專利名稱：體細胞無性系變異草坪草育種方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明屬于育種技術(shù)，特別涉及草坪草的育種。
草坪草育種多采用傳統(tǒng)的父母本雜交法，篩選具有優(yōu)良性狀的雜交后代培育成新品種。該方法需多世代篩選，時間長，消耗人力物力多，育種周期長。采用植物組織和細胞培養(yǎng)技術(shù)，通過體細胞胚發(fā)生途經(jīng)可形成再生植物。在這個過程中部分細胞會出現(xiàn)變異，稱為體細胞無性系變異，目前，已利用體細胞無性系變異法，培育農(nóng)作物新品種，但尚未在草坪草育種中應用。
本發(fā)明的目的就是根據(jù)體細胞無性系變異的原理，將體細胞無性系變異育種法應用于草坪草育種，培育草坪草新品種，為草坪草的育種提供了一條新的育種途徑。
本發(fā)明所提供的草坪草體細胞無性系變異育種法，是用草坪草的節(jié)或萌發(fā)種子的胚作為外植體，外植體經(jīng)消毒處理后，接種于固體培養(yǎng)基上，誘導愈傷組織，再用相同成分的液體培養(yǎng)基進行懸浮培養(yǎng)或繼續(xù)以固體培養(yǎng)基培養(yǎng)，在培養(yǎng)期間給予40-50℃高溫或0.2-1.0mol/LNaCl高鹽物理脅迫處理，誘導細胞發(fā)生變異；或者反復繼代培養(yǎng)，使細胞自然變異，分化出再生植株，從再生植株中獲得變異體，選擇具有優(yōu)良性狀的品系，即為新種。固體培養(yǎng)基成分為N6培養(yǎng)基的大量元素、B5培養(yǎng)基的微量元素、蔗糖20-30g/L，谷氨酰胺和脯氨酸各0.1-2.0g/L，MS培養(yǎng)基的維生素，麥草畏(Dicamba)或2，4-D 0-10mg/L和6-BA 0-5mg/L。
本發(fā)明的主要特點就是利用植物體細胞在離體培養(yǎng)中會產(chǎn)生變異的性質(zhì)，選擇有用的突變體，培育成品種。與傳統(tǒng)育種方法相比，具有下列優(yōu)點1、很容易誘導體細胞發(fā)生變異，增加了突變率；2、細胞生長條件易控制，易重復選擇；3、育種篩選所需空間小，節(jié)省人力和物力；4、獲得突變體所需時間短，大大縮短了育種周期。
實施例一選用狗牙根營養(yǎng)體的節(jié)作外植體，以0.1％HgCl2消毒10-15分鐘后，用無菌水洗凈，接種于固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基含N6培養(yǎng)基的大量元素、B5培養(yǎng)基的微量元素、蔗糖20-30g/L，谷氨酰胺和脯氨酸各0.1-2.0g/L，MS培養(yǎng)基的維生素，麥草畏(Dicamba)或2，4-D 0-10.0mg/L和6-BA 0-5mg/L，誘導愈傷組織，再用相同的培養(yǎng)基作進一步懸浮培養(yǎng)，在40-50℃高溫培養(yǎng)5-30分鐘后，自然冷卻至25-30℃，繼續(xù)懸浮培養(yǎng)，剔除高溫下死去的細胞，選擇存活的細胞，再生出植物。從中篩選出來的品系提高了抗冷性或抗熱性，即為新品種。
實施例二以草地早熟禾作外植體，以0.1％HgCl2消毒10-15分鐘后，用無菌水洗凈，接種于固體培養(yǎng)基上。培養(yǎng)基含N6培養(yǎng)基的大量元素、B5培養(yǎng)基的微量元素、蔗糖20-30g/L，谷氨酰胺和脯氨酸各0.1-2.0g/L，MS培養(yǎng)基的維生素，麥草畏(Dicamba)或2，4-D 0-10.0mg/L和6-BA 0-5mg/L，種子萌發(fā)后取膨大的胚，誘導愈傷組織。將愈傷組織移至含0.2-1.0 M NaCl的培養(yǎng)基培養(yǎng)5-10天后，繼續(xù)用不含NaCl的培養(yǎng)基培養(yǎng)，剔除高鹽下死去的細胞，選擇存活的細胞，再生出植物。從中篩選出來的品系提高了抗鹽性，即為新品種。
