專利名稱：：一種有機免疫肥的制備方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種有機免疫肥的制備方法，特別涉及一種添加能夠表達各種抗菌肽(人類防御素LL-37、3、HNP1，動物來源抗菌肽Grahamin1、Grahamin2、Astacidin2，和植物防御素HsAFP?；虻慕湍讣毎挠袡C免疫肥的制備方法。
背景技術：
：隨著我國經(jīng)濟改革的不斷深入，農(nóng)村經(jīng)濟得到快速的發(fā)展，促進了養(yǎng)殖業(yè)的蓬勃發(fā)展。然而養(yǎng)殖業(yè)所產(chǎn)生的大量排泄物卻給環(huán)境衛(wèi)生帶來了很大壓力，長期堆放的畜禽糞便滋生大量的蚊蠅害蟲，帶著各種病菌到處傳播，給養(yǎng)殖業(yè)安全及從業(yè)人員健康帶來嚴重的威脅。利用"有機農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)循環(huán)鏈"模式下提供的牛糞、牛尿資源為載體，即有機土地一有機牧草一牛一牛糞、牛尿，加入能夠表達各種抗菌肽(人類防御素LL-37、HPD-3、HNP1，動物來源抗菌肽Grahamin1、Grahamin2、Astacidin2，和植物防御素HsAFP》基因的酵母細胞，隨著酵母發(fā)酵，分泌表達各種抗菌肽，使有機肥中含有幾種可以抑制殺滅有害微生物的抗菌肽，再添加多種微量元素和功能菌，制備而成的純生物有機肥料，不僅解決了養(yǎng)殖場安全問題，也實現(xiàn)了再創(chuàng)資源的可持續(xù)利用，形成了一個完全閉合的無污染、無殘留、無公害的有機循環(huán)產(chǎn)業(yè)鏈。另一方面，由于化肥在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中大量使用，雖然農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)量有了很大的提高，但帶來了諸如農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)下降、土壤板結、水源污染等問題，這些都是由于土壤長期缺乏有機質(zhì)和化肥過量使用造成的，要解決這些問題最根本的辦法是減少化肥的使用量增加土壤有機質(zhì)。而有機免疫肥能夠減少化肥的使用量，也可以延緩已形成的固態(tài)元素的釋放，與土壤中的營養(yǎng)成分均勻融合，同時可以有效殺滅土壤中的細菌、真菌和病毒，從而提高和改良土壤環(huán)境質(zhì)量。目前世界各國對無公害農(nóng)產(chǎn)品、綠色食品、有機食品的要求、標準越來越高，隨著我國國民經(jīng)濟的發(fā)展和人民生活水平的提高，國內(nèi)對農(nóng)產(chǎn)品的安全性的要求和認識也逐步提高，為了實踐二十一世紀的有機農(nóng)業(yè)的要求，提高人類健康水平，提高我國農(nóng)副產(chǎn)品市場競爭能力，減少農(nóng)作物對化肥、農(nóng)藥的使用量和對農(nóng)作物的污染，關鍵要從源頭種植環(huán)節(jié)控制住產(chǎn)品質(zhì)量，使用有機免疫肥，減少環(huán)境污染，達到有機農(nóng)業(yè)生產(chǎn)要求和標準，增強我國農(nóng)產(chǎn)品在國際市場上的競爭力。