專利名稱：抗糖化方法及組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于治療或預(yù)防人類和動(dòng)物的糖化事件及相關(guān)病變的組合物。更特別 的是，本發(fā)明涉及具有抗糖化活性的組合物。
背景技術(shù)：
糖化或非酶糖化包括蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或核酸的氨基與糖的醛基或酮基反應(yīng)以產(chǎn)生修 飾的氨基并且最終生成高級(jí)糖化終產(chǎn)物(AGE)。糖化可為已知為Amadori反應(yīng)、SchifT堿反 應(yīng)和Maillard反應(yīng)的一系列體內(nèi)慢反應(yīng)的第一步，并且產(chǎn)生高級(jí)糖化終產(chǎn)物(AGE)。盡管 糖化在體內(nèi)進(jìn)行緩慢，但是糖化產(chǎn)物可具有反應(yīng)性或可具有長(zhǎng)期持續(xù)的效應(yīng)，并且AGE的 出現(xiàn)與衰老和病理狀態(tài)相關(guān)。在其中存在大量可用于反應(yīng)的糖分子的生理狀態(tài)下，例如那 些諸如糖尿病的糖水平增高的癥狀，糖化效應(yīng)可更為顯著。一些AGE為良性的，但是其它的 更具反應(yīng)性，并且牽涉許多衰老相關(guān)的慢性疾病，所述疾病例如II型糖尿病、心血管疾病、 阿耳茨海默病、癌癥、外周神經(jīng)病和諸如耳聾和失明的其它感覺缺失。糖化也在脂質(zhì)和RNA/ DNA修飾中起作用。糖化的底物從體內(nèi)緩慢清除，因?yàn)槟I清除率僅為約30%。這一事實(shí)用于提供測(cè)定 糖尿病中糖水平的方法。紅細(xì)胞具有120天的壽命并且簡(jiǎn)單地可用于測(cè)量近期存在的糖化 產(chǎn)物增加。糖化的血紅蛋白水平(也稱作HbAlc)被確定，并指示發(fā)生于人體的糖化水平。目前，氨基胍通過與糖反應(yīng)并阻斷Amadori反應(yīng)而用于減緩糖化。氨基胍可體外 和體內(nèi)還原葡萄糖衍生的AGE。親核胼化合物氨基胍，目前被研究用作糖尿病中AGE并發(fā)癥 的治療。抑制AGE形成或破壞已經(jīng)形成的AGE的其他藥物(例如，AGE阻斷劑)也在積極 研究中。例如，據(jù)報(bào)道AGE阻斷劑用于導(dǎo)致收縮期高血壓和嚴(yán)重心力衰竭改善的血管無彈 性的逆轉(zhuǎn)。糖尿病是由缺乏胰島素導(dǎo)致的代謝病癥，并且通常通過血糖水平的增加而診斷。 所述病癥以胰島素依賴性組織對(duì)葡萄糖攝入降低為特征。所述病癥可通過胰島素注射控 制，但是長(zhǎng)期的糖尿病并發(fā)癥包括眼部病變(白內(nèi)障形成和視網(wǎng)膜病)、腎病變(腎病)、神 經(jīng)元病變(神經(jīng)病)和血管病變(血管病和動(dòng)脈粥樣硬化)。糖化在糖尿病相關(guān)的病變中 起作用。研究表明AGE可在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展中起作用。單核細(xì)胞具有AGE特異性受體 (RAGE)并且被釋放的細(xì)胞因子刺激而響應(yīng)。血管壁的輕度損傷可暴露內(nèi)皮下AGE，提高單 核細(xì)胞的滲透并且引起動(dòng)脈粥樣硬化損傷的發(fā)展。脂蛋白循環(huán)也可以經(jīng)受糖化，然后可以 比非糖化脂蛋白更快的速率被上皮細(xì)胞吸收?？傻挚笰GE形成的長(zhǎng)期效應(yīng)以及預(yù)防或治療AGE相關(guān)病變的組合物的攝入是有益的。在諸如飲料或增甜劑組合物的易于消耗的產(chǎn)品中提供所述化合物對(duì)于預(yù)防或治療糖化 相關(guān)癥狀是有利的。概述本發(fā)明包括用于糖化治療和預(yù)防的方法和組合物。本發(fā)明的組合物包括用于抑制 人類或動(dòng)物的糖化反應(yīng)，并預(yù)防和治療糖化相關(guān)癥狀的礦物質(zhì)提取物組合物。本發(fā)明的組 合物包括在此描述的礦物質(zhì)提取物組合物、羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物和羅漢果苷組 合物。本發(fā)明的方法包括治療或預(yù)防糖化相關(guān)癥狀的方法，包括提供有效量的礦物質(zhì)提取 物組合物、羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物以預(yù)防或減少發(fā)生于人類或 動(dòng)物的糖化事件。礦物質(zhì)提取物組合物、羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物和/或羅漢果苷組合物，單 獨(dú)地或與其它組分組合地提供或施用于受治療者(人類或動(dòng)物)以形成抗糖化組合物。例 如，本發(fā)明的礦物質(zhì)提取物組合物、羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物可 與食品或飲料結(jié)合以提供可被受治療者消耗的抗糖化組合物。有效量的抗糖化組合物，例 如，抑制諸如AGE的糖化產(chǎn)物的形成，并且預(yù)防或治療體內(nèi)與糖化事件相關(guān)的癥狀。所述糖 化相關(guān)癥狀包括但不限于糖尿病、心血管疾病、阿耳茨海默病、癌癥、外周神經(jīng)病和諸如耳 聾、腎功能不全和失明的其它感覺缺失。本發(fā)明的組合物包括與具有甜味或感覺具有甜味 的化合物或組合物結(jié)合的礦物質(zhì)提取物組合物、羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果 苷組合物以形成抗糖化增甜劑組合物。


圖1為顯示三種礦物質(zhì)提取物組合物在抗糖化測(cè)定中的結(jié)果的圖。圖2A和2B為顯示礦物質(zhì)提取物組合物對(duì)線粒體代謝的效應(yīng)的圖。A 所有細(xì)胞群 體中線粒體活性增加，B 基于每個(gè)細(xì)胞的線粒體活性增加。圖3為顯示礦物質(zhì)提取物組合物對(duì)人類細(xì)胞產(chǎn)生I型膠原的效應(yīng)的圖。圖4為顯示體外礦物質(zhì)提取物組合物對(duì)金屬蛋白酶活性的圖。圖5為顯示本發(fā)明的組合物的膠原刺激活性的圖。圖6A和6B為顯示本發(fā)明的組合物的代謝刺激活性的圖。圖7為顯示本發(fā)明的組合物的糖化抑制活性的圖。詳述本發(fā)明包括治療或預(yù)防與諸如糖化的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或核酸的糖化分子的存在相關(guān) 的癥狀的并發(fā)癥和病變的組合物和方法。糖化相關(guān)的癥狀包括在人體或動(dòng)物體內(nèi)由于糖 化的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸的存在引起的或與之相關(guān)的癥狀，并且包括但不限于炎性響應(yīng)、動(dòng) 脈粥樣硬化、阿耳茨海默病、糖尿病、癌癥、心血管疾病和其它AGE-以及RAGE-相關(guān)的癥狀。 AGE(高級(jí)糖化終產(chǎn)物)及其受體RAGE(高級(jí)糖化終產(chǎn)物的受體)牽涉如心血管疾病和糖尿 病的多種癥狀。AGE引起多種長(zhǎng)期細(xì)胞功能缺失和最終的疾病狀態(tài)。實(shí)質(zhì)上，糖-蛋白質(zhì)復(fù) 合物成為化學(xué)交聯(lián)的，并且降低正常細(xì)胞的功能，同時(shí)促進(jìn)自由基損傷。本發(fā)明包括治療或預(yù)防糖化相關(guān)癥狀的組合物和方法。本發(fā)明的組合物包括在此 所述的礦物質(zhì)提取物組合物、羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物和羅漢果苷組合物。本發(fā)明 方法包括提供有效量的礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物以預(yù)防或減少在受治療者中發(fā)生的糖化事件，或者以治療或預(yù)防人類或動(dòng)物的糖 化相關(guān)癥狀。包括礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合 物的組合物在此被稱為抗糖化組合物，但是該引用并非意在限制所述組合物的活性。高級(jí)糖化終產(chǎn)物(AGE)已經(jīng)涉及為影響健康、健康狀態(tài)和壽命的關(guān)鍵因素，尤其 是與炎癥和其它疾病狀態(tài)相關(guān)的關(guān)鍵因素。糖化為體內(nèi)導(dǎo)致AGE形成的一系列復(fù)雜非酶反 應(yīng)的第一步，所述非酶反應(yīng)已知為Amadori反應(yīng)、Schiff堿反應(yīng)和Maillard反應(yīng)。某些反 應(yīng)性AGE或前體AGE的特征為蛋白質(zhì)的共價(jià)交聯(lián)的形成，這改變它們的結(jié)構(gòu)和功能，并且被 發(fā)現(xiàn)于細(xì)胞基質(zhì)、基底膜、紅細(xì)胞和血管壁組分中。AGE其它主要的特性涉及它們與多種細(xì) 胞表面AGE-結(jié)合受體(RAGE)的相互作用，其導(dǎo)致活化和助氧化事件、促炎性事件。大量證據(jù)表明AGE是幾乎所有糖尿病并發(fā)癥的重要的致病介質(zhì)，所述糖尿病并發(fā) 癥通常被分為微血管病和大血管病。例如，在糖尿病患者的視網(wǎng)膜血管中發(fā)現(xiàn)AGE，并且 AGE的水平與血清中AGE水平以及視網(wǎng)膜病的嚴(yán)重性相關(guān)?，F(xiàn)在AGE涉及眾多與年齡相關(guān) 的退化，從冠狀動(dòng)脈疾病至皮膚老化。一些AGE為良性的，但是其它AGE比衍生它們的糖 更具反應(yīng)性，并且涉及許多與年齡相關(guān)的慢性疾病，諸如糖尿病，其中β細(xì)胞被損傷；心 血管疾病，其中內(nèi)皮、纖維蛋白原和膠原被損傷；阿耳茨海默病，其中淀粉樣蛋白是發(fā)展成 AGE的反應(yīng)的副產(chǎn)物；釋放丙烯酰胺和其它副產(chǎn)物的癌癥；外周神經(jīng)病和其它感覺缺失，諸 如由脫髓鞘作用產(chǎn)生的耳聾、腎功能不全和由于微血管損傷發(fā)生的失明。這一疾病的范圍 表明高級(jí)糖化終產(chǎn)物干擾整個(gè)身體的分子和細(xì)胞功能的作用的程度，以及與AGE相關(guān)的其 它副作用的程度，所述副作用例如高度氧化的副產(chǎn)物，諸如過氧化氫的釋放。糖化底物從體內(nèi)排出速度慢，并且腎清除率因子僅為約30%。結(jié)果，長(zhǎng)壽命的細(xì) 胞(如神經(jīng)元)、長(zhǎng)期作用的蛋白質(zhì)(如眼部晶狀體和膠原)和DNA可隨著時(shí)間而累積嚴(yán)重 的損傷。如腎小球中的代謝活性細(xì)胞、眼部的視網(wǎng)膜細(xì)胞和胰腺中的β細(xì)胞(產(chǎn)生胰島素 的)也具有受損的高度危險(xiǎn)。血管上皮細(xì)胞被糖化直接損傷，這與動(dòng)脈粥樣硬化有關(guān)。動(dòng)脈 粥樣硬化斑塊易于在高血流區(qū)域累積，因?yàn)樵谶@些位點(diǎn)，存在的糖分子和糖化終產(chǎn)物增加。 糖化損傷產(chǎn)生血管壁中膠原的硬化，并且產(chǎn)生高血壓。