專利名稱：丁香酚、蛇床子素復(fù)配生物殺菌劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種防治植物病害的殺菌劑，屬于植物保護(hù)領(lǐng)域，具體是關(guān)于植物來源的天然化合物丁香酚、蛇床子素復(fù)配而成的生物殺菌劑。
背景技術(shù)：
約有80％的植物病害中是由真菌引起的。植物真菌病害不僅降低作物的產(chǎn)量和品質(zhì)，而且在農(nóng)產(chǎn)品貯藏、加工、運(yùn)輸過程中進(jìn)一步發(fā)展造成更大危害和損失，有些還能產(chǎn)生真菌毒素污染。許多植物病害如白粉病、灰霉病、疫病、霜霉病、紋枯病、葉斑病等已成為影響農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的主要病害。目前對(duì)植物真菌病害的藥劑防治主要采用化學(xué)殺菌劑防治。隨著化學(xué)農(nóng)藥使用頻率和使用量增加，其潛在的弊端也逐漸暴露出來(1)毒性較高；(2)農(nóng)藥殘留超標(biāo)；(3)病菌對(duì)藥劑產(chǎn)生嚴(yán)重的抗藥性。如有報(bào)道卵菌對(duì)苯基酰胺類(甲霜靈)及乙磷鋁兩類藥劑抗性問題已有很多報(bào)道；鐮刀菌、菌核菌、葉斑病菌等多種病原真菌對(duì)多菌靈和甲基托布津早已產(chǎn)生抗性；灰霉病菌對(duì)二甲酰亞胺類(速克靈)、苯胺基嘧啶類、咪唑類菌劑等已產(chǎn)生多重抗性；白粉病菌對(duì)三唑酮已產(chǎn)生了抗性。
隨著人們對(duì)植物病害生物防治的重視，生物農(nóng)藥在植物病害防治工作中的作用越來越重要。生物農(nóng)藥具有毒性低、環(huán)境兼容性好，不同作用機(jī)制的生物農(nóng)藥也將對(duì)現(xiàn)有生產(chǎn)上已經(jīng)產(chǎn)生抗藥性的農(nóng)藥品種起到一種緩解抗性風(fēng)險(xiǎn)的作用。
丁香酚(eugenol)，又稱丁子香酚，化學(xué)名稱為2-甲氧基-4-烯丙基苯酚，分子式為C10H12O2。無色至淡黃色液體，在空氣中變棕色，存在于丁香油、內(nèi)桂葉油、內(nèi)桂皮油、樟腦油、肉豆蔻油等中。丁香酚在醫(yī)藥上的藥理活性主要表現(xiàn)為抑菌、麻醉、解熱、抗氧化、抗腫瘤、促進(jìn)透皮吸收、祛蚊等。丁香酚具有辛香科的強(qiáng)烈香氣，生活中常用作牙膏香料、抗氧化劑和防腐劑等。丁香酚在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用，李鵬霞2006年報(bào)道該化合物在室內(nèi)對(duì)蘋果貯藏期病害致病真菌如蘋果青霉、蘋果灰霉、蘋果炭疽等有抑制作用。
香豆素類化合物蛇床子素(Osthol)，化學(xué)名稱為8-(3-甲基-2-丁烯基)甲醚繖形酮，是傘形花科植物蛇床子中主要成分，也是歐前胡、圓當(dāng)歸、毛當(dāng)歸、栓翅芹的根和根莖，蕓香科植物八角、黃皮的根皮，單葉蕓香等的地上部分的活性成分。蛇床子素在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用，2004年江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院申請(qǐng)了“蛇床子素及其復(fù)配組合物防治作物白粉病”及“蛇床子素復(fù)配組合物”。該化合物對(duì)作物白粉病有良好的防治效果，且毒性低，不污染環(huán)境。但該化合物不能進(jìn)行人工合成，成本相對(duì)較高。
關(guān)于丁香酚和蛇床子素這兩種化合物的復(fù)配殺菌劑至今未見有相關(guān)報(bào)道和應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明目的是針對(duì)以上兩種化合物的特征，提供一種高效、低毒的植物來源的天然化合物復(fù)配組合物，其主要成分為丁香酚和蛇床子素，可用于防治瓜果、蔬菜、水稻、小麥、果樹等植物上的真菌性病害。
技術(shù)方案一種丁香酚、蛇床子素復(fù)配殺菌劑，由丁香酚和蛇床子素組成，丁香酚和蛇床子素的重量比例為1∶1～8∶1之間。將蛇床子素、丁香酚按比例混勻即可。
所述復(fù)配殺菌劑可以制成由丁香酚、蛇床子素、溶劑、助劑和水組成的微乳劑。其制法是首先將蛇床子素、丁香酚按比例混勻，再依次加入不同比例的溶劑、助劑和水，按常規(guī)方法配制。
本發(fā)明所述的復(fù)配殺菌劑具有以下優(yōu)點(diǎn)1、增效性，室內(nèi)復(fù)配配方篩選結(jié)果表明，丁香酚和蛇床子素按不同比例復(fù)配對(duì)不同的植物病原真菌均具有明顯的增效作用。
2、降低成本，由于蛇床子素不能人工合成，其來源依賴于植物材料，成本相對(duì)較高，而丁香酚雖然也是來源植物的一種化合物，但是其已經(jīng)可以進(jìn)行人工合成。因此兩者復(fù)配不但能降低使用成本，更能降低對(duì)植物資源的依賴。