雖然人類已經(jīng)發(fā)展了許多強化營養(yǎng)素的有機肥，例如鈣、磷以及各種微量元素，但有關在有機肥中加入能夠表達各種抗菌肽(人類防御素LL-37、3、HNP1，動物來源抗菌肽Grahamin1、Grahamin2、Astacidin2，和植物防御素HsAFPO基因的酵母細胞，隨著酵母發(fā)酵，分泌表達各種抗菌肽，使有機肥中含有幾種可以抑制殺滅有害微生物的抗菌肽，從而制備有機免疫肥的研究卻還未見有報道。有機免疫肥是發(fā)展"兩高一優(yōu)"農(nóng)業(yè)和生產(chǎn)"綠色食品"的理想肥料。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明第一個目的在于公開一種含有抗菌肽的有機肥。本發(fā)明第二個目的在于公開一種有機肥的制備方法。本發(fā)明第三個目的在于公開一種有機免疫肥的制備方法。本發(fā)明目的是通過如下技術方案實現(xiàn)的本發(fā)明第一個技術方案為一種含有抗菌肽的有機肥，是由如下原料制成有機肥100000重量份抗菌肽1.05.0重量份本發(fā)明含有抗菌肽的有機肥的原料組成優(yōu)選為有機肥100000重量份抗菌肽1.0重量份。本發(fā)明含有抗菌肽的有機肥的原料組成優(yōu)選為有機肥100000重量份抗菌肽2.0重量份。本發(fā)明含有抗菌肽的有機肥的原料組成優(yōu)選為有機肥100000重量份抗菌肽2.5重量份。本發(fā)明含有抗菌肽的有機肥的原料組成優(yōu)選為有機肥100000重量份抗菌肽3.5重量份。本發(fā)明含有抗菌肽的有機肥的原料組成優(yōu)選為有機肥100000重量份抗菌肽4.5重量份。所述抗菌肽可以為(l)單鏈無半胱氨酸(Cys)的抗菌肽,或由無規(guī)則巻曲連接的兩段a-螺旋組成的肽。該類包括天蠶素Cecropins，Magainins等。(2)富含某些氨基酸殘基但不含Cys的抗菌肽。如富含脯氨酸(Pro)或甘氨酸(Gly)殘基的抗菌肽。如從豬腸內(nèi)分離的抗菌肽PR39中Pro含量占49y。。鞘翅肽Coleoptericin和半翅肽Hemiptericin的全序中富含Gly。(3)含一個二硫鍵的抗菌肽，該二硫鍵的位置通常在肽鏈C端。如爪蟾皮膚細胞中產(chǎn)生的Brevinins。(4)有兩個或兩個以上二硫鍵，具有P折疊結構的抗菌肽。如綠蠅防御素(Phormindefensin)，分子內(nèi)有6個Cys形成3個分子內(nèi)二硫鍵，肽鏈C末段是帶有擬e轉角的反向平行的e片層。上述抗菌肽可以根據(jù)現(xiàn)有技術制備，或通過市場購買。上述有機肥可以根據(jù)現(xiàn)有技術制備，或通過市場購買。本發(fā)明第二個技術方案提供了一種有機肥的制備方法，該方法包括如下步驟①將動物糞和/或尿發(fā)酵，并按照動物糞和/或尿與麥秸體積比為1_3:l-3加入麥秸得到物料；②用翻拋機將物料翻倒均勻；③放置2448小時后，當物料溫度達5(TC7(TC，再次將物料翻倒均勻；④間隔3050小時后測量溫度，當溫度再次上漲達至5(TC70。C，再次翻倒，若物料溫度降至2(TC3(TC以下，出料；⑤物料1000重量份中，分別加入鐵、碘、鋅、硒、銅、鈷、氟、錳、鉻、鉬一種或多種微量元素共計0.53.0重量份和加入地衣芽孢桿菌、浸麻芽孢桿菌一種或兩種功能菌共計1.05重量份；⑥制得有機肥。上述動物糞/尿可以為牲畜的糞或/和尿，優(yōu)選牛糞或/和牛尿；所述選用多種微量元素時各微量元素為等比例；所述選用多種功能菌時各功能菌為等比例添加。