專利名稱：春尺蠖核型多角體病毒殺蟲劑工廠化生產(chǎn)工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種春尺蠖核型多角體病毒(保藏號為CGMCC No.0953，保藏日期為2003年06月18日)殺蟲劑工廠化生產(chǎn)工藝屬于林木害蟲——春尺蠖生物防治領(lǐng)域。
春尺蠖核型多角體病毒，對目標害蟲具有較強的致病力和專一性；在自然環(huán)境中存留較穩(wěn)定，持續(xù)防治效果好；連續(xù)使用不易產(chǎn)生抗藥性；對人、畜和野生動物及有益昆蟲是安全可靠的。因此在林業(yè)蟲害防治中得到越來越廣泛的應(yīng)用。昆蟲病毒殺蟲劑的特異性較強，只能在活的宿主細胞內(nèi)增殖，目前多采用野外接毒感染收集法的方式生產(chǎn)病毒殺蟲劑。其缺點是首先，一年只能生產(chǎn)一次(春尺蠖一年發(fā)生一代)。其次，受外部環(huán)境制約的因素多，如溫度、濕度、風(fēng)雨、沙塵、蟲口密度、樹高、地勢等，都會對病毒殺蟲劑的施藥和采收帶來不良的影響，從而使生產(chǎn)病毒殺蟲劑的產(chǎn)量極不穩(wěn)定，很難進行較為連續(xù)的大規(guī)模生產(chǎn)。
本發(fā)明所述的春尺蠖核型多角體病毒，其特征在于，該病毒多角體大多為三角形，少數(shù)近圓形，直徑為1-1.8μm；病毒粒子呈桿狀，長約272-311nm，寬約66-83nm，病毒粒子在多角體中呈單粒包埋，該病毒包括脫氧核糖核酸(DNA)和蛋白質(zhì)。上述的DNA含量，用二苯胺顯色法測定為該病毒每毫克含6微克DNA。該病毒的蛋白質(zhì)含有14種氨基酸，其中每毫克蛋白質(zhì)中含有天門冬氨酸16.00微克、蘇氨酸3.95微克、絲氨酸3.52微克、谷氨酸18.58微克、甘氨酸4.50微克、丙氨酸5.11微克、纈氨酸6.87微克、異亮氨酸6.64微克、亮氨酸11.21微克、酪氨酸6.30微克、苯丙氨酸8.23微克、組氨酸1.55微克、賴氨酸5.18微克、色氨酸6.40微克。
本發(fā)明提供的春尺蠖病毒殺蟲劑工廠化生產(chǎn)工藝，其特征在于包括以下步驟(1)將春尺蠖蛹裝入沙土中，在冰箱冷藏至滯育解除，即可羽化成蟲；(2)將上述羽化后的成蟲雌雄搭配成對，放入容器中進行交配產(chǎn)卵；(3)將上述交配產(chǎn)卵后的卵經(jīng)常規(guī)消毒后孵出幼蟲，接入裝有春尺蠖幼蟲人工飼料的春尺蠖幼蟲飼養(yǎng)容器內(nèi)，放入健康養(yǎng)蟲間內(nèi)飼養(yǎng)到3-4齡；(4)將上述的春尺蠖幼蟲人工飼料裝入春尺蠖幼蟲飼養(yǎng)容器中，飼料表面接上經(jīng)過常規(guī)技術(shù)純化后的春尺蠖核型多角體病毒，每個容器中接入