專利名稱：真菌油孢子混劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種真菌生物農(nóng)藥制劑。
現(xiàn)有技術(shù)真菌致病機(jī)制十分復(fù)雜，有害生物難以產(chǎn)生抗藥性，在病蟲(chóng)草害控制中具有巨大潛力。真菌生防制劑是以有害生物的病原真菌為有效成分研制的生物農(nóng)藥，具有安全、不殺傷非目標(biāo)生物等優(yōu)點(diǎn)以及觸殺性和流行性等突出特點(diǎn)，主要包括真菌殺蟲(chóng)劑、真菌除草劑、真菌殺菌劑和真菌殺線蟲(chóng)劑等。近年來(lái)，國(guó)際上對(duì)真菌生防制劑的研究已超過(guò)細(xì)菌類生防制劑，成為生物農(nóng)藥研究的熱點(diǎn)。近10年來(lái)，國(guó)外對(duì)真菌生防制劑的研制明顯加速，已注冊(cè)登記100多個(gè)品種，絕大多數(shù)為真菌殺蟲(chóng)劑，僅綠僵菌和白僵菌制劑國(guó)際上已登記的產(chǎn)品有20多個(gè)，真菌除草劑和真菌殺菌劑也在逐年增加；真菌生防制劑生產(chǎn)技術(shù)日趨成熟。目前，由于制劑貯存穩(wěn)定性較差、田間防效不穩(wěn)定或成本較高限制其商品化和市場(chǎng)化。
粉劑、可濕性粉劑、顆粒劑和乳劑是真菌生防制劑常用的劑型。真菌類農(nóng)藥利用活體真菌防治有害生物，作為真菌農(nóng)藥使用的活體真菌包括菌絲、孢子兩大類，粉劑是將真菌菌絲、孢子與填充劑(如硅藻土、淀粉、滑石粉、輕質(zhì)碳酸鈣、高嶺土等)、抗紫外線輻射劑等添加物混合加工而成。粉劑直接噴粉后，孢子或菌絲段依靠從環(huán)境中吸收水分而萌發(fā)或重新生長(zhǎng)。由于真菌孢子萌發(fā)或重新生長(zhǎng)要求高濕度條件，受環(huán)境中濕度變化的影響大。因此，殺蟲(chóng)真菌粉劑存在難以在干燥地區(qū)和干燥的季節(jié)使用、田間應(yīng)用的穩(wěn)定性較差等缺陷；可濕性粉劑、乳劑、顆粒中需要添加一些表面活性劑(如拉開(kāi)粉等)，高濃度表面活性劑與真菌孢子長(zhǎng)時(shí)間接觸，往往影響真菌孢子活力，使得這幾種制劑貯存穩(wěn)定性差、貨架期短。與粉劑一樣，它們對(duì)環(huán)境濕度要求高，田間防效不穩(wěn)定。這些缺陷長(zhǎng)期制約真菌農(nóng)藥應(yīng)用。
近10多年真菌孢子油懸浮劑已發(fā)展成為一種真菌殺蟲(chóng)劑的新劑型將真菌孢子分散在各種油(植物油、礦物油或復(fù)合油)中制成油懸浮劑。油能在疏水的昆蟲(chóng)表面展開(kāi)，破壞昆蟲(chóng)體表蠟質(zhì)層結(jié)構(gòu)，使昆蟲(chóng)體內(nèi)水分蒸發(fā)，為孢子萌發(fā)提供水分，降低孢子對(duì)環(huán)境濕度的依賴性。油懸浮劑成功地克服了真菌孢子難以在干燥環(huán)境中使用、殺蟲(chóng)效果受環(huán)境中濕度影響的缺陷，但油懸浮劑的成本較高，更為重要的是，油懸浮劑需要超低容量機(jī)動(dòng)噴霧機(jī)進(jìn)行超低容量噴霧施藥，不適合絕大多數(shù)農(nóng)戶的常量噴霧施藥習(xí)慣。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種真菌油孢子混劑，在于解決目前真菌制劑中粉劑、可濕性粉劑、顆粒劑和乳劑對(duì)環(huán)境濕度要求高、田間防效不穩(wěn)定和貯存穩(wěn)定性較差以及油劑只適合用超低容量機(jī)動(dòng)噴霧機(jī)施藥，對(duì)噴藥器械要求較高、難以為多數(shù)農(nóng)戶接受等問(wèn)題。
本發(fā)明的“真菌油孢子混劑”適用于通過(guò)固體發(fā)酵或液體發(fā)酵獲得的真菌孢子。