本發(fā)明第三個技術方案提供一種有機免疫肥的制備方法步驟l:制備抗菌肽利用基因工程方法，將等量人類防御素、動物來源抗菌肽、和植物防御素目的基因與pYES2/NT-C酵母載體連接，形成重組DNA分子，構建高效表達抗菌肽的載體，并將載體轉入酵母工程菌；選擇酵母菌作為工程菌，獲得高效表達抗菌肽的酵母工程菌株；步驟2:將動物糞和/或尿發(fā)酵，并按照動物糞和/或尿麥秸體積比為1-3:1-3加入麥秸得到物料，按常規(guī)方法將酵母工程菌加入到物料中，通過酵母工程菌的分泌表達，使肥料中含有有效殺菌濃度的抗菌肽，其中比例為動物糞和/或尿100000重量份、抗菌肽1.05.0重量份；用翻拋機將物料翻倒均勻；放置2448小時后，當物料溫度達50。C7(TC，再次將物料翻倒均勻；間隔3050小時測溫度，當溫度再次上漲達至50'C7(TC，再次翻倒，若物料溫度降至20'C3(rC以下，出料；物料1000重量份中，分別加入鐵、碘、鋅、硒、銅、鈷、氟、錳、鉻、鉬一種或多種微量元素共計0.53.0重量份和地衣芽孢桿菌、浸麻芽孢桿菌一種或兩種功能菌共計1.05重量份；制得有機免疫肥；上述動物糞和/或尿可以為牲畜的糞或/和尿，優(yōu)選牛糞或/和牛尿；所述選用多種微量元素時各微量元素為等比例；所述選用多種功能菌時各功能菌為等比例添加；所述按照動物糞和/或尿麥秸體積比優(yōu)選為2:2;所述按照動物糞和/或尿麥秸體積比優(yōu)選為2:3;所述動物糞和/或尿與抗菌肽的比例優(yōu)選為動物糞和/或尿100000重量份抗菌肽1.0重量份。所述動物糞和/或尿與抗菌肽的比例優(yōu)選為動物糞和/或尿100000重量份抗菌肽2.0重量份。所述動物糞和/或尿與抗菌肽的比例優(yōu)選為動物糞和/或尿100000重量份抗菌肽2.5重量份。本發(fā)明制備有機肥方法，可以是制備的有機肥中己形成的固態(tài)元素的延緩釋放，與土壤中地營養(yǎng)成分均勻融合。抗菌肽是動植物防御微生物入侵的第一道屏障，具有廣譜的抗菌作用，對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌和真菌都有殺滅作用，且有效作用濃度極低，9有些甚至在納摩爾濃度下就可完全抑制細菌的生長。本發(fā)明所提供的含有抗菌肽的有機肥，按常規(guī)方法將各種抗菌肽(LL-37、HPD-3、HNP1、Grahamin1、Grahamin2、Astacidin2和HsAFPJ加入使有機肥中，不僅能夠減少化肥的使用量，改善和提高土壤環(huán)境，同時還可以有效殺滅土壤中的細菌、真菌和病毒。本發(fā)明有機免疫肥更優(yōu)選利用"有機農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)循環(huán)鏈"模式下提供的牛糞、牛尿資源為載體，即有機土地一有機牧草一牛一牛糞、牛尿，加入能夠表達各種抗菌肽(人類防御素LL-37、HPD-3、HNP1，動物來源抗菌肽Grahamin1、Grahamin2、Astacidin2，和植物防御素HsAFPl)基因的酵母細胞，隨著酵母發(fā)酵，分泌表達各種抗菌肽，使有機肥中含有幾種可以抑制殺滅有害微生物的抗菌肽，再添加多種微量元素和功能菌，制備而成的純生物有機肥料。有機免疫肥可以延緩已形成的固態(tài)元素的釋放，與土壤中地營養(yǎng)成分均勻融合，同時可以有效殺滅土壤中的細菌、真菌和病毒，從而提高和改良土壤環(huán)境質(zhì)量。