專利名稱：黑青霉及其代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種微生物及其代謝產(chǎn)物的培養(yǎng)生產(chǎn)方法。
背景技術：
黑青霉(Penicillium nigricans Bainier)是一種青霉屬絲狀真菌，天然存在于 土壤中，能抑制引起多種植物枯萎病等病害發(fā)生的尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum)的生 長繁殖，是西瓜枯萎病、黃瓜枯萎病、番茄枯萎病、辣椒枯萎病等多種植物枯萎病病原菌的 天然拮抗微生物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種黑青霉及其代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)方法，通過工業(yè)化生產(chǎn)，大
量獲取黑青霉菌體、孢子及其代謝產(chǎn)物的人工培養(yǎng)方法。 本發(fā)明的目的是通過以下措施實現(xiàn)的 黑青霉及其代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)方法，其特征是生產(chǎn)過程如下 將重量份為0-13%豆餅粉、0-6.8%菜子餅粉、0. 5-6%小麥粉、0_4%硫酸銨、 0-0. 2%硫酸鎂、0_0. 3%氯化鈣、0_0. 4%磷酸氫二鉀，上述原料投入發(fā)酵罐內(nèi)，以自來水配 制培養(yǎng)基，調(diào)整ra為4. 5 5. 5，保持發(fā)酵罐內(nèi)溫度為12rC，壓力為0. 12MPa，滅菌30 45分鐘; 發(fā)酵罐降溫，使罐內(nèi)培養(yǎng)基質(zhì)溫度為32 35t:后，接種黑青霉，接種量占罐內(nèi)培 養(yǎng)基的重量比為1 8. 5% ; 接種后，保持發(fā)酵罐壓力為0.03 0. 1Mpa，連續(xù)向罐內(nèi)通入無菌空氣，通氣量保 持在0. 4 0. 5VVM ; 液體培養(yǎng)時間約為3 5天，結束后，收集活菌及代謝產(chǎn)物，再進行干燥、濃縮、吸
附、蒸發(fā)，添加吸附劑，在膠體磨中碾磨，制得產(chǎn)品。 發(fā)酵罐壓力控制為前期0. 04Mpa，中期0. 1Mpa，后期0. 03Mpa。 本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比具有以下優(yōu)點 黑青霉在生長過程中與病原菌爭奪營養(yǎng)和空間，并分泌拮抗物質(zhì)直接抑制尖孢鐮 刀菌的生長，從而控制植物病害的發(fā)生，是一種生態(tài)有益微生物。由于其能在土壤中存活多 年，孢子的抗逆性很強且能在大田土壤中重復循環(huán)增殖，施用到植物和土壤后，能較長時間 的保持對植物病原菌尖孢鐮刀菌產(chǎn)生抑制作用，因此是有很有前途的微生物源農(nóng)藥。可用 于防治農(nóng)田葫蘆科、茄科、禾本科等作物的枯萎病，有獨特的效果，用量省、成本低、效果好、 專業(yè)性強、污染少、不傷害天敵、環(huán)境友好，因此是農(nóng)林牧及園藝上的優(yōu)良生物農(nóng)藥，有利于 人類可持續(xù)發(fā)展和生態(tài)平衡。 本發(fā)明生產(chǎn)方法，操作簡便，生產(chǎn)過程不要高溫、高壓和易燃易爆原輔材料，也不 產(chǎn)生三廢，同時利用現(xiàn)代微生物工藝技術能很容易實現(xiàn)室內(nèi)工業(yè)化、規(guī)模化生產(chǎn)，生產(chǎn)條件 和生產(chǎn)過程容易人工調(diào)控，質(zhì)量容易控制，產(chǎn)品能進行連續(xù)化、批量化生產(chǎn)，特別是作為生物農(nóng)藥使用的黑青霉制劑能大大降低生產(chǎn)和使用成本，提高產(chǎn)品單位效價，而且不同于一
般的制劑類生物農(nóng)藥，該制劑由活菌、孢子和代謝產(chǎn)物組成，施用到土壤和植物上后，活菌
和孢子能繼續(xù)生長繁殖，并抑制病原菌，具有很高的經(jīng)濟價值和良好的應用前景。 為了提高生產(chǎn)率，本發(fā)明還對各類步驟工藝選擇了適宜的相應條件，利于黑青霉
