專利名稱：卡特蘭的無菌播種和組織培養(yǎng)技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供卡特蘭的實生種苗快速繁殖技術(shù)。
背景技術(shù)：
卡特蘭被喻為蘭花之王，有大花品系，迷你品系，花型優(yōu)美，色彩艷麗，觀賞價值極高。可用于盆栽或吊盆觀賞，也廣泛應(yīng)用于切花，國際市場上貿(mào)易額巨大，在我國市場上也將可能成為蝴蝶蘭、大花惠蘭之后的一個新的熱帶蘭銷售熱點。
卡特蘭商品苗中大部分是實生種苗，目前其生產(chǎn)流程為種子萌發(fā)培養(yǎng)基(母瓶)→生長增殖培養(yǎng)基(中母瓶)→成苗培養(yǎng)基在固體萌發(fā)培養(yǎng)基上從種子萌發(fā)到繼代轉(zhuǎn)瓶依品種不同而需要2個月到半年之久，經(jīng)中母瓶形成小苗后，再轉(zhuǎn)接到成苗培養(yǎng)基上壯苗生根，這往往需要花費大量的人工和培養(yǎng)成本。
卡特蘭的繁殖可采用分株法，但繁殖速度慢，而卡特蘭種子由于胚發(fā)育不完全，自然狀態(tài)下極難萌發(fā)。利用試管無菌播種的方法能獲得大量試管苗，但現(xiàn)有常規(guī)生產(chǎn)技術(shù)采用固體培養(yǎng)基播種，種子萌發(fā)時間長，生長緩慢；其生產(chǎn)流程為播種母瓶---中母瓶---成苗培養(yǎng)，種子萌發(fā)后需要經(jīng)過中母瓶階段，操作費工，培育時間長，成本高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是通過改進(jìn)生產(chǎn)流程，前期利用液體培養(yǎng)，促使種子快速萌發(fā)生長，然后直接將原球莖接種到成苗培養(yǎng)基上，一步成苗，減少了中間環(huán)節(jié)，大大降低成本和培養(yǎng)時間，最快4個月即可由種子成苗出瓶。
本發(fā)明提供了卡特蘭實生種苗的液-固兩步法快速試管繁殖方法和所使用的培養(yǎng)基，技術(shù)簡單實惠可操作性強(qiáng)，應(yīng)用價值高。
本發(fā)明技術(shù)即前期利用液體培養(yǎng)，促使種子快速萌發(fā)生長，然后直接將原球莖接種到成苗培養(yǎng)基上，一步成苗，提供的培養(yǎng)基極適合卡特蘭生長發(fā)育需求，特別是具有很高的pH緩沖能力，其具體技術(shù)包括步驟如下1.材料采用性狀優(yōu)良的卡特蘭為親本，開花時選取生長健壯的母株進(jìn)行卡特蘭的自交授粉及雜交，授粉后果實120-150天基本成熟時做為外植體用于播種；2.無菌播種取基本成熟的果實，用75％的酒精浸泡30秒后置于0.1％的升汞溶液中消毒20分鐘，無菌水沖洗4～5次后切開果實，將白色粉末狀種子接種到種子萌發(fā)液體培養(yǎng)基(改良V&W培養(yǎng)基+6-芐基嘌呤0.2-1毫克/升+萘乙酸0.2-1毫克/升10％+10-20％椰子汁)中，150rpm搖床振蕩培養(yǎng)；一周左右胚萌發(fā)，20天左右形成直徑1-2mm的綠色原球莖；
3.成苗培養(yǎng)將液體培養(yǎng)基中形成的原球莖用吸管接種到成苗培養(yǎng)基(花寶一號(Hyponex1)3克/升+香蕉汁100克/升+6-芐基嘌呤0.1-1毫克/升+萘乙酸0.5-2毫克/升+活性碳0.5-2克/升+瓊脂7克/升+MES1克/升)上培養(yǎng)，30天左右可形成完整的小植株，繼續(xù)培養(yǎng)45天左右可以長成健壯大苗；4.試管苗移栽當(dāng)試管苗能長至3-4厘米高時，轉(zhuǎn)移到自然光下煉苗7-14天，觀察植株形成較好的角質(zhì)層；然后將其從玻璃瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，移入塘基石2炭化樹皮1的混合基質(zhì)中，保持適當(dāng)通風(fēng)和足夠的濕度，移栽的成活率均可達(dá)95％以上；在實驗中所用的培養(yǎng)基都附加蔗糖20克/升，pH5.2-5.4。培養(yǎng)溫度(25±1)℃，光照度1500～2000lx，光照12小時/天。
本發(fā)明技術(shù)可大大降低卡特蘭實生苗生產(chǎn)的成本和縮短生產(chǎn)周期，可以應(yīng)用于卡特蘭屬內(nèi)，近源屬間雜交種的實生種苗生產(chǎn)和育種工作，具有良好的應(yīng)用前景。
本發(fā)明技術(shù)提供的培養(yǎng)基具有高pH緩沖能力，這是進(jìn)行液體培養(yǎng)和后期一步成苗(要求長期培養(yǎng))成功的關(guān)鍵，本培養(yǎng)基極適合卡特蘭生長發(fā)育。
本發(fā)明技術(shù)能成功地進(jìn)行卡特蘭實生種苗的快速繁殖。實施該技術(shù)只需有常規(guī)的植物組織培養(yǎng)設(shè)備即可進(jìn)行，具有投入少，產(chǎn)出高的特點。
具體實施例方式
實例11、材料Cattleya bowringiana var.coerulea(藍(lán)寶石卡特蘭)開花后3天取不同植株個體授粉，授粉后180天取未開裂果家莢播種。
2、果莢消毒將果莢用75％的酒精浸泡30秒后置于0.1％的升汞溶液中消毒20分鐘，無菌水沖洗5次。