3、擴(kuò)大抑菌譜，丁香酚和蛇床子素兩者作用機(jī)制不同，不容易產(chǎn)生交互抗性。丁香酚是破壞真菌菌絲體細(xì)胞膜、影響膜的滲透性，從而導(dǎo)致菌體死亡。蛇床子素對(duì)病原真菌的作用機(jī)理是抑制葡萄糖的吸收而導(dǎo)致糖饑餓，糖饑餓引起幾丁質(zhì)水解酶活性升高，影響到細(xì)胞壁的形成，另一方面抑制鈣的吸收，影響到細(xì)胞壁前體物質(zhì)的運(yùn)輸、沉積，最終影響到菌絲頂端生長(zhǎng)。兩者復(fù)配可以克服化學(xué)藥劑容易產(chǎn)生抗性的缺點(diǎn)，擴(kuò)大藥劑使用范圍，延長(zhǎng)持效期，提高藥效。
4、毒性低，丁香酚和蛇床子素均屬于植物來源的化合物，其毒性低，對(duì)人和環(huán)境安全。丁香酚對(duì)大鼠急性經(jīng)口毒性LD50＞3000mg/Kg；蛇床子素對(duì)大鼠急性經(jīng)口、經(jīng)皮毒性 ♀＞5000mg/Kg。`按照急性口服毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)兩者分別屬于微毒和低毒類。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1丁香酚與蛇床子素復(fù)配室內(nèi)配方篩選1、供試藥劑A.99.0％丁香酚，購于南京豐澤土畜產(chǎn)品有限責(zé)任公司，溶解于70％乙醇，配制成10000μg/ml母液備用。
B.94.7％蛇床子素，購于四川成都龍泉高科生物制品公司，溶解于70％乙醇，配制成10000μg/ml母液備用。
2、供試菌株水稻紋枯病菌(Rhizoctonia solani)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)(均由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食品質(zhì)量安全與檢測(cè)研究所提供)。
3、試驗(yàn)方法采用菌絲生長(zhǎng)速率測(cè)定法試驗(yàn)設(shè)9個(gè)處理，即丁香酚、蛇床子素、5個(gè)丁香酚和蛇床子素的不同配比、溶劑對(duì)照和空白對(duì)照，將兩種藥劑的母液按不同比例加入到定量的融化的PDA培養(yǎng)基中，使兩個(gè)單劑和復(fù)配劑的最終濃度分別為100、50、25、12.5、6.25μg/ml，充分搖勻，倒入已滅菌的培養(yǎng)皿(直徑9cm)中，待培養(yǎng)基凝固后，用直徑0.5cm打孔器制取菌碟，用接種針將菌碟接種到培養(yǎng)基中央，菌絲面朝下，每皿一塊，每處理重復(fù)4次，置于26℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)5(天)后用十字交叉法測(cè)量菌落直徑。以4次重復(fù)的平均值計(jì)算抑制率。計(jì)算公式為 根據(jù)公式計(jì)算抑制率，利用百分比與幾率值對(duì)照表將抑制率轉(zhuǎn)換成機(jī)率值，同時(shí)將劑量濃度換算成對(duì)數(shù)值，以劑量對(duì)數(shù)值(x)和機(jī)率值(y)得到毒力公式Y(jié)＝a+bx，計(jì)算出相關(guān)系數(shù)r及抑制中濃度EC50。
根據(jù)Wadley的方法計(jì)算混配劑的相互作用，以增效系數(shù)SR值分析混配的效果EC50(理論值)＝(c+d)/[c/EC50(C)+d/EC50(D)]；SR＝EC50(理論值)/EC50(實(shí)際值)；C、D分別代表混劑中的兩種組分；c、d分別代表兩種單劑在混劑中的比例；EC50(實(shí)際值)為特定混劑的實(shí)際測(cè)定值；SR≥1.5表示兩種單劑混配后具有增效作用；SR≤0.5表示兩種單劑混配后具有拮抗作用；0.5≤SR≤1.5表示兩種單劑混配后具有相加作用。
4、試驗(yàn)結(jié)果丁香酚、蛇床子素兩種單劑及不同復(fù)配組合物對(duì)供試植物病原真菌的抑制率、毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)r、有效抑制中濃度EC50和混劑的增效系數(shù)SR見表1。
表1丁香酚、蛇床子素復(fù)配配方的篩選結(jié)果

注表中丁香酚和蛇床子素的各個(gè)比例均為有效成分之比。
實(shí)施例2丁香酚與蛇床子素復(fù)配殺菌劑田間藥效試驗(yàn)丁香酚與蛇床子素復(fù)配殺菌劑防治草莓白粉病田間試驗(yàn)(試驗(yàn)方案按照《農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則(二)》設(shè)計(jì))一、試驗(yàn)設(shè)計(jì)和安排1、供試作物和防治對(duì)象。
供試作物草莓，品種為豐香。