本發(fā)明的具體方案是一種真菌油孢子混劑，其特征在于它由真菌油孢子粉和分散劑組成，它以“真菌油孢子粉”與“分散劑”形式分別貯存，使用時(shí)真菌油孢子粉與分散劑混合后，直接超低容量噴霧或兌水常量噴霧、兌水超低容量噴霧，其中A.“真菌油孢子粉”是將含1-20％凡士林和0.01-1.0％抗氧化劑的油，按油∶真菌干孢子粉＝1∶3-100的比例采用高壓超細(xì)噴霧技術(shù)或攪拌混合技術(shù)均勻地附著在真菌孢子表面，形成一薄層油膜；B.“分散劑”是將20-85％油、75-10％水、1-10％乳化劑混合后，加工而成的乳劑。
本發(fā)明在制作“真菌油孢子粉”時(shí)，較佳方案是將含1-20％凡士林和0.01-1.0％抗氧化劑的油，按油∶真菌干孢子粉＝1∶4-50的比例采用超細(xì)噴霧技術(shù)或攪拌混合技術(shù)均勻地附著在真菌孢子表面上，形成一薄層油膜。
本發(fā)明所述“真菌油孢子粉”是將真菌孢子粉加工成為油孢子粉，以油孢子粉的形式貯存和運(yùn)輸，能有效延長(zhǎng)真菌孢子貯存時(shí)間。真菌孢子表面的油膜起到保護(hù)膜的作用，并維持孢子低的含水量，減少真菌孢子與環(huán)境中氧氣的接觸，油膜中含有的抗氧化劑進(jìn)一步降低孢子與氧的作用，使真菌孢子代謝處于低的水平。施用后，油能有效阻擋紫外線，降低紫外線對(duì)真菌孢子的損傷，有效提高田間防效穩(wěn)定性。
本發(fā)明所述“分散劑”中含有20-85％油，與油孢子粉混合加水后，油包裹真菌孢子均勻分散在水中，在施藥后，可直接提供孢子萌發(fā)所需要的水分，混劑中的油還可以破壞寄主表皮脂類結(jié)構(gòu)，增加表皮水分蒸發(fā)，提高真菌孢子周圍環(huán)境濕度，為孢子萌發(fā)持續(xù)提供水分，從而降低孢子對(duì)環(huán)境濕度的依賴性；真菌孢子活力兼容的表面活性劑(吐溫、司班等)一方面具有穩(wěn)定分散劑作用，另一方面便于超低容量噴霧和常量噴霧器，既適合大面積機(jī)械施藥，又適合農(nóng)民一家一戶小面積使用。
本發(fā)明使用時(shí)，按真菌油孢子粉與分散劑的比例為1∶1-100進(jìn)行混合；優(yōu)選配比是1∶2-50。
將真菌油孢子粉與分散劑混合后，直接超低容量噴霧或兌水常量噴霧、兌水超低容量噴霧。
本發(fā)明經(jīng)實(shí)驗(yàn)獲得顯著成功，它具有良好的穩(wěn)定性、耐熱性、耐干燥性能，貯存時(shí)間延長(zhǎng)，施藥方便，既可用超低容量噴霧，也可采用常量噴霧。
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)一、真菌油孢子粉的熱穩(wěn)定性按1∶10的比例將植物油噴到綠僵菌菌株MA102干孢子粉制成油孢子粉，5g油孢子粉和干孢子粉裝入2個(gè)50ml的燒杯中分別放置在溫度為26±1℃，濕度為95％、75％、55％、35％的環(huán)境放置10天后，每個(gè)樣品分別混勻后，分別取出0.1g放入1.5ml的離心管，在高溫(55℃)恒溫水浴鍋處理4小時(shí)后用0.05％吐溫-80滅菌水配成3×107spores/ml濃度的孢子懸浮液，用移液槍取100ul均勻涂布在放有直徑為9mm玻璃紙圓片的1/4SDA平板上，26±1℃恒溫培養(yǎng)，設(shè)未經(jīng)高溫處理為對(duì)照，24小時(shí)取玻璃紙圓片用棉藍(lán)染色后鏡檢，計(jì)數(shù)200-300個(gè)孢子，記錄萌發(fā)的孢子數(shù)，計(jì)算萌發(fā)率，每一處理三個(gè)重復(fù)。
表1環(huán)境濕度對(duì)菌株CQMA102油孢子粉與干孢子粉熱穩(wěn)定性影響

從表1可以看出未貯存的CQMA102油孢子粉與干孢子粉熱穩(wěn)定性無(wú)明顯差異，而油孢子粉在相對(duì)濕度≥55％環(huán)境中貯存一段時(shí)間后，其耐熱性明顯高于干孢子粉。如在75％、95％的環(huán)境濕度常溫貯存10天后，經(jīng)過(guò)55℃恒溫處理4小時(shí)，油孢子粉的萌發(fā)率分別為80.6％、67.1％，顯著高于干孢子粉65.5％、42.4％的萌發(fā)率水平，孢子的熱穩(wěn)定性與孢子的貯存時(shí)間呈正相關(guān)，說(shuō)明油孢子粉耐貯性優(yōu)于干孢子粉。