3、種子液體培養(yǎng)切開果莢，將白色粉末狀種子接種到種子萌發(fā)液體培養(yǎng)基(改良V&W培養(yǎng)基+6-芐基嘌呤0.5毫克/升+萘乙酸0.5毫克/升+10％椰子汁)中，150rpm搖床振蕩培養(yǎng)；一周左右胚萌發(fā)，20天左右形成直徑1-2mm的綠色原球莖。
4、成苗培養(yǎng)將液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)25天形成的原球莖用吸管接種到成苗培養(yǎng)基(花寶一號(Hyponex 1)3克/升+香蕉汁100克/升+6-芐基嘌呤1毫克/升+萘乙酸0.5毫克/升+活性碳1克/升+瓊脂7克/升+MES1克/升)上培養(yǎng)，30天左右形成完整的小植株，繼續(xù)培養(yǎng)60天左右長成健壯大苗。
5、試管苗移栽當(dāng)試管苗培養(yǎng)65天時，苗長至3-4厘米高，轉(zhuǎn)移到溫室自然光下煉苗14天，觀察植株已形成較好的角質(zhì)層；然后將其從玻璃瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，移入塘基石2炭化樹皮1的混合基質(zhì)中，保持適當(dāng)通風(fēng)和足夠的濕度，移栽的成活率約95％。
在實驗中所用的培養(yǎng)基都附加蔗糖20克/升，pH 5.2-5.4。培養(yǎng)溫度(25±1)℃，光照度1500～2000lx，光照12小時/天。
權(quán)利要求
1.一種卡特蘭的無菌播種和組織培養(yǎng)技術(shù)，前期利用液體培養(yǎng)，促使種子快速萌發(fā)生長，然后直接將原球莖接種到成苗培養(yǎng)基上，一步成苗，其特征在于具體步驟包括如下1)、材料采用性狀優(yōu)良的卡特蘭為親本，開花時選取生長健壯的母株進(jìn)行卡特蘭的自交授粉及雜交，授粉后果實120-150天基本成熟時做為外植體用于播種；2)、無菌播種取基本成熟的果實，用75％的酒精浸泡30秒后置于0.1％的升汞溶液中消毒20分鐘，無菌水沖洗4～5次后切開果實，將白色粉末狀種子接種到種子萌發(fā)液體培養(yǎng)基中，150rpm搖床振蕩培養(yǎng)；一周胚萌發(fā)，20天形成直徑1-2mm的綠色原球莖；3).成苗培養(yǎng)將液體培養(yǎng)基中形成的原球莖用吸管接種到成苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)，30天可形成完整的小植株，繼續(xù)培養(yǎng)45天可以長成健壯大苗；4).試管苗移栽當(dāng)試管苗能長至3-4厘米高時，轉(zhuǎn)移到自然光下煉苗7-14天，觀察植株形成較好的角質(zhì)層；然后將其從玻璃瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，移入塘基石2∶炭化樹皮1的混合基質(zhì)中，保持適當(dāng)通風(fēng)和足夠的濕度；
2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的卡特蘭的無菌播種和組織培養(yǎng)技術(shù)，其特征在于步驟2)中所述種子萌發(fā)液體培養(yǎng)基為改良V&W培養(yǎng)基+6-芐基嘌呤0.2-1毫克/升+萘乙酸0.2-1毫克/升10％+10-20％椰子汁。
3.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的卡特蘭的無菌播種和組織培養(yǎng)技術(shù)，其特征在于步驟3)中所述成苗培養(yǎng)基為花寶一號3克/升+香蕉汁100克/升+6芐基嘌呤0.1-1毫克/升+萘乙酸0.5-2毫克/升+活性碳0.5-2克/升+瓊脂7克/升+MES1克/升。
4.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的卡特蘭的無菌播種和組織培養(yǎng)技術(shù)，其特征在于具體各步驟中所用的培養(yǎng)基都附加蔗糖20克/升，pH5.2-5.4；培養(yǎng)溫度25±1℃，光照度1500～2000lx，光照12小時/天。
全文摘要
本發(fā)明提供卡特蘭的實生種苗快速繁殖技術(shù)?？ㄌ靥m被喻為蘭花之王，花型優(yōu)美，色彩艷麗，觀賞價值極高。國際市場上貿(mào)易額巨大，在我國市場上也將可能成為蝴蝶蘭、大花惠蘭之后的一個新的熱帶蘭銷售熱點。但現(xiàn)有常規(guī)生產(chǎn)技術(shù)采用固體培養(yǎng)基播種，種子萌發(fā)時間長，生長緩慢；操作費工，培育時間長，成本高。本發(fā)明的目的是通過改進(jìn)生產(chǎn)流程，前期利用液體培養(yǎng)，促使種子快速萌發(fā)生長，然后直接將原球莖接種到成苗培養(yǎng)基上，一步成苗，減少了中間環(huán)節(jié)，大大降低成本和培養(yǎng)時間，該技術(shù)可以應(yīng)用于卡特蘭屬內(nèi)，近源屬間雜交種的實生種苗生產(chǎn)和育種工作，具有良好的應(yīng)用前景。
文檔編號A01H4/00GK1631107SQ20041007772
公開日2005年6月29日 申請日期2004年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月29日
發(fā)明者段俊, 曾宋君, 陳之林, 黃向力, 溫鐵龍 申請人:中國科學(xué)院華南植物園