專利名稱：一種人工栽培龍血樹誘導(dǎo)生產(chǎn)血竭的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種外源化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)龍血樹產(chǎn)生血竭的方法，尤其涉及一種利用外源化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)人工栽培龍血樹生產(chǎn)血竭的方法。
背景技術(shù)：
血竭是一種名貴而常用的傳統(tǒng)中藥，具有止血、活血、消炎、定痛和生肌的功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明血竭具有改善機(jī)體微循環(huán)，調(diào)整機(jī)體新陳代謝，提高機(jī)體免疫功能等作用，因而在臨床上得到廣泛的應(yīng)用。血竭主要來(lái)源于兩類植物一類是百合科植物劍葉龍血樹屬植物含脂木質(zhì)部中提取而得的樹脂(稱國(guó)產(chǎn)血竭，亦稱龍血竭)，實(shí)際上也主要依靠從東南亞進(jìn)口；另一類是棕櫚科黃藤屬藤本植物麒麟竭(DaemonoropsdracoBl.)及同屬他種植物果實(shí)中溶出或分泌的紅色樹脂(稱進(jìn)口血竭)。我國(guó)中醫(yī)應(yīng)用血竭的歷史有上千年，但長(zhǎng)期以來(lái)，我國(guó)的血竭原料仍然依賴于進(jìn)口。
龍血樹屬植物，全世界有150種左右，分布于亞洲和非洲的熱帶與亞熱帶地區(qū)。我國(guó)原產(chǎn)有5種，主要分布在海南、云南西雙版納、廣西、廣東等地。龍血樹生長(zhǎng)緩慢，在植物界中它的生命期最長(zhǎng)，可達(dá)八千年，因此被植物學(xué)家們譽(yù)之為“植物壽星”。龍血樹不僅具有重要的觀賞價(jià)值，可做室內(nèi)觀賞盆景，又可做公共場(chǎng)所的重要點(diǎn)綴觀賞植物，它還是提煉名貴中藥——“血竭”的重要原材料。如龍血樹屬中的劍葉龍血樹、海南龍血樹等是提煉血竭的原料，其經(jīng)濟(jì)價(jià)值極高。已有的研究表明，國(guó)產(chǎn)血竭是龍血樹樹干受傷后(如機(jī)械損傷、昆蟲蛀洞等)由于禾谷鐮刀菌(紅色)等真菌的浸入，龍血樹植物本身產(chǎn)生一種防衛(wèi)反應(yīng)，而形成的防衛(wèi)素即稱為血竭。通常，從龍血樹上獲取的血竭亦稱龍血竭。
龍血竭的獲取，目前有三種方法1、從野生龍血樹上取其自然干枯的樹桿或者枝條，再用其提煉血竭。野生龍血樹中血竭的形成是其在受傷后由于感染了禾谷鐮刀菌等真菌而形成的，其形成的過(guò)程比較緩慢，一般需要上百年的積累才能進(jìn)行砍伐，且因不斷的砍伐還會(huì)導(dǎo)致資源的枯竭。目前，周邊東南亞國(guó)家的龍血樹野生資源已經(jīng)枯竭，我國(guó)的野生龍血樹資源也已枯竭，上世紀(jì)八十年代我國(guó)就將龍血樹列為國(guó)家III級(jí)保護(hù)的珍稀瀕危保護(hù)植物。
2、利用龍血樹在組織培養(yǎng)的過(guò)程中，通過(guò)添加外源誘導(dǎo)物質(zhì)于增殖培養(yǎng)基中使幼苗在切割部位產(chǎn)生血竭并分泌到培養(yǎng)基中，然后直接將培養(yǎng)基烘干，用甲醇提取，即可得到血竭。
3、在野生劍葉龍血樹活體枝條上開槽或鉆孔，然后將從龍血樹上分離、培養(yǎng)、提取的菌株懸浮液注入其中，并用塑料膜密閉覆蓋，處理6～12個(gè)月后，將處理過(guò)的劍葉龍血樹枝條鋸下來(lái)，經(jīng)干燥、粉碎后用乙醇提取而得。該法使用的誘導(dǎo)物質(zhì)屬于微生物菌種，且適用于野生劍葉龍血樹，但目前野生大面積連片的龍血樹資源已經(jīng)枯竭。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種在人工栽培龍血樹或野生龍血樹上利用外源化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)生產(chǎn)血竭的方法。