使用有機免疫肥，可以從源頭種植環(huán)節(jié)控制住產(chǎn)品質(zhì)量，減少環(huán)境污染，達到有機農(nóng)業(yè)生產(chǎn)要求和標準，增強我國農(nóng)產(chǎn)品在國際市場上的競爭力，是我國發(fā)展"兩高一優(yōu)"農(nóng)業(yè)和生產(chǎn)"綠色食品"的理想肥料。下述實驗例均能實現(xiàn)上述實驗例所述的效果。實驗例1本發(fā)明所述抗菌肽的抑菌實驗分別對革蘭氏陽性菌(金黃色葡萄球菌)、革蘭氏陰性菌(大腸桿菌、銅綠假單胞菌、鼠傷寒沙門氏菌、枯草桿菌、志賀氏菌)、真菌(白色念珠菌、黃曲霉菌、腐皮鐮刀菌)等測定最小抑菌濃度(MIC)。1.1.常量肉湯稀釋法1.1.1.培養(yǎng)基使用Mueller-Hinton(MH)肉湯，pH7.27.4。1.1.2接種物的制備用接種環(huán)挑取形態(tài)相似待檢菌落(金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌、鼠傷寒沙門氏菌、枯草桿菌、志賀氏菌、白色念珠菌、黃曲霉菌、腐皮鐮刀菌)，分別接種于45mL的MH肉湯中，35°C孵育26h。增菌后的對數(shù)生長期菌液用生理鹽水或MH肉湯校正濃度至0.5麥氏比濁標準，約含l2X10SCFU/ml。1.1.3稀釋抗菌肽的制備及菌液接種取無菌試管(13X100mm)13支，排成一排，除第1管加入1.6mLMH肉湯外，其余每管加入MH肉湯lmL，在第1管加入抗菌肽原液(如1280iig/mL)0.4mL混勻，然后吸取lmL至第2管，混勻后再吸取lml至第3管，如此連續(xù)倍比稀釋至第11管，并從第11管中吸取lmL棄去，第12管為不含藥物的生長對照。此時各管抗菌肽濃度依次為256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25ug/mL。然后在每管內(nèi)加入上述制備好的接種物各lmL，使每管最終菌液濃度約為5X105CFU/mL。第1管至第11管藥物濃度分別為128、64、32、16、8、4、2、1、05、0.25、0.125lig/mL。1.L4孵育將接種好的稀釋管塞好塞子，置35"C普通空氣孵箱中孵育1620h。1.1.5結果判斷與解釋以肉眼觀察，藥物最低濃度管無細菌生長者，即為受試菌的MIC。表l不同菌株的最小抑菌濃度(Wg/mL)菌種GrahaminlGrahamin2Astacidin23LL-37HNP1HsAFPl空白金黃色葡萄球菌2.52.58.012.02.516.0大腸桿菌1.55.04.06,010.020.0志賀桿菌1.252.51.025.0銅綠假單胞桿菌—8.013.052.5枯草桿菌2.0一6.0白色念珠菌7.57.5—6.025.0-一一黃曲霄菌——10.02.5—腐皮鐮刀菌——0.2—實驗例2有機免疫肥抑菌試驗1、通過PCR方法進行定性檢測，有機免疫肥中含有抗菌肽(LL-37、3、HNP1、Grahamin1、Grahamin2、Astacidin2禾卩HsAFPj的基因2、通過BCA蛋白定量試劑盒進行定量檢測，抗菌肽的總含量不低于lg/噸(有機肥)；3、按照100g有機免疫肥(按本發(fā)明方法制備)/有機肥(牛糞和尿)溶至100mL水中，利用瓊脂糖擴散法進行抑菌試驗。