專利名稱：馬藍(lán)的離體培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及植物馬藍(lán)的離體培養(yǎng)方法，以及由該方法獲得的植物馬藍(lán)試管苗和植株。
背景技術(shù)：
馬藍(lán)為爵床科多年生宿根性草本植物(基部莖木質(zhì)化)，在民間用其葉和根治乙腦、流感、流腦、肝炎和上呼吸道炎癥(如腮腺炎、咽喉炎、口腔炎、扁桃體炎等)。用其莖和葉加工成粉末成青黛或藍(lán)靛，用于熱病和咯血、吐血等的治療。根用于治風(fēng)熱感冒及小兒麻疹等病。隨著植物化學(xué)研究的深入，發(fā)現(xiàn)其葉含色胺酮有抗真菌活性，靛玉紅是一種很好的抗癌藥物，主治慢粒性細(xì)胞白血病等?，F(xiàn)在該領(lǐng)域?qū)＜艺谔剿黢R藍(lán)產(chǎn)業(yè)化GAP種植技術(shù)，但種苗奇缺。因現(xiàn)有技術(shù)中未見(jiàn)有馬藍(lán)離體培養(yǎng)成功的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)未有馬藍(lán)離體培養(yǎng)的成功方法，目的在于提供馬藍(lán)優(yōu)良均一的種苗，使這一藥材生產(chǎn)走上規(guī)范化、集約化、產(chǎn)業(yè)化和現(xiàn)代化的道路，促進(jìn)這一中藥材生產(chǎn)健康發(fā)展。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案馬藍(lán)的離體培養(yǎng)方法，取馬藍(lán)莖或試管苗葉片或根切段，消毒，接種在叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，長(zhǎng)出叢芽后，轉(zhuǎn)接到壯苗和增值培養(yǎng)基中，長(zhǎng)成單牙芽芽條后接入生根培養(yǎng)基中，待完整試管苗長(zhǎng)成，移入基質(zhì)中即可。
上述方法的叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為Ms+BA2mg·L-1+IAA0.2mg·L-1，壯苗和增值培養(yǎng)基為Ms+BA2mg·L-1+NAA0.1-0.2mg·L-1，生根培養(yǎng)基為Ms+NAA0.2mg·L-1，培養(yǎng)基中蔗糖濃度均為3％，以瓊脂固化，pH5.8，培養(yǎng)溫度為(25±2)℃，光照時(shí)間12h·d-1，光照度為2000lx。
具體地，本發(fā)明的方法是取馬藍(lán)未木質(zhì)化莖段或試管苗葉片或根切段，水洗后用70％乙醇消毒10s，再用0.2％HgCl2消毒7min，無(wú)菌水沖洗外植體數(shù)次，再在無(wú)菌濾紙上修整為長(zhǎng)約0.8cm切段，接種在叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基Ms+BA2mg·L-1+IAA0.2mg·L-1上，待莖段葉腋處長(zhǎng)出小而密的叢生芽，即轉(zhuǎn)接到壯苗和增值培養(yǎng)基Ms+BA2mg·L-1+NAA0.1-0.2mg·L-1上，培養(yǎng)30d小而密的叢生芽長(zhǎng)高長(zhǎng)大后，接入生根培養(yǎng)基Ms+NAA0.2mg·L-1中，待芽條基部長(zhǎng)出不定根，芽高長(zhǎng)至3-4cm時(shí)，將完整試管苗移入事先經(jīng)5％甲醛水溶液消毒過(guò)的2∶1的腐葉土和黃土基質(zhì)中即可。
具體實(shí)施例方式為了更好地說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面用本發(fā)明的實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。
實(shí)施例11、材料植物名稱馬藍(lán)(Baphicacanthas cusia)，亦稱南板藍(lán)根、大青葉、藍(lán)靛和土靛等。
2、材料類別莖段和試管苗葉片和根切段(The segment of stem.The segmentof leaf and root from plantlet In Vitro)。
3、培養(yǎng)條件(1)叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基Ms+BA2mg·L-1(單位下同)+IAA0.2；(2)壯苗和增值培養(yǎng)基Ms+BA2+NAA0.1-0.2；(3)生根培養(yǎng)基Ms+NAA0.2。培養(yǎng)基中蔗糖濃度均為3％，以瓊脂固化，pH5.8，培養(yǎng)溫度為(25±2)℃，光照時(shí)間12h·d-1，光照度為2000lx。
4生長(zhǎng)與分化情況4.1外植體的獲得采集野生馬藍(lán)未木質(zhì)化莖段，水洗后用70％乙醇消毒10s，再用0.2％HgCl2消毒7min，無(wú)菌水沖洗外植體數(shù)次，再無(wú)菌濾紙上修整為長(zhǎng)約0.8cm切段待用。
4.2叢芽的誘導(dǎo)將修整好的莖段接種在培養(yǎng)基(1)上，培養(yǎng)15d后莖段下切口長(zhǎng)出不定芽，平均每條莖段長(zhǎng)2個(gè)芽。培養(yǎng)25d莖段下切口長(zhǎng)出白色帶紫紅色的愈傷組織。培養(yǎng)29d莖段葉腋處長(zhǎng)出小而密的叢生芽。
