一種提取辛弗林的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術領域，尤其涉及一種從橘皮中提取辛弗林的方法。
【背景技術】
[0002] 柑橘屬在植物分類學上為蕓香科（Rutaceue)柑橘屬（Citrus)植物。我國柑橘種 質資源豐富，是世界許多柑橘種類的原產(chǎn)地，目前，中國柑橘品種仍然以寬皮柑橘為主，約 占總種植面積的55 %，甜橙占30 %，柚子占10 %，其它柑橘類占5 %。
[0003] 目前，對柑橘加工廢棄物的研究越來越受到人們的重視，對柑橘皮渣利用的主要 途徑之一就是圍繞其所含成分的提取而展開的，如從中提取香精油、色素、果膠、類黃酮、膳 食纖維等。柑橘果渣的另一個主要利用途徑就是利用微生物發(fā)酵，如生產(chǎn)果醋、乳酸飲料、 高蛋白飼料和栽培食用菌。
[0004] 辛弗林（syn印hrine)分子式為C9H13N02,分子量為167. 20,結構如下式所示，辛 弗林屬于生物堿中的麻黃堿類，分子結構中同時含有酚羥基和氨基，因此辛弗林具有兩性 性質，與酸堿均能結合成鹽。游離的辛弗林易溶于有機溶劑，難溶于水；其酸式鹽和堿式鹽 則易溶于水，難溶于有機溶劑。
[0005]
[0006] 辛弗林已收載于北歐三國藥典和德國藥典。目前認為，其為腎上腺素 a-受體興 奮劑。辛弗林有收縮血管、產(chǎn)生升高血壓的作用。辛弗林有較強的擴張氣管和支氣管的作 用。麻醉貓靜脈注射可完全對抗組織胺所引起的支氣管收縮，對豚鼠離體氣管亦有同樣作 用。辛弗林臨床用于治療支氣管哮喘及手術和麻醉時低血壓、虛脫及休克、體位性低血壓 等。辛弗林是21世紀天然興奮劑，無任何副作用和陽性反應，廣泛用于醫(yī)藥、食品、飲料等 保健行業(yè)，隨著化學合成藥物的禁用，辛弗林的需求量和價值將會倍增。
[0007] 因此，本領域的技術人員致力于開發(fā)一種低成本、高效率的辛弗林制備工藝。

【發(fā)明內容】

[0008] 有鑒于現(xiàn)有技術的上述缺陷，本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種從柑橘皮中 提取辛弗林的方法。
[0009] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種從柑橘皮中提取辛弗林的方法，該方法包括 步驟：
[0010] ⑴制備辛弗林粗提物
[0011] 取柑橘皮渣，用乙醇水溶液提取得到辛弗林粗提物；
[0012] ⑵初步純化
[0013] 將辛弗林粗提物用乙酸乙酯萃取后，使用HP20樹脂進行柱層析；
[0014] ⑶精制
[0015] 將步驟（2)得到的初步純化的辛弗林用XAD18樹脂進行柱層析，并通過HPLC檢 測，將辛弗林純度大于95%的洗脫液混合，冷凍干燥得白色粉末狀物質即為辛弗林。
[0016] 優(yōu)選地，步驟（2)中使用HP20樹脂進行柱層析過程中，上柱液pH為2.5-4.5。
[0017] 優(yōu)選地，步驟（3)中使用XAD18樹脂進行柱層析過程中，上柱液pH為6.0-8.0。
[0018] 優(yōu)選地，步驟（2)中調節(jié)辛弗林粗提物ρΗ2· 5-4. 5后再用乙酸乙酯萃取。
[0019] 優(yōu)選地，所述步驟（1)中，取柑橘皮渣，用60-95 % (v/v)的乙醇水溶液在 50°C -70°C下浸泡提取l_2h后，過濾取上清液，真空旋蒸去除乙醇，得到辛弗林粗提物。
