專利名稱：一種用于防治梨采后病害的酵母生物制劑制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及微生物真菌及其提取物，尤其涉及一種用于防治梨采后病害的酵母生物制劑制備方法。
背景技術：
果蔬采后腐爛大多由真菌引起的，長期以來防治真菌病害的方法主要是采用化學殺菌劑(農藥)。然而，由于長期使用化學殺菌劑，病原菌會對殺菌劑產生抗藥性而降低農藥使用的效果，更嚴重的是，農藥的使用會對公眾的健康造成危害，農藥殘留會對環(huán)境造成污染，目前，化學殺菌劑在許多國家已被禁止使用。為了提高水果的保鮮期，人們不得不尋求能取代當前化學殺菌劑的安全、無毒和有效的新方法。近年來，我國政府對食品的安全性非常重視，各地都在推行放心菜、放心肉、放心水果工程，不使用化肥農藥的綠色水果已成為廣大消費者的首選。另外，我國已加入WTO，國外對水果上的農藥殘留有嚴格的規(guī)定，特別是有些國家為了保護本國的經濟利益，實行貿易壁壘，對水果上的農藥殘留實行近乎苛刻的規(guī)定。所有這一切都要求我們開發(fā)安全、無公害、高效的水果生物保鮮劑。安全的病害防治措施是實施安全食品生產的重要內容之一。生物殺菌劑既能減輕有害微生物對果蔬侵染，又能保護環(huán)境，是生產安全性食品的有效方法.因而研究天然生物殺菌取代農藥進行果蔬采后病害的防治，對減少食品中農藥的殘留，保護環(huán)境，確保人體健康，增加果蔬出口，都具有深刻的意義。
生物殺菌劑可分為植物殺菌劑、動物殺菌劑和微生物殺菌劑三種。用微生物進行采后病害的生物防治是國外近幾年來發(fā)展起來的一個新的研究領域，自從Guter首次報道枯草桿菌(Bacillus subtilis)對水果病原菌有拮抗作用以來，國外學者對用微生物拮抗菌對果蔬采后病害的防治進行了廣泛的研究。
從國外文獻中可知當前以有效微生物取代化學殺菌劑對水果用于采后果蔬病害的防治已顯示出巨大的應用前景，采后果蔬的生物防治成為一個新的研究熱點。但目前的研究主要集中在蘋果和桃的病害防治上，而且還存在抑菌效果低、抑菌時間短、在果實表面附著性差及拮抗菌安全性等問題，限制了它們的廣泛使用，尤其是拮抗微生物抑菌的機理還不十分明了，因而篩選活力高、存活時間長、附著性好的安全菌種，是提高采后果蔬生物防治效果的關鍵。同時搞清采后病害生物防治的機理也十分重要。
在眾多的拮抗微生物如拮抗細菌、拮抗真菌和拮抗放線菌中，人們的關注焦點已逐漸由拮抗細菌轉向了拮抗真菌中的酵母生物制劑。因為拮抗酵母具有以下優(yōu)點酵母不會產生抗生素，不會對人體產生危害；能在干燥的條件下長期占據在果蔬表面并生長存活；它本身能產生胞外多糖以增強其自身生存能力；酵母能快速利用營養(yǎng)物質繁殖，生長快速。酵母的抑菌機理主要是通過其與病原菌之間對營養(yǎng)物質和空間的競爭來達到對病原菌的抑制效果。

發(fā)明內容
為了替代化學殺菌劑或盡量減少化學殺菌劑使用量，本發(fā)明的目的是提供一種用于防治梨采后病害的酵母生物制劑制備方法。根據微生物之間的相生相克原理，利用酵母菌來抑制果蔬上病害真菌的生長而達到抑制腐爛的效果。
本發(fā)明的技術方案將羅倫隱球酵母菌菌體在10-12°Brix的麥芽汁培養(yǎng)基中26-30℃下在搖床中180-220轉/分鐘搖動20-26小時，進行培養(yǎng)，在2500-3000轉/分鐘下離心分離10-15分鐘，收集菌體，直接配制成1×108-5×108個/毫升的酵母菌懸液，或者采用冷凍干燥機在零下40-45℃冷凍干燥制成干粉，貯藏。
本發(fā)明的有益效果是該生物制劑可以防治梨上由兩種主要病原真菌引起的病害，并且使用后不會影響到果品品質，不會危害人體健康；酵母菌體通過某種作用機制，可以很好地抑制病原真菌的生長繁殖，并且其本身能很好的適應梨的傷口環(huán)境，適應采前惡劣的大田環(huán)境，如高溫、干燥和使用化學殺菌劑；或者適應采后的貯藏環(huán)境，如低溫環(huán)境。并且長期地發(fā)揮抑菌作用；人類食用使用了該酵母生物制劑的梨果實后，對健康不會產生影響，因為該酵母生物制劑是安全，對人體無毒的；酵母菌體能夠較好地附著在梨果實表面上，而不會輕易地脫落下來；在梨果實上使用該羅倫隱球酵母菌生物制劑后，不會對梨的風味、外觀等品質產生影響.