防治對(duì)象草莓白粉病，病原菌為Sphaerotheca pannosa。
2、供試藥劑試驗(yàn)藥劑20％丁香酚微乳劑，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，有效濃度為300μg/ml。
1％蛇床子素水乳劑，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，有效濃度為40μg/ml。
22.5％丁香酚·蛇床子素微乳劑(有效成分20％丁香酚+2.5％蛇床子素)，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，有效濃度為200μg/ml丁香酚+25μg/ml蛇床子素。
22.5％丁香酚·蛇床子素微乳劑(有效成分20％丁香酚+2.5％蛇床子素)，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，有效濃度為150μg/ml丁香酚+18.75μg/ml蛇床子素。
22.5％丁香酚·蛇床子素微乳劑(有效成分20％丁香酚+2.5％蛇床子素)，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，有效濃度為100μg/ml丁香酚+12.5μg/ml蛇床子素。
對(duì)照藥劑70％代森錳鋅可濕性粉劑900倍，市售，上海華泰農(nóng)藥有限公司生產(chǎn)。
3、小區(qū)設(shè)計(jì)試驗(yàn)地塊的選擇此試驗(yàn)設(shè)在江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所試驗(yàn)大棚基地。
試驗(yàn)設(shè)7個(gè)藥劑處理，22.5％丁香酚·蛇床子素微乳劑225μg/mL、22.5％丁香酚·蛇床子素微乳劑168.75μg/mL、22.5％丁香酚·蛇床子素微乳劑112.5μg/mL，20％丁香酚微乳劑300μg/mL，1％蛇床子素水乳劑40μg/mL，70％代森錳鋅可濕性粉劑900倍，空白對(duì)照。小區(qū)面積15m2，4次重復(fù)，小區(qū)間采用完全隨機(jī)區(qū)組排列，分別于2007年2月28日、3月6日施二次藥，施藥用工農(nóng)-16型人工背負(fù)式噴霧器，每667m2藥液量為60kg。
4、調(diào)查方法每小區(qū)對(duì)角線五點(diǎn)取樣，每點(diǎn)五株。每株各取3張有代表性的復(fù)葉，以復(fù)葉上每張葉片病斑面積占整個(gè)小葉片面積百分率分級(jí)。
分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為0級(jí)無病斑；1級(jí)病斑面積占整個(gè)葉面積5％以下；3級(jí)病斑面積占整個(gè)葉面積6％～15％；5級(jí)病斑面積占整個(gè)葉面積16％～25％；7級(jí)病斑面積占整個(gè)葉面積26％～50％；9級(jí)病斑面積占整個(gè)葉面積50％以上。
5、調(diào)查時(shí)間和次數(shù)本試驗(yàn)共調(diào)查2次，于2月28日第1次施藥前調(diào)查病情基數(shù)，第2次調(diào)查在3月12日最后一次藥后6d進(jìn)行。


CK0噴藥前不施藥對(duì)照區(qū)的病指。CK1噴藥后不施藥對(duì)照區(qū)的病指。
pt0噴藥前處理區(qū)的病指。Pt1噴藥后處理區(qū)的病指。
二、試驗(yàn)結(jié)果表2 22.5％蛇床子素·丁香酚微乳劑防治草莓白粉病田間藥效試驗(yàn)結(jié)果 江蘇南京

注不同小寫字母表示差異達(dá)0.05顯著水平。
*為4次重復(fù)的平均值。
丁香酚與蛇床子素復(fù)配殺菌劑防治油菜菌核病田間試驗(yàn)(試驗(yàn)方案按照《農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則(一)》設(shè)計(jì))一、試驗(yàn)設(shè)計(jì)和安排1、供試作物和防治對(duì)象。
供試作物油菜，品種為油研8號(hào)。
防治對(duì)象油菜菌核病，病原菌為Sclerotinia sclerotiorum。
2、供試藥劑試驗(yàn)藥劑20％丁香酚微乳劑，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，有效濃度為300μg/ml。
1％蛇床子素水乳劑，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，有效濃度為80μg/ml。
10％丁香酚·蛇床子素微乳劑(有效成分5％丁香酚+5％蛇床子素)，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，有效濃度為60μg/ml丁香酚+60μg/ml蛇床子素。