將金黃色葡萄球菌/大腸桿菌、銅綠假單胞菌、鼠傷寒沙門氏菌、枯草桿菌、志賀氏菌、白色念珠菌、黃曲霉菌和腐皮鐮刀菌涂布培養(yǎng)板上，然后將溶解好的有機免疫肥和有機肥溶液分別加到培養(yǎng)板上打好的小孔中，于37。C24h觀察抑菌環(huán)直徑。表2不同菌株的抑菌直徑(cm)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實驗例3有機免疫肥其他技術指標檢測按農(nóng)業(yè)部《生物有機肥國家標準》(NY884-2004)對有機免疫肥進行鑒定，應符合如下技術指標根據(jù)NY884-2004中4.2規(guī)定，有機免疫肥呈現(xiàn)粉狀，應松散、無惡臭味。根據(jù)NY884-2004中4.3規(guī)定，有機免疫肥干燥前有效活菌數(shù)(cfu)2億/g;有機質(zhì)(以干基計)》25.0%;水分《30.0%;pH值5.58.5;糞大腸菌群數(shù)《100個/g(mL);蛔蟲卵死亡率>95%;有效期^6月。根據(jù)NY525-2002規(guī)定，有及免疫肥中N+P205+K20>4%;產(chǎn)品標簽樣式(包括標識、使用說明書)均符合有關規(guī)定；有效活菌數(shù)測定應符合NY/T798-2004中5.3.2的規(guī)定；有機質(zhì)的測定應符合NY525-2002中5.2的規(guī)定；水分測定應符合NY/T798-2004中5.3.5的規(guī)定；pH值測定應符合NY/T798-2004中5.3.7的規(guī)定；糞大腸菌群數(shù)的測定應符合GB/T19524.1-2004的規(guī)定；蛔蟲卵死亡率的測定應符合GB/T19524.2-2004的規(guī)定；N、P205、1(20含量測定應符合NY525—2002中5.35.5的規(guī)定。下述實施例均能夠實現(xiàn)上述實驗例所述的效果具體實施方式實施例l:有機肥制備將牛糞和尿發(fā)酵，并按照牛糞和尿麥秸體積比為1:1加入麥秸得到物料；用德國翻拋機(型號Backhus16.43)將物料翻倒均勻；放置40小時后，當物料溫度達60。C,再次將物料翻倒均勻；間隔40小時測溫度，當溫度再次上漲達至60'C，再次翻倒，若物料溫度降至2(TC3(TC以下，出料；物料1000g中，分別加入等比例的鐵、碘、鋅、硒、銅、鈷、氟、錳、鉻、鉬微量元素1.5g和等比例的地衣芽孢桿菌、浸麻芽孢桿菌功能菌3g;制得有機肥。實施例2:有機肥制備將牛糞發(fā)酵，并按照牛糞麥秸體積比為1:2加入麥秸得到物料；用德國翻拋機(型號Backhus16.43)將物料翻倒均勻；放置35小時后，當物料溫度達65。C,再次將物料翻倒均勻；間隔35小時測溫度，當溫度再次上漲達至65'C，再次翻倒，若物料溫度降至2(TC3(TC以下，出料；物料1000g中，分別加入等比例的碘、鋅、硒、鈷、氟、錳、鉻、鉬微量元素2.0g和等比例的地衣芽孢桿菌、浸麻芽孢桿菌功能菌4g;制得有機肥。實施例3:有機免疫肥制備步驟l:制備抗菌肽利用基因工程方法，將等量人類防御素LL-37、動物來源抗菌肽Grahamin1、和植物防御素HsAFPl目的基因與pYES2/NT-C酵母載體連接，形成重組DNA分子，構建高效表達抗菌肽的載體，并將載體轉入酵母工程菌；選擇酵母菌作為工程菌，獲得高效表達抗菌肽的酵母工程菌株；步驟2:將動物糞發(fā)酵，并按照牛糞麥秸體積比為l:1加入麥秸得到物料，按常規(guī)方法將酵母工程菌加入到物料中，通過酵母工程菌的分泌表達，使肥料中含有有效殺菌濃度的抗菌肽，其中比例為牛糞100000g、抗菌肽4.0g;用德國翻拋機(型號Backhus16.43)將物料翻倒均勻；放置40小時后，當物料溫度達6(TC，再次將物料翻倒均勻；間隔40小時測溫度，當溫度再次上漲達至60。