糖化也引起血管壁的削弱，這可引起 微動(dòng)脈瘤或大動(dòng)脈瘤，其如果在腦部形成，可轉(zhuǎn)而引起中風(fēng)。除了內(nèi)源形成的AGE之外，AGE也可從外源來源導(dǎo)入體內(nèi)。外源AGE可作為“飲食 的”或“預(yù)形成的”AGE而被消耗。這些在當(dāng)糖與蛋白質(zhì)及脂肪一起烹調(diào)時(shí)形成。例如，煙 草煙霧為公知的AGE的外源來源。吸煙時(shí)，煙草中的各種前-AGE的燃燒產(chǎn)生反應(yīng)性的和有 毒的AGE。血清AGE或LDL-聯(lián)AGE在吸煙者體內(nèi)顯著升高。結(jié)果，據(jù)報(bào)道糖尿病吸煙者的 動(dòng)脈和眼部晶狀體中顯示較高的AGE沉積。氨基胍，AGE形成的抑制劑，已經(jīng)顯示可在糖尿病動(dòng)物中預(yù)防視網(wǎng)膜病。另外，AGE 在糖尿病患者的外周神經(jīng)中累積，并且抗-AGE劑的使用提高神經(jīng)傳導(dǎo)速率并且改善神經(jīng) 元血流異常。動(dòng)脈粥樣硬化在糖尿病患者中顯著被加速，并且伴隨更高風(fēng)險(xiǎn)的心血管性死亡和 腦血管性死亡。臨床前研究和臨床研究已經(jīng)表明AGE在粥樣硬化病變的形成和發(fā)展中起到 重要作用。增加的AGE在糖尿病血管組織上的累積與上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞功 能的變化相關(guān)。另外，AGE可以一種意在使LDL膽固醇易于被氧化并在管壁內(nèi)沉積的方式 修飾LDL膽固醇，導(dǎo)致劃痕的形成，并且最后導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣化。AGE-交聯(lián)形成產(chǎn)生動(dòng)脈硬化和大血管彈性的喪失。AGE在正常體內(nèi)以恒定但是緩慢的速率形成，起始于早期胚胎發(fā)育，并且隨著時(shí)間 累積。然而，他們的形成隨著衰老或暴露于諸如葡萄糖、果糖和半乳糖的糖源的增加而顯著 加速。令人驚奇的發(fā)現(xiàn)，在此所述的礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組 合物或羅漢果苷組合物顯示可與氨基胍相當(dāng)或比其更好的抗糖化性質(zhì)。礦物質(zhì)涉及體內(nèi)大 量的復(fù)雜反應(yīng)，大多數(shù)反應(yīng)依賴于礦物質(zhì)的化學(xué)特性。礦物質(zhì)和電解質(zhì)保持體液平衡和酸 堿平衡，而且它們?cè)谠S多酶催化反應(yīng)中具有作為輔因子的化學(xué)活性。本發(fā)明的礦物質(zhì)提取 物組合物或羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物可包括干粉、液體制劑、食 品組合物、化妝品組合物和通過注射施用的組合物。組合物可被添加于第二組合物中以形 成結(jié)合的組合物，以將發(fā)現(xiàn)于礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅 漢果苷組合物中的抗糖化活性提供給第二組合物。本發(fā)明的組合物包括礦物質(zhì)提取物組合物。生產(chǎn)所述組合物的方法教導(dǎo)于美國(guó)專 利公布第2005/0118279號(hào)中，其全部?jī)?nèi)容在此并入。簡(jiǎn)要地，為了生產(chǎn)本發(fā)明的礦物質(zhì)提 取物組合物，收集來自合適的地點(diǎn)的包含描述于美國(guó)專利公開第2005/0118279號(hào)中的元 素的土壤，并且使其進(jìn)入其中描述的水溶性提取過程中以產(chǎn)生包含礦物質(zhì)元素的液體礦物 質(zhì)元素組合物，該組合物可被干燥以產(chǎn)生干粉礦物質(zhì)元素組合物。液體礦物質(zhì)提取物組合物和干粉礦物質(zhì)提取物組合物包括描述于美國(guó)專利公開 第2005/0118279號(hào)中的綜合礦物質(zhì)組合物中的礦物質(zhì)元素。按在此描述的步驟生產(chǎn)的液 體礦物質(zhì)提取物組合物和干粉礦物質(zhì)提取物組合物通常包含最少8種常量礦物質(zhì)元素和 最少60種微量礦物質(zhì)元素。也對(duì)液體礦物質(zhì)提取物組合物和干燥礦物質(zhì)提取物組合物進(jìn)行物理學(xué)測(cè)試和分 析。典型的液體礦物質(zhì)提取物組合物的分類可以顏色分類并可為從黃色至琥珀褐色，并含 有按重量計(jì)至10%之間的礦物質(zhì)元素，或按重量計(jì)3-5%的礦物質(zhì)元素。液體礦物質(zhì) 提取物組合物為酸性，具有2. 5-4. 5或2. 5-3. 5的pH范圍。液體礦物質(zhì)提取物組合物可被 干燥以產(chǎn)生無水粉末。所述無水粉末的顏色范圍可從淡米白色至褐色，或從黃色至金琥珀 色，在諸如親脂性液體(油和脂肪)的非極性溶劑中不溶，在醇中不溶，并且以按重量計(jì)
至5%的濃度或按重量計(jì)3-5%的濃度在水和水醇(hydro-alcoholic)溶液中易溶，但不膨 脹。干粉以過飽和溶液的形式部分溶解于極性溶劑中或能夠部分懸浮于極性溶劑中。以在此描述的步驟生產(chǎn)的液體礦物質(zhì)提取物組合物和干燥礦物質(zhì)提取物組合物 可含有最少8種常量礦物質(zhì)元素和最少60種微量礦物質(zhì)元素。微量礦物質(zhì)元素包括痕量 和稀土族礦物質(zhì)元素。例如，干燥礦物質(zhì)提取物組合物可含有常量礦物質(zhì)元素鈣、氯、鎂、錳、磷、鉀、硅 和鈉，濃度范圍按重量百分比計(jì)從0.0001-20. 00%，按重量百分比計(jì)從0. 001% -10%、從 0. 至 20%、從 至 20%、從 至 10%、從 5%至 10%、從 10-20%、從 10%至 15%、 從15 %至20 %、從1 %至5 %、從5 %至15 % ；并且優(yōu)選地含有至少六十種微量礦物質(zhì)元素， 濃度范圍按重量百分比計(jì)從0. 00001-3. 0%，按重量百分比計(jì)從0. 0001-1%、從0. 001%至 1%、從0.01%至3%、從0.1%至3.0%。微量礦物質(zhì)元素包括鋁、銻、砷、鋇、鈹、鉍、硼、溴、 鎘、鈰、銫、鉻、鈷、銅、鏑、鉺、銪、氟、釓、金、鉿、鈥、碘、銦、銥、鐵、鑭、鉛、鋰、镥、汞、鉬，釹、鎳、鈮、鈀、鉬、鐠、錸、銠、銣、釕、釤、鈧、硒、銀、鍶、硫、鉭、鋱、碲、鉈、釷、銩、錫、鈦、鎢、釩、
鐿、釔、鋅和鋯。用于生產(chǎn)本發(fā)明的礦物質(zhì)提取物組合物提取過程通常不將導(dǎo)入任何礦物質(zhì)作為 提取過程的一部分。因此，原材料，按提取方法處理的原始粘土或其它土壤，很可能包括與 多種可探測(cè)礦物質(zhì)一起自然富集的自然存在的硅酸鋁和其它金屬硅酸鹽。如果礦物質(zhì)元素 在含水液體提取物中被鑒定和定量，通常，由于干燥過程或體積減小，該元素在干粉提取物 中會(huì)被鑒定并定量成更高的濃度。例如，使用美國(guó)專利申請(qǐng)系列號(hào)11/725，729 (通過引用在此并入)所述的土壤和 提取方法所生產(chǎn)的提取物組合物，使用鑒定和定量干燥形式和液體形式的礦物質(zhì)提取物組 合物的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，通過進(jìn)行化學(xué)分析的獨(dú)立分析測(cè)試而檢測(cè)。采用諸如滴定、電感耦合等 離子體、質(zhì)譜和原子吸收設(shè)備的科學(xué)上可接受的并且標(biāo)準(zhǔn)的設(shè)備，在Himtsville，Ala.的 Teledyne Wah Chang實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的測(cè)試結(jié)果產(chǎn)生含水礦物質(zhì)提取物組合物和干燥礦物質(zhì) 提取物組合物的礦物質(zhì)元素定量數(shù)據(jù)，列于表I中，所述干燥礦物質(zhì)提取物組合物是當(dāng)所 述含水礦物質(zhì)提取物組合物被干燥至粉末時(shí)產(chǎn)生。表I 礦物質(zhì)提取物組合物 列于上表I中的礦物質(zhì)提取物組合物為從自然存在的土壤中產(chǎn)生，所述土壤的分 析反映在下表II中。
表II 自然存在的土壤的分析 一旦得到所需要的自然存在的土壤或土壤組合物，土壤經(jīng)受美國(guó)專利系列號(hào) 11/725，729中所述的提取過程。在本發(fā)明的實(shí)施中，優(yōu)選粘質(zhì)土、粘質(zhì)土混合物或粘質(zhì)土與 風(fēng)化褐煤的混合物。優(yōu)選該土壤組合物的一個(gè)原因在于該土壤可具有高含量的在本發(fā)明的 實(shí)施中認(rèn)定為重要的礦物質(zhì)元素。如所述，優(yōu)選根據(jù)本發(fā)明的礦物質(zhì)提取物組合物包含至 少八種常量礦物質(zhì)元素和至少六十種微量礦物質(zhì)元素。確定粘質(zhì)土是否可作為可接受的原始材料的第一步為確定砷、鉛、汞和鎘是否各自以可接受的低濃度存在。本發(fā)明的一個(gè)方面包括具有這些元素中的每一種的濃度的量比 下表III中所示濃度低的組合物。表III有毒元素的最高要求濃度 表IV自然存在的土壤中所選的稀土元素的優(yōu)選最低濃度 列于表IV中的元素濃度可根據(jù)需要變化，但是應(yīng)注意，需要所述元素至少具有表 IV所示的每個(gè)元素的濃度。本發(fā)明的組合物的原始材料土壤可包含或不包含列于表IV的稀土元素之一或全部。例如，可在原始材料土壤中發(fā)現(xiàn)濃度為至少ISppm的鑭和濃度為至 少3.7ppm的鈧。也可發(fā)現(xiàn)钷和釓的濃度。本發(fā)明的組合物的原始材料土壤可包含或不包 含至少10種稀土元素，至少12種或更多的稀土元素以及可選擇包括鑭和鈧。盡管不希望 被局限于任何特定的理論，理論上，可以認(rèn)為在土壤中和在衍生于原始材料土壤的礦物質(zhì) 提取物組合物中存在的稀土元素，當(dāng)被身體攝入或透皮吸收時(shí)，用于提高礦物質(zhì)提取物組 合物的功效。如美國(guó)專利申請(qǐng)系列號(hào)11/725，729所教導(dǎo)，提供或組合粘質(zhì)土或粘土和土壤混 合物以產(chǎn)生礦物質(zhì)元素后，原始材料土壤就經(jīng)受美國(guó)專利申請(qǐng)系列號(hào)11/725，729中所教 導(dǎo)的提取過程以產(chǎn)生包含在本發(fā)明的抗糖化組合物中的礦物質(zhì)提取物組合物。通常，原始材料土壤的提取使用下列步驟。通常使用諸如逆向滲透的已知方法純 化的水在混合池中被加入到檸檬酸和原始材料土壤中。檸檬酸(或磷酸或其它可食用的 酸)或其組合物的量可在所用水的重量的0. 25%至7. 5%的范圍內(nèi)，但是通常在1. 0%至 2.0%的范圍內(nèi)。水、檸檬酸和原始材料土壤形成泥漿，并且將其溫和攪拌(例如，葉片以一 至十RPM緩慢旋轉(zhuǎn))約一小時(shí)，盡管攪拌時(shí)間可根據(jù)需要變化。將池中的泥漿導(dǎo)向沉降池以 使微粒向下沉出泥漿。泥漿在沉降池中保持任何需要的時(shí)間長(zhǎng)度，在約一至十天的范圍內(nèi)。 