專利名稱：用于培養(yǎng)餌料線蟲的細(xì)菌菌株(kg品系)及其線蟲培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于培養(yǎng)餌料線蟲的細(xì)菌及其餌料線蟲Panagrellus redivivus的培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
世界范圍的水產(chǎn)養(yǎng)殖，特別是對(duì)蝦的養(yǎng)殖熱帶動(dòng)了水產(chǎn)品幼苗培育的發(fā)展，也加劇了生物餌料的需求，尤其是鹵蟲的需求。鹵蟲一般采自高鹽度水域，其集約化養(yǎng)殖尚未形成規(guī)模。最初，美國猶他州的大鹽湖是盛產(chǎn)鹵蟲的場地，多年來其鹵蟲卵產(chǎn)量一直占世界產(chǎn)量的80％以上，左右世界市場的供應(yīng)。但是，九十年代以來，由于鹵蟲資源的過度收采以及湖水鹽度的改變，鹽湖的鹵蟲產(chǎn)量急劇下降，導(dǎo)致了鹵蟲的價(jià)格不菲。中亞地區(qū)也供應(yīng)鹵蟲，但是由于所產(chǎn)鹵蟲質(zhì)量的不穩(wěn)定，市場的需求仍未滿足。為了滿足市場的需要和保護(hù)自然鹵蟲資源，有必要尋找新型的生物餌料以替代或部分替代目前廣泛使用的鹵蟲餌料。
目前，自由生活線蟲Panagrellus redivivus(一種小桿目腐生線蟲，卵胎生；中文名待定)已用作魚蝦苗的生物餌料〔Schlechtriem et al.(2004)Aquaculture Research 35，547-551；Briedenbach et al.(1989)Journal of World Aquaculture Society 20，61-71；Hofsten et al(1983)Journal of Fish biology 23，419-428.〕。這類線蟲作為生物餌料具有體積小，可在海水中生存72小時(shí)以上，個(gè)體不會(huì)過度增大而使幼蝦難以消化，營養(yǎng)價(jià)值高，世代時(shí)間短，繁殖力強(qiáng)，培養(yǎng)方法簡單的優(yōu)點(diǎn)。因此是魚、蝦蟹等水產(chǎn)苗種適宜的高級(jí)活生物餌料。P.redivivus線蟲的培養(yǎng)一般采用在培養(yǎng)基中加入大腸桿菌或酵母菌實(shí)現(xiàn)的。大腸桿菌或酵母菌的加入主要是直接提供線蟲繁殖所需要的營養(yǎng)，或者在繁殖過程中轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基為線蟲提供營養(yǎng)。但是，在商業(yè)化應(yīng)用上，由于大腸桿菌是人類的病原菌，因此，難以用于生物餌料的大規(guī)模培養(yǎng)；酵母菌雖然作為生物餌料是安全的，但是，酵母菌的培養(yǎng)，特別是液體培養(yǎng)不如細(xì)菌方便。因此，有必要選擇新的菌株來培養(yǎng)這種生物餌料線蟲。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提出一種可用來培養(yǎng)Panagrellus redivivus這種生物餌料線蟲的細(xì)菌菌株。
本發(fā)明的另一目的是提供一種培養(yǎng)Panagrellus redivivus生物餌料線蟲的新方法。
本發(fā)明所提出的用于培養(yǎng)Panagrellus redivivus生物餌料線蟲的細(xì)菌菌株，為Xenorhabdus屬的Xenorhabdus poinarii KG品系細(xì)菌，該菌株是從專性寄生昆蟲的昆蟲病原線蟲體內(nèi)分離的，革蘭氏陰性，屬于腸桿菌科(Enterobacteriaceae)。過氧化氫酶陰性；硝酸鹽不能被降解為亞硝酸鹽；初生型菌體具有周身鞭毛；不產(chǎn)生生物熒光。在LB固體培養(yǎng)上，Xenorhabduspoinarii KG菌株的菌落呈現(xiàn)呈現(xiàn)淺褐色。
該細(xì)菌菌株已保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，其保藏編號(hào)為CCTCC NOM 206091，保藏日期為2006年9月17日。
本發(fā)明提出的生物餌料線蟲的培養(yǎng)方法是，采用菌株Xenorhabduspoinarii KG CCTCC M206091作為生產(chǎn)菌，其培養(yǎng)步驟包括將細(xì)菌菌株Xenorhabdus poinarii KG CCTCC M 206091在蛋白胨水培養(yǎng)基上，于25-28℃下培養(yǎng)得到細(xì)菌液，然后將其加入線蟲培養(yǎng)基，再接入無菌的Panagrellus redivivus線蟲，置于25-28℃下培養(yǎng)6至15天，即可收獲所培養(yǎng)的線蟲。
在所述的生物餌料線蟲的培養(yǎng)方法中，所述的蛋白胨水培養(yǎng)基推薦采用含有1％(質(zhì)量百分比)蛋白胨和0.5％(質(zhì)量百分比)氯化鈉的蛋白胨水培養(yǎng)基。
推薦的線蟲培養(yǎng)基的組分配比(按質(zhì)量百分比計(jì))為酵母膏1％，面粉10％，黃豆粉5％，豬油4％，水65％，海綿15％。
昆蟲病原線蟲是目前新型的生物農(nóng)藥，由于其安全性和有效性，許多工業(yè)化國家豁免注冊(cè)可以釋放。Xenorhabduspoinarii KG CCTCC M 206091是利用這類昆蟲病原線蟲體內(nèi)分離的Xenorhabdus屬共生細(xì)菌，利用它來培養(yǎng)P.redivivus線蟲不僅對(duì)環(huán)境和人畜安全，而且容易培養(yǎng)，特別是大型發(fā)酵罐的培養(yǎng)。本發(fā)明描述的方法可促進(jìn)P.redivivus線蟲的產(chǎn)業(yè)化培養(yǎng)，為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)提供優(yōu)良的生物餌料。