上述的經(jīng)過健康養(yǎng)蟲間飼養(yǎng)的幼蟲，放入復(fù)制養(yǎng)蟲間飼養(yǎng)；(5)上述經(jīng)過復(fù)制養(yǎng)蟲間飼養(yǎng)的感染春尺蠖核型多角體病毒幼蟲經(jīng)常規(guī)生物殺蟲劑制備技術(shù)粉碎、過濾，將濾液離心后收集沉淀，在該沉淀中加入甘油，攪拌均勻得到最后產(chǎn)品。
其中步驟(1)中的沙土為濕潤沙土，冰箱溫度為0-4度。步驟(2)中的容器中盛有紙片而且容器中放1-2對成蟲。
本發(fā)明提供的春尺蠖幼蟲人工飼料，其特征在于含有重量百分比為11.2-13.4％麥胚，2-5％的干酪素，0.5-1.8％的韋氏鹽，0.2-0.43％的山梨酸，0.1-0.35％的尼泊金，0.40-0.77％的維生素C，0.375-0.7％的維生素B，1.2-1.8％的瓊脂，0.025-0.075％的肌醇，75-84％的水。表1和表2中的配方1-3為上述的配方含量。選擇理由幼蟲成活率70％以上；幼蟲歷期低于20天；幼蟲均體重大于200mg；成蛹率高于55％；相對成本較低。
本發(fā)明提供的生產(chǎn)工藝，步驟(1)中將春尺蠖蛹裝入濕潤沙土中，在0-4度冰箱冷藏，直至滯育解除，即可羽化成蟲；其原因見表3。選擇理由在此溫度段和時間段蛹的羽化率相對最高本發(fā)明提供的生產(chǎn)工藝，步驟(2)將羽化的成蟲雌雄搭配成對，放入盛有紙片的容器中進行交配產(chǎn)卵，紙片為產(chǎn)卵載體，每容器中放1-2對成蟲；選擇理由平均產(chǎn)卵量高于350粒；孵化率高于95％。實驗數(shù)據(jù)見表4。
本發(fā)明提供的生產(chǎn)工藝，步驟(4)將春尺蠖幼蟲人工飼料裝入春尺蠖幼蟲飼養(yǎng)容器中，飼料表面接上濃度為1.1×106-1.1×107(PIB/ml)個多角體/毫升病毒，濃度試驗數(shù)據(jù)見表5。選擇理由春尺蠖感染病毒幼蟲死亡率高于90％；幼蟲死亡前化蛹率低于2％；幼蟲死亡齡期處于即不化蛹，其生物量又達到最大化階段。這樣可使病毒殺蟲劑復(fù)制量達到最高。
本發(fā)明提供的生產(chǎn)工藝，步驟(3)或步驟(4)所述的春尺蠖幼蟲飼養(yǎng)容器，其特征在于養(yǎng)蟲杯中放入網(wǎng)狀物。步驟(3)健康幼蟲飼養(yǎng)的實驗數(shù)據(jù)見表6，選擇理由幼蟲成活率85％；節(jié)省人工和材料，可重復(fù)使用。
本發(fā)明提供的生產(chǎn)工藝，步驟(5)中甘油的重量百分比為40％-50％，選擇理由是在該含量范圍的最后產(chǎn)品在-10℃基本不結(jié)冰；室溫下能抑制雜菌生長，有利于保存。結(jié)果見表7。