隨著泥漿在沉降池中保持的時(shí)間長(zhǎng)度的增加，可從池中抽出并輸送至冷卻池或濃縮器中的 液體量增加，并且沉于池底的固體量增加。可使用添加劑以促進(jìn)固體從泥漿中沉積。當(dāng)泥 漿停留在沉降池需要的一段時(shí)間后，將液體從池中抽至冷卻池中，或直接至濃縮器中。池底 的固體可被再處理、棄去或可以其他方式利用。冷卻池將來自沉降池中的液體冷卻至40-70 (5至21°C )的溫度范圍內(nèi)。冷卻的液 體被輸送到濃縮器。濃縮器將水從冷卻的液體中移除。這可使用諸如薄層復(fù)合逆向滲透系統(tǒng)或蒸發(fā)的 已知方法完成。所產(chǎn)生的包含從原始泥漿中提取的礦物質(zhì)的濃縮液體，按是否需要儲(chǔ)存或 進(jìn)一步處理而注入冷卻池或干燥器。冷卻池將濃縮液體冷卻至40至70 (5至20°C )以防止 酵母和霉菌生長(zhǎng)。由濃縮器產(chǎn)生的濃縮液體具有約為3的pH。濃縮液體通常包括按重量計(jì)從百分之 三至百分之十二的礦物質(zhì)元素，即如果礦物質(zhì)元素從濃縮液體中分離，產(chǎn)生的干燥材料具 有相當(dāng)于濃縮液體重量的約3%至12%的重量。濃縮液體的pH通過改變添加至混合池的 檸檬酸或其它可食用酸和/或堿性或酸性土壤的量來調(diào)節(jié)，并且在PH 2. 0至pH 5. 0的范 圍內(nèi)，優(yōu)選為PH 2.5至？!1 3.5。濃縮液體(以及從其中產(chǎn)生的干燥粉末或其它材料)的 PH優(yōu)選為低于pH 4.5?？商峁舛戎辽贋?8%的礦物質(zhì)提取物用于注射入干燥器。可利 用任何所需的干燥系統(tǒng)，例如可噴入濃縮液體以產(chǎn)生粉末的塔。本發(fā)明的抗糖化組合物可包括諸如表1中所示的礦物質(zhì)提取物組合物，或羅漢果 苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物，其與第二組分結(jié)合或混合。礦物質(zhì)提取物組 合物具有產(chǎn)生能量和膠原生長(zhǎng)刺激的活性。礦物質(zhì)提取物組合物的其它活性可在美國(guó)專利 申請(qǐng)系列號(hào)10/725，729,11/472, 536和11/638,311中發(fā)現(xiàn)，它們每個(gè)的全部?jī)?nèi)容在此并 入?？固腔M合物的第二組分可為液體組分或干燥組分，以形成液體組合物或干燥組合物。 液體抗糖化組合物包括干燥粉末形式或液體形式的礦物質(zhì)提取物組合物、羅漢果苷/礦物 質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物，和液體，所述液體包括但不限于水(可以是蒸餾水或碳酸水)和其它即用飲用或即用混合飲料，所述飲料包括但不限于咖啡、茶、能量飲料、果 汁、牛奶和植物液體，諸如大豆制品、甘蔗制品、可可豆制品、蛋白質(zhì)飲料、代餐飲料和諸如 啤酒和紅酒的含酒精制品。液體抗糖化組合物可包括與礦物質(zhì)提取物組合物結(jié)合的藥物組 合物、營(yíng)養(yǎng)組合物或食品補(bǔ)充組合物。例如，抗糖化組合物可包括與礦物質(zhì)提取物組合物、 羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物結(jié)合的液體的藥學(xué)上可接受的糖漿、賦 形劑、填充劑或其它已知的藥物制劑。作為進(jìn)一步的實(shí)例，抗糖化組合物可包括在滴眼液的 藥物制劑中的礦物質(zhì)提取物組合物、羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物以 對(duì)例如糖尿病人的眼部提供抗糖化效應(yīng)，以治療視力障礙。固體或干燥的抗糖化組合物包含礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷/礦物質(zhì)提取 物組合物或羅漢果苷組合物，以及固體或干燥材料，例如人類或動(dòng)物攝入的食品。所述固體 或干燥材料包括但不限于食物、食品、營(yíng)養(yǎng)增甜劑和非營(yíng)養(yǎng)增甜劑、藥物組合物、營(yíng)養(yǎng)組合 物或食品補(bǔ)充組合物。例如，抗糖化組合物可以包括固體或干燥的藥學(xué)上可接受的組合物、 賦形劑、填充劑或其它已知的藥物制劑，以與礦物質(zhì)提取物組合物、羅漢果苷/礦物質(zhì)提取 物組合物或羅漢果苷組合物結(jié)合制成諸如片劑、膠囊或粉末的劑量單位。本發(fā)明的組合物 可作為食物的添加劑起作用，并且可與食品結(jié)合，所述食品包括其中可加入干燥或液體的 礦物質(zhì)提取物組合物、羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物以向食物提供抗 糖化活性的食物。作為特定的實(shí)例，抗糖化組合物可加入至人類或動(dòng)物消耗的食品中?？固腔鎏?劑可包括單獨(dú)的或與具有甜味或?yàn)楣J(rèn)的增甜劑的化合物或組合物相結(jié)合的礦物質(zhì)提取 物組合物、羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物?？固腔M合物可用作增甜 劑，并且可包括與增甜劑相結(jié)合的礦物質(zhì)提取物組合物，所述增甜劑包括但不限于諸如蔗 糖或楓糖漿的天然甜味化合物或組合物，或人工增甜劑?？固腔V物質(zhì)提取物組合物可與 包括羅漢果苷的增甜劑相結(jié)合，以形成抗糖化增甜劑羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物。礦 物質(zhì)提取物組合物可被加入至增甜劑化合物或組合物中，并且以連續(xù)噴霧積聚至糖顆粒而 用作例如包衣，或者加入諸如赤蘚醇的可選的天然增甜劑以提供具有抗糖化性質(zhì)的增甜 劑。礦物質(zhì)提取物組合物可作為液體加入至甜菊提取物以提供具有抗糖化性質(zhì)的結(jié)合的甜 菊/礦物質(zhì)提取物組合物增甜劑。礦物質(zhì)提取物組合物、羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物 或羅漢果苷組合物可加入至已知的可提高AGE的增甜劑，諸如高果糖玉米糖漿，以提供抗 糖化的礦物質(zhì)提取物組合物、羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物/高果糖 玉米糖漿組合物?？固腔钚曰蛱腔种苹钚詾榭山粨Q使用的術(shù)語，并且指化合物、提取物或組合 物的能力，所述能力為干擾糖化反應(yīng)以至于使生成修飾的氨基的蛋白質(zhì)、脂類或核酸的氨 基與糖的醛基或酮基的反應(yīng)被改變或阻止，或者高級(jí)糖化終產(chǎn)物(AGE)的形成被體內(nèi)或體 外改變或阻止。本發(fā)明的組合物包含自然增甜劑化合物，包括但并不局限于從羅漢果衍生而來的 那些自然增甜劑化合物，其可單獨(dú)或與諸如在此所教導(dǎo)的礦物質(zhì)提取物組合物的組合物的 其它組分相結(jié)合而用作抗糖化增甜劑。羅漢果為也公知為Momordica Grosvenori (羅漢 果)或Siraitiagrosverorii (羅漢果)的植物，最初生長(zhǎng)于中國(guó)并且現(xiàn)仍生長(zhǎng)于中國(guó)以及 氣候允許的其它地方。通常，諸如公知為羅漢果苷的增甜劑化合物來源于植物羅漢果的果實(shí)，盡管該植物的任何部分都可被加工以產(chǎn)生增甜劑化合物。羅漢果果實(shí)為一種小的葫蘆 狀果實(shí)，具有強(qiáng)烈甜味。所述水果包含稱為羅漢果苷的自然存在的化合物，其被認(rèn)為比蔗糖 甜三百倍并且熱量低。本文中，術(shù)語羅漢果苷用于指羅漢果果實(shí)中存在的一種或多種或者 所有的羅漢果苷化合物，并且羅漢果苷也稱為羅漢果提取物。在文獻(xiàn)中，植物羅漢果也稱為 Lo Han Guo (羅漢果)或luohanguo (羅漢果)，所有這些都意指同一種植物。令人驚訝的是，發(fā)明者已經(jīng)發(fā)現(xiàn)羅漢果苷具有抗糖化活性，并且具有能量提高和 膠原生長(zhǎng)刺激活性。本發(fā)明的方法包括將抗糖化活性、能量提高和膠原刺激的羅漢果苷組 合物應(yīng)用于甜味食品或飲料的組合物中。羅漢果苷組合物與諸如在此所教導(dǎo)的那些礦物質(zhì) 提取物組合物的組合在此稱為羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物。羅漢果苷組合物包括來自 羅漢果果實(shí)的羅漢果苷提取物，并且制備羅漢果苷或羅漢果果實(shí)提取物的方法為公知的。礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物的抗 糖化活性的有效量可以依賴或可不依賴于礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷/礦物質(zhì)提取 物組合物或羅漢果苷組合物中所加入的第二組分的類型?？固腔M合物可一天一次、一天 兩次、一天三次或一天更多次提供給或施用于受治療者?？固腔M合物可以固定方案或按 所需的方案每天、每周或每月施用。通常，抗糖化組合物可含有從約0. OOOlg至約IOOOg礦 物質(zhì)提取物、或從約0. OOOlg至約100g、從約0. OOOlg至約10g、從約0. OOlg至約1000g、從 約0. Olg至約1000g、從約0. Ig至約1000g、從約1. Og至約100g、從約1. Og至約10g、從約 IOg至約lOOOg，以及在其中的范圍。例如，12oz增強(qiáng)的水飲料可含有0. 1克礦物質(zhì)提取物 組合物，而含高果糖玉米糖漿的IOoz碳酸飲料可含有10克礦物質(zhì)提取物組合物，而且一加 侖大小的楓糖漿可含有300克礦物質(zhì)提取物組合物。羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物可含有約0. OOOlg至約IOOOg如上所述的礦物質(zhì) 提取物，該提取物以約0. OOOlg至約IOOOg的量加入到含有羅漢果苷的羅漢果苷組合物。產(chǎn)生于原始材料土壤的選擇和提取過程的礦物質(zhì)提取物組合物包含在用于本發(fā) 明的方法的抗糖化組合物中。本發(fā)明的方法包括抑制糖化終產(chǎn)物形成的方法、抑制AGE形 成的方法、抑制蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和/或核酸的糖化反應(yīng)的方法、抑制與糖化反應(yīng)相關(guān)的衰老效 應(yīng)的方法，以及治療或預(yù)防糖化相關(guān)的癥狀的方法，或者防止糖化產(chǎn)物累積的方法，所述糖 化相關(guān)的癥狀包括但不限于糖尿病(I型和II型)的并發(fā)癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、阿耳茨海 默氏病、尿毒癥、神經(jīng)毒性、動(dòng)脈粥樣硬化、炎性反應(yīng)、心室肥大、血管病、心肌炎、腎炎、關(guān)節(jié) 炎、腎小球性腎炎、微血管病和腎機(jī)能不全。抑制糖化或抑制AGE形成的方法、糖化相關(guān)癥 狀的預(yù)防或治療的方法包括施用或提供有效量的包含礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷/ 礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物的抗糖化組合物于人類或動(dòng)物，其中所述抗糖化組 合物改變受治療者的糖化效應(yīng)、糖化活性、糖化速率或諸如AGE的糖化產(chǎn)物的量。