專(zhuān)利名稱(chēng)：一種內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素用作農(nóng)用抗生素的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物保護(hù)和生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素用作農(nóng)用抗生素的用途。
背景技術(shù)：
農(nóng)用抗生素屬于生物農(nóng)藥范疇。農(nóng)用抗生素絕大多數(shù)是微生物發(fā)酵的天然產(chǎn)物，具有對(duì)人畜毒性較低，容易降解，對(duì)環(huán)境和非靶標(biāo)生物安全的特點(diǎn)，符合無(wú)公害農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)中防治有害生物的要求，一直是國(guó)內(nèi)外農(nóng)藥研究開(kāi)發(fā)的熱點(diǎn)之一。然而目前商品化的農(nóng)用抗生素品種仍然很少，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的需求。此外，絕大多數(shù)農(nóng)用抗生素的作用譜窄，防治對(duì)象單一，其應(yīng)用范圍受到限制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足之處，提供將一種β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素用作農(nóng)用抗生素的用途。本發(fā)明提供的作為農(nóng)用抗生素的內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素為秦嶺霉素，其對(duì)多種農(nóng)作物病原菌具有廣譜抗菌作用。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供秦嶺霉素作為農(nóng)用抗生素的原藥和制劑制備方法及應(yīng)用技術(shù)。
本發(fā)明通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種作為農(nóng)用抗生素的內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素，具有如下的分子結(jié)構(gòu) 一種作為農(nóng)用抗生素的內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素的原藥及其制劑的制備方法，包括下列步驟1.發(fā)酵
(1)發(fā)酵菌株發(fā)酵菌株的分類(lèi)命名為秦嶺鏈霉菌(Streptomyces qinlingnensis sp.nov)，于2005年5月30日保藏于“中國(guó)生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心”，其保藏登記號(hào)為CGMCC NO.1381。
(2)斜面培養(yǎng)采用高氏一號(hào)培養(yǎng)基(可溶性淀粉20g，KNO31g，K2HPO40.5g，MgSO4·7H2O0.5g，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.01g，瓊脂20g，蒸餾水1000ml，pH值7.2～7.4)于1×105Pa下滅菌30min，接菌后在28～32℃下培養(yǎng)4d；(3)種子培養(yǎng)培養(yǎng)基(葡萄糖5～10g，可溶性淀粉5～10g，牛肉膏5～10g，蛋白胨10～18g，氯化鈉5～8g，蒸餾水1000ml，pH值7.2)，用250ml的三角瓶每瓶分裝100ml，然后用1m1無(wú)菌水將斜面的秦嶺鏈霉菌孢子洗下并制成孢子懸浮液，使其濃度為1×106～1×107個(gè)/ml，每瓶加1ml孢子懸浮液，置于搖床上28～32℃培養(yǎng)24～36h；(4)發(fā)酵采用液體搖瓶發(fā)酵。培養(yǎng)基(小米10～30g加蒸餾水1000ml煮沸15min后濾去米粒，加入葡萄糖15～30g，碳酸鈣2～15g，氯化鈉5～12g，蛋白胨5～15g，pH值7.2～7.4)于1×105Pa下滅菌30min，分裝于250ml三角瓶，每瓶20～100ml。接種量10％(V/V)，搖床轉(zhuǎn)速150～240r/min，28～32℃振蕩培養(yǎng)4～5d。
