的版本)的Needle程序中所執(zhí)行的Needleman-Wunsch算法
7(Needleman和Wunsch，1970，見(jiàn)上文)來(lái)確定的。所用的任選參數(shù)是缺口產(chǎn)生罰分為10， 缺口延伸罰分為0. 5，和EDNAFULL (NCBI NUC4. 4的EMBOSS版本)取代矩陣。使用Needle 標(biāo)記為“l(fā)ongest identity” ( “最長(zhǎng)同一性”)的輸出結(jié)果(使用-nobrief選項(xiàng)獲得)作 為百分比同一性并且該輸出結(jié)果是如下計(jì)算的(相同的脫氧核糖核苷酸XlOO)/(比對(duì)的長(zhǎng)度-比對(duì)中的缺口總數(shù))同源序列術(shù)語(yǔ)“同源序列”定義為在使用指定序列進(jìn)行的tfasty檢索(Pearson，W. R.， 1999,于 Bioinformatics Methods and Protocols, S. Misener 禾口 S. A. Krawetz 編，185-219 頁(yè))中給出的E值(或期望得分)小于0.001的預(yù)測(cè)蛋白。術(shù)語(yǔ)“同源序列”也可以定義為與指定序列具有至少75 %、至少80 %、至少85 %、 至少90 %、至少95 %、至少97 %、至少98 %、至少99 %或甚至100 %同一性程度的序列。
實(shí)施例材料和方法塵角質(zhì)酶，其為SEQ ID NO :1所示的特異腐質(zhì)霉角質(zhì)酶中具有如下取代的變體 E6Q、G8D、Α14Ρ、N15D、Ε47Κ、S48E、R51P、Α88Η、Α91Η、A130V、E179Q 和 R189V。來(lái)自嗜熱毀絲霉的漆酶(MtL)，其具有在本文如SEQ ID NO 3所示的氨基酸序列。來(lái)自天藍(lán)色鏈霉菌的漆酶(ScL)，其具有在本文如SEQ ID NO :4所示的氨基酸序 列的漆酶。來(lái)自Polyporus pinsitus的漆酶(PpL)，其具有在本文如SEQ ID NO 5所示的氨
基酸序列。來(lái)自米曲霉的羧肽酶(CPY)，其具有在本文如SEQ ID NO 7所示的氨基酸序列。介體丁香酸甲酯(MeS)吩噻嗪-10-丙酸(PPT)測(cè)定法反應(yīng)在Eppendorf管中的600微升體積中進(jìn)行，其中包含黃曲霉毒素 30 μ M、乙酸鈉IOOmM和酶0. Img EP/mL。在涉及漆酶的反應(yīng)中，還包括0. 2mM介體。在對(duì) 照反應(yīng)中，將酶體積用等量H2O替代。將反應(yīng)在37°C溫育24小時(shí)，其后通過(guò)加入600 μ L的 100 μ M乙腈終止溶液來(lái)終止反應(yīng)。將反應(yīng)儲(chǔ)存在_20°C直到進(jìn)行層析分析。層析分析將樣品離心并通過(guò)HPLC-DAD如Smedsgaard (J. Chromatogr. A，1997，760，264-270)所述分析上清液的黃曲霉毒素。DAD掃描從200_600nm。在 Phenomenex (Torrance, CA) Luna C18(2) 10X 2mm ID，3 μ m，柱 2 上在 20 分鐘使用從 5%到 100%乙腈的線性梯度進(jìn)行分離。相對(duì)于對(duì)照計(jì)算殘余的黃曲霉毒素。實(shí)施例1表1.在用3種漆酶(MtL, PpL或ScL)和作為介體的MeS在pH 4. 5或pH 7. 0溫育24小時(shí)后殘余的黃曲霉毒素
權(quán)利要求
一種從植物材料產(chǎn)生飼料產(chǎn)物的方法，所述方法包括用降解黃曲霉毒素的酶處理所述植物材料以產(chǎn)生黃曲霉毒素水平降低的飼料產(chǎn)物。
2.一種在植物材料中降解黃曲霉毒素的方法，所述方法包括用酶處理所述植物材料。
3.前述權(quán)利要求中任一所述的方法，其中所述植物材料是發(fā)酵方法的醪液或濕磨方法 中的谷粒。
4.前述權(quán)利要求中任一所述的方法，其中所述植物材料是飼料產(chǎn)物。
5.前述權(quán)利要求中任一所述的方法，其中所述酶是漆酶。
6.前述權(quán)利要求中任一所述的方法，其中使用了介體。
7.前述權(quán)利要求中任一所述的方法，其中所述介體是丁香酸甲酯或吩噻嗪-10-丙酸。
8.前述權(quán)利要求中任一所述的方法，其中所述酶是角質(zhì)酶。
9.前述權(quán)利要求中任一所述的方法，其中所述角質(zhì)酶是具有SEQID NO :1所示的序列 或同源序列的角質(zhì)酶。
10.前述權(quán)利要求中任一所述的方法，其中所述角質(zhì)酶是SEQID NO :1所示角質(zhì)酶中 包含G8D、m5D、S48E、A88H、N91H、A130V和R189V取代中的一種或多種，優(yōu)選包括所有取代 的變體。
11.前述權(quán)利要求中任一所述的方法，其中所述是羧肽酶。
12.前述權(quán)利要求中任一所述的方法，其中所述羧肽酶是具有SEQIDN0:5、SEQ ID NO 6所示的序列或其同源序列的羧肽酶。
13.前述權(quán)利要求中任一所述的方法，其中所述飼料產(chǎn)物包括選自玉米、小麥、大麥、黑 麥、稻、高粱和黍的一種或多種組分。
14.前述權(quán)利要求中任一所述的方法，其中所述飼料產(chǎn)物包括釀酒酒糟(brewers spent grain) > ^ tg M f (distillers' spent grain) > ^ tg M M ff (distillers' wet grain)禾口 / 或蒸溜干酒糟(distillers' dried grain)。
15.酶用于降解飼料產(chǎn)物中的黃曲霉毒素的用途。
16.前述權(quán)利要求中的用途，其中所述酶選自下組角質(zhì)酶、漆酶和羧肽酶。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于受到真菌毒素黃曲霉毒素污染的飼料產(chǎn)物解毒的方法。
文檔編號(hào)A23K1/165GK101959425SQ200980107768
公開(kāi)日2011年1月26日 申請(qǐng)日期2009年3月5日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月5日
發(fā)明者伯西·H·索倫森, 安德斯·維克索-尼爾森 申請(qǐng)人:諾維信公司