例如，糖 化活性的量通?？赏ㄟ^糖化血紅蛋白的AIC測(cè)試來測(cè)量。AIC測(cè)量中的降低表明較低量的 體內(nèi)糖化活性。對(duì)糖化蛋白質(zhì)的測(cè)量對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是公知的，參見例如美國(guó)專利第 5，506，144 號(hào)。本發(fā)明的方法包括制備和使用抗糖化組合物。該組合物可被健康的年輕或成年動(dòng) 物和人類，以及有風(fēng)險(xiǎn)發(fā)展為或患有糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化或相似的糖化相關(guān)癥狀的人類 或動(dòng)物所使用。食物、飲料和營(yíng)養(yǎng)添加劑抗糖化組合物可用于向受治療者提供抗糖化潛能， 并且提供降低蛋白質(zhì)和糖類的可能的交聯(lián)以促進(jìn)健康和健康狀態(tài)的益處。例如，由于引入本發(fā)明的礦物質(zhì)提取物組合物而具有抗糖化能力的食物或飲料系列因多種健康益處而被 不同年齡的人使用。治療或預(yù)防糖化相關(guān)癥狀或抑制糖化水平的方法包括提供有效量的包括礦物質(zhì) 提取物組合物或羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物的抗糖化組合物用于 腸炎。腸炎可影響免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)，并且造成包括食物耐受不良、變態(tài)反應(yīng)、炎癥、認(rèn)知 困難、機(jī)能亢進(jìn)和其它行為問題的許多癥狀。高級(jí)糖化終產(chǎn)物的受體(RAGE)為與炎性響應(yīng) 相關(guān)的細(xì)胞表面受體家族。目前認(rèn)為，RAGE涉及當(dāng)糖化的消耗促進(jìn)產(chǎn)物與腸道和胃上皮襯 細(xì)胞(cell lining)接觸時(shí)腸道中的炎性響應(yīng)。已經(jīng)表明，RAGE在腸道上皮細(xì)胞中表達(dá)， 主要集中于接近頂端細(xì)胞連接復(fù)合物的側(cè)膜。盡管在通常情況下RAGE在上皮中表達(dá)低，但 是在糖消耗時(shí)表達(dá)被上調(diào)。當(dāng)食用糖時(shí)發(fā)生的糖化作用導(dǎo)致腸壁和胃壁的交聯(lián)和炎癥。在預(yù)防或治療糖化相關(guān)癥狀或抑制糖化產(chǎn)物和AGE的本發(fā)明的方法中，例如，包 含諸如礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物的抗糖 化組合物的飲料或食物可被受治療者(動(dòng)物或人類)攝入以降低糖化對(duì)胃腸系統(tǒng)中襯細(xì)胞 的影響。該抗糖化組合物可支持腸道抗糖化效應(yīng)，提高腸道氧化化合物的去毒作用，提高腸 道內(nèi)營(yíng)養(yǎng)吸收，幫助延遲腸炎進(jìn)程，提高腸道作為AGE進(jìn)入循環(huán)途徑的看門者的作用，促進(jìn) 腸道健康和幫助降低炎癥因子，以及幫助平靜和緩解腸道糖化誘導(dǎo)的炎癥。飲料和食物除 了包含抗糖化組合物外，還可包含植物，諸如甘菊、蒲公英、紫錐花(echinecea)、大薊(milk thistle)、龍膽、甘草、繁縷(chickenweed)、繡線菊、白毛茛、西班牙黑蘿卜(Spanish black radish)和葉綠素。預(yù)防或治療糖化相關(guān)癥狀或抑制糖化產(chǎn)物和AGE的方法包括提供有效量的包含 礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物的抗糖化組合 物用于認(rèn)知功能。認(rèn)知為覆蓋腦功能的許多方面的通用術(shù)語，腦功能包括學(xué)習(xí)、記憶、思考 和推理。這些過程在自然的衰老過程中或在變性疾病期間衰退。高級(jí)糖化終產(chǎn)物和自由基 損傷可為衰老的自然部分，導(dǎo)致認(rèn)知功能和運(yùn)動(dòng)能力的降低，并且可導(dǎo)致癡呆、阿耳茨海默 病或帕金森病的加速形式。例如，包括抗糖化組合物飲料或食物可被受治療者(動(dòng)物或人 類)攝入以降低糖化對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的影響，降低炎性響應(yīng)，并且防止循環(huán)系統(tǒng)的損傷。所述抗 糖化組合物可用于避免認(rèn)知退化，重建最優(yōu)的認(rèn)知功能，促進(jìn)健康的認(rèn)知功能，提高認(rèn)知表 現(xiàn)，促進(jìn)健康的腦功能和幫助對(duì)抗氧化誘導(dǎo)的認(rèn)知退化、加強(qiáng)認(rèn)知功能防御，以及刺激相關(guān) 的認(rèn)知過程。飲料和食物除了包括抗糖化組合物外，還可包括以下的草藥或植物化合物或 提取物銀杏、人參、長(zhǎng)春西汀(vipocetine)、綠茶、大豆異黃酮、維生素E、維生素C、維生素 B6、維生素B12、磷脂(磷脂酰絲氨酸和磷脂酰膽堿)和胞磷膽堿(前體)和甘油磷酸膽堿、 α-硫辛酸、乙酰左旋肉毒堿、輔酶Q10、肌酸、必需脂肪酸、DHA、EPA和白藜蘆醇或葡萄籽提 取物。預(yù)防或治療糖化相關(guān)的癥狀或抑制糖化產(chǎn)物和AGE的方法包括提供有效量的包 含礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物的抗糖化組 合物用于視力。視力喪失、白內(nèi)障和黃斑變性的主要的危險(xiǎn)因子是眼部動(dòng)脈、毛細(xì)血管和視 網(wǎng)膜的硬化。已公認(rèn)，糖尿病人比一般人群具有更高的視力障礙發(fā)病率，部分是因?yàn)楦呒?jí)糖 化終產(chǎn)物在眼部積累。例如，包括抗糖化組合物的飲料或食物可被受治療者(動(dòng)物或人類) 攝入，以降低糖化對(duì)眼部和相關(guān)結(jié)構(gòu)的影響。該組合物用于提高視覺健康，防御衰老相關(guān)的視覺退化，重建眼部微循環(huán)，避免衰老相關(guān)的視力障礙，避免糖化引發(fā)的視力障礙，降低衰 老相關(guān)的視力障礙，促進(jìn)眼部衛(wèi)生，提高晶狀體透明度，并且保持健康視覺。飲料和食物除 了包括抗糖化組合物外，還可包括草藥，諸如越桔、銀杏；植物營(yíng)養(yǎng)素，諸如葉黃素、玉米黃 素、番茄紅素、生物類黃酮、混合胡蘿卜素、硫辛酸、正乙酰半胱氨酸和槲皮素；氨基酸，諸如 ?；撬帷⒐入赘孰?、半胱氨酸；維生素，諸如維生素A、C、Ε、Β-12、β _胡蘿卜素；必需脂肪酸 和其它抗氧化劑(也就是褪黑素)。預(yù)防或治療糖化相關(guān)的癥狀或抑制糖化產(chǎn)物和AGE的方法包括提供有效量的包 含礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物的抗糖化組 合物用于關(guān)節(jié)炎。高級(jí)糖化終產(chǎn)物(AGE)被認(rèn)為是如見于骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的炎 癥和最終的關(guān)節(jié)退化的促進(jìn)因子。已經(jīng)表明，AGE活化稱為MMP的炎癥調(diào)質(zhì)以開始疼痛和 受限的運(yùn)動(dòng)靈活性的級(jí)聯(lián)效應(yīng)?；ひ罕谎趸⑶医?jīng)受糖化驅(qū)動(dòng)的硬化。已鑒別，糖化標(biāo) 記在骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者中以增高的量存在，表明糖化為這些癥狀的因素。本 發(fā)明的抗糖化組合物在年幼者中的預(yù)防性使用可預(yù)防或延緩這些癥狀的發(fā)作，并且在任何 年齡攝入可以降低骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率和嚴(yán)重性。在任何年齡攝入，本發(fā) 明的抗糖化組合物可以限制糖化的級(jí)聯(lián)損害，并且因此降低促進(jìn)伴隨衰老的較長(zhǎng)期的關(guān)節(jié) 炎疾病的傾向。例如，包含抗糖化組合物的飲料或食物或食品可被受治療者(動(dòng)物或人類)攝入 以降低糖化對(duì)關(guān)節(jié)或滑膜液的影響。所述組合物可用于延緩衰老相關(guān)的關(guān)節(jié)炎性退化，保 持關(guān)節(jié)和腱的靈活性，提高健康骨強(qiáng)度和關(guān)節(jié)彈性，促進(jìn)骨結(jié)構(gòu)完整性和靈活性，抵御糖化 誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)退化，提高關(guān)節(jié)和腱的健康滑膜環(huán)境，促進(jìn)患關(guān)節(jié)炎時(shí)更積極的生活方式，促進(jìn) 針對(duì)關(guān)節(jié)炎的長(zhǎng)期的預(yù)防性健康，以及降低的炎癥、點(diǎn)腫脹和緊縮感的發(fā)病率。飲料或食物，除了包括抗糖化組合物外，可還把包括草藥和草藥提取物，諸如姜、 中國(guó)雷公藤、柳皮提取物、龍牙草，貓爪草、蕁麻、乳香，S-腺苷甲硫氨酸(SAMe)、硫酸軟骨 素、葡萄糖胺、必需脂肪酸、以及諸如菠蘿蛋白酶和槲皮素的酶。預(yù)防或治療糖化相關(guān)的癥狀或抑制糖化產(chǎn)物和AGE的方法包括提供有效量的包 含礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物的抗糖化組 合物用于勃起機(jī)能障礙(ED)。已提出糖化通過形成蛋白質(zhì)和DNA的加合物以及交聯(lián)而在 衰老相關(guān)的過程中起作用。這些交聯(lián)可以通過清除勃起需要的一氧化氮而導(dǎo)致勃起機(jī)能障 礙。另外，糖化導(dǎo)致動(dòng)脈硬化，這抑制了保持勃起所必需的動(dòng)脈靈活性。已證實(shí)，AGE通過影 響海綿體的功能能力并通過干擾天然陰莖血管擴(kuò)張劑、內(nèi)皮和神經(jīng)元一氧化氮(NO)的產(chǎn) 生損害勃起功能。例如，包括抗糖化組合物的飲料或食物可被受治療者(動(dòng)物或人類)攝 入以降低糖化對(duì)獲得和維持勃起的能力的影響。所述組合物可用于提高健康的性功能，減 緩衰老相關(guān)的ED循環(huán)退化，防止糖化誘導(dǎo)的ED，最大化性循環(huán)過程，提高健康的勃起性能， 以及促進(jìn)正常的勃起性能。飲料或食物除包括抗糖化組合物外，也可包括維生素C&E、生物 類黃酮、必需脂肪酸、育亨樹皮、淫羊藿、瑪咖、沙巴棕和男寶(man bao)。用于這些和其它糖化相關(guān)的癥狀的抗糖化組合物可包括即食谷物、果汁、糖果、口 香糖、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑、風(fēng)味水飲料、碳酸和非碳酸飲料、諸如啤酒和紅酒的酒精飲料、嬰兒食物 以及許多其它食物和飲料。