2原粉制備發(fā)酵液經(jīng)100～200目篩網(wǎng)過(guò)濾后，用HPD-600大孔吸附樹(shù)脂吸附，甲醇洗脫。將甲醇洗脫液進(jìn)行噴霧干燥，即得秦嶺霉素原粉。
3制劑加工本發(fā)明的作為農(nóng)用抗生素的秦嶺霉素可按傳統(tǒng)方法加工成乳油、微乳劑和可濕性粉劑。
(1)乳油的組成(質(zhì)量百分比)秦嶺霉素原粉30～50％乳化劑 8～10％溶劑40～62％(2)微乳劑的組成(質(zhì)量百分比)
秦嶺霉素原粉20～40％乳化劑 10～15％抗凍劑 8～10％水 35～62％(3)可濕性粉劑的組成(質(zhì)量百分比)秦嶺霉素原粉20～40％潤(rùn)濕劑 2～5％填料55～78％與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有下述優(yōu)點(diǎn)和有益效果(1)本發(fā)明的農(nóng)用抗生素其原藥和制劑的生產(chǎn)原料易得，工藝相對(duì)簡(jiǎn)單，成本低廉，適合作為農(nóng)藥用途。
(2)本發(fā)明的農(nóng)用抗生素具有廣譜抗菌性，對(duì)多種農(nóng)業(yè)真菌病害和細(xì)菌病害都有效。
(3)本發(fā)明的農(nóng)用抗生素是天然產(chǎn)物，分子中只含C、H、O、N元素，易降解，對(duì)環(huán)境安全。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)說(shuō)明。
實(shí)施例1原粉的制備1種子培養(yǎng)培養(yǎng)基(葡萄糖8g，可溶性淀粉8g，牛肉膏6g，蛋白胨15g，氯化鈉5g，蒸餾水1000ml，pH值7.2)，用250ml的三角瓶每瓶分裝100ml，然后用1ml無(wú)菌水將斜面的秦嶺鏈霉菌孢子洗下并制成孢子懸浮液，使其濃度為1×106～1×107個(gè)/ml，每瓶加1ml孢子懸浮液，置于搖床上30±1℃培養(yǎng)24h；2發(fā)酵采用液體搖瓶發(fā)酵，培養(yǎng)基(小米10g加蒸餾水1000ml煮沸15min后濾去米粒，加入葡萄糖15g，碳酸鈣2g，氯化鈉5g，蛋白胨5g，pH值7.2)于1×105Pa下滅菌30min，分裝于250ml三角瓶，每瓶50ml。接種量10％(V/V)，搖床轉(zhuǎn)速210r/min，30±1℃振蕩培養(yǎng)4d。
3原粉制備50L發(fā)酵液經(jīng)200目篩網(wǎng)過(guò)濾，用5kgHPD-600大孔吸附樹(shù)脂(河北寶恩化工有限公司生產(chǎn))靜態(tài)吸附3h，將吸附飽和的大孔吸附樹(shù)脂裝入15cm(內(nèi)徑)×200cm(高)的玻璃柱中，用甲醇洗脫，流速為50ml·min-1，洗脫總體積約20L；將甲醇洗脫液噴霧干燥，即得農(nóng)用抗生素原粉，其中秦嶺霉素含量為22.8％。
實(shí)施例2秦嶺霉素殺菌活性測(cè)定秦嶺霉素抗真菌活性測(cè)定采用抑制菌絲生長(zhǎng)速率法將含秦嶺霉素400mg·ml-1的發(fā)酵液1ml與9ml融化的PDA培養(yǎng)基混勻，倒入無(wú)菌的培養(yǎng)皿中制成帶藥培養(yǎng)基平面(藥劑濃度為40mg·ml-1)，對(duì)照為1ml清水加9ml PDA培養(yǎng)基組成。培養(yǎng)基凝固后，在每個(gè)培養(yǎng)基表面放入1個(gè)供試菌菌餅(直徑4mm)，使菌餅帶菌絲的一面貼在培養(yǎng)基表面，每處理3次重復(fù)。在28±1℃溫箱中培養(yǎng)72h后用十字交叉法測(cè)量菌落生長(zhǎng)直徑，以下式計(jì)算菌絲生長(zhǎng)抑制率。

結(jié)果如表1所示。
表1 秦嶺霉素抗真菌生測(cè)結(jié)果

秦嶺霉素抗細(xì)菌活性采用管碟法底層培養(yǎng)基為2％的瓊脂培養(yǎng)基，上層培養(yǎng)基為牛肉浸膏培養(yǎng)基。在每個(gè)培養(yǎng)皿中加入10ml底層培養(yǎng)基，冷凝后再將已融化冷至45℃左右的上層培養(yǎng)基(加入供試細(xì)菌)倒入已凝固的底層培養(yǎng)基表面，待冷凝后，放置牛津杯。在每個(gè)牛津杯中加入秦嶺霉素藥液(濃度為40mg·ml-1)0.2ml，每處理重復(fù)3次，清水作對(duì)照。在26±1℃溫箱中培養(yǎng)24h，測(cè)定抑菌圈直徑。結(jié)果見(jiàn)表2所示。