C，再次翻倒，當物料溫度降至2(TC3(TC以下，出料；物料1000g中，分別加入等比例的鐵、碘、鋅、硒、銅、鈷、氟、錳微量13元素2.0g和等比例的地衣芽孢桿菌、浸麻芽孢桿菌3g;制得有機免疫肥。實施例4:有機免疫肥制備步驟l:制備抗菌肽利用基因工程方法，將等量人類防御素HPD-3、動物來源抗菌肽Astacidin2與pYES2/NT-C酵母載體連接，形成重組DNA分子，構建高效表達抗菌肽的載體，并將載體轉入酵母工程菌；選擇酵母菌作為工程菌，獲得高效表達抗菌肽的酵母工程菌株；步驟2:將牛糞和尿發(fā)酵，并按照牛糞和尿(牛糞和尿為等重量)麥秸體積比為l:2加入麥秸得到物料，按常規(guī)方法將酵母工程菌加入到物料中，通過酵母工程菌的分泌表達，使肥料中含有有效殺菌濃度的抗菌肽，其中比例為牛糞和尿100000g、抗菌肽4.0g;用德國翻拋機(型號Backhus16.43)將物料翻倒均勻；放置40小時后，當物料溫度達6(TC，再次將物料翻倒均勻；間隔40小時測溫度，當溫度再次上漲達至60°C，再次翻倒，當物料溫度降至2(TC3(TC以下，出料；物料1000g中，分別加入等比例的碘、硒、銅、鈷、氟、錳微量元素2.5g和等比例的地衣芽孢桿菌4g;制得有機免疫肥。實施例5:含有抗菌肽的有機肥有機肥100000g天蠶素Cecropins2.Og;按現(xiàn)有技術方法制備有機肥和天蠶素Cecropins,經(jīng)常規(guī)方法制備含有天蠶素Cecropins的有機肥。實施例6:含有抗菌肽的有機肥有機肥100000g抗菌肽PR39l.Og按現(xiàn)有技術方法制備有機肥和抗菌肽，經(jīng)常規(guī)方法制備含有抗菌肽PR39的有機肥。實施例7:含有抗菌肽的有機肥有機肥100000g植物防御素HsAFPl1.0g按現(xiàn)有技術方法制備有機肥和植物防御素HsAFPl，經(jīng)常規(guī)方法制備含有抗菌肽的有機肥。權利要求1、一種含有抗菌肽的有機肥，其特征在于該含有抗菌肽的有機肥是由如下原料制備有機肥100000重量份抗菌肽1.0～5.0重量份。2、如權利要求1所述的含有抗菌肽的有機肥，其特征在于該含有抗菌肽的有機肥是由如下原料制備有機肥100000重量份抗菌肽1.0重量份。3、如權利要求1所述的含有抗菌肽的有機肥，其特征在于該含有抗菌肽的有機肥是由如下原料制備有機肥100000重量份抗菌肽2.0重量份。4、如權利要求1所述的含有抗菌肽的有機肥，其特征在于該含有抗菌肽的有機肥是由如下原料制備-有機肥100000重量份抗菌肽2.5重量份。5、如權利要求1所述的含有抗菌肽的有機肥，其特征在于該含有抗菌肽的有機肥是由如下原料制備有機肥100000重量份抗菌肽3.5重量份。6、如權利要求1所述的含有抗菌肽的有機肥，其特征在于該含有抗菌肽的有機肥是由如下原料制備有機肥100000重量份抗菌肽4.5重量份。7、如權利要求1-6所述的含有抗菌肽的有機肥，其特征在于抗菌肽、有機肥根據(jù)現(xiàn)有技術制備，或通過市場購買。