本發(fā)明的抗糖化組合物可用于動(dòng)物飼料添加劑。AGE被認(rèn)為在降低細(xì)胞代謝速率和功能上起作用。本發(fā)明的抗糖化礦物質(zhì)提取物組合物可在減緩由糖化終產(chǎn)物引起的代謝率降低中起作用。另外，本發(fā)明的抗糖化組合物 也可通過提高線粒體功能而向體細(xì)胞提供能量。參見在此的實(shí)施例，其中在此教導(dǎo)的組合 物在線粒體代謝中起作用。例如，包括抗糖化組合物的飲料或食物可被受治療者(動(dòng)物或 人類)攝入以提高身體的能量代謝，所述抗糖化組合物包含礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果 苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物。所述組合物提供無化學(xué)刺激的代謝增強(qiáng)。AGE被認(rèn)為在降解膠原中起作用。本發(fā)明的抗糖化組合物可在減緩由于糖化終產(chǎn) 物引起的膠原降解中起作用。預(yù)防或治療糖化相關(guān)的癥狀或抑制糖化產(chǎn)物和AGE的方法包 括提供有效量的包含礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷 組合物的抗糖化組合物用于膠原生成和保持。膠原是組成人體總蛋白質(zhì)量的25%的高度特 征化的纖維蛋白家族。伴隨衰老，膠原生成降低并且膠原降解增加。無論是否促進(jìn)更年輕 的皮膚，為了更健康的骨和腱，膠原刺激是食物和飲料成分所需的屬性。I型膠原的刺激達(dá) 到高于未處理(水)對(duì)照幾乎90%的實(shí)施例顯示于本文?；|(zhì)金屬蛋白酶MMP是消化和分 解體內(nèi)蛋白質(zhì)的蛋白水解酶或蛋白酶。至今已發(fā)現(xiàn)超過30個(gè)不同類型的具有多種酶消化 功能和炎癥介導(dǎo)的MMP。對(duì)于皮膚，MMP酶的主要功能是保持皮膚基質(zhì)，尤其是結(jié)構(gòu)蛋白膠 原再循環(huán)的穩(wěn)定狀態(tài)，并且一些皮膚基質(zhì)為炎癥途徑的一部分。作為衰老的一部分，MMP傾 向于過度表達(dá)其自身。另外，炎癥、刺激和環(huán)境應(yīng)激(自由基)提高皮膚的MMP水平以產(chǎn)生 更多的膠原消化。在此教導(dǎo)的使用人類成纖維細(xì)胞的體外研究表明本發(fā)明的礦物質(zhì)提取物 組合物在濃度水平低至0. 005%時(shí)有效地阻斷膠原消化酶。在0. 05%的濃度水平時(shí)，可見 對(duì)MMP的100 %的抑制作用。AGE為自由基的氧化促進(jìn)劑。本發(fā)明的抗糖化組合物可在抵抗由糖化終產(chǎn)物產(chǎn)生 的自由基中起作用。本發(fā)明的方法包括治療或抑制氧化，包括提供有效量的抗氧化劑組合 物，該抗氧化劑組合物包含在此所述的礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組 合物或羅漢果苷組合物與諸如食物或飲料的第二成分的組合。有許多環(huán)境和生活方式的 因素可提高活細(xì)胞的氧化水平至不健康的水平，所有都加速衰老進(jìn)程并且產(chǎn)生疾病的可能 性。因?yàn)槠鋵?duì)關(guān)鍵生物系統(tǒng)的損傷作用，氧化應(yīng)激已經(jīng)涉及超過100種疾病以及衰老?？?氧化劑緊密參與抑制細(xì)胞損傷一癌癥、衰老和多種其它疾病的共同途徑。耐力訓(xùn)練可提 高氧氣使用超過休息狀態(tài)10至20倍。這大大提高自由基的產(chǎn)生，激發(fā)增加的對(duì)肌肉和其 它組織的損傷的擔(dān)心。飲料或食物，除包括抗氧化組合物之外，還可包括維生素A、C和E， 以及植物多酚，所述氧化組合物包含本發(fā)明的礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷/礦物質(zhì)提 取物組合物或羅漢果苷組合物。盡管不希望局限于任何特定的理論，目前認(rèn)為，皮膚衰老可被AGE和其對(duì)于HA和 膠原的降解、自由基和炎癥的作用而加速。如下面的實(shí)施例中所證實(shí)，公布于此的礦物質(zhì)提 取物組合物或羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物可增加透明質(zhì)酸(HA)的 濃度。這也可輔助滑膜液環(huán)境。提高HA的能力用成年人類皮膚成纖維細(xì)胞以每孔10，000 個(gè)細(xì)胞鋪板于補(bǔ)充5%血清的高葡萄糖DMEM來評(píng)估，并且加入礦物質(zhì)提取物組合物。5 天后，收集細(xì)胞培養(yǎng)物條件培養(yǎng)基，并且將每個(gè)試驗(yàn)條件下IOOul的樣品用于HA測(cè)試。HA 測(cè)試使用來自Echelon (Salt Lake City, UT)的乙酰透明質(zhì)酸酶聯(lián)免疫吸附測(cè)試試劑盒 (HA-ELISA，目錄號(hào)K-1200)進(jìn)行。觀察到礦物質(zhì)提取物組合物產(chǎn)生> 20%的HA刺激。與 抗糖化、膠原的刺激和保護(hù)、抗炎性性質(zhì)和抗氧化性質(zhì)聯(lián)合，預(yù)防或治療糖化相關(guān)的癥狀或抑制糖化產(chǎn)物和AGE的方法包括提供有效量的包含礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷/礦物 質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物的抗糖化組合物用于局部美容治療或口服施用的美容 產(chǎn)品，諸如抗皮膚衰老的飲料和食物。由于高級(jí)糖化終產(chǎn)物(AGE)已經(jīng)被確認(rèn)為炎癥的促 進(jìn)劑，而炎癥被確認(rèn)為皮膚衰老的促進(jìn)劑?？偟脕碚f，本發(fā)明包括抗糖化組合物，以及制備和使用抗糖化組合物的方法，以及 治療和預(yù)防糖化相關(guān)癥狀的方法。治療或防止糖化相關(guān)癥狀的方法，包括將有效量的包含 礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物的抗糖化組合 物施用于人類或動(dòng)物，其中所述量有效地減少至少一部分人類或動(dòng)物的糖化事件?？固腔?組合物可包括礦物質(zhì)提取物組合物，抗糖化組合物可包括羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合 物，或者抗糖化組合物可包括羅漢果苷組合物?？固腔M合物還可包括食物或飲料。糖化 相關(guān)癥狀包括糖化終產(chǎn)物的形成，AGE形成，蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和/或核酸的糖化反應(yīng)，與糖化反 應(yīng)相關(guān)的衰老效應(yīng)，以及糖尿病(I型和II型)的并發(fā)癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、阿耳茨海默病、 尿毒癥、神經(jīng)毒性、動(dòng)脈粥樣硬化、炎性反應(yīng)、心室肥大、血管病、心肌炎、腎炎、關(guān)節(jié)炎、腎小 球性腎炎、微血管病和腎機(jī)能不全，或糖化產(chǎn)物的積累?？固腔M合物可包括羅漢果苷和礦物質(zhì)提取物組合物的組合，而且還可與食物或 飲料結(jié)合?？固腔M合物可包括羅漢果苷和礦物質(zhì)提取物組合物的組合，而且還可與增甜 劑組合物結(jié)合。抑制糖化反應(yīng)的方法包括提供有效量的包含礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷/ 礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物的抗糖化組合物，并且抑制糖化反應(yīng)。所述方法可 包括包含礦物質(zhì)提取物組合物的抗糖化組合物，包含羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物的抗 糖化組合物，或包含羅漢果苷組合物的抗糖化組合物。所述方法還可包括包含食物或飲料 的抗糖化組合物。所述方法可包括向人類或動(dòng)物體內(nèi)提供抗糖化組合物或可體外提供。在此所用定義化學(xué)元素。由僅一種原子組成和由單個(gè)或組合組成的超過100種基本的金屬和非 金屬物質(zhì)中任何一種構(gòu)成所有的物質(zhì)，大多數(shù)這些在重量上輕于并且包括鈾的物質(zhì)發(fā)現(xiàn)于 在自然界，而剩余物質(zhì)通過引起原子核變化人工產(chǎn)生。粘土。一種天然的或合成的膠質(zhì)無光澤的泥土組合物，所述組合物包括大小小于 約0. 002毫米的鋁和/或硅的微小片狀分層顆粒，所述組合物在濕潤(rùn)時(shí)通常為可塑的，并且 在自然產(chǎn)生時(shí)所述組合物包括分解的火成巖和/或變質(zhì)巖。大多數(shù)粘土具有在約4. 5至 8. 5的pH范圍。天然或合成的粘土包括礦物質(zhì)元素。除具有小于5微米的顆粒大小外，粘 土可包括具有大于5微米大小的顆粒。風(fēng)化褐煤。一種軟的，松散質(zhì)地的具有低BTU值的煤。風(fēng)化褐煤是腐殖酸鹽，可含 有按質(zhì)量計(jì)多達(dá)70%的礦物質(zhì)，可從褐煤中產(chǎn)生，可由于長(zhǎng)期未被加熱和施壓至生成無煙 煤、褐煤或煙煤所需的程度而自然產(chǎn)生，而且可包含堆肥作為組分。礦物質(zhì)。任何自然存在的化學(xué)元素或化合物。礦物質(zhì)具有特征性的晶體結(jié)構(gòu)和化 學(xué)組成或組成范圍。礦物質(zhì)元素。作為礦物質(zhì)或在礦物質(zhì)中的自然存在的化學(xué)元素。礦物質(zhì)元素可通 過合成或制造工藝生成，然而每種礦物質(zhì)元素確實(shí)作為礦物質(zhì)或在礦物質(zhì)中自然存在。稀土或稀土元素。具有原子序數(shù)58至71的一族金屬元素中的任何一個(gè)，包括鈰、鐠、釹、钷、釤、銪、釓、鋱、鏑、鈥、鉺、銩、鐿和镥。在自然中，稀土元素與非金屬元素以磷酸 鹽、碳酸鹽、氟化物、硅酸鹽和鉭酸鹽的形式結(jié)合。沙。一種由小但是容易區(qū)別的顆粒組成的松散材料，所述顆粒直徑通常小于2毫 米并且大于約0. 02毫米，最常見為巖石破碎產(chǎn)生的石英。泥漿。未固化的或松散的沉積材料，其組成的巖石顆粒為比沙粒細(xì)并且比粘土顆 粒大，特別是由直徑范圍從約0. 02毫米至0. 002毫米的礦物質(zhì)土壤顆粒組成的材料。必須指出，如在本說明書以及附加權(quán)利要求中使用，除非上下文清楚地另外指出， 否則單數(shù)形式“一(a)”、“一(an)”和“所述(the) ”包括復(fù)數(shù)指示物。在此包括的所有專利、專利申請(qǐng)和參考文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容通過引用在此具體并入。當(dāng)然，應(yīng)理解，前述僅指本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方式，并且其中可對(duì)本發(fā)明進(jìn)行多種 改良和改變而沒有背離本公開中所列的本發(fā)明的精神和范圍。本發(fā)明進(jìn)一步通過以下實(shí)施例闡釋，所述實(shí)施例不應(yīng)被理解為以任何方式對(duì)其范 圍施加限制。相反，可以清楚理解的是，本領(lǐng)域內(nèi)專業(yè)人員可在閱讀此說明后，借助其進(jìn)行 多種的其它實(shí)施方式、改良及其等同物，且不背離本發(fā)明的精神和/或所附權(quán)利要求的范圍。
