專利名稱：誘導(dǎo)海膽雌核發(fā)育二倍體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種海膽新品種的培育方法，尤其是一種誘導(dǎo)海膽雌核發(fā)育二倍體的方法。
背景技術(shù)：
海膽屬棘皮動物門，有許多種類，其中光棘球海膽主要產(chǎn)于我國遼寧、山東等地沿海，蝦夷馬糞海膽又稱中間球海膽，是從俄羅斯遠東日本?；蛉毡镜妊睾ＲM的品種。海膽的食用部分為生殖腺，有較高的營養(yǎng)和藥用價值，不同性別的海膽在繁殖季節(jié)、生殖腺指數(shù)(決定出肉率)、營養(yǎng)成分及口味上有著較大差別。雄性海膽的繁殖期長，可在較長時間內(nèi)滿足市場供應(yīng)，可是其性腺在口味和色澤上與雌性海膽有較大區(qū)別；雌性海膽性腺色深且口感好，在營養(yǎng)價值方面有一定的優(yōu)勢，但是雌性海膽繁殖期短，難以長時間滿足市場供應(yīng)；在國際市場上雄、雌海膽的價格差異較大。雖然目前人們對海膽營養(yǎng)價值的利用及養(yǎng)殖技術(shù)等均有研究，但是由于海膽胚胎的性別難以區(qū)分，迄今為止的公開出版物上還沒有關(guān)于如何控制海膽性別的報道。
人工誘導(dǎo)雌核發(fā)育是指用物理或化學(xué)的方法使精子遺傳失活，用遺傳失活的精子與卵子結(jié)合生成受精卵，然后再用物理、化學(xué)方法等對受精卵或胚胎進行處理，使胚胎染色體二倍化，形成可以正常發(fā)育的胚胎。目前，人工誘導(dǎo)雌核發(fā)育已在泥鰍、鯉魚、鰈與川鰈、草魚、褐鱒、虹鱒、銀大馬哈魚、大馬哈魚以及斑馬魚等10多種魚類上獲得成功。公知技術(shù)使精子遺傳失活的方法基本上有兩種一種是用γ射線、x射線對精子進行輻射處理，另一種就是用甲苯胺蘭、乙烯脲以及二甲基硫酸鹽等化學(xué)藥物處理精子；使染色體二倍化的方法主要有三種方法一種是用靜水壓法或冷、熱休克等物理方法處理受精卵；另一種是用化學(xué)藥劑處理發(fā)育到不同時期的胚胎；還有一種就是用核融合、核移植等生物方法進行處理?？墒呛Ｄ懯桥c魚類相隔較遠的棘皮動物，不能將現(xiàn)有的人工誘導(dǎo)雌核發(fā)育技術(shù)直接應(yīng)用在海膽上，以至于人們還不能按照自己的需求生產(chǎn)和養(yǎng)殖不同性別的海膽。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的不能按需求生產(chǎn)和養(yǎng)殖不同性別海膽的技術(shù)問題，提供一種誘導(dǎo)海膽雌核發(fā)育二倍體的方法，可按需求培育出性腺營養(yǎng)價值高、色澤及口感好的雌性海膽。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是一種誘導(dǎo)海膽雌核發(fā)育二倍體的方法，步驟依次如下a.用紫外線照射海膽精子使其遺傳失活；b.用遺傳失活的海膽精子與海膽卵子結(jié)合，生成受精卵；c.用靜水壓法處理受精卵，使海膽受精卵染色體二倍化。
所述的海膽精子為光棘球海膽精子。
所述的海膽卵子為蝦夷馬糞海膽卵子。
所述a步驟的紫外線照射劑量為30～330mJ/cm2。
所述b步驟的靜水壓力為60～80MPa，起始時間為90～120min，持續(xù)時間3～5min。
所述a步驟的紫外線照射劑量最好為180mJ/cm2。
所述b步驟的靜水壓力最好為80MPa，起始時間為120min，持續(xù)時間5min。
本發(fā)明是用紫外線照射使海膽精子遺傳失活，遺傳失活的海膽精子與海膽卵子結(jié)合，用靜水壓法使海膽受精卵染色體二倍化，成批生產(chǎn)出性腺色澤、口感好，營養(yǎng)價值高的雌性海膽，可提高海膽?zhàn)B殖效益和滿足市場的不同需求。尤其是選用光棘球海膽精子、蝦夷馬糞海膽卵子，受精卵成活率高且可改善海膽的品質(zhì)。當紫外線為180mJ/cm2、靜水壓力為80MPa，起始時間為120min，持續(xù)時間5min時效果最好，二倍體率可達30.76％。
具體實施例方式實施例1a.用現(xiàn)有技術(shù)取光棘球海膽精子置于盛有水的平坦的器皿中，水溫為適合于精子存活的溫度，最好為18℃，用紫外線燈對其照射，照射劑量為30～330mJ/cm2，則光棘球海膽精子染色體滅活，即遺傳失活；用遺傳失活的光棘球海膽精子與其它種類的海膽的卵子結(jié)合，如蝦夷馬糞海膽卵子，生成受精卵；b.將受精后90～120min的受精卵置于壓力倉中，水溫為適合受精卵存活的溫度，最好為18℃，用靜水壓法處理受精卵，靜水壓力60～80MPa，持續(xù)時間3～5min，則使海膽受精卵染色體二倍化。