8、一種有機免疫肥的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟步驟l:利用基因工程方法，將等量人類防御素、動物來源抗菌肽、和植物防御素目的基因與pYES2/NT-C酵母載體連接，形成重組DNA分子，構建高效表達抗菌肽的載體，并將載體轉入酵母工程菌；選擇酵母菌作為工程菌，獲得高效表達抗菌肽的酵母工程菌株；步驟2:將動物糞和/或尿發(fā)酵，并按照動物糞和/或尿麥秸體積比為l-3:l-3加入麥秸得到物料，按常規(guī)方法將酵母工程菌加入到物料中，通過酵母工程菌的分泌表達，使肥料中含有有效殺菌濃度的抗菌肽，其中比例為動物糞和/或尿100000重量份、抗菌肽1.05.0重量份；用翻拋機將物料翻倒均勻；放置2448小時后，當物料溫度達50。C7(TC，再次將物料翻倒均勻；間隔3050小時測溫度，當溫度再次上漲達至5(TC7(TC，再次翻倒，若物料溫度降至2(TC3(TC以下，出料；物料1000重量份中，分別加入鐵、碘、鋅、硒、銅、鈷、氟、錳、鉻、鉬中的一種或多種微量元素0.53.0重量份和地衣芽孢桿菌、浸麻芽孢桿菌一種或兩種功能菌1.05重量份；制得有機免疫肥。9、如權利要求8所述的有機免疫肥的制備方法，其特征在于所述選用多種微量元素時各微量元素為等比例。10、如權利要求8所述的機免疫肥的制備方法，其特征在于所述選用多種功能菌時各功能菌為等比例添加。11、如權利要求10所述的有機免疫肥的制備方法，其特征在于所述動物糞和/或尿麥秸體積比為2:2。12、如權利要求10所述的有機免疫肥的制備方法，其特征在于所述動物糞和/或尿麥秸體積比為2:3。13、如權利要求8所述的有機免疫肥的制備方法，其特征在于所述動物糞和/或尿與抗菌肽的比例為動物糞和/或尿100000重量份抗菌肽1.0重量份。14、如權利要求8所述的有機免疫肥的制備方法，其特征在于所述動物糞和/或尿與抗菌肽的比例為動物糞和/或尿100000重量份抗菌肽4.0重量份。15、如權利要求8所述的機免疫肥的制備方法，其特征在于所述動物糞和/或尿與抗菌肽的比例為動物糞和/或尿100000重量份抗菌肽2.0重量份。16、如權利要求8所述的機免疫肥的制備方法，其特征在于所述動物糞和/或尿與抗菌肽的比例為動物糞和/或尿100000重量份抗菌肽2.5重量份。17、如權利要求8所述的機免疫肥的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟步驟1:制備抗菌肽利用基因工程方法，將等量人類防御素LL-37、動物來源抗菌肽rahamin1、和植物防御素HsAFPl目的基因與pYES2/NT-C酵母載體連接，形成重組DNA分子，構建高效表達抗菌肽的載體，并將載體轉入酵母工程菌；選擇酵母菌作為工程菌，獲得高效表達抗菌肽的酵母工程菌株；步驟2:將動物糞發(fā)酵，并按照牛糞麥秸體積比為l:1加入麥秸得到物料，按常規(guī)方法將酵母工程菌加入到物料中，通過酵母工程菌的分泌表達，使肥料中含有有效殺菌濃度的抗菌肽，其中比例為牛糞100000重量份、抗菌肽4.0重量份；用型號Backhus16.43德國翻拋機將物料翻倒均勻；放置40小時后，當物料溫度達6(TC，再次將物料翻倒均勻；間隔40小時測溫度，當溫度再次上漲達至6CTC，再次翻倒，當物料溫度降至2(TC3(TC以下，出料；物料1000重量份中，分別加入等比例的鐵、碘、鋅、硒、銅、鈷、氟、錳微量元素2.0重量份和等比例的地衣芽孢桿菌、浸麻芽孢桿菌3重量份；制得有機免疫肥。