4.3壯苗培養(yǎng)莖段葉腋叢芽一旦形成，便可轉(zhuǎn)接到培養(yǎng)基(2)上，培養(yǎng)30d小而密的叢生芽明顯長(zhǎng)高長(zhǎng)大。在培養(yǎng)基Ms+BA0.5+NAA0.1時(shí)，無(wú)愈傷組織形成，但在Ms+BA0.5+NAA0.2上培養(yǎng)的叢芽，形成了帶致密、堅(jiān)實(shí)的綠色愈傷組織的叢芽團(tuán)。這種有結(jié)構(gòu)的組織塊，可切割繼代，月增殖率為1∶4。試管苗葉片切段培養(yǎng)在培養(yǎng)基(1)上，約25d葉片長(zhǎng)大，因葉脈生長(zhǎng)速度趕不上葉肉部分，所以葉片切段呈凸凹不平狀，葉段切口也長(zhǎng)出白色帶紫紅色的愈傷組織，培養(yǎng)42d，葉片切段上長(zhǎng)出黃綠色顆粒狀愈傷組織。培養(yǎng)約69d，葉片切段上形成叢芽和顆粒狀黃綠色愈傷組織團(tuán)。根切斷在培養(yǎng)基(1)上，約經(jīng)25d的培養(yǎng)，根斷切口處形成極少量淡黃綠色的愈傷組織，但未見(jiàn)不定芽的形成。
4.4生根培養(yǎng)及移栽將長(zhǎng)2cm左右的單芽芽條接入培養(yǎng)基(3)上，培養(yǎng)約20d芽條基部幾乎全部長(zhǎng)出不定根數(shù)條，同時(shí)芽條也長(zhǎng)高至3-4cm。這時(shí)小心取出完整試管苗，移入事先經(jīng)5％甲醛水溶液消毒過(guò)的基質(zhì)中(基質(zhì)為2∶1的腐葉土和黃土)，澆透定根水，注意保濕、通氣和補(bǔ)水等精細(xì)管理。移苗成活率達(dá)90％。
5、意義與進(jìn)展馬藍(lán)為爵床科多年生宿根性草本植物(基部莖木質(zhì)化)，在云南民間用其葉和根治乙腦、流感、流腦、肝炎和上呼吸道炎癥(如腮腺炎、咽喉炎、口腔炎、扁桃體炎等)。用其莖和葉加工成粉末成青黛或藍(lán)靛，用于熱病和咯血、吐血等的治療。根用于治風(fēng)熱感冒及小兒麻疹等病。隨著植物化學(xué)研究的深入，發(fā)現(xiàn)其葉含色胺酮有抗真菌活性，靛玉紅是一種很好的抗癌藥物，主治慢粒性細(xì)胞白血病等?，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)外同領(lǐng)域人員正探索馬藍(lán)產(chǎn)業(yè)化GAP種植，但種苗奇缺。馬藍(lán)離體培養(yǎng)方法的成功，為工業(yè)化生產(chǎn)馬藍(lán)提供了優(yōu)良均一的種苗，使這一藥材生產(chǎn)走上規(guī)范化、集約化、產(chǎn)業(yè)化和現(xiàn)代化的道路，促進(jìn)這一中藥材生產(chǎn)健康發(fā)展。
權(quán)利要求
1.馬藍(lán)的離體培養(yǎng)方法，其特征在于取馬藍(lán)莖或試管苗葉片或根切段，消毒，接種在叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，長(zhǎng)出叢芽后，轉(zhuǎn)接到壯苗和增值培養(yǎng)基中，長(zhǎng)出單牙芽芽條后接入生根培養(yǎng)基中，待完整試管苗長(zhǎng)成，移入基質(zhì)中即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為Ms+BA2mg·L-1+IAA0.2mg·L-1，壯苗和增值培養(yǎng)基為Ms+BA2mg·L-1+NAA0.1-0.2mg·L-1，生根培養(yǎng)基為Ms+NAA0.2mg·L-1，培養(yǎng)基中蔗糖濃度均為3％，以瓊脂固化，pH5.8，培養(yǎng)溫度為(25±2)℃，光照時(shí)間12h·d-1，光照度為2000lx。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其特征在于取馬藍(lán)未木質(zhì)化莖段或試管苗葉片或根切段，水洗后用70％乙醇消毒10s，再用0.2％HgCl2消毒7min，無(wú)菌水沖洗外植體數(shù)次，再在無(wú)菌濾紙上修整為長(zhǎng)約0.8cm切段，接種在叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基Ms+BA2mg·L-1+IAA0.2mg·L-1上，待莖段葉腋處長(zhǎng)出小而密的叢生芽，即轉(zhuǎn)接到壯苗和增值培養(yǎng)基Ms+BA2mg·L-1+NAA0.1-0.2mg·L-1上，培養(yǎng)30d，接入生根培養(yǎng)基Ms+NAA0.2mg·L-1中，待芽條基部長(zhǎng)出不定根，芽高長(zhǎng)至3-4cm時(shí)，將完整試管苗移入事先經(jīng)5％甲醛水溶液消毒過(guò)的2∶1的腐葉土和黃土基質(zhì)中即可。
全文摘要
馬藍(lán)的離體培養(yǎng)方法，取馬藍(lán)莖或試管苗葉片或根切段，消毒，接種在叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，長(zhǎng)出叢芽后，轉(zhuǎn)接到壯苗和增值培養(yǎng)基中，長(zhǎng)出單牙芽芽條后接入生根培養(yǎng)基中，待完整試管苗長(zhǎng)成，移入基質(zhì)中即可。
文檔編號(hào)A01H4/00GK1748475SQ20051001092
公開日2006年3月22日 申請(qǐng)日期2005年7月21日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月21日
發(fā)明者龍春林, 程治英, 羅吉鳳 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所