表2 秦嶺霉素抗細(xì)菌和酵母菌生測(cè)結(jié)果

表1、表2的結(jié)果說(shuō)明，秦嶺霉素具有廣譜抗菌性，尤其對(duì)西瓜枯萎病菌、小麥赤霉病菌、蘋(píng)果輪紋病菌、小麥根腐病菌、棉花枯萎病菌、番茄灰霉病菌、煙草赤星病菌等真菌及枯草芽孢桿菌、水稻白葉枯病菌等細(xì)菌表現(xiàn)高活性。
實(shí)施例3制劑加工1.5％秦嶺霉素乳油加工取秦嶺霉素原粉(秦嶺霉素含量為22.8％)44g，加二甲苯46g(56ml)溶解，加入三元乳化劑10g(具體為農(nóng)乳500#2g，寧乳34#4g，OP-10#4g，均購(gòu)自南京金陵石化公司)，常溫下攪拌30min至均相，即得5％秦嶺霉素乳油。
2.5％秦嶺霉素微乳劑加工取秦嶺霉素原粉(秦嶺霉素含量為22.8％)44g，加甲醇20g，加入三元乳化劑15g(具體為農(nóng)乳500#3g，寧乳33#7g，Tween 20 5g，均購(gòu)自南京金陵石化公司)，在75℃的條件下攪拌至均相，再緩慢加入21g去離子水，繼續(xù)攪拌至整個(gè)體系為透明狀態(tài)，靜置冷卻到室溫，即得5％秦嶺霉素微乳劑。
3.2.5％秦嶺霉素可濕性粉劑取秦嶺霉素原粉(秦嶺霉素含量為22.8％)22g，木質(zhì)素磺酸鈉2g，NNO1.5g，硅藻土(細(xì)度為200目)74.5g，在混合機(jī)中預(yù)混合后，經(jīng)氣流粉碎機(jī)粉碎至98％過(guò)300目篩，即得2.5％秦嶺霉素可濕性粉劑。
實(shí)施例4大田藥效試驗(yàn)1防治黃瓜霜霉病試驗(yàn)試驗(yàn)于2005年4月23日～5月5日在陜西省楊凌示范區(qū)進(jìn)行。試驗(yàn)設(shè)5％秦嶺霉素乳油稀釋250倍、500倍2個(gè)處理，以64％殺毒礬可濕性粉劑400倍為標(biāo)準(zhǔn)藥劑，另設(shè)不施藥空白對(duì)照，每處理重復(fù)三次。小區(qū)面積25m2，隨機(jī)區(qū)組排列。黃瓜品種為長(zhǎng)春密刺，4月21日噴灑霜霉病菌孢子懸浮液(20×10倍鏡下每視野8～20個(gè)孢子)人工接菌。4月23日施第一次藥，4月28日施第二次藥，5月3日調(diào)查防效。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。
表3 5％秦嶺霉素乳油防治黃瓜霜霉病效果

試驗(yàn)結(jié)果表明，5％秦嶺霉素乳油對(duì)黃瓜霜霉病有優(yōu)異的防治效果，稀釋250～500倍，其防治效果和64％殺毒礬可濕性粉劑400倍的防治效果相當(dāng)。
2防治小麥白粉病試驗(yàn)大田防治小麥白粉病試驗(yàn)于2004年在陜西省安康市漢濱區(qū)進(jìn)行，試驗(yàn)設(shè)5％秦嶺霉素乳油250倍、500倍2個(gè)處理，以15％粉銹寧可濕性粉劑600倍為標(biāo)準(zhǔn)藥劑，另設(shè)不施藥空白對(duì)照，每處理重復(fù)三次。小區(qū)面積25m2，隨機(jī)區(qū)組排列。分別于4月5日、4月12日兩次施藥，4月20日調(diào)查防效。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。
表4 5％秦嶺霉素乳油防治小麥白粉病效果

試驗(yàn)結(jié)果表明，5％秦嶺霉素乳油對(duì)小麥白粉病有良好的防治效果，稀釋250～500倍，其防治效果相當(dāng)于目前推廣應(yīng)用的15％粉銹寧可濕性粉劑稀釋600倍的防效。
權(quán)利要求
1.一種內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素用作農(nóng)用抗生素的用途，其特征在于，該抗生素具有如下的分子結(jié)構(gòu)