實施例2a.用現(xiàn)有技術(shù)取中間球海膽(蝦夷馬糞海膽)精子置于盛有水的平坦的器皿中，水溫為適合于精子存活的溫度，最好為18℃，用紫外線燈對其照射，照射劑量為30～330mJ/cm2，則中間球海膽精子染色體滅活，即遺傳失活；用遺傳失活的中間球海膽精子與其同種的海膽卵子，生成受精卵；b.將受精后90～120min的受精卵置于壓力倉中，水溫為適合受精卵存活的溫度，最好為18℃，用靜水壓法處理受精卵，靜水壓力60～80MPa，持續(xù)時間3～5min，則使海膽受精卵染色體二倍化。
實施例3a.用現(xiàn)有技術(shù)取馬糞海膽精子置于盛有水的平坦的器皿中，水溫為適合于精子存活的溫度，最好為18℃，用紫外線燈對其照射，照射劑量為180mJ/cm2，則馬糞海膽精子染色體滅活，即遺傳失活；b.用遺傳失活的馬糞海膽精子與蝦夷馬糞海膽卵子結(jié)合，生成受精卵；c.將受精后120min的受精卵置于壓力倉中，水溫為適合受精卵存活的溫度，最好為18℃，用靜水壓法處理受精卵，靜水壓力80MPa，持續(xù)時間5min，則使海膽受精卵染色體二倍化率最高。
實驗結(jié)果見表1、表2表1 不同劑量紫外線照射光棘球海膽精子對其受精的蝦夷馬糞海膽的胚胎發(fā)育的影響


表2 不同壓力、持續(xù)時間和起始時間對海膽胚胎發(fā)育的影響

權(quán)利要求
1.一種誘導(dǎo)海膽雌核發(fā)育二倍體的方法，步驟依次如下a.用紫外線照射海膽精子使其遺傳失活；b.用遺傳失活的海膽精子與海膽卵子結(jié)合，生成受精卵；c.用靜水壓法處理受精卵，使海膽受精卵染色體二倍化。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)海膽雌核發(fā)育二倍體的方法，其特征在于所述的海膽精子為光棘球海膽精子。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的誘導(dǎo)海膽雌核發(fā)育二倍體的方法，其特征在于所述的海膽卵子為蝦夷馬糞海膽卵子。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的誘導(dǎo)海膽雌核發(fā)育二倍體的方法，其特征在于所述a步驟的紫外線照射劑量為30～330mJ/cm2。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的誘導(dǎo)海膽雌核發(fā)育二倍體的方法，其特征在于所述b步驟的靜水壓力為60～80MPa，起始時間為90～120min，持續(xù)時間3～5min。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的誘導(dǎo)海膽雌核發(fā)育二倍體的方法，其特征在于所述a步驟的紫外線照射劑量為180mJ/cm2。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的誘導(dǎo)海膽雌核發(fā)育二倍體的方法，其特征在于所述b步驟的靜水壓力為80MPa，起始時間為120min，持續(xù)時間5min。
全文摘要
本發(fā)明公開一種誘導(dǎo)海膽雌核發(fā)育二倍體的方法，步驟依次如下用紫外線照射海膽精子使其遺傳失活；用遺傳失活的海膽精子與海膽卵子結(jié)合，生成受精卵；用靜水壓法處理受精卵，使海膽受精卵染色體二倍化。成批生產(chǎn)出性腺色澤、口感好，營養(yǎng)價值高的雌性海膽，可提高海膽?zhàn)B殖效益和滿足市場的不同需求。尤其是選有光棘球海膽精子、蝦夷馬糞海膽卵子，受精卵成活率高且可改善海膽的品質(zhì)。當紫外線為180mJ/cm
文檔編號A01K67/00GK1586189SQ20041005033
公開日2005年3月2日 申請日期2004年8月27日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月27日
發(fā)明者常亞青, 丁君, 曹學(xué)彬, 宋堅, 王 華 申請人:大連水產(chǎn)學(xué)院