實(shí)施例實(shí)施例1評(píng)價(jià)三種礦物質(zhì)提取物組合物以測(cè)試抗糖化效應(yīng)。每個(gè)反應(yīng)混合物含有10mg/ml在PBS中的白蛋白(Sigma)和500mM在PBS中的葡 萄糖(Sigma G8270)。陰性對(duì)照為10mg/ml白蛋白，不含葡萄糖。陰性對(duì)照用于每個(gè)實(shí)驗(yàn) 點(diǎn)。陽性對(duì)照為10mg/ml白蛋白，含有500mM葡萄糖和ImM鹽酸氨基胍(Sigma 396494)。樣品制備在I型無菌水中稀釋每個(gè)礦物質(zhì)提取物組合物至10mg/ml，通過0. 22微米過濾除 菌，并且在37°C下在100ug/ml、10ug/ml、lug/ml和0. lug/ml的稀釋液中，在疊氮化納存在
下，在含有或不含有葡萄糖時(shí)，與反應(yīng)混合物一起孵化11天。如所述(Argirova和Argirov，2003)， 使用微板熒光儀 Cytofluor2350 (Mi llipore)通過非色氨酸熒光(激發(fā)于360歷，發(fā)射于460nm)的增加檢測(cè) 蛋白質(zhì)糖化。通過減去背景讀數(shù)(不含葡萄糖的樣品)而得到每一個(gè)實(shí)驗(yàn)點(diǎn)的糖化值。結(jié)果與討論如圖1所見，O為陰性對(duì)照，并且每個(gè)礦物質(zhì)提取物組合物顯示出在50ug/ml下抑 制白蛋白糖化，且#1顯示總體最佳抑制活性。氨基胍(AG)(ImM)具有良好的抑制活性，此 為其已知活性。實(shí)施例2抗糖化活性正常人類皮膚成纖維細(xì)胞(NHDF)在允許大量細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)合成的條件下培 養(yǎng)。NHDF以充分形式在正常培養(yǎng)基中生長(zhǎng)至匯聚。在培養(yǎng)基中填加維生素C以誘導(dǎo)基質(zhì)合 成/沉積。用三種濃度的礦物質(zhì)提取物處理細(xì)胞(或不處理陰性對(duì)照)或用陽性對(duì)照的參照化合物(氨基胍)處理細(xì)胞。在所有條件下重復(fù)三次進(jìn)行。在細(xì)胞中加入過量的葡萄糖，并且在37°C孵化細(xì)胞15天。最后，提取并純化ECM 蛋白質(zhì)(主要是膠原)，并且將每個(gè)樣品的一部分以可重現(xiàn)的點(diǎn)上樣于硝酸纖維素。使用抗-AGE抗體顯示AGE導(dǎo)入到膠原中，并且用過氧化酶結(jié)合物和化學(xué)發(fā)光反應(yīng) (ECL)對(duì)其標(biāo)記。使用化學(xué)發(fā)光成像儀進(jìn)行相對(duì)信號(hào)鑒定。結(jié)果列于如下表1和表2中。表1 sem:平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差A(yù)U:任意單位表2
sem 平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差 AU 任意單位
礦物質(zhì)提取物組合物顯示降低糖化終產(chǎn)物(AGE)的生成的傾向。 實(shí)施例3
本測(cè)定的目的為使用MTT測(cè)定測(cè)試在細(xì)胞培養(yǎng)群落中礦物質(zhì)提取物組合物(6批 次)對(duì)線粒體代謝的作用。MTT測(cè)定測(cè)量琥珀酸脫氫酶的活性，該酶為線粒體中呼吸電子傳 遞鏈的關(guān)鍵酶(Berridge & Tan, 1993)。方法在I型無菌水中稀釋礦物質(zhì)提取物組合物至10mg/ml，通過0. 22微米過濾除菌，并 且以500ug/ml、50ug/ml、5ug/ml和0. 5ug/ml的稀釋液，與每孔2，500個(gè)來自81歲女性捐 獻(xiàn)者(Cascade Biologies，批號(hào)061215-901)的人類皮膚成纖維細(xì)胞，在含有2. 5%小牛血 清的高葡萄糖DMEM培養(yǎng)基中孵化72h。對(duì)于線粒體代謝的測(cè)量，在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，在細(xì)胞培養(yǎng)物中加入MTT (3_(4，5-二甲 基噻唑-2-基)-2，5-二苯基溴化四氮唑，Sigma目錄號(hào)M5655)并且孵化2h。然后棄去細(xì) 胞培養(yǎng)基并且將細(xì)胞內(nèi)MTT還原產(chǎn)物甲月替溶解于100% DMS0中。與細(xì)胞培養(yǎng)物中線粒體 活性成比例的比色信號(hào)用BioRad微板分光光度計(jì)3550-UV在570nm下測(cè)量。對(duì)于細(xì)胞數(shù)的測(cè)量，在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，使用磺酰羅丹明B染色細(xì)胞骨架蛋白，并且用 BioRad微板分光光度計(jì)3550-UV在570nm下測(cè)量與細(xì)胞數(shù)成比例的比色信號(hào)。通過確定兩個(gè)相關(guān)的信號(hào)的比，標(biāo)準(zhǔn)化線粒體代謝的細(xì)胞數(shù)。結(jié)果與討論參見圖2A和B的結(jié)果。所有測(cè)試的礦物質(zhì)提取物組合物批次顯示相似的模式，且 一個(gè)批次(#2)可刺激線粒體代謝高達(dá)基線上幾乎100%。參見圖2A。0為陰性對(duì)照，其中 將水加入細(xì)胞中，且六個(gè)礦物質(zhì)提取物組合物樣品中每一個(gè)標(biāo)記為1_6，6個(gè)樣品中每一個(gè) 濃度為 500ug/ml、50ug/ml 和 5ug/ml 和 0. 5ug/ml。C 為肌酸，以 500ug/ml 加入細(xì)胞。有趣地是，來自年紀(jì)較大的捐獻(xiàn)者的皮膚成纖維細(xì)胞對(duì)肌酸(6. 3%刺激)僅輕微 敏感，并且對(duì)堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF，結(jié)果未顯示)不敏感。此外，重要地是，礦物 質(zhì)提取物組合物在此測(cè)定中不刺激細(xì)胞增殖，僅刺激代謝。參見圖2B。實(shí)施例4皮膚成纖維細(xì)胞分泌的膠原為皮膚細(xì)胞外基質(zhì)的主要組分。在衰老的和光損傷的 皮膚里，新的膠原池由于皮膚成纖維細(xì)胞的較差的量和質(zhì)量而降低。本方案的目的是測(cè)試 在人類皮膚成纖維細(xì)胞條件培養(yǎng)基中礦物質(zhì)提取物組合物對(duì)I型膠原的作用。方法將正常人類皮膚成纖維細(xì)胞(第7代，批號(hào)7F1254，Cambrex, ffalkersville, MD) 在96孔板中(板#431)中接種至含有5%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，并且使其生長(zhǎng)至后期 分會(huì)合階段。在I型無菌水中制備礦物質(zhì)提取物組合物的水溶液，并且以1/20稀釋加入細(xì) 胞培養(yǎng)物中。水為未處理對(duì)照，并且抗壞血酸磷酸鎂(MAP目錄號(hào)A8960，Sigma，St. Louis， M0)為陽性對(duì)照。在實(shí)驗(yàn)開始5天后收獲細(xì)胞培養(yǎng)條件培養(yǎng)物，并且根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)ELISA程序 (Dobak等人，1994，Zhao等人，2005)，使用親和純化的抗體通過夾心ELISA，之后通過抗生 蛋白鏈菌素_卵白素-HRP結(jié)合物和ABTS測(cè)定I型膠原。在405nm下用BioRad微板分光光度計(jì)3550-UV測(cè)量與膠原含量成比例的比色信 號(hào)。參見圖3，礦物質(zhì)提取物組合物在HDF-條件培養(yǎng)基中對(duì)I型膠原的作用。結(jié)果與討論對(duì)膠原I的強(qiáng)刺激見于陽性對(duì)照(MAP)，參見圖3。礦物質(zhì)提取物組合物顯示對(duì)I型膠原極好的、鐘形的刺激，高達(dá)超過非處理(水)對(duì)照的幾乎90%，與陽性對(duì)照(MAP)相 當(dāng)。鐘形的劑量反應(yīng)曲線表明礦物質(zhì)提取物組合物對(duì)I型膠原的刺激的最優(yōu)濃度為在0.01 和 0. lmg/ml (0. 1-1% )之間。實(shí)施例5金屬蛋白酶(MP)(膠原蛋白酶)活性用來自Molecular Probes (Invitrogen, IL) 的Enzcheck試劑盒使用猝滅的熒光明膠和種屬金屬蛋白酶梭菌(Clostridium)膠原蛋白 酶IV測(cè)量。500ug/ml、50ug/ml和5ug/ml和0. 5ug/ml的稀釋液中的礦物質(zhì)提取物組合物， 在膠原蛋白酶底物-猝滅的熒光素聯(lián)明膠存在下并且在蛋白水解酶膠原蛋白酶存在下孵 化。100ug/ml的有效的MP抑制劑菲咯啉用作陽性對(duì)照。使用Millipore Cytofluor 2350 顯微熒光計(jì)在激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)為485/530nm下測(cè)量釋放被消化的熒光明膠的動(dòng)力學(xué)。結(jié)果與討論如圖4所示，礦物質(zhì)提取物組合物具有金屬蛋白酶抑制劑活性。該活性可在濃度 低至50ug/ml (6%抑制)下被檢測(cè)，并且在500ug/ml時(shí)為100%抑制。如所預(yù)期的，MP活 性完全被菲咯啉所抑制。多數(shù)金屬蛋白酶抑制劑為無差別的二價(jià)陽離子螯合劑。礦物質(zhì)提取物組合物可通 過不同的作用機(jī)理起作用。值得研究地是，這種可能的新穎的作用機(jī)理是否可削弱對(duì)金屬 蛋白酶亞型的特異性，這是皮膚病學(xué)應(yīng)用所關(guān)注的。實(shí)施例6使用標(biāo)準(zhǔn)熒光測(cè)定技術(shù)，在獨(dú)立的體外實(shí)驗(yàn)中測(cè)定礦物質(zhì)提取物組合物的抗氧化 效應(yīng)以評(píng)價(jià)氧自由基吸收能力(0RAC分?jǐn)?shù))。已經(jīng)報(bào)道了主要的抗氧化水果具有在15-30范圍內(nèi)的0RAC分?jǐn)?shù)，這是極其顯著的 抗氧化能力。使用同樣的程序測(cè)試，發(fā)現(xiàn)礦物質(zhì)提取物組合物樣品在相等的重量基礎(chǔ)上， 0RAC分?jǐn)?shù)超過主要的抗氧化水果10-30倍之間。水果的0RAC(ii mole TE/g)櫻桃15草莓24覆盆子28黑莓28藍(lán)莓28石榴32礦物質(zhì)提取物組合物的氧自由基吸收能力因?yàn)檠趸瘧?yīng)激對(duì)重要的生物系統(tǒng)的損傷作用，氧化應(yīng)激已經(jīng)涉及超過100種疾病 以及衰老(Ames等人，1993)。本測(cè)試的目的是應(yīng)用氧自由基吸收能力(0RAC)測(cè)定測(cè)量若 干礦物質(zhì)提取物組合物樣品的抗氧化潛能。方法根據(jù)描述于0u等人(2001)并少量修改(Sunny BioDiscovery程序#21)的方法進(jìn) 行0RAC測(cè)定。0RAC測(cè)定測(cè)量抗氧劑組分抑制熒光素二鈉(FL) (Sigma-Aldrich, St Louis, Mo)熒光降低的能力，這種降低由過氧化自由基發(fā)生劑，2' ,2' _偶氮雙(2-脒基丙烷)二 鹽酸(AAPH) (ffako Chemicals, Richmond, Va)誘導(dǎo)。
