專利名稱：日本落葉松微體繁殖的根誘導(dǎo)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及林業(yè)科學(xué)中林木繁殖及植株再生技術(shù)，具體地說是一種日本落葉松微體繁殖的根誘導(dǎo)方法。
背景技術(shù)：
落葉松屬松科(Pinaceae)中的落葉松亞科(Laricodeae)，本屬種質(zhì)資源豐富，據(jù)資料報(bào)道，全世界共有落葉松25個(gè)種及若干變種、雜種，其中17種分布在我國(文獻(xiàn)1王戰(zhàn)(主編)，張頌云(副主編)，1992，中國落葉松林，北京中國林業(yè)出版社，pp1-3)。它們分布廣，遍及北半球的亞熱帶山區(qū)、溫帶山區(qū)及寒溫帶平原地區(qū)。落葉松具有適應(yīng)性強(qiáng)、生長速度快、成林早、抗病蟲害以及木材強(qiáng)度高、耐腐性強(qiáng)等優(yōu)良品質(zhì)，在工業(yè)上有廣泛的用途并能作為重要的造紙?jiān)稀Ｓ捎诼淙~松的上述特性，可作為大面積造林樹種。
日本落葉松(Larix Kaempferi(Lamb)Carr.)原產(chǎn)于日本本州島中部，迄今已在世界許多國家有了引種栽培，我國最早引種日本落葉松是在1884年，少量種植于青島嶗山。歷經(jīng)百年，引種范圍已經(jīng)擴(kuò)大到北起黑龍江林口，南至湖南安化，東從青島嶗山，西至新疆哈密，但栽培區(qū)域主要集中在遼、吉、魯、鄂、川、陜、甘等省。70年代和80年代進(jìn)行的兩次落葉松種間對比和日本落葉松種源聯(lián)合實(shí)驗(yàn)表明，在我國降雨量500mm以上的溫帶山區(qū)和亞熱帶中高山區(qū)，日本落葉松同其他同屬種相比，如長白落葉松(L.olgensis Henry)、華北落葉松(L.principis-rupprechtii Mayr.)、興安落葉松(L.gmelini Rupr.)等，具有較大的生長優(yōu)勢(文獻(xiàn)2馬常耕，王建華，1992，我國發(fā)展日本落葉松問題的探討，落葉松種和種源的選擇，北京北京農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，pp22-29)。但是由于日本落葉松種子年稀少，結(jié)實(shí)量少，種子不宜采集和發(fā)芽率低等弱點(diǎn)，利用天然的種子遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足生產(chǎn)的需要，因此，人們對其進(jìn)行了一系列的改良工作。國內(nèi)日本落葉松的育種工作始于20世紀(jì)60年代，基本上經(jīng)歷了種和種源選擇試驗(yàn)階段、種子園階段和無性系階段，現(xiàn)已選育出一批具有優(yōu)良性狀的植株，但由于個(gè)體數(shù)量少，利用其它繁殖手段不能穩(wěn)定地提供大量的優(yōu)質(zhì)種苗，所以難于滿足商品林業(yè)的需要。
微體繁殖作為現(xiàn)代生物技術(shù)的一個(gè)重要組成部分，具有速度快、周期短、不受季節(jié)影響、后代穩(wěn)定性高的特點(diǎn)，現(xiàn)已取得了顯著成績，并在農(nóng)業(yè)、林業(yè)、醫(yī)藥、遺傳育種等方面得到廣泛應(yīng)用。落葉松微體繁殖主要集中于歐洲落葉松(L.decidua Mill.)和歐日雜種落葉松(L.×eurolepis)兩個(gè)樹種上，如Bonga(文獻(xiàn)3J.M.Bonga，1982，Shoot formation in callusfrom the stalks of young female strobili of Larix deciduas，Can.J.Bot.，60(8)1357-1359)從歐洲落葉松雌球果部分經(jīng)愈傷組織形成枝，從幼嫩組織中形成不定芽；最重大的突破是Nagimani(文獻(xiàn)4R.Nagmani；J.M.Bonga，1985，Embryo in subcultured callus of Larix deciduas.Can.J.For.Res.，15(6)1088-1091)利用雌配子體誘導(dǎo)形成的歐洲落葉松再生植株，Laliberte和Lalonde(文獻(xiàn)5A.Laliberte；M.Lalonde，1988，Sustained caulogenesis incallus cultures of Larix ×eurolepis initiated from short shoot buds of a12-year-old tree，Am.J.Bot.