本發(fā)明所提出的血竭生產(chǎn)方法，是利用人工栽培或野生的龍血樹，對(duì)三年齡以上的樹體通過(guò)截除其生長(zhǎng)不到二年的嫩枝干后，在二年生或二年生以上的枝干中間鉆孔注射外源化學(xué)誘導(dǎo)物質(zhì)，同時(shí)在枝干的四周進(jìn)行縱切3-8條縱溝，然后用脫脂棉吸濕外源化學(xué)誘導(dǎo)物質(zhì)后填充至縱溝里，再用透明的塑料薄膜或保鮮袋抱扎，兩頭封口。1個(gè)月后經(jīng)誘導(dǎo)的枝干開始產(chǎn)生紅色的血竭，5-10個(gè)月即可將該枝干截下，干燥、粉碎后用甲醇提取血竭。整個(gè)過(guò)程包括龍血樹的人工栽培過(guò)程、血竭的誘導(dǎo)過(guò)程以及血竭的提取過(guò)程。
所述龍血樹的人工栽培過(guò)程是將龍血樹幼苗按株行距1-2米×2-3米規(guī)格種植在田間，當(dāng)龍血樹生長(zhǎng)至高45-55厘米時(shí)對(duì)其進(jìn)行截頂分枝，并在每個(gè)截頂?shù)闹l上選留2-3條分枝；待分枝生長(zhǎng)至長(zhǎng)45-55厘米時(shí)再對(duì)其進(jìn)行截頂次分枝，在每條分枝上選留2-3條二級(jí)分枝，依次類推進(jìn)行，當(dāng)?shù)谌?jí)分枝長(zhǎng)出后可不再對(duì)其進(jìn)行截頂，讓其自然生長(zhǎng)。所述龍血樹幼苗是種子苗、扦插苗或組培苗。
所述血竭的誘導(dǎo)過(guò)程是在三年生以上人工栽培的龍血樹上將二年生以下的枝條截出，在二年生或二年生以上的枝干中間鉆孔，孔深40厘米或深至分枝部位，再往孔內(nèi)注射誘導(dǎo)物質(zhì)，并用脫脂棉封口；再在該枝干的四周縱切3-8條寬1厘米、深至木質(zhì)部、長(zhǎng)40厘米或至分枝部位的縱溝，并用脫脂棉吸濕誘導(dǎo)物質(zhì)后填充至縱溝里，然后再用透明的塑料薄膜或保鮮袋進(jìn)行抱扎，兩頭封口。1個(gè)月后誘導(dǎo)的枝干開始產(chǎn)生紅色的血竭，5-10個(gè)月后所處理的枝條整個(gè)木質(zhì)部都充滿了血脂，即全部變成紅色，此時(shí)可將其切下進(jìn)行血竭的提取。所述誘導(dǎo)物質(zhì)是6-BA。
所述血竭的提取過(guò)程是將已誘導(dǎo)產(chǎn)生血脂的枝干截取，干燥粉碎后，用甲醇提取，即得到血竭。
本發(fā)明所述血竭的誘導(dǎo)過(guò)程也可以選擇在野生的龍血樹上進(jìn)行。
本發(fā)明所提供的在人工栽培龍血樹或野生龍血樹上利用外源化學(xué)物質(zhì)人工誘導(dǎo)生產(chǎn)血竭的方法，工藝簡(jiǎn)單，操作方便，誘導(dǎo)效果顯著，可極大地縮短血竭生產(chǎn)的周期，實(shí)用于大規(guī)模標(biāo)準(zhǔn)化商品化生產(chǎn)，能很好地解決因龍血樹資源匱乏而不能大量生產(chǎn)血竭的問(wèn)題，可使再生資源得到高效和可持續(xù)發(fā)展，所體現(xiàn)的經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益和生態(tài)效益均非常顯著。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。