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)二、“真菌油孢子混劑”耐紫外線特性將7g含有10％植物油的綠僵菌油孢子粉與100ml分散劑混合后，加水稀釋300倍，再用移液槍取100ul均勻涂抹在放有直徑為9mm玻璃紙圓片的1/4SDAY平板上，在干燥器中干燥至表面無(wú)水膜后置于距30w的紫外燈35cm的地方垂直照射60S后，取出放入26℃恒溫箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，以孢子濃度為3×107個(gè)/ml的綠僵菌油懸浮劑、水劑和干孢子粉為對(duì)照。不同時(shí)間取出玻璃紙圓片經(jīng)棉藍(lán)染色后鏡檢，計(jì)數(shù)200-300個(gè)孢子，記錄萌發(fā)的孢子數(shù)，計(jì)算萌發(fā)率，第一次6h檢測(cè)，以后每隔3h分別檢查一次萌發(fā)率。
從圖1可以看出真菌油孢子混劑耐紫外線能力接近綠僵菌油懸浮劑，經(jīng)紫外線處理60s后，它們的36h的萌發(fā)率分別為82.0％和93.3％，顯著高于綠僵菌水劑和干孢子粉，紫外線處理綠僵菌水劑和干孢子粉60s，培養(yǎng)36h后的萌發(fā)率分別為為42.1％與28.3％。
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)三、“真菌油孢子混劑”耐干燥特性將7g含有10％植物油的綠僵菌油孢子粉與100ml分散劑混合后，加水稀釋300倍后噴霧于東亞飛蝗翅膜上，分別放在溫度為26℃、濕度為100％、92％、83％、75％的容器中，設(shè)干孢子粉與孢子濃度為3×107個(gè)/ml水劑作對(duì)照，36h后用經(jīng)棉藍(lán)染色后鏡檢，計(jì)數(shù)200-300個(gè)孢子，記錄萌發(fā)的孢子數(shù)，計(jì)算萌發(fā)率。重復(fù)3次。
表2不同劑型綠僵菌孢子在不同濕度條件下的萌發(fā)率(％) 從表2可以看出環(huán)境濕度為92％時(shí)，真菌油孢子混劑的萌發(fā)率分別為56.2％，顯著高于綠僵菌干孢子粉和水劑在相同濕度環(huán)境中的的萌發(fā)率，干孢子粉和水劑在環(huán)境濕度為92％的萌發(fā)率分別為19.4％、23.7％，在環(huán)境濕度為83％時(shí)，干孢子粉與水劑不萌發(fā)，真菌油孢子混劑的萌發(fā)率為19.5％，說(shuō)明真菌油孢子混劑的耐旱能力高于綠僵菌水劑及干孢子粉。


圖1是紫外線對(duì)不同劑型綠僵菌孢子萌發(fā)的影響圖。
具體實(shí)施例實(shí)施例1A.制備真菌油孢子粉將在60L色拉油加入2.5Kg凡士林，再加入抗氧化劑(0.2Kg的抗壞血酸)攪拌混勻，加色拉油定容至100L攪拌混勻后備用。將100Kg綠僵菌CQMA102灰綠色的干孢子粉裝入噴霧塔，用高壓噴霧器噴入5L的備用油，形成表面顏色深綠、塵揚(yáng)性低的油孢子粉。
B.制備分散劑分別將50L色拉油、3L吐溫-80、3L曲拉通、6L司班和38L水，倒入乳化機(jī)中，乳化30分鐘，形成穩(wěn)定的乳白色分散劑。
C.使將真菌油孢子粉與分散劑按1∶10混合后，進(jìn)行超低容量噴霧。
實(shí)施例2A.制備真菌油孢子粉將在60L礦物油加入10Kg凡士林，再加入抗氧化劑(0.04Kg的BHA和0.2Kg的微生E)攪拌混勻，加礦物油定容至100L攪拌混勻后備用。將100Kg白僵菌干孢子粉裝入噴霧塔，用高壓噴霧器噴入20L的備用油，形成塵揚(yáng)性低白僵菌的油孢子粉。