，75(6)767-777)培養(yǎng)的雜種落葉松再生植株，以及Klimaszewska(文獻(xiàn)6K.Klimaszewska，1989，Recovery of somaticembryos and plantlets from protoplast cultures of Larix ×eurolepis，Plant CellReports，8(8)440-444)得到的落葉松屬中第一個(gè)體胚再生植株--雜種落葉松未成熟合子胚的再生植株。上世紀(jì)90年代，Ewald(文獻(xiàn)7D.Ewald，1998，Advances in tissue culture of adult larch，Vitro Cellular andDevelopmental Biology Plant，34(4)325-330)等在成樹的微體繁殖如誘導(dǎo)生根等問題上取得了突破性進(jìn)展，發(fā)現(xiàn)材料在無激素的培養(yǎng)基上連續(xù)繼代，或微嫁接，可使成年材料恢復(fù)幼年性狀。迄今，雖然已經(jīng)在歐洲落葉松的幼樹微體繁殖中建立了持續(xù)微體繁殖體系，但它們或者繁殖率低，如Itahana利用了日本落葉松的頂芽(文獻(xiàn)8N.Itahana，1995，Manual for budculture of Japanese larch，Bulletin of the National Forest Tree Breeding Center，13145-149)，而每個(gè)枝條僅有1個(gè)頂芽；或者僅注重科學(xué)問題，如Klimaszewska利用雜種落葉松進(jìn)行的原生質(zhì)體途徑再生植株的試驗(yàn)(見文獻(xiàn)6)，因此距離生產(chǎn)應(yīng)用尚有相當(dāng)距離。目前在我國，對日本落葉松的微體繁殖還沒有相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于通過腋芽增殖和不經(jīng)過愈傷組織的器官發(fā)生途徑，提供一種日本落葉松微體繁殖的根誘導(dǎo)方法，本發(fā)明的方法能夠加快優(yōu)良種植材料的繁殖速度，滿足商品林業(yè)生產(chǎn)對優(yōu)良苗木的數(shù)量需求。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為選擇日本落葉松無性系的1年生材料，經(jīng)莖誘導(dǎo)完成后，采用生根培養(yǎng)基，以變溫培養(yǎng)和繼代繁殖相結(jié)合的方法，實(shí)現(xiàn)根器官的再生，具體可按如下步驟操作1)材料的采集及預(yù)處理選取日本落葉松無性系的1年生枝條，采集時(shí)間為冬末至初春間芽苞萌動(dòng)時(shí)、萌動(dòng)前或萌動(dòng)后，水培兩周，水溫為常溫；2)微體繁殖培養(yǎng)基的制備(1)用常規(guī)方法制備改良MS培養(yǎng)基；(2)分裝、高壓蒸汽滅菌，冷卻后備用；3)接種腋芽將水培后芽苞發(fā)亮的枝條流水洗滌，剪下腋芽，在無菌條件下滅菌接種于莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，完成不定莖的伸長生長階段；4)誘導(dǎo)生根制備生根培養(yǎng)基，在所述改良MS培養(yǎng)基中加入植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和/或促進(jìn)物，加入濃度分別為植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)0～1.5mg/l，促進(jìn)物1.0～10.0g/l，再將步驟3)所述不定莖轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基中，進(jìn)入根生長階段；5)變溫處理及繼代培養(yǎng)將步驟4)所述不定莖置于恒溫暗光下培養(yǎng)3～5天，然后以光強(qiáng)2000～3000Lux，變溫培養(yǎng)5～20周；變溫培養(yǎng)的同時(shí)對誘導(dǎo)伸長