[0020] 優(yōu)選地，所述步驟（2)中，調節(jié)辛弗林粗提物的pH至2. 5-4. 5,乙酸乙酯萃取后蒸 干除去乙酸乙酯，再用含10%的乙醇水溶液溶解，并用鹽酸將其pH調整到2. 5-4. 5,上大孔 吸附樹脂HP20層析柱，上柱后先用10% -20%的乙醇水溶液洗脫除雜，再用50-70%的乙醇 水溶液將辛弗林集中洗下。
[0021] 優(yōu)選地，所述步驟（3)中，將步驟（2)所得辛弗林洗脫液旋蒸去除乙醇，用鹽酸調 節(jié)pH至2. 5-4. 5,乙酸乙酯萃取后旋蒸除去乙酸乙酯；用pH6-8的水溶解，并用氫氧化鈉調 節(jié)pH至6-8后上XAD18層析柱，上柱后先用水洗脫除雜，再用5-20%的乙醇水溶液將辛弗 林洗脫下來，分步收集洗脫液，并通過HPLC檢測，將辛弗林純度大于95%的洗脫液混合，冷 凍干燥得白色粉末狀物質即為辛弗林。
[0022] 技術效果
[0023] 本發(fā)明的從柑橘皮中提取辛弗林的方法，合理充分地利用了柑橘加工產(chǎn)業(yè)的廢棄 物，并且能夠獲得HPLC純度大于95%的辛弗林，并且制備過程中辛弗林回收率在65 %以 上。
【具體實施方式】
[0024] 實施例1
[0025] 取1kg柑橘皮渣，水洗后濾干，用3L 80% (v/v)乙醇在60°C下浸泡提取lh后，過 濾取上清液，重復提取一次，合并兩次上清液，在30-35°C下真空旋蒸至無醇味兒，得到粗提 物濃縮液。
[0026] 用鹽酸調節(jié)上述濃縮液的pH至3,過濾后用粗提物濃縮液的1/2體積的乙酸乙酯 萃取兩次，萃取后向乙酸乙酯相中加入pH為3的蒸餾水，振蕩混合后取酯相在30°C下旋蒸 除去乙酸乙酯得辛弗林粗品；再用含10%的乙醇水溶液溶解辛弗林粗品，并用鹽酸將其pH 調整到3。
[0027] 將辛弗林粗品的溶液上大孔吸附樹脂ΗΡ20(Φ80Χ350πιπι)層析柱，上柱后先用 3BV含20%的乙醇水溶液洗脫除雜，再用3BV 60%的乙醇水溶液將辛弗林集中洗下，分步 收集洗脫液，并通過HPLC檢測，將辛弗林純度大于70 %的洗脫液混合，ΗΡ20樹脂柱提取收 率為82. 6%。
[0028] 將上述辛弗林混合液在30_35°C下真空旋蒸至無醇味兒，用鹽酸調節(jié)上述混 合液的pH至3,過濾后用1/2體積的乙酸乙酯萃取兩次，取酯相在30°C下旋蒸除去乙 酸乙酯；用pH6. 5的水溶液溶解辛弗林粗品，并用氫氧化鈉將其pH調整到6. 5后上 XAD18(〇80X350mm)層析柱，上柱后先用4BV水洗脫除雜，再用10%的乙醇水溶液將辛弗 林洗脫下來，分步收集洗脫液，并通過HPLC檢測，將辛弗林純度大于95 %的洗脫液混合， XAD18樹脂柱提取收率為90. 6%，冷凍干燥得白色粉末狀物質即為辛弗林。
[0029] 實施例2
[0030] 取lkg柑橘皮漁，水洗后濾干，用2L 95% (v/v)乙醇在55°C下浸泡提取2h后，過 濾取上清液，重復提取一次，合并兩次上清液，在30_35°C下真空旋蒸至無醇味兒，得到粗提 物濃縮液。
[0031] 用鹽酸調節(jié)上述濃縮液的pH至4,過濾后用粗提物濃縮液的1/2體積的乙酸乙酯 萃取兩次，萃取后向乙酸乙酯相中加入pH為4的蒸餾水，振蕩混合后取酯相在30°C下旋蒸 除去乙酸乙酯得辛弗林粗品；再用含10%的乙醇水溶液溶解辛弗林粗品，并用鹽酸將其pH 調整到4。
[0032] 將辛弗林粗品的溶液上大孔吸附樹脂ΗΡ20(Φ80Χ350πιπι)層析柱，上柱后先用 3BV含15%的乙醇水溶液洗脫除雜，再用3BV 50%的乙醇水溶液將辛弗林集中洗下，分步 收集洗脫液，并通過HPLC檢測，將辛弗林純度大于70%的洗脫液混合，ΗΡ20樹脂柱提取收 率為80. 2%。
[0033] 將上述辛弗林