本發(fā)明所涉及的在人工栽培龍血樹或野生龍血樹上，通過(guò)外源化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)生產(chǎn)血竭的方法，包括龍血樹的人工栽培過(guò)程、血竭的誘導(dǎo)過(guò)程以及血竭的提取過(guò)程。
1、龍血樹的人工栽培過(guò)程選地選水源方便，土層深厚，土壤肥沃的地塊；土地整理先對(duì)土地進(jìn)行兩犁兩耙，再按株行距1-2米×2-3米的規(guī)格挖穴，穴的規(guī)格為口寬0.4米×底寬0.4米×深0.4米；基肥每穴施入豬牛糞10kg，過(guò)磷酸鈣0.25kg，復(fù)合肥0.1kg，尿素0.05kg；苗木規(guī)格20-30厘米高的龍血樹種子苗、或扦插苗或組培苗；種植3-8月為最佳種植季節(jié)，植后淋透水；栽培管理種植后每年施追肥3-4次，每次0.1-0.2kg復(fù)合肥；樹身管理生長(zhǎng)至高45-55厘米時(shí)對(duì)其進(jìn)行截頂分枝，并在每個(gè)截頂?shù)闹l上選留2-3條分枝；待分枝生長(zhǎng)至長(zhǎng)45-55厘米時(shí)再對(duì)其進(jìn)行截頂次分枝，同樣再在每條分枝上選留2-3條二級(jí)分枝，依次類推進(jìn)行，當(dāng)?shù)谌?jí)分枝長(zhǎng)出后可不再對(duì)其進(jìn)行截頂，讓其自然生長(zhǎng)。
2、血竭的誘導(dǎo)過(guò)程在三年生以上人工栽培的龍血樹上將二年生以下的枝條截出，在二年生或二年生以上的枝干中間鉆孔，孔徑1-2厘米，孔深40厘米或至分枝部位，再往孔內(nèi)注射誘導(dǎo)物質(zhì)至滿，用脫脂棉堵塞孔口；在枝干的四周縱切3-8條寬1厘米、深至木質(zhì)部、長(zhǎng)40厘米或至分枝部位的縱溝，用脫脂棉吸濕誘導(dǎo)物質(zhì)后填充至縱溝里，或用脫脂棉填充在縱溝里再充分注射誘導(dǎo)物質(zhì)，最后再用透明的塑料薄膜或保鮮袋把整條枝干抱扎，兩頭封口。約1個(gè)月后誘導(dǎo)的枝干開始產(chǎn)生血竭，5-10月該枝干木質(zhì)部全部變?yōu)榧t色，可用于提取血竭。所述誘導(dǎo)物質(zhì)是0.5-10.0mg/L 6-BA。
3、血竭的提取過(guò)程將已誘導(dǎo)產(chǎn)生血竭的枝干截取，干燥、粉碎后用甲醇提取，即得到血竭。所述用甲醇提取血竭的過(guò)程是用分析純甲醇溶解粉碎物，之后經(jīng)過(guò)濾并棄其殘?jiān)?，所得濾液用石油醚萃取，靜置后分層；待甲醇層回收溶劑至小體積后再加入蒸餾水，使甲醇濃度達(dá)到28-35％，接著再進(jìn)行過(guò)濾得到濾液和濾渣；將濾液于Diaion樹脂上層析，再用蒸餾水洗脫除去寡糖，然后又用甲醇洗脫，回收甲醇洗脫液后用SephadexLH-20層析，再以45-55％甲醇為洗脫劑進(jìn)行洗脫，得到若干個(gè)流分；將所得流分用MCIgel柱或SephadexLH-20層析純化，所得化合物即為血竭的有效成分；將濾渣先以石油醚-丙酮的混合溶液為洗脫劑用200～300目硅膠柱層析，獲得若干流分段，再經(jīng)SephadexLH-20柱層析，再用MCIgel柱分別純化，所得化合物即為血竭的有效成分。所述石油醚-丙酮混合溶液中石油醚與丙酮的比例為5∶3。
本發(fā)明所述血竭的誘導(dǎo)過(guò)程可以選擇在野生的龍血樹上進(jìn)行。
權(quán)利要求