的莖進(jìn)行繼代培養(yǎng)，每次轉(zhuǎn)代時(shí)切去底部褐化部分，完成根器官的再生；其中所述步驟3)中剪下的腋芽尺寸為0.5～1cm；所述冬末至初春間芽苞萌動(dòng)時(shí)、萌動(dòng)前或萌動(dòng)后枝條為芽苞苞鱗由無光澤的暗棕或暗褐色轉(zhuǎn)變?yōu)橛泄鉂傻牡鼗虻稚闹l；所述植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)為玉米素(Zea)0.01～0.1mg/l、萘乙酸(NAA)0～0.6mg/l和/或吲哚丁酸(IBA)0～0.8mg/l；所述促進(jìn)物為AC；所述變溫培養(yǎng)是指晝間培養(yǎng)溫度在22～28℃，夜間培養(yǎng)溫度在15～18℃范圍內(nèi)，所述變溫培養(yǎng)過程中的光暗周期為14～20/4～10小時(shí)；所述繼代繁殖次數(shù)可為1～10次，每次繼代時(shí)間可為7～40天；所述繼代操作重復(fù)步驟4)、5)；所述恒溫培養(yǎng)溫度為25～28℃。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)1.微體繁殖速度快。由生物學(xué)特性所決定，落葉松苗木經(jīng)過13～15年的營養(yǎng)生長期才能進(jìn)入開花結(jié)實(shí)的生殖生長階段，其后代的優(yōu)良性狀還需不少于1/3生命史(30～40年)的時(shí)間方可表現(xiàn)出來，并作出選擇(約需8～12年)，但此時(shí)植株的無性繁殖能力已顯著下降，常規(guī)的扦插繁殖技術(shù)尚未有效解決恢復(fù)生根能力的問題。本發(fā)明通過繼代培養(yǎng)的方法促進(jìn)了成齡材料恢復(fù)幼年生長特性，是提高組織生根率的一條十分有效的途徑，其與自然狀態(tài)下采取種子繁殖或扦插繁殖的常規(guī)方法相比，利用本發(fā)明的方法，可使優(yōu)良苗木種群的實(shí)現(xiàn)周期可縮短一半以上。
2.微體繁殖繁殖效率高。與現(xiàn)有技術(shù)僅利用頂芽進(jìn)行繁殖相比，本發(fā)明利用了母樹1年生枝條上的大量腋芽，可繁育出大量子代幼苗，在技術(shù)成熟條件下，以80m2的小型實(shí)驗(yàn)室配合必要育苗設(shè)施為例，可年產(chǎn)20萬株以上，并且繁殖過程可不受自然季節(jié)影響(需人工設(shè)施條件保障)。
3.完善了日本落葉松遺傳改良的技術(shù)路線。經(jīng)過多年實(shí)踐，日本落葉松已確立了“有性創(chuàng)造、無性利用”的遺傳改良路線，但選擇育種、雜交育種僅能獲得的少量優(yōu)良種苗，采用本發(fā)明能夠充分利用少量的優(yōu)良種苗，通過快速增殖培養(yǎng)過程，形成大批量的無性繁殖材料，從而完善了日本落葉松良種化進(jìn)程中的一個(gè)主要技術(shù)環(huán)節(jié)，滿足了商品林業(yè)生產(chǎn)上對優(yōu)良苗木的數(shù)量需要。


圖1A為本發(fā)明不定莖生成過程中的一個(gè)實(shí)施例。
圖1B為本發(fā)明接種在生根培養(yǎng)基上的一個(gè)實(shí)施例。
圖2A、2B為本發(fā)明根誘導(dǎo)成功的一個(gè)實(shí)施例。
圖2C、2D為本發(fā)明根誘導(dǎo)成功的另一個(gè)實(shí)施例。
圖3A、3B、3C、3D為重復(fù)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中的生根苗實(shí)施例。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例詳述本發(fā)明。
實(shí)施例1選取日本落葉松的無性系植株，以初春芽苞萌動(dòng)前的1年生枝條為材料，經(jīng)莖誘導(dǎo)完成后，選用經(jīng)過改進(jìn)的改良MS培養(yǎng)基，以變溫培養(yǎng)和繼代繁殖相結(jié)合的方法，實(shí)現(xiàn)日本落葉松微體繁殖的根誘導(dǎo)；具體操作如下1.材料的采集及預(yù)處理選取遼寧省撫順縣五龍林場種子園的日本落葉松38號無性系，樹齡10年，采集1年生樹冠上部枝條，采集時(shí)間為初春芽苞萌動(dòng)前，此時(shí)芽苞苞鱗由無光澤的暗棕色或暗褐色轉(zhuǎn)變?yōu)橛泄鉂傻牡厣虻稚?℃下保存，取出后常溫水培約兩周，至芽苞發(fā)亮?xí)r止。