具體實施例方式
本發(fā)明提供的酵母生物保鮮劑羅倫隱球酵母(Cryptococcus laurentii)，菌體顏色是淺黃色的。動物急性經口實驗證明，該酵母屬實際無毒級。該酵母在國外已有人作過生防實驗，證實是安全的。
本發(fā)明中使用的羅倫隱球酵母，經實驗研究證實，對許多病原菌有抑制作用，特別對引起梨采后腐爛的兩種主要病原真菌[擴展青霉(Penicilliumexpansum)和灰葡萄孢(Botrytis cinerea)]有很好的抑制效果，并且在室溫和冷藏低溫時都能在梨皮上和傷口處生長。
羅倫隱球酵母在低溫下仍然能夠在水果上緩慢生長，且在低溫下仍然能夠發(fā)揮生物防治作用，因此可以和低溫貯藏一起使用；該羅倫隱球酵母可以耐受較低濃度的某些化學殺菌劑，因此可以混合使用，以降低化學殺菌劑的使用量；此外該羅倫隱球酵母與一些金屬離子結合使用還可以提高抑菌效果。
實施例1將羅倫隱球酵母菌菌體在12°Brix的麥芽汁培養(yǎng)基中28℃下200轉/分鐘搖動，培養(yǎng)活化20小時，在3000轉/分鐘下離心分離10min，收集菌體，直接配制成1×108個/毫升的酵母菌懸液，將菌體分離后直接懸浮在無菌生理鹽水中，配成濃度為2×108個/毫升的酵母菌懸液，直接噴灑使用。
實施例2將羅倫隱球酵母菌菌體在12°Brix的麥芽汁培養(yǎng)基中28℃下190轉/分鐘搖動，培養(yǎng)活化22小時，在2800轉/分鐘下離心分離10分鐘，收集菌體，直接配制成1×108個/毫升的酵母菌懸液，將菌體分離后直接懸浮在無菌生理鹽水中，配成濃度為3×108個/毫升的酵母菌懸液，直接噴灑使用。
實施例3將羅倫隱球酵母菌菌體在10°Brix的麥芽汁培養(yǎng)基中29℃下180轉/分鐘搖動，培養(yǎng)活化24小時，在2500轉/分鐘下離心分離12分鐘，收集菌體，用冷凍干燥機在零下40℃冷凍干燥制成干粉，在4℃貯藏備用.用時將干粉直接懸浮在無菌生理鹽水中，配成濃度為2×108個/毫升的酵母菌懸液，直接噴灑使用。
實施例4將羅倫隱球酵母菌菌體在10°Brix的麥芽汁培養(yǎng)基中28℃下190轉/分鐘搖動，培養(yǎng)活化23小時，在3000轉/分鐘下離心分離10分鐘，收集菌體，用冷凍干燥機在零下40℃冷凍干燥制成干粉，在4℃貯藏備用.用時將干粉直接懸浮在無菌生理鹽水中，配成濃度為5×108個/毫升的酵母菌懸液，直接噴灑使用。
權利要求
1.一種用于防治梨采后病害的酵母生物制劑制備方法，其特征在于將羅倫隱球酵母菌菌體在10-12°Brix的麥芽汁培養(yǎng)基中26-30℃下在搖床中180-220轉/分鐘搖動20-26小時，進行培養(yǎng)，在2500-3000轉/分鐘下離心分離10-15分鐘，收集菌體，直接配制成1×108-5×108個/毫升的酵母菌懸液，或者采用冷凍干燥機在零下40-45℃冷凍干燥制成干粉，貯藏。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于防治梨采后病害的酵母生物制劑制備方法，將羅倫隱球酵母菌菌體在麥芽汁培養(yǎng)基中搖床培養(yǎng)，離心分離，收集菌體，直接配制成1×10
文檔編號A01N63/02GK1557165SQ20041001594
公開日2004年12月29日 申請日期2004年1月16日 優(yōu)先權日2004年1月16日
發(fā)明者鄭曉冬, 張紅印, 傅承新, 孫萍 申請人:浙江大學