1.一種人工栽培龍血樹誘導(dǎo)生產(chǎn)血竭的方法，其特征在于包括龍血樹的人工栽培過(guò)程、血竭的誘導(dǎo)過(guò)程以及血竭的提取過(guò)程1)、所述龍血樹的人工栽培過(guò)程是按株行距1-2米×2-3米的規(guī)格種植龍血樹幼苗，待苗木生長(zhǎng)至高45-55厘米時(shí)進(jìn)行截頂分枝，并在每個(gè)截頂?shù)闹l上選留2-3條分枝；待分枝生長(zhǎng)至長(zhǎng)45-55厘米時(shí)再進(jìn)行截頂次分枝，每條分枝選留2-3條二級(jí)分枝，依次類推到第三級(jí)分枝時(shí)可不再截頂，讓其自然生長(zhǎng)；2)、所述血竭的誘導(dǎo)過(guò)程是在三年生以上人工栽培的龍血樹上將二年生以下的枝條截出，在二年生或二年生以上的枝干中間鉆孔，孔徑1-2厘米，孔深40厘米或至分枝部位，再往孔內(nèi)注射誘導(dǎo)物質(zhì)至滿，用脫脂棉堵塞孔口；在枝干的四周縱切3-8條寬1厘米、深至木質(zhì)部、長(zhǎng)40厘米或至分枝部位的縱溝，用脫脂棉吸濕誘導(dǎo)物質(zhì)后填充至縱溝里，最后再用透明的塑料薄膜或保鮮袋把整條枝干抱扎，兩頭封口，待枝干木質(zhì)部全部變?yōu)榧t色，用于提取血竭；所述誘導(dǎo)物質(zhì)是0.5-10.0mg/L 6-BA；3)、所述血竭的提取過(guò)程是將已誘導(dǎo)產(chǎn)生血竭的枝干截取，干燥、粉碎后用甲醇提取，即得到血竭。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人工栽培龍血樹誘導(dǎo)生產(chǎn)血竭的方法，其特征在于所述龍血樹幼苗是種子苗、扦插苗或組培苗。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人工栽培龍血樹誘導(dǎo)生產(chǎn)血竭的方法，其特征在于所述血竭的誘導(dǎo)過(guò)程是在野生的龍血樹上進(jìn)行。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人工栽培龍血樹誘導(dǎo)生產(chǎn)血竭的方法，其特征在于在血竭的誘導(dǎo)過(guò)程中縱溝的埋填方式是將脫脂棉填充在縱溝里再充分注射誘導(dǎo)物質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種在人工栽培龍血樹或野生龍血樹上利用外源化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)生產(chǎn)血竭的方法，它是在三年生以上的龍血樹上，在二年生或二年生以上的枝干中間鉆孔并注入誘導(dǎo)物質(zhì)，并在枝干四周縱切縱溝，然后用脫脂棉吸濕誘導(dǎo)物質(zhì)后填充至縱溝里，再用透明的塑料薄膜或保鮮袋將整條枝干抱扎封口，待整條枝干全部變紅產(chǎn)生血竭后將枝干截取，干燥、粉碎后用甲醇提取得到血竭。本發(fā)明所提供的利用化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)龍血樹生產(chǎn)血竭的方法，工藝簡(jiǎn)單，操作方便，誘導(dǎo)效果顯著，可極大地縮短血竭生產(chǎn)的周期，實(shí)用于大規(guī)模標(biāo)準(zhǔn)化商品化生產(chǎn)，對(duì)龍血樹資源的保護(hù)、開發(fā)和利用提供有效的新途徑，具有重要的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)和生態(tài)效益。
文檔編號(hào)A01G7/06GK101032207SQ200710100470
公開日2007年9月12日 申請(qǐng)日期2007年4月12日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月12日
發(fā)明者楊本鵬, 張樹珍, 楊學(xué), 蔡文偉 申請(qǐng)人:中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所