2.培養(yǎng)基制備1)制備常規(guī)的改良MS培養(yǎng)基，其組成成分的濃度為KNO3950mg/l、NH4NO3825mg/l、KH2PO4170mg/l、CaCl2·2H2O 220mg/l、MgSO4·7H2O370mg/l、FeSO4·7H2O 27.8mg/l、Na2EDTA·2H2O 37.3mg/l、H3BO36.2mg/l、ZnSO4·7H2O 8.6mg/l、MnSO4·4H2O 22.3mg/l、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/l、KI0.83mg/l、CuSO4·5H2O 0.025mg/l、CoCl2·6H2O 0.025mg/l、肌醇100mg/l、甘氨酸2.0mg/l、鹽酸硫胺素0.1mg/l、煙酸0.5mg/l、鹽酸吡哆醇0.5mg/l、瓊脂6000mg/l。
2)分裝、高壓蒸汽滅菌，冷卻后備用。
3.接種腋芽將水培后長出腋芽的枝條分割成1～2cm的小段，無菌水洗滌后，浸入75％乙醇溶液中消毒1分鐘，取出枝條小段上尺寸為0.5～1cm的腋芽，剝離包被在腋芽上的鱗片，腋芽投入0.1％升汞或3％過氧化氫溶液消毒10～30分鐘，然后無菌水沖洗數(shù)次；將滅好菌的腋芽轉(zhuǎn)接于事先制備好的裝有莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的三角瓶內(nèi)，每瓶內(nèi)接1～3個(gè)腋芽，誘導(dǎo)不定莖的生成。圖1A為莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基，表示已完成莖誘導(dǎo)過程的不定莖。莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為在改良MS培養(yǎng)基中添加玉米素(Zea)0.01～0.1mg/l、NAA 0.01～0.1mg/l、IBA 0.1～0.5mg/l。
4.誘導(dǎo)生根制備生根培養(yǎng)基，在上述改良MS培養(yǎng)基中加入適量的NAA、IBA和AC，加入的濃度為NAA 0.1mg/l、IBA 0.3mg/l、AC 1.5g/l，再將步驟3中生成的不定莖轉(zhuǎn)接于盛裝有生根培養(yǎng)基的三角瓶中，每瓶接1～3個(gè)不定莖，進(jìn)入根生長階段。圖1B示轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上的不定莖，培養(yǎng)基呈黑色表示其中加入了活性炭(AC)。
5.變溫處理及繼代培養(yǎng)將步驟4中接種了不定莖的三角瓶移至25℃下恒溫暗光培養(yǎng)3天，然后在光強(qiáng)2500Lux條件下，繼代培養(yǎng)共130天，光暗周期為16/8小時(shí)，培養(yǎng)溫度晝間25～28℃，夜間18～20℃；每次繼代時(shí)將底部褐化部分切去，20～25天繼代1次，繼代時(shí)更換生根培養(yǎng)基(生根培養(yǎng)基同步驟4)，共繼代8次，完成植株再生。圖2A、2B示本實(shí)施例中的再生植株，表明NAA與IBA協(xié)同處理，生根數(shù)量較多，根系比較粗壯。
本發(fā)明的原理是植物的細(xì)胞具有全能性，即在適當(dāng)?shù)纳項(xiàng)l件和環(huán)境條件下，離體材料能夠重建缺失的器官，形成再生植株。日本落葉松根誘導(dǎo)的關(guān)鍵是生長調(diào)節(jié)物質(zhì)種類和濃度、基本培養(yǎng)基和附加促進(jìn)物的選擇以及環(huán)境條件的合理控制。不同植物根的誘導(dǎo)對各種生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的要求不同，它主要是植物本身內(nèi)源激素的合成能力不盡相同所造成的。在各種生長調(diào)節(jié)物質(zhì)中，生長素的生理作用主要是促進(jìn)細(xì)胞伸長生長和細(xì)胞分裂，促進(jìn)生根。培養(yǎng)基為植物發(fā)育分化提供了必需的養(yǎng)分元素，其生理作用一是組成各種化合物，參與機(jī)體的建造，成為結(jié)構(gòu)物質(zhì)；二是構(gòu)成一些特殊的生理活性物質(zhì)，參與新陳代謝，如構(gòu)成植物激素、酶、輔酶以及作為酶的活化劑等；三是這些元素之間相互協(xié)調(diào)，維持離子濃度的平衡、膠體穩(wěn)定、電荷平衡等電化學(xué)方面的作用；四是在發(fā)育方面，一定的元素影響到形態(tài)發(fā)生、組織和器官的建成。