礦物質(zhì)提取物組合物樣品在I型無菌水中稀釋至10mg/ml，通過0. 22微米過濾來 除菌，并且10ug/ml加入反應(yīng)混合物中。濃度為lug/ml、5ug/ml和10ug/ml的Trolox (在I型水中新鮮配制)被用于生成 標(biāo)準(zhǔn)曲線，其通過繪制用出NIH ImageJ軟件計(jì)算的曲線下面積(AUC)對(duì)表示為微摩爾/升 的Trolox濃度的曲線。然后每個(gè)樣品的AUC用于Trolox標(biāo)準(zhǔn)曲線。參見表3。表30RAC 值 實(shí)施例7抗糖化組合物抗糖化組合物包括新鮮橙汁98. 80% (重量百分比)山梨酸鉀0.15%維生素E (生育酚)0.05%表I中干燥的礦物質(zhì)提取物組合物1. 00%過程1.使用合適的壓榨裝置，擠壓橙汁2.加入和混合于山梨酸鉀和生育酚3.加入和混合礦物質(zhì)提取物組合物4.在5-8攝氏度包裝和冷卻一升加工的橙汁中的礦物質(zhì)含有不低于Ippm的常量礦物質(zhì)，所述常量礦物質(zhì)由 鈣、氯、鎂、錳、磷、鉀、硅、鈉的混合物組成以及不低于0. OOOlppm的微量礦物質(zhì)，所述微量 礦物質(zhì)由以下組成鋁、銻、砷、鋇、鈹、鉍、硼、溴、鎘、鈰、銫、鉻、鈷、銅、鏑、鉺、銪、氟、釓、金、 鉿、鈥、碘、銦、銥、鐵、鑭、鉛、鋰、镥、汞、鉬，釹、鎳、鈮、鈀、鉬、鐠、錸、銠、銣、釕、釤、鈧、硒、 銀、鍶、硫、鉭、鋱、碲、鉈、釷、銩、錫、鈦、鎢、釩、鐿、釔、鋅、鋯的混合物。實(shí)施例8飲料添加劑_粉末狀濃縮礦物質(zhì)包裝將7g表I中干燥的礦物質(zhì)提取物組合物包裝于箔包裝中。將箔包裝中的7g干燥 礦物質(zhì)提取物組合物混合至12盎斯包括水的任何飲料，遞送不低于Ippm的常量礦物質(zhì)以 及不低于0. OOOlppm的微量礦物質(zhì)，所述常量礦物質(zhì)由鈣、氯、鎂、錳、磷、鉀、硅、鈉的混合 物組成，所述微量礦物質(zhì)由以下組成鋁、銻、砷、鋇、鈹、鉍、硼、溴、鎘、鈰、銫、鉻、鈷、銅、鏑、 鉺、銪、氟、釓、金、鉿、鈥、碘、銦、銥、鐵、鑭、鉛、鋰、镥、汞、鉬，釹、鎳、鈮、鈀、鉬、鐠、錸、銠、 銣、釕、釤、鈧、硒、銀、鍶、硫、鉭、鋱、碲、鉈、釷、銩、錫、鈦、鎢、釩、鐿、釔、鋅、鋯的混合物。
實(shí)施例9羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物及其組分對(duì)1型膠原的作用通過將約84%3%液體礦物質(zhì)提取物組合物與檸檬酸(0. 01% )和 防腐劑(至少0.01% 和來自酪蛋白水解產(chǎn)物的二肽及三肽結(jié)合制 備羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物。該混合物與可溶性食物纖維(1.50%以及改 良的食物淀粉(1. 60% w/w% )結(jié)合。該混合物與山梨醇溶液，70% USP/FCC(9. 0% w/w% ) 以及粉末狀的羅漢果苷(羅漢果水果提取物)(MB North America) (3. 0%w/w% )混合。該 混合物與調(diào)味劑(0. 5% w/w% )結(jié)合。在此稱為SS II。膠原是結(jié)締組織(筋膜)、軟骨、韌帶、腱、骨和牙齒的主要組分，并且其還向血管 提供結(jié)構(gòu)支持。此測(cè)定的目的為確定羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物及其單個(gè)組分對(duì)在人 類皮膚成纖維細(xì)胞條件培養(yǎng)基中的I型膠原水平的作用。方法在所述測(cè)定中檢測(cè)批號(hào)100-151106的礦物質(zhì)提取物組合物(TL)的 3%溶液， 和在此所教導(dǎo)的羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物(SS II)，羅漢果提取物中的羅漢果苷 (Luo HG，批號(hào) MOGO 1-060502)，赤蘚醇(Eryt，批號(hào) 07241BP952)和木糖醇(Xylit，批號(hào) H125T7G1)。所有測(cè)試材料保存于室溫下。材料在1型水中稀釋，通過0. 22 μ濾器過濾并且 在 TL 和 SS II 最終濃度為 1%、0. 5%、0. 1%、0. 05%和 0. 01% (ν ν)以及 Luo HG,Eryt 和Xylit最終濃度為0.5%、0. 1%、0. 05%和0.01% (w ν)下，在含5%小牛血清的高葡 萄糖DMEM中的成年人類皮膚成纖維細(xì)胞(HDF，捐獻(xiàn)者年齡為58歲，Lonza,批號(hào)7F39 = 019 胸部)上測(cè)定。水為未處理對(duì)照并且抗壞血酸磷酸鎂(MAP目錄號(hào)A8960，Sigma，St. Louis, MO)為陽性對(duì)照。在實(shí)驗(yàn)開始72h后，收獲細(xì)胞培養(yǎng)條件培養(yǎng)基，并且根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)ELISA程序 (Dobak等人，1994，Zhao等人，2005)，通過夾心ELISA使用親和純化抗體，之后為鏈酶抗生 物素_抗生物素-HRP結(jié)合物和ABTS測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)條件培養(yǎng)基的I型膠原。在405nm下用 BioRad微板分光光度計(jì)3550-UV測(cè)量與膠原含量成比例的比色信號(hào)。結(jié)果與討論如圖5所示，TL和SS II在和0. 5%下具有強(qiáng)的劑量依賴膠原刺激活性(TL高 達(dá)54%以及SS II高達(dá)49%)。Luo HG在0. 和0. 05%下具有強(qiáng)力的劑量依賴刺激活 性(高達(dá)77%)。相反，赤蘚醇和木糖醇在所有被測(cè)濃度下不具有顯著活性。0為水，未處 理對(duì)照，使用50 μ g/mL MAP, Luo HG在圖5中以L標(biāo)記。實(shí)施例10羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物、礦物質(zhì)提取物組合物、三氯半乳蔗糖和赤蘚醇 對(duì)線粒體代謝的作用該實(shí)施例的目的為使用MTT測(cè)定測(cè)試4個(gè)樣品的作用羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物 組合物(在圖6A中標(biāo)記為1)、礦物質(zhì)提取物組合物(在圖6A中標(biāo)記為2)、三氯半乳蔗糖 濃縮液(在圖6A中標(biāo)記為3)和赤蘚醇(在圖6A中標(biāo)記為4)對(duì)線粒體代謝I成纖維細(xì)胞 群體的作用。MTT測(cè)定檢測(cè)琥珀酸脫氫酶的活性，琥珀酸脫氫酶是線粒體(mitrochondria) 呼吸電子傳遞鏈中的關(guān)鍵酶(Berridge & Tan，1993)。方法測(cè)試材料為如上實(shí)施例9中制備的羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物，礦物質(zhì)提取物組合物( 3%溶液)、三氯半乳蔗糖濃縮液(按重量計(jì)25%三氯半乳蔗糖)_批號(hào) F2304B311LB和赤蘚醇(25%水溶液)-批號(hào)RFA 2104-35，并且在室溫下保存。材料在1型 無菌水中稀釋，通過0.22 μ濾器過濾并且在最終濃度為2.5%、0. 5%和0.05% (ν ν)下， 在含5%小牛血清的高葡萄糖DMEM中的人類皮膚成纖維細(xì)胞(Invitrogen)上檢測(cè)72h。為了在整個(gè)細(xì)胞群體中測(cè)量線粒體代謝，在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)在細(xì)胞培養(yǎng)物中加入 MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5_ 二苯基溴化四氮唑，Sigma目錄號(hào)M 5655)并且 繼續(xù)孵化另外的2小時(shí)。然后棄去細(xì)胞培養(yǎng)基，并且將細(xì)胞內(nèi)MTT還原產(chǎn)物甲月替溶解于 90%異丙醇中。細(xì)胞培養(yǎng)物中與線粒體活性成比例的比色信號(hào)用BioRad微板分光光度計(jì) 3550-UV 在 570nm 下測(cè)量。結(jié)果與討論結(jié)果表明羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物具有代謝刺激活性。礦物質(zhì)提取物組合 物具有劑量依賴活性，而在測(cè)試濃度下，三氯半乳蔗糖抑制細(xì)胞代謝并且赤蘚醇不具活性 (參見圖6A)。通過重復(fù)每個(gè)實(shí)驗(yàn)材料的一個(gè)劑量來進(jìn)一步證實(shí)并再現(xiàn)該第一個(gè)實(shí)驗(yàn)(重 復(fù)四次進(jìn)行)的結(jié)果(參見圖6B)。堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF在15nM下)用作陽性 對(duì)照并且如所預(yù)見，顯示出代謝刺激。0代表水，未處理的樣品。實(shí)施例11羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物及其組分對(duì)蛋白質(zhì)糖化的作用Maillard反應(yīng)(非酶糖化)為產(chǎn)生諸如皮膚上細(xì)胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)的大分子的胺基 基團(tuán)與還原糖上的羰基基團(tuán)的交聯(lián)的一系列反應(yīng)。這些交聯(lián)的大分子稱為高級(jí)糖化終產(chǎn)物 (AGE)。AGE的生成被自由基提高。AGE為諸如糖尿病和動(dòng)脈粥樣硬化的生理病理學(xué)標(biāo)記， 并且與衰老和光衰老過程相關(guān)聯(lián)(van Boekel等人，1991)。此測(cè)定的目的為確定羅漢果苷 /礦物質(zhì)提取物組合物及其單個(gè)組分對(duì)白蛋白/葡萄糖模型系統(tǒng)中AGE形成的作用。方法礦物質(zhì)提取物組合物(TL，_3%溶液)和羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物(SS II)、 羅漢果提取物(L，批號(hào)MOGO 01-060502)、赤蘚醇(E，批號(hào)07J241BP952)和木糖醇(X，批號(hào) H125T7G1)保存于室溫下。材料在1型無菌水中稀釋，通過0. 22 μ濾器過濾并且在37°C下， TL和SS II最終濃度(ν ν)和L、E和X最終濃度為0. 5%、0. 1%、0. 05%和0. 01% (w ν)下，在存在或不存在葡萄糖(Sigma G8270)下，在含有10mg/ml白蛋白和疊氮化納 的培養(yǎng)基中檢測(cè)3周。抑制劑陽性對(duì)照為ImM鹽酸氨基胍(AG) (Sigma 396494)。如前所述(Argirova和 Argirov，2003)，使用微板熒光儀 Cytofluor 2350 (Millipore)通過非色氨酸熒光(激發(fā)于360nm，發(fā)射于460nm)的增加檢測(cè)蛋白質(zhì)糖 化。通過減去背景讀數(shù)(不含葡萄糖的樣品)得到每一個(gè)實(shí)驗(yàn)點(diǎn)的糖化值并且表示為對(duì)照 (水)的％。結(jié)果與討論結(jié)果表明礦物質(zhì)提取物組合物和羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物在濃度為時(shí) 具有中等的(20-25% )糖化抑制活性，而且在測(cè)試的所有其它濃度下無抑制活性。在此模 型系統(tǒng)中，羅漢果提取物在所有測(cè)試的濃度下顯示出劑量依賴性糖化抑制作用(在0. 5% 時(shí)可達(dá)幾乎90%抑制)。在較低濃度下，木糖醇沒有作用，并且赤蘚醇具有中等的抑制作用。