實例三選用狗牙根營養(yǎng)體的節(jié)作外植體，以0.1％HgCl2消毒10-15分鐘后，用無菌水洗凈，接種于固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基含N6培養(yǎng)基的大量元素、B5培養(yǎng)基的微量元素、蔗糖20-30g/L，谷氨酰胺和脯氨酸各0.1-2.0g/L，MS培養(yǎng)基的維生素，麥草畏(Dicamba)或2，4-D 0-10.0mg/L和6-BA 0-5mg/L，誘導愈傷組織，再用相同的培養(yǎng)基作進一步作懸浮培養(yǎng)，此后，反復繼代培養(yǎng)10-20代，使細胞在繼代培養(yǎng)中發(fā)生變異。從再生植物中篩選出一個新品系，匍匐莖節(jié)間長度減短了1/3，緊貼地面生長，表現(xiàn)為植株更矮，根系更發(fā)達。延長了冬季綠期。
權(quán)利要求
1.體細胞無性系變異草坪草育種方法，其特征在于用草坪草的節(jié)或萌發(fā)種子的胚作為外植體，外植體經(jīng)消毒處理后，接種于固體培養(yǎng)基上，誘導愈傷組織，再用相同成分的液體培養(yǎng)基進行懸浮培養(yǎng)或繼續(xù)以固體培養(yǎng)基培養(yǎng)，在培養(yǎng)期間給予40-50℃高溫或0.2-1.0mol/LNaCl高鹽物理脅迫處理，誘導細胞發(fā)生變異，或者反復繼代培養(yǎng)，使細胞自然變異，分化出再生植株，從再生植株中獲得變異體，選擇具有優(yōu)良性狀的品系，即為新種。固體培養(yǎng)基成分為N6培養(yǎng)基的大量元素、B5培養(yǎng)基的微量元素、蔗糖20-30g/L，谷氨酰胺和脯氨酸各0.1-2.0g/L，MS培養(yǎng)基的維生素，麥草畏(Dicamba)或2，4-D 0-10mg/L和6-BA 0-5mg/L。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所說的體細胞無性系變異草坪草育種方法，其特征在于選用狗牙根營養(yǎng)體的節(jié)作外植體，以0.1％HgCl2消毒10-15分鐘后，用無菌水洗凈，接種于固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基含N6培養(yǎng)基的大量元素、B5培養(yǎng)基的微量元素、蔗糖20-30g/L，谷氨酰胺和脯氨酸各0.1-2.0g/L，MS培養(yǎng)基的維生素，麥草畏(Dicamba)或2，4-D 0-10.0mg/L和6-BA 0-5mg/L，誘導愈傷組織，再用相同的培養(yǎng)基作進一步懸浮培養(yǎng)，在40-50℃高溫培養(yǎng)5-30分鐘后，自然冷卻至25-30℃，繼續(xù)懸浮培養(yǎng)，剔除高溫下死去的細胞，選擇存活的細胞，再生出植物。從中篩選出來的品系提高了抗冷性或抗熱性，即為新品種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所說的體細胞無性系變異草坪草育種法，其特征在于以草地早熟禾作外植體，以0.1％HgCl2消毒10-15分鐘后，用無菌水洗凈，接種于固體培養(yǎng)基上。培養(yǎng)基含N6培養(yǎng)基的大量元素、B5培養(yǎng)基的微量元素、蔗糖20-30g/L，谷氨酰胺和脯氨酸各0.1-2.0g/L，MS培養(yǎng)基的維生素，麥草畏(Dicamba)或2，4-D 0-10.0mg/L和6-BA 0-5mg/L，取種子萌發(fā)后膨大的胚，誘導愈傷組織。將愈傷組織移至含0.2-1.0 M NaCl的培養(yǎng)基培養(yǎng)5-10天后，繼續(xù)用不含NaCl的培養(yǎng)基培養(yǎng)，剔除高鹽下死去的細胞，選擇存活的細胞，再生出植物。從中篩選出來的品系提高了抗鹽性，即為新品種。
全文摘要
本發(fā)明屬于草坪草育種領域,通過誘導草坪草外植體產(chǎn)生愈傷組織,誘導細胞產(chǎn)生變異,從再生植物中篩選具有優(yōu)良性狀的變異體,進一步培育成新品種。該育種方法所需周期短,需要的空間小,節(jié)省人力和物力,突變率高。
文檔編號A01H4/00GK1369196SQ0211497
公開日2002年9月18日 申請日期2002年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2002年3月18日
發(fā)明者郭振飛, 盧少云 申請人:華南農(nóng)業(yè)大學