依據(jù)其生理作用，本發(fā)明針對前人進(jìn)行日本落葉松微體繁殖使用MS培養(yǎng)基造成離子濃度過高的缺陷，通過實(shí)驗(yàn)，在供選的幾種培養(yǎng)基配方中選擇了改良MS培養(yǎng)基。改良MS培養(yǎng)基中加入適量活性炭，一方面是因?yàn)榛钚蕴烤哂袕?qiáng)大的吸附能力(它主要吸附非極性物質(zhì))；另一方面，使培養(yǎng)基變黑可減少強(qiáng)光對根的抑制作用，特別是抑制內(nèi)源激素吲哚乙酸(IAA)的光氧化過程，從而有利于日本落葉松不定莖的生根。同時(shí)，處在自然環(huán)境中的植株根系一般要求相對較低的溫度才能良好發(fā)育，為此，本發(fā)明在根誘導(dǎo)階段進(jìn)行了晝夜變溫處理，重復(fù)試驗(yàn)證明促進(jìn)了根的形成。
其結(jié)果與自然狀態(tài)下采取種子繁殖或扦插繁殖的常規(guī)方法相比，利用本發(fā)明的方法，可使優(yōu)良苗木種群的實(shí)現(xiàn)周期縮短一半以上；以80m2的小型實(shí)驗(yàn)室配合必要育苗設(shè)施，可年產(chǎn)經(jīng)過遺傳改良的優(yōu)良苗木20萬株以上，并且繁殖過程不受自然季節(jié)影響。
實(shí)施例2與實(shí)施例1不同之處在于選取28年生日本落葉松無性系朝6號植株，3月采集冬芽飽滿的1年生枝條，以誘導(dǎo)伸長大于2cm的不定莖為材料；制備生根培養(yǎng)基，在所述改良MS培養(yǎng)基中加入適量的NAA和AC，加入的濃度分別為NAA 0.3mg/l、AC 1.0g/l；將步驟4中接種了不定莖的三角瓶移至28℃下恒溫暗光培養(yǎng)5天，然后在光強(qiáng)3,000Lux條件下，繼代培養(yǎng)共70天，光暗周期為14/10小時(shí)，繼代3次，結(jié)果在25個(gè)外植體中有5個(gè)生根，完成植株再生。圖2C、2D示本實(shí)施例中的再生植株，表明單獨(dú)使用本發(fā)明中適宜濃度的NAA也能夠完成誘導(dǎo)生根過程。
實(shí)施例3重復(fù)進(jìn)行實(shí)施例1和實(shí)施例2的試驗(yàn)，條件分別同上述。圖3A、3B、3C、3D示上述兩個(gè)實(shí)施例重復(fù)試驗(yàn)的結(jié)果，其中圖3A為本實(shí)施例1的生根培養(yǎng)基，圖3B和3C為實(shí)施例1的驗(yàn)證結(jié)果，圖3D為本實(shí)施例2的驗(yàn)證結(jié)果。
權(quán)利要求
1.一種日本落葉松微體繁殖的根誘導(dǎo)方法，其特征在于選擇日本落葉松無性系的1年生材料，經(jīng)莖誘導(dǎo)完成后，采用生根培養(yǎng)基，以變溫培養(yǎng)和繼代繁殖相結(jié)合的方法，實(shí)現(xiàn)根器官的再生；具體可按如下步驟操作1)材料的采集及預(yù)處理選取日本落葉松無性系的1年生枝條，采集時(shí)間為冬末至初春間芽苞萌動(dòng)時(shí)、萌動(dòng)前或萌動(dòng)后，水培兩周，水溫為常溫；2)微體繁殖培養(yǎng)基的制備(1)用常規(guī)方法制備改良MS培養(yǎng)基；(2)分裝培養(yǎng)基并進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，冷卻后備用；3)接種腋芽將水培后芽苞發(fā)亮的枝條流水洗滌，剪下腋芽，在無菌條件下滅菌后通過無菌操作接種于莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，完成不定莖的伸長生長階段；4)誘導(dǎo)生根制備生根培養(yǎng)基，在所述改良MS培養(yǎng)基中加入植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和/或促進(jìn)物，加入濃度分別為植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)0～1.5毫克/升，促進(jìn)物1～10克/升，再將步驟3所述不定莖轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基中，進(jìn)入根生長階段；5)變溫處理及繼代培養(yǎng)將步驟4)所述不定莖置于恒溫暗光下培養(yǎng)3～5天，然后以光強(qiáng)2000～3000Lux，變溫培養(yǎng)5～20周；變溫培養(yǎng)的同時(shí)對誘導(dǎo)伸長的莖進(jìn)行繼代培養(yǎng)，每次轉(zhuǎn)代時(shí)切去底部褐化部分，完成根器官的再生。