該生產(chǎn)工藝克服了現(xiàn)有技術(shù)的缺點，不受外界環(huán)境制約，可大規(guī)模生產(chǎn)，制備出的殺蟲劑安全高效。
春尺蠖核型多角體病毒的離心提取采用DPB-30型疊片式液固兩相分離機。
實施例1、春尺蠖蛹2.5萬頭，裝入濕潤沙土中，在4度冰箱冷藏，88天后開始羽化，每產(chǎn)卵容器中放2對成蟲。春尺蠖幼蟲人工飼料按照配方1加熱混勻，分裝到春尺蠖幼蟲飼養(yǎng)容器中，將初孵幼蟲接入，放入健康養(yǎng)蟲間內(nèi)飼養(yǎng)至4齡，室溫為20℃。將飼料分裝置春尺蠖幼蟲飼養(yǎng)容器中，自然冷卻后，在表面接上濃度為1.1×106PIB/ml病毒，晾干后每養(yǎng)蟲容器中接入12頭4齡幼蟲，放入復(fù)制養(yǎng)蟲間飼養(yǎng)，室溫18℃。10天后采收病毒，采用常規(guī)技術(shù)加工成最后產(chǎn)品，產(chǎn)品含量為1.25×1010PIB/ml，共生產(chǎn)70000ml，防治2-3齡春尺蠖幼蟲3.5萬畝，當代害蟲死亡率92％。
實施例2、春尺蠖蛹9.8萬頭，裝入濕潤沙土中，在4度冰箱冷藏，90天后開始羽化，每產(chǎn)卵容器中放1對成蟲。春尺蠖幼蟲人工飼料按照配方2加熱混勻，分裝到春尺蠖幼蟲飼養(yǎng)容器中，將初孵幼蟲接入，放入健康養(yǎng)蟲間內(nèi)飼養(yǎng)至3齡，室溫為22℃。將飼料分裝置春尺蠖幼蟲飼養(yǎng)容器中，自然冷卻后，在表面接上濃度為5×106PIB/ml病毒，晾干后每養(yǎng)蟲容器中接入10頭4齡幼蟲，放入復(fù)制養(yǎng)蟲間飼養(yǎng)，室溫19℃。9天后采收病毒，采用常規(guī)技術(shù)加工成最后產(chǎn)品，產(chǎn)品含量為1.25×1010PIB/ml，共生產(chǎn)375000ml，防治3-4齡春尺蠖幼蟲15萬畝，當代害蟲死亡率80％以上。
實施例3、春尺蠖蛹2.3萬頭，裝入濕潤沙土中，在0度冰箱冷藏，85天后開始羽化，每產(chǎn)卵容器中放1對成蟲。春尺蠖幼蟲人工飼料按照配方3加熱混勻，分裝到春尺蠖幼蟲飼養(yǎng)容器中，將初孵幼蟲接入，放入健康養(yǎng)蟲間內(nèi)飼養(yǎng)至4齡，室溫為22℃。將飼料分裝置春尺蠖幼蟲飼養(yǎng)容器中，自然冷卻后，在表面接上濃度為1.1×106PIB/ml病毒，晾干后每養(yǎng)蟲容器中接入10頭4齡幼蟲，放入復(fù)制養(yǎng)蟲間飼養(yǎng)，室溫20℃。9天后采收病毒，采用常規(guī)技術(shù)加工成最后產(chǎn)品，產(chǎn)品含量為1.25×1010PIB/ml，共生產(chǎn)64500ml，防治2-3齡春尺蠖幼蟲3.2萬畝，當代害蟲死亡率85％以上。
表1 春尺蠖幼蟲人工飼料不同配方各物質(zhì)的重量百分比