氨基胍(AG)顯示強(qiáng)的糖化抑制活性，表明本實(shí)驗(yàn)的技術(shù)成功。參見圖7。實(shí)施例12本實(shí)驗(yàn)的目的是確定礦物質(zhì)提取物組合物在0.5% (ν ν)時(shí)對(duì)成年人成纖維細(xì) 胞的基因表達(dá)模式的作用方法人類成纖維細(xì)胞(批號(hào)7F3019，胸部，捐獻(xiàn)者為58歲)從Lonza，Inc.獲得，并且 根據(jù)制造商的說明書培養(yǎng)。將0.5% (ν ν)的礦物質(zhì)提取物組合物(批號(hào)100-151106) 加入至在75cm2燒瓶中的在DMEM (高葡萄糖)/5 % FCS中的匯合的確立細(xì)胞培養(yǎng)物，持續(xù)48 小時(shí)。孵化完成時(shí)，細(xì)胞用胰蛋白酶處理，沉淀并在液氮中速凍。沉淀含有約4百萬個(gè)細(xì)胞。然后用Qiagen試劑盒對(duì)細(xì)胞進(jìn)行RNA提取。提取的RNA質(zhì)量通過電泳測(cè)定兩 次(提取之后和微陣列分析之前)。使用來自PhalanxBiotechpalo Alto, CA)的人類 OneArray平臺(tái)將樣品技術(shù)性復(fù)制地雜交。然后，進(jìn)一步內(nèi)部處理在超過30，000個(gè)探針上 提取信息的Excel文件以排除具有高ρ值(ρ > 0. 1)和低倍變化(< T)的差異。所有描 述為“未歸類的”和“假定的”基因從最終分析中排除。使用ArrayStudio V2. 5 (Omicsoft) 軟件以確定受測(cè)試材料影響的功能類別。結(jié)果與討論分離的RNA的數(shù)量和質(zhì)量以及核酸與蛋白質(zhì)的比極佳，表明RNA不僅是完整的而 且不含蛋白質(zhì)雜質(zhì)。微陣列雜交是成功的。用礦物質(zhì)提取物組合物處理顯示基因表達(dá)模式 的變化。礦物質(zhì)提取物組合物調(diào)節(jié)2914個(gè)探針的表達(dá)，代表約9%的總探針。Array Studio 分析顯示礦物質(zhì)提取物組合物顯著地調(diào)節(jié)20個(gè)基因功能類別。細(xì)胞代謝類別被最顯著地調(diào)節(jié)。例如，觀察到線粒體核糖體蛋白的前體和NADH脫 氫酶的一致的上調(diào)，表明線粒體代謝通過涉及ATP生成的效應(yīng)物的合成的上調(diào)而活化。提 高的線粒體活性的進(jìn)一步的指征是細(xì)胞色素C氧化酶的上調(diào)，細(xì)胞色素C氧化酶是線粒體 呼吸鏈末端酶，該酶在調(diào)節(jié)能量的有氧生成上起關(guān)鍵作用。另一個(gè)顯著調(diào)節(jié)的類別是涉及鞘脂代謝過程的類別?？梢姵^5倍對(duì)MD-I蛋白 質(zhì)的表達(dá)。所述基因/蛋白質(zhì)涉及多糖鞘糖脂的合成，多糖鞘糖脂是涉及細(xì)胞膜完整性的 分子。有利于此途徑的化合物可用于皮膚護(hù)理的應(yīng)用。被上調(diào)的其它基因包括涉及解毒/ 抗氧化活性(對(duì)過氧化物氧還蛋白_5和超氧化物歧化酶-SOD-表達(dá)的刺激超過2倍)、細(xì) 胞死亡抑制(通過半胱天冬酶途徑的抑制)以及透明質(zhì)酸和I型膠原合成的上調(diào)的那些基 因。實(shí)施例13干燥增甜劑組合物組合物為包含礦物質(zhì)提取物組合物、羅漢果苷的羅漢果提取物和其它成分以形成 增甜劑的增甜劑的實(shí)例。參見下表中的具體量。
成分C. T. F. A.名稱ff/ff%A相—Α相A相 另外的成分或代替物可從以下序列中選擇。1-食物淀粉改良劑、膨脹劑和/或功能劑·木薯麥芽糊精.·小麥糊精·糯玉米·木薯淀粉· 成膜劑·固化劑·調(diào)味劑載體·膠凝劑·基于糧食的食物成分 水解的谷物固體
·麥芽糖糊精，也參見膨脹劑；包封成分·肉類膨脹劑·油、植物、玉米·改良的、預(yù)膠化的稀糊的淀粉、玉米、撒粉·制片劑·標(biāo)準(zhǔn)穩(wěn)定膠質(zhì)，如瓊脂、藻酸鹽、阿拉伯樹膠、角叉菜膠、羧甲基纖維素(CMC)、 羥丙基甲基纖維素、微晶纖維素和甲基纖維素、刺槐豆膠、瓜爾膠(植物瓜爾豆(Cyamopsis tetragonoloba)的胚乳)、菊粉(可從菊苣根和耶路撒冷菊芋(Jerusalem artichokes)中 提取的現(xiàn)有的食物纖維)、果膠(果膠從柑橘屬水果皮中提取)、黃原膠、阿拉伯樹膠。營(yíng)養(yǎng)制品成分包括可在人類和/或動(dòng)物的食物和健康之間建立聯(lián)系的任何自然 的和/或合成的類型。營(yíng)養(yǎng)制品成分可包括從水果、草藥、海產(chǎn)、香料、蔬菜和合成產(chǎn)生的化 合物中取得的成分。這些種類包括但不限于下列成分異黃酮、卵磷脂、油和脂肪(低級(jí)反 式脂肪油)、植物留醇、大豆蛋白、維生素、維生素E和混合生育酚。調(diào)味劑任何自然的和/或合成的調(diào)味劑可引入所述組合物中。可使用調(diào)味劑以 促進(jìn)組合物的使用。
權(quán)利要求
一種治療或預(yù)防糖化相關(guān)癥狀的方法，包括向人類或動(dòng)物施用有效量的包含礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物的抗糖化組合物，其中所述量有效地降低人類或動(dòng)物中的至少部分的糖化事件。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物包括礦物質(zhì)提取物組合物。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物包括羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物包括羅漢果苷組合物。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物還包括食物。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物還包括飲料。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述糖化相關(guān)癥狀包括糖化終產(chǎn)物的形成、AGE形 成，蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和/或核酸的糖化反應(yīng)、與糖化反應(yīng)相關(guān)的衰老效應(yīng)，以及糖尿病(I型和 II型)的并發(fā)癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、阿耳茨海默病、尿毒癥、神經(jīng)毒性、動(dòng)脈粥樣硬化、炎性 反應(yīng)、心室肥大、血管病、心肌炎、腎炎、關(guān)節(jié)炎、腎小球性腎炎、微血管病和腎機(jī)能不全，或 糖化產(chǎn)物的累積。
8.一種抗糖化組合物，包括羅漢果苷和礦物質(zhì)提取物組合物。
9.如權(quán)利要求8所述的組合物，還包括食物或飲料。
10.如權(quán)利要求8所述的組合物，還包括增甜劑組合物。
11.如權(quán)利要求8所述的抗糖化組合物，其中所述組合物包括羅漢果苷，并且用于能量產(chǎn)生。
12.如權(quán)利要求8所述的抗糖化組合物，其中所述組合物包括礦物質(zhì)提取物組合物，其 中所述組合物用于能量產(chǎn)生。
13.—種抑制糖化反應(yīng)的方法，包括a)提供有效量的包含礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢 果苷組合物的抗糖化組合物，且b)抑制糖化反應(yīng)。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述組合物包括礦物質(zhì)提取物組合物。
15.如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述組合物包括羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物。
16.如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述組合物包括羅漢果苷組合物。
17.如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述組合物還包括食物。
18.如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述組合物還包括飲料。
19.如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述組合物體內(nèi)提供于人類或動(dòng)物。
20.如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述組合物被體外提供。
全文摘要
本發(fā)明包括提供抗糖化活性的組合物，該組合物包括礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷/礦物質(zhì)提取物組合物或羅漢果苷組合物。所述組合物用于預(yù)防、治療和抑制體內(nèi)的糖化效應(yīng)的方法中。本發(fā)明的方法包括抗糖化組合物在對(duì)包括糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化、關(guān)節(jié)炎、精神癥狀和視力障礙的與糖化相關(guān)的癥狀的治療和預(yù)防中的用途。
文檔編號(hào)A01N37/12GK101932240SQ200880117917
公開日2010年12月29日 申請(qǐng)日期2008年10月10日 優(yōu)先權(quán)日2007年10月10日
發(fā)明者卡瑞斯·博加諾烏斯基, 拉蒙·費(fèi)蓋羅拉, 羅格·博洛特斯基, 雷諾德·多明戈斯 申請(qǐng)人:環(huán)球有機(jī)物有限責(zé)任公司