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述日本落葉松微體繁植的根誘導(dǎo)方法，其特征在于所述步驟3)中剪下的腋芽尺寸為0.5～1cm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述日本落葉松微體繁植的根誘導(dǎo)方法，其特征在于所述冬末至初春間芽苞萌動(dòng)時(shí)、萌動(dòng)前或萌動(dòng)后枝條為芽苞苞鱗由無光澤的暗棕或暗褐色轉(zhuǎn)變?yōu)橛泄鉂傻牡鼗虻稚闹l。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述日本落葉松微體繁植的根誘導(dǎo)方法，其特征在于所述植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)為Zea 0.01～0.1mg/l、NAA0～0.6mg/l和/或IBA0～0.8mg/l；所述促進(jìn)物為AC。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述日本落葉松微體繁植的根誘導(dǎo)方法，其特征在于所述變溫培養(yǎng)是指晝間培養(yǎng)溫度在22～28℃、夜間培養(yǎng)溫度在15～18℃范圍內(nèi)，所述變溫培養(yǎng)過程中的光暗周期為14～20/4～10小時(shí)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述日本落葉松微體繁植的根誘導(dǎo)方法，其特征在于所述繼代繁殖可為1～10次繼代繁殖次數(shù)，每次繼代時(shí)間可為7～40天。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述日本落葉松微體繁植的根誘導(dǎo)方法，其特征在于所述繼代操作重復(fù)步驟4)、5)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述日本落葉松微體繁植的根誘導(dǎo)方法，其特征在于所述恒溫培養(yǎng)溫度為25～28℃。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種日本落葉松微體繁殖根誘導(dǎo)方法。即選擇日本落葉松無性系的1年生材料，經(jīng)莖誘導(dǎo)完成后，采用生根培養(yǎng)基，以變溫培養(yǎng)和繼代繁殖相結(jié)合的方法，實(shí)現(xiàn)根器官的再生，步驟1)材料的采集及預(yù)處理水培兩周，水溫為常溫；2)制備改良MS培養(yǎng)基；3)接種腋芽將水培后芽苞發(fā)亮的枝條流水洗滌，剪下腋芽，消毒后通過無菌操作接種于莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，完成不定莖的伸長生長階段；4)誘導(dǎo)生根制備生根培養(yǎng)基，再將所述不定莖轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基中，進(jìn)入根生長階段；5)變溫處理及繼代培養(yǎng)將步驟4)所述不定莖置于變溫條件下，進(jìn)行繼代培養(yǎng)，完成根器官的再生。本發(fā)明能夠加快日本落葉松優(yōu)良種質(zhì)材料的繁殖速度和種群數(shù)量擴(kuò)增。
文檔編號A01H4/00GK1491535SQ0213327
公開日2004年4月28日 申請日期2002年10月25日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月25日
發(fā)明者王力華, 賀鳳美, 許思明 申請人:中國科學(xué)院沈陽應(yīng)用生態(tài)研究所