的生長。 生產(chǎn)方法簡便，生產(chǎn)過程不需要高溫、高壓、易燃易爆原輔材料，無三廢排放；產(chǎn) 品為培養(yǎng)基和活菌體、活孢子及次生代謝產(chǎn)物組成，不是提取的純制劑，不需要提取醇化設 備，節(jié)省投資，同時產(chǎn)品使用到植物和土壤上后，活菌和活孢子能循環(huán)生長繁殖，持續(xù)控制 土傳病害。本發(fā)明中接種所使用的黑青霉可以從有關高等院校、科研院所或科技公司購買。
具體實施例方式
現(xiàn)舉兩個實施例，進一步說明。
液體培養(yǎng)法 1、將0-13 %豆餅粉、0-6. 8 %菜子餅粉、0. 5-6 %小麥粉、0_4 %硫酸銨、0-0. 2 % 硫酸鎂、0-0.3%氯化鈣、0-0.4%磷酸氫二鉀等上述原料投入發(fā)酵罐內(nèi)，加入足量水份， 使培養(yǎng)料含水量約為80-99 % ，調(diào)整ra為4. 5-5. 5 ，保持發(fā)酵罐內(nèi)溫度為121°C ，壓力為 0. 12MPa，滅菌30-45分鐘。 2、發(fā)酵罐降溫，使罐內(nèi)培養(yǎng)基質(zhì)溫度為35t:后，接種黑青霉，接種量占罐內(nèi)培養(yǎng)基 的重量比為1_8%。 3、接種后，保持發(fā)酵罐壓力為0. 04MPa(前期)、0. lMPa(后期)、0. 03MPa(后期)， 連續(xù)向罐內(nèi)通入無菌空氣，通氣量保持在0. 4-0. 5VVM。 4、液體培養(yǎng)時間約為3 5天，結束后，可進行干燥、濃縮、吸附、蒸發(fā)、膠體磨碾 磨，添加占產(chǎn)品總重10%吸附劑(300-400目碳酸鈣)和占產(chǎn)品總重10%載體(粘土)及 不同助劑(1_2%洗衣粉)，在膠體磨中碾磨，制成產(chǎn)品。
權利要求
黑青霉及其代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)方法，其特征是生產(chǎn)過程如下將重量份為0-13％豆餅粉、0-6.8％菜子餅粉、0.5-6％小麥粉、0-4％硫酸銨、0-0.2％硫酸鎂、0-0.3％氯化鈣、0-0.4％磷酸氫二鉀，上述原料投入發(fā)酵罐內(nèi)，以自來水配制培養(yǎng)基，調(diào)整PH為4.5～5.5，保持發(fā)酵罐內(nèi)溫度為121℃，壓力為0.12MPa，滅菌30～45分鐘；發(fā)酵罐降溫，使罐內(nèi)培養(yǎng)基質(zhì)溫度為32～35℃后，接種黑青霉，接種量占罐內(nèi)培養(yǎng)基的重量比為1～8％；接種后，保持發(fā)酵罐壓力為0.03～0.1Mpa，連續(xù)向罐內(nèi)通入無菌空氣，通氣量保持在0.4～0.5VVM；培養(yǎng)過程中不斷進行攪拌，攪拌速度初期30-50轉/分，中期80-100轉/分，后期30-40轉/分。液體培養(yǎng)時間約為3～5天，結束后，收集活菌及代謝產(chǎn)物，再進行干燥、濃縮、吸附、蒸發(fā)，添加吸附劑，在膠體磨中碾磨，制得產(chǎn)品。
2. 根據(jù)權利要求1所述的生產(chǎn)方法，其特征是接種后，控制發(fā)酵罐壓力控制為前期 0. 04Mpa，中期0. 1Mpa，后期0. 03Mpa。
3. 根據(jù)權利要求l所述的生產(chǎn)方法，其特征是所述吸附劑為碳酸鈣、粘土或兩者的混 合，吸附劑的添加量為產(chǎn)品總重的10-60 % 。
4. 根據(jù)權利要求1所述的生產(chǎn)方法，其特征是制得產(chǎn)品中還可以添加占產(chǎn)品總重 1-2%的助劑。
5. 根據(jù)權利要求4所述的生產(chǎn)方法，其特征是所述助劑為洗衣粉。
全文摘要
本發(fā)明提供一種黑青霉及其代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)方法，通過工業(yè)化生產(chǎn)，大量獲取黑青霉菌體、孢子及其代謝產(chǎn)物的人工培養(yǎng)方法。將培養(yǎng)基置入培養(yǎng)容器內(nèi)，滅菌后，接種一定量的黑青霉，在一定的溫度、濕度、壓力、pH條件下，通以無菌空氣，經(jīng)一段時間培養(yǎng)后，將培養(yǎng)基質(zhì)連同黑青霉菌體、孢子和次生帶產(chǎn)物一起收集，制得產(chǎn)品。該生產(chǎn)方法簡便，生產(chǎn)過程不需要高溫、高壓、易燃易爆原輔材料，無三廢排放。
文檔編號A01N63/04GK101735953SQ20091002593
公開日2010年6月16日 申請日期2009年3月13日 優(yōu)先權日2009年3月13日
發(fā)明者吳洪生 申請人:南京信息工程大學