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，將權(quán)利要求1的內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素制備成農(nóng)用抗生素原藥。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述農(nóng)用抗生素原藥的制備方法包括下列步驟①發(fā)酵菌株發(fā)酵菌種的分類(lèi)命名為秦嶺鏈霉菌(Streptomyces qinlingnensis sp.nov)，于2005年5月30日保藏于“中國(guó)生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心”，其保藏登記號(hào)為CGMCC NO.1381；②斜面培養(yǎng)采用高氏一號(hào)培養(yǎng)基(可溶性淀粉20g，KNO31g，K2HPO40.5g，MgSO4·7H2O0.5g，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.01g，瓊脂20g，蒸餾水1000ml，pH值7.2～7.4)于1×105Pa下滅菌30min，接菌后在28～32℃下培養(yǎng)4d；③種子培養(yǎng)培養(yǎng)基(葡萄糖5～10g，可溶性淀粉5～10g，牛肉膏5～10g，蛋白胨10～18g，氯化鈉5～8g，蒸餾水1000ml，pH值7.2)，用250ml的三角瓶每瓶分裝100ml，然后用1ml無(wú)菌水將斜面的秦嶺鏈霉菌孢子洗下并制成孢子懸浮液，使其濃度為1×106～1×107個(gè)/ml，每瓶加1ml孢子懸浮液，置于搖床上28～32℃培養(yǎng)24～36h；④發(fā)酵采用液體搖瓶發(fā)酵，培養(yǎng)基(小米10～30g加蒸餾水1000ml煮沸15min后濾去米粒，加入葡萄糖15～30g，碳酸鈣2～15g，氯化鈉5～12g，蛋白胨5～15g，pH值7.2～7.4)于1×105Pa下滅菌30min，分裝于250ml三角瓶，每瓶20～100ml。接種量10％(V/V)，搖床轉(zhuǎn)速150～240r/min，28～32℃振蕩培養(yǎng)4～5d；⑤原粉制備發(fā)酵液經(jīng)100～200目篩網(wǎng)過(guò)濾后，用HPD-600大孔吸附樹(shù)脂吸附，甲醇洗脫。將甲醇洗脫液進(jìn)行噴霧干燥，即得秦嶺霉素原粉，獲得所述的農(nóng)用抗生素原藥。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，該抗生素可以加工成用于防治農(nóng)業(yè)病害的乳油、微乳劑及可濕性粉劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，乳油的組成(質(zhì)量百分比)為秦嶺霉素原粉30～50％，乳化劑8～10％，溶劑40～62％。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，微乳劑的組成(質(zhì)量百分比)為秦嶺霉素原粉20～40％，乳化劑10～15％，抗凍劑8～10％，水35～62％。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，可濕性粉劑的組成(質(zhì)量百分比)為秦嶺霉素原粉20～40％，潤(rùn)濕劑2～5％，填料55～78％。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了秦嶺霉素作為農(nóng)用抗生素的用途。秦嶺霉素屬于內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素，具有如圖所示的分子結(jié)構(gòu)。其產(chǎn)生菌菌株種的分類(lèi)命名為秦嶺鏈霉菌(Streptomyces qinlingnensis sp.nov)，其保藏登記號(hào)為CGMCC NO.1381。本發(fā)明的作為農(nóng)用抗生素的秦嶺霉素的制備方法包括種子培養(yǎng)和液體發(fā)酵，發(fā)酵液經(jīng)過(guò)濾后大孔吸附樹(shù)脂吸附，甲醇洗脫，噴霧干燥制得秦嶺霉素原粉。秦嶺霉素原粉可加工成乳油、微乳劑和可濕性粉劑。秦嶺霉素生產(chǎn)原料廉價(jià)易得，工藝簡(jiǎn)單，其制劑對(duì)多種農(nóng)作物主要病害防效顯著，對(duì)環(huán)境安全。
文檔編號(hào)A01N43/90GK1871911SQ20051007561
公開(kāi)日2006年12月6日 申請(qǐng)日期2005年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月31日
發(fā)明者吳文君, 姬志勤, 龍建友, 胡兆農(nóng), 師寶君, 張繼文 申請(qǐng)人:西北農(nóng)林科技大學(xué)農(nóng)藥研究所