10％丁香酚·蛇床子素微乳劑(有效成分5％丁香酚+5％蛇床子素)，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，有效濃度為50μg/ml丁香酚+50μg/ml蛇床子素。
10％丁香酚·蛇床子素微乳劑(有效成分5％丁香酚+5％蛇床子素)，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，有效濃度為40μg/ml丁香酚+40μg/ml蛇床子素。
對(duì)照藥劑40％菌核凈可濕性粉劑75g/667m2，市售，揚(yáng)州市蘇靈農(nóng)藥化工有限公司生產(chǎn)。
3、小區(qū)設(shè)計(jì)試驗(yàn)地塊的選擇此試驗(yàn)設(shè)在江蘇省建湖縣蘆溝鎮(zhèn)蘆東村一油菜種植地。
試驗(yàn)設(shè)7個(gè)藥劑處理10％丁香酚·蛇床子素微乳劑120μg/mL、10％丁香酚·蛇床子素微乳劑100μg/mL、10％丁香酚·蛇床子素微乳劑80μg/mL，20％丁香酚微乳劑300μg/mL，1％蛇床子素水乳劑80μg/mL，40％菌核凈可濕性粉劑75g/667m2，空白對(duì)照。小區(qū)面積20m2，4次重復(fù)，小區(qū)間采用完全隨機(jī)區(qū)組排列，分別于2006年4月6日、4月13日施二次藥，施藥用工農(nóng)-16型人工背負(fù)式噴霧器，每667m2藥液量為60kg。
4、調(diào)查方法每小區(qū)棋盤式10點(diǎn)取樣，每點(diǎn)5株。并根據(jù)以下分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)記錄發(fā)病情況；分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為0級(jí)無病斑；
1級(jí)輕微發(fā)病，發(fā)病面積占整個(gè)植株面積的5％以下；3級(jí)輕微發(fā)病，發(fā)病面積占整個(gè)植株面積的6％～15％；5級(jí)中等發(fā)病，發(fā)病面積占整個(gè)植株面積的16％～30％；7級(jí)高度發(fā)病，發(fā)病面積占整個(gè)植株面積的31～50％以下；9級(jí)嚴(yán)重發(fā)病，發(fā)病面積占整個(gè)植株面積的50％以上。
5、調(diào)查時(shí)間和次數(shù)本試驗(yàn)共調(diào)查1次，于在油菜菌核病發(fā)病基本定局即2006年5月21日調(diào)查各小區(qū)發(fā)病情況。


CK1噴藥后不施藥對(duì)照區(qū)的病指。Pt1噴藥后處理區(qū)的病指。
二、試驗(yàn)結(jié)果表3 10％蛇床子素·丁香酚微乳劑防治油菜菌核病田間藥效試驗(yàn)結(jié)果 江蘇建湖

注不同小寫字母表示差異達(dá)0.05顯著水平。
*為4次重復(fù)的平均值。
權(quán)利要求
1.一種丁香酚、蛇床子素復(fù)配殺菌劑，其特征是該復(fù)配殺菌劑由丁香酚和蛇床子素組成，丁香酚和蛇床子素的重量比例為1∶1～8∶1之間。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的丁香酚、蛇床子素復(fù)配殺菌劑，其特征是丁香酚和蛇床子素的重量比例為1∶1～6∶1之間。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的丁香酚、蛇床子素復(fù)配殺菌劑，其特征是丁香酚和蛇床子素的重量比例為1∶1～4∶1之間。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的丁香酚、蛇床子素復(fù)配殺菌劑，其特征是丁香酚和蛇床子素的重量比例為1∶1～2∶1之間。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3或4所述的丁香酚、蛇床子素復(fù)配殺菌劑，其特征是所述復(fù)配殺菌劑由蛇床子素、丁香酚、溶劑、助劑和水組成的微乳劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種丁香酚、蛇床子素復(fù)配生物殺菌劑，該復(fù)配殺菌劑由蛇床子素和丁香酚組成，丁香酚和蛇床子素的重量比例為1∶1～8∶1之間。本發(fā)明中的兩種化合物均來源于植物，復(fù)配物對(duì)人和環(huán)境安全。對(duì)植物病原菌的作用機(jī)理不同，使用后病原菌不易對(duì)其產(chǎn)生抗藥性。
文檔編號(hào)A01N31/08GK101036461SQ20071002172
公開日2007年9月19日 申請(qǐng)日期2007年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月26日
發(fā)明者王春梅, 石志琦, 陳浩, 范永堅(jiān) 申請(qǐng)人:江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院