表2不同飼料配方飼養(yǎng)春尺蠖幼蟲的效果

表3春尺蠖蛹滯育解除情況


表4春尺蠖成蟲產(chǎn)卵量對比實驗

表5春尺蠖核型多角體病毒濃度試驗

表6養(yǎng)蟲容器試驗

表7本發(fā)明殺蟲劑中甘油比例的篩選

權(quán)利要求
1.一種春尺蠖核型多角體病毒殺蟲劑工廠化生產(chǎn)工藝，其特征在于，它包括以下步驟(1)將春尺蠖蛹裝入沙土中，在冰箱冷藏至滯育解除，即可羽化成蟲；(2)將上述羽化后的成蟲雌雄搭配成對，放入容器中進行交配產(chǎn)卵；(3)將上述交配產(chǎn)卵后的卵經(jīng)常規(guī)消毒后孵出幼蟲，接入裝有春尺蠖幼蟲人工飼料的春尺蠖幼蟲飼養(yǎng)容器內(nèi)，放入健康養(yǎng)蟲間內(nèi)飼養(yǎng)到3-4齡；(4)將上述的春尺蠖幼蟲人工飼料裝入春尺蠖幼蟲飼養(yǎng)容器中，飼料表面接上經(jīng)過常規(guī)技術(shù)純化后的春尺蠖核型多角體病毒，每個容器中接入上述的經(jīng)過健康養(yǎng)蟲間飼養(yǎng)的幼蟲，放入復(fù)制養(yǎng)蟲間飼養(yǎng)；(5)上述經(jīng)過復(fù)制養(yǎng)蟲間飼養(yǎng)的感染春尺蠖核型多角體病毒幼蟲經(jīng)常規(guī)生物殺蟲劑制備技術(shù)粉碎、過濾，將濾液離心后收集沉淀，在該沉淀中加入甘油，攪拌均勻得到最后產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的春尺蠖核型多角體病毒殺蟲劑工廠化生產(chǎn)工藝，其特征在于，步驟(1)中的沙土為濕潤沙土。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的春尺蠖核型多角體病毒殺蟲劑工廠化生產(chǎn)工藝，其特征在于，步驟(1)中的冰箱溫度為0-4度。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的春尺蠖核型多角體病毒殺蟲劑工廠化生產(chǎn)工藝，其特征在于，步驟(2)中的容器盛有紙片。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的春尺蠖核型多角體病毒殺蟲劑工廠化生產(chǎn)工藝，其特征在于，步驟(2)中盛有紙片的容器中放1-2對成蟲。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的春尺蠖核型多角體病毒殺蟲劑工廠化生產(chǎn)工藝，其特征在于，步驟(3)中春尺蠖幼蟲人工飼料含有重量百分比為11.2-13.4％麥胚，2-5％的干酪素，0.5-1.8％的韋氏鹽，0.2-0.43％的山梨酸，0.1-0.35％的尼泊金，0.40-0.77％的維生素C，0.375-0.7％的維生素B，1.2-1.8％的瓊脂，0.025-0.075％的肌醇，75-84％的水。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的春尺蠖核型多角體病毒殺蟲劑工廠化生產(chǎn)工藝，其特征在于，步驟(3)溫度為20-22度；
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的春尺蠖核型多角體病毒殺蟲劑工廠化生產(chǎn)工藝，其特征在于，步驟(3)或(4)中春尺蠖幼蟲飼養(yǎng)容器是在養(yǎng)蟲杯中放入網(wǎng)狀物。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的春尺蠖核型多角體病毒殺蟲劑工廠化生產(chǎn)工藝，其特征在于，步驟(4)飼料表面接上濃度為1.1×106-1.1×107個多角體/毫升春尺蠖核型多角體病毒。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的春尺蠖核型多角體病毒殺蟲劑工廠化生產(chǎn)工藝，其特征在于，步驟(4)溫度為18-20度。
全文摘要
一種春尺蠖核型多角體病毒殺蟲劑工廠化生產(chǎn)工藝屬于林木害蟲——春尺蠖生物防治領(lǐng)域。本發(fā)明提供的工藝，包括以下步驟將春尺蠖蛹裝入沙土中，在冰箱冷藏至滯育解除，羽化成蟲；羽化后的成蟲搭配成對，放入容器中進行交配產(chǎn)卵；產(chǎn)出的卵經(jīng)消毒后孵出幼蟲，接入裝有春尺蠖幼蟲人工飼料的春尺蠖幼蟲飼養(yǎng)容器內(nèi)，放入健康養(yǎng)蟲間內(nèi)飼養(yǎng)到3－4齡；春尺蠖幼蟲人工飼料裝入春尺蠖幼蟲飼養(yǎng)容器中，飼料表面接上春尺蠖核型多角體病毒，每容器中接入健康養(yǎng)蟲間飼養(yǎng)的幼蟲，放入復(fù)制養(yǎng)蟲間飼養(yǎng)感染病毒后幼蟲，粉碎、過濾，將濾液離心后收集沉淀，在沉淀中加入甘油，攪拌得最后產(chǎn)品。該生產(chǎn)工藝不受外界環(huán)境制約，可大規(guī)模生產(chǎn)，制備出的殺蟲劑安全高效。
文檔編號A01N63/00GK1471826SQ0314657
公開日2004年2月4日 申請日期2003年7月8日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月8日
發(fā)明者王貴成, 張永安, 王玉珠, 吳燕, 王志賢 申請人:中國林業(yè)科學(xué)研究院森林保護研究所