B.制備分散劑分別將20L礦物油、1.5L吐溫-80、1.5羧甲基纖維素鈉、2L司班和75L水，倒入乳化機(jī)中，乳化30分鐘，形成穩(wěn)定的乳白色分散劑。
C.使將真菌油孢子粉與分散劑按1∶20混合，加水稀釋300-500倍后進(jìn)行常量噴霧。
實(shí)施例3A.制備真菌油孢子粉將在6.0L礦物油加入1.5Kg熔化后的凡士林，再加入抗氧化劑(0.01Kg愈瘡木膠和0.01Kg磷脂)攪拌混勻，加定色拉油容至10.0L攪拌混勻后備用。將1.0K膠孢炭疽菌干孢子粉裝入攪拌器中攪拌，攪拌時(shí)用噴霧器噴入0.3L的備用油，混合形成塵揚(yáng)性低的膠孢炭疽菌油孢子粉。
B.制備分散劑分別將6.0L色拉油、0.3L吐溫-80、0.3L乳化劑OP、0.6L司班和2.8L水，倒入乳化機(jī)中，乳化30分鐘，形成穩(wěn)定的乳白色分散劑。
C.使將真菌油孢子粉與分散劑按1∶3混合，加水稀釋1000-1500倍后進(jìn)行常量噴霧。
權(quán)利要求
1.一種真菌油孢子混劑，其特征在于它由真菌油孢子粉和分散劑組成，它以“真菌油孢子粉”與“分散劑”形式分別貯存，使用時(shí)真菌油孢子粉與分散劑混合后，直接超低容量噴霧或兌水常量噴霧、兌水超低容量噴霧，其中A.“真菌油孢子粉”是將含1-20％凡士林和0.01-1.0％抗氧化劑的油，按油∶真菌干孢子粉＝1∶3-100的比例采用超細(xì)噴霧技術(shù)或攪拌混合技術(shù)均勻地附著在的真菌孢子表面，形成一薄層油膜；B.“分散劑”是將20-85％油、75-10％水、1-20％乳化劑混合后，加工而成的乳劑。
2.如權(quán)利要求1所述的真菌油孢子混劑，其特征在于在A點(diǎn)所述油中抗氧化劑是抗壞血酸、BHA、BHT、微生E、愈瘡木膠、磷脂或它們的混合物。
3.如權(quán)利要求1所述的真菌油孢子混劑，其特征在于在B點(diǎn)所述中乳化劑是吐溫、司班、曲拉通、羧甲基纖維素鈉、乳化劑OP或它們的混合物。
4.如權(quán)利要求1所述的真菌油孢子混劑，其特征在于所述油是礦物油、植物油或它們的混合油。
5.如權(quán)利要求1所述的真菌油孢子混劑，其特征在于“真菌油孢子粉”是將含1-20％凡士林和0.01-1.0％抗氧化劑的油，按油∶真菌干孢子粉＝1∶4-50的比例采用超細(xì)噴霧技術(shù)或攪拌混合技術(shù)均勻地附著在真菌孢子表面，形成一薄層油膜。
6.如權(quán)利要求1所述的真菌油孢子混劑，其特征在于所述真菌油孢子混劑使用時(shí)，真菌油孢子粉與分散劑的混合比例為1∶1-100。
7.如權(quán)利要求1所述的真菌油孢子混劑，其特征在于所述真菌油孢子混劑使用時(shí)，真菌油孢子粉與分散劑的混合比例為1∶2-50。
全文摘要
本發(fā)明屬于一種真菌生物農(nóng)藥制劑，特別是真菌油孢子混劑。其特征在于它由真菌油孢子粉和分散劑組成，它以“真菌油孢子粉”與“分散劑”形式分別貯存，使用時(shí)真菌油孢子粉與分散劑混合后，直接超低容量噴霧或兌水常量噴霧、兌水超低容量噴霧，其中A.“真菌油孢子粉”是將含1－20％凡士林和0.01－1.0％抗氧化劑的油，按油∶真菌干孢子粉＝1∶3－100的比例采用高壓超細(xì)噴霧技術(shù)或攪拌混合技術(shù)均勻地附著在真菌孢子表面，形成一薄層油膜；B.“分散劑”是將20－85％油、75－10％水、1－20％乳化劑混合后，加工而成的乳劑。該發(fā)明具有良好的穩(wěn)定性、耐熱性、耐干燥性能，其貯存時(shí)間延長(zhǎng)，施用方便，既可用超低容量噴霧，也可采用常量噴霧。
文檔編號(hào)A01N63/04GK1545885SQ20031011111
公開(kāi)日2004年11月17日 申請(qǐng)日期2003年12月5日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月5日
發(fā)明者彭國(guó)雄, 夏玉先, 王中康, 殷幼平, 曾德玉 申請(qǐng)人:重慶大學(xué), 重慶重大生物技術(shù)發(fā)展有限公司