具體實(shí)施例方式
下列實(shí)驗(yàn)及操作實(shí)例是進(jìn)一步對(duì)本發(fā)明的說明，不應(yīng)該當(dāng)作對(duì)本發(fā)明的限制。
1.將菌株Xenorhabdus poinarii KG CCTCC M 206091在含有1％(質(zhì)量百分比)蛋白胨，0.5％(質(zhì)量百分比)氯化鈉的蛋白胨水培養(yǎng)基上，于26℃下培養(yǎng)得到Xenorhabdus屬的細(xì)菌液；2.將線蟲培養(yǎng)基在121℃下滅菌40分鐘，線蟲培養(yǎng)基的組分配比(按質(zhì)量百分比計(jì))為酵母膏1％，面粉10％，黃豆粉5％，豬油4％，水65％，海綿15％；3.將100克經(jīng)滅菌的線蟲培養(yǎng)基加到500ml的三角瓶中，再加入所培養(yǎng)的Xenorhabdus屬的細(xì)菌液，然后接入無菌的P.redivivus線蟲，置于25-28℃下培養(yǎng)，6至15天后收獲所培養(yǎng)的線蟲，即可收獲培養(yǎng)物中的線蟲。
在做上述用Xenorhabdus poinarii KG CCTCC M 206091菌株培養(yǎng)Panagrellus redivivus生物餌料線蟲實(shí)驗(yàn)時(shí)，發(fā)明人作了在同樣培養(yǎng)基中接入大腸桿菌(Escherichia coli)EPI100品系和啤酒酵母菌的Invscl，Gim2.8和R12品系的對(duì)比試驗(yàn)，這些培養(yǎng)物同樣置于25-28℃下培養(yǎng)。6至15天計(jì)算培養(yǎng)物中線蟲的產(chǎn)量。
結(jié)果顯示分別接入Xenorhabdus poinarii KG CCTCC M 206091菌株、大腸桿菌EPI100品系、啤酒酵母菌的Invscl、Gim2.8和R12品系菌液的培養(yǎng)瓶中，每瓶含100克培養(yǎng)基的產(chǎn)量分別是2365，2839，3470，3000，和1140萬條P.redivivus線蟲。可見，Xenorhabdus poinariiKG CCTCC M 206091的細(xì)菌菌株可支持P.redivivus線蟲的繁殖，而且獲得較高的產(chǎn)量。
權(quán)利要求
1.一種用于培養(yǎng)生物餌料線蟲的細(xì)菌菌株，其特征在于該細(xì)菌菌株為保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心的Xenorhabdus poinarii KG CCTCC M 206091。
2.一種生物餌料線蟲的培養(yǎng)方法，其特征在于采用細(xì)菌菌株Xenorhabdus poinarii KGCCTCC M 206091作為生產(chǎn)菌，其培養(yǎng)步驟包括將細(xì)菌菌株Xenorhabdus poinarii KG CCTCCM 206091在蛋白胨水培養(yǎng)基上，于25-28℃下培養(yǎng)得到細(xì)菌液，然后將其加入線蟲培養(yǎng)基，再接入無菌的Panagrellus redivivus線蟲，置于25-28℃下培養(yǎng)6至15天，即可收獲所培養(yǎng)的線蟲。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物餌料線蟲的培養(yǎng)方法，其特征在于所述的蛋白胨水培養(yǎng)基含有質(zhì)量百分比為1％的蛋白胨和質(zhì)量百分比為0.5％的氯化鈉。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物餌料線蟲的培養(yǎng)方法，其特征在于所述的線蟲培養(yǎng)基的組分配比按質(zhì)量百分比計(jì)為酵母膏1％，面粉10％，黃豆粉5％，豬油4％，水65％，海綿15％。
全文摘要
本發(fā)明提供一種用于培養(yǎng)餌料線蟲的細(xì)菌菌株(KG品系)及其線蟲培養(yǎng)方法，所提供的細(xì)菌菌株為Xenorhabdus poinarii KG CCTCC M 206091。其線蟲培養(yǎng)方法是以Xenorhabduspoinarii KG CCTCC M 206091菌株為生產(chǎn)菌，其培養(yǎng)步驟包括將細(xì)菌菌株Xenorhabduspoinarii KG CCTCC M 206091在蛋白胨水培養(yǎng)基上，于25－28℃下培養(yǎng)得到細(xì)菌液，然后將其加入線蟲培養(yǎng)基，再接入無菌的Panagrellus redivivus線蟲，置于25－28℃下培養(yǎng)6至15天，即可收獲所培養(yǎng)的線蟲。本發(fā)明所提供的菌株是從昆蟲病原線蟲體內(nèi)分離的Xenorhabdus屬共生細(xì)菌，利用它培養(yǎng)得到的P.redivivus線蟲，對(duì)環(huán)境和人畜安全，為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)優(yōu)良的生物餌料。
文檔編號(hào)A23K1/18GK101041810SQ20061012279
公開日2007年9月26日 申請(qǐng)日期2006年10月17日 優(yōu)先權(quán)日2006年10月17日
發(fā)明者韓日疇, 丘雪紅, 曹莉, 劉小芬, 劉秀玲, 陳鏡華 申請(qǐng)人:廣東省昆蟲研究所