18、如權利要求8所述的機免疫肥的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟步驟l:制備抗菌肽利用基因工程方法，將等量人類防御素HPD-3、動物來源抗菌肽Astacidin2與pYES2/NT-C酵母載體連接，形成重組DNA分子，構建高效表達抗菌肽的載體，并將載體轉入酵母工程菌；選擇酵母菌作為工程菌，獲得高效表達抗菌肽的酵母工程菌株；步驟2:將牛糞和尿發(fā)酵，并按照牛糞和尿(牛糞和尿為等重量)麥秸體積比為l:2加入麥秸得到物料，按常規(guī)方法將酵母工程菌加入到物料中，通過酵母工程菌的分泌表達，使肥料中含有有效殺菌濃度的抗菌肽，其中比例為牛糞和尿100000重量份、抗菌肽4.0重量份；用德國翻拋機(型號Backhus16.43)將物料翻倒均勻；放置40小時后，當物料溫度達60'C，再次將物料翻倒均勻；間隔40小時測溫度，當溫度再次上漲達至60。C，再次翻倒，當物料溫度降至2(TC3(TC以下，出料；物料1000重量份中，分別加入等比例的碘、硒、銅、鈷、氟、錳微量元素2.5重量份和等比例的地衣芽孢桿菌4重量份；制得有機免疫肥。19、一種有機肥的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟①將動物糞和/或尿發(fā)酵，并按照動物糞和/或尿與麥秸體積比為l-3:1-3加入麥秸得到物料；②用翻拋機將物料翻倒均勻；③放置2448小時后，當物料溫度達50'C7(TC，再次將物料翻倒均勻；間隔3050小時后測量溫度，當溫度再次上漲達至50。C7(TC，再次翻倒，若物料溫度降至2(TC3(TC以下，出料；⑤物料1000重量份中，分別加入鐵、碘、鋅、硒、銅、鈷、氟、錳、鉻、鉬微量元素共計0.53.0重量份和地衣芽孢桿菌、浸麻芽孢桿菌功能菌共計1.05重量份；⑥混合制得有機肥。20、如權利要求19所述的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟將牛糞和尿發(fā)酵，并按照牛糞和尿麥秸體積比為l:l加入麥秸得到物料；用型號Backhusl6.43德國翻拋機將物料翻倒均勻；放置40小時后，當物料溫度達6(TC，再次將物料翻倒均勻；間隔40小時測溫度，當溫度再次上漲達至6(TC，再次翻倒，若物料溫度降至2(TC3(TC以下，出料；物料1000重量份中，分別加入等比例的鐵、碘、鋅、硒、銅、鈷、氟、錳、鉻、鉬微量元素共計1.5重量份和等比例的地衣芽孢桿菌、浸麻芽孢桿菌功能菌共計3重量份；混合制得有機肥。全文摘要本發(fā)明公開一種有機免疫肥的制備方法。本發(fā)明是利用“有機農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)循環(huán)鏈”模式下提供的牛糞、牛尿為載體，加入各種抗菌肽基因的酵母細胞，隨著酵母發(fā)酵，分泌各種抗菌肽，再添加多種微量元素和功能菌，制備而成的純生物有機肥。有機免疫肥可以延緩已形成的固態(tài)元素的釋放，與土壤中地營養(yǎng)成分均勻融合，可有效殺滅土壤中的致病細菌、真菌和病毒，從而提高土壤環(huán)境質(zhì)量，是我國發(fā)展“兩高一優(yōu)”農(nóng)業(yè)和生產(chǎn)“綠色食品”的理想肥料。文檔編號C05D9/02GK101591203SQ200810113838公開日2009年12月2日申請日期2008年5月30日優(yōu)先權日2008年5月30日發(fā)明者于忠波,杜啟科,王銀香,谷登峰,陸家海申請人:山東銀香偉業(yè)生物工程有限公司;王銀香