一種何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基及其配制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及何首烏組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基， 還涉及一種何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基配制方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 何首烏，是寥科何首烏屬多年生纏繞藤本植物，塊根肥厚，長(zhǎng)橢圓形，黑褐色，其塊 根入藥，可安神、養(yǎng)血、活絡(luò)、消癰，是常見(jiàn)的中藥材。
[0003] 目前何首烏人工繁殖主要采用扦插和組織培養(yǎng)，現(xiàn)有的何首烏組織培養(yǎng)技術(shù)多以 莖段和莖尖作為外植體，但是以莖尖和莖段作為外植體不僅僅對(duì)母體傷害大，而且取材不 容易。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 基于現(xiàn)有技術(shù)存在上述問(wèn)題，本發(fā)明提供一種何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基 以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加有TDZ(噻苯?。?-BA(6-芐氨基腺嘌呤）、IBA(吲哚丁 酸）、椰乳、瓊脂粉、蔗糖，以何首烏葉片作為外置體，不僅僅取材容易簡(jiǎn)單，還能降低取材對(duì) 母體的傷害，同時(shí)本培養(yǎng)基還具有誘導(dǎo)率高的優(yōu)點(diǎn)。
[0005] -種何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加有TDZ(噻苯 ?。?、6-BA(6-芐氨基腺嘌呤）、IBA(吲哚丁酸）、椰乳、瓊脂粉、蔗糖，椰乳為椰子的液態(tài)胚乳， 具有多種植物生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和調(diào)節(jié)物質(zhì)，能更好地促進(jìn)何首烏葉片脫分化，誘導(dǎo)出 愈傷組織。
[0006] 了02(噻苯?。┑臐舛葹?.001-0.0111^/1^，6-84(6-芐氨基腺嘌呤）的濃度為1-1 · 5mg/L，IBA(吲哚丁酸）的濃度為0 · 2-0.8 mg/L，椰乳的濃度為150-200 mg/L，瓊脂粉的濃 度為8~llg/L，鹿糖的濃度為25~35g/L。
[0007] TDZ(噻苯?。┑臐舛葹?·004-0·006mg/L，6-BA(6-芐氨基腺嘌呤）的濃度為1 ·2-1.411^/1，184(吲哚丁酸）的濃度為0.4-0.6 1^/1，椰乳的濃度為180-190 1^/1，瓊脂粉的濃 度為9~10g/L，蔗糖的濃度為28~32g/L。
[0008] 何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH值為5.8~6.5。
[0009] 何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH值為6.3,微酸性的組培環(huán)境有利于提高脫分化相關(guān) 酶類的活性，誘導(dǎo)何首烏葉片長(zhǎng)出愈傷組織。
[0010] 椰乳是從沒(méi)成熟的椰汁果實(shí)中采集，成熟的椰子果實(shí)已經(jīng)消耗了部分椰乳中的營(yíng) 養(yǎng)物質(zhì)，改變了椰乳的成分。
[0011] -種何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配制方法，其包括以下步驟： 步驟SlO溶解配制培養(yǎng)基：用蒸餾水溶解MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基各成分，并添加 TDZ(噻苯隆）、6_ BA( 6-芐氨基腺嘌呤）、IBA(吲哚丁酸）、椰乳、瓊脂粉、蔗糖； 步驟S20高溫滅菌:將步驟SlO配制好的培養(yǎng)基放于高壓滅菌鍋中，于120~121°C高溫滅 菌20~21分鐘，冷卻凝固。
[0012] 步驟si O還包括步驟SI 1調(diào)節(jié)pH值:使用HCL和KOH滴定調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值至6 · 3。
【具體實(shí)施方式】
[0013] 實(shí)施例一:配制何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基。
[0014]根據(jù)表1所示的MS培養(yǎng)基配方以及表2所示的何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方，配制本 發(fā)明所述的何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基。
[0015]用天平稱取MS培養(yǎng)基中的各成分以及TDZ(噻苯隆）、6-BA(6-節(jié)氨基腺嘌呤）、IBA (吲哚丁酸）、椰乳、瓊脂粉、鹿糖，置于三角瓶中，加入適量蒸餾水，攪拌溶解，并調(diào)節(jié)pH值至 6.3，定容至100〇111匕將三角瓶封口，置于高壓滅菌鍋中，于121°(：滅菌2〇1^11，然后置于超凈 工作臺(tái)中自然冷卻，備用。
[0016] 將冷卻到50-60°C時(shí)將培養(yǎng)基分裝至組織培養(yǎng)瓶中，晾涼，待其凝固后將組織培養(yǎng) 瓶封口，備用。
[0017] 表1 MS培養(yǎng)基的成分及其用量。
[0018] 表2何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基的成分及其用量。
[0019] 實(shí)施例二:本發(fā)明所述的何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基的測(cè)試 根據(jù)表1所示的MS培養(yǎng)基配方以及表3所示的何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方，參照實(shí)施例 一所述的培養(yǎng)基制備方法，分別配制各試驗(yàn)組、對(duì)照組的何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基。
[0020] 表3何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基。
[0021] 備注:對(duì)照組1為現(xiàn)有技術(shù)對(duì)照組，采用何首烏莖段作為外植體。 1 選取生長(zhǎng)健康，品質(zhì)優(yōu)良的何首烏幼嫩葉片，置于超凈工作臺(tái)中，用質(zhì)量濃度為 75%的酒精浸泡30秒，用無(wú)菌水沖洗干凈，再用質(zhì)量濃度為0.1%的氯化汞溶液消毒5分鐘，用 打孔器將葉片打成直徑0.5厘米的葉塊，接種于表3所示各試驗(yàn)組、對(duì)照組的培養(yǎng)基中，每瓶 接種20塊，黑暗培養(yǎng)5天，然后于光暗周期為12h光照/12h黑暗、光照強(qiáng)度為20001UX、溫度為 25±2°C的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)25天后統(tǒng)計(jì)葉片愈傷組織誘導(dǎo)率和褐化率，結(jié)果如表4所 不。
[0023] 表4何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基測(cè)試結(jié)果。
[0024] 由表4的試驗(yàn)結(jié)果可知，采用本發(fā)明所述的何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基，能夠成功使用 何首烏葉片作為外植體進(jìn)行何首烏組織培養(yǎng)，并且能誘導(dǎo)率達(dá)到100%，由對(duì)照組5和試驗(yàn)組 6對(duì)比得知，椰乳對(duì)何首烏葉片誘導(dǎo)至關(guān)重要，可大大提高其誘導(dǎo)率。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其特征在于，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加有TDZ (噻苯?。?、6-BA(6-芐氨基腺嘌呤）、IBA(吲哚丁酸）、椰乳、瓊脂粉、蔗糖。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其特征在于，TDZ(噻苯?。┑臐?度為0.001-0.011^/1，6-84(6-芐氨基腺嘌呤）的濃度為1-1.511^/1，184(吲哚丁酸）的濃度 為0.2-0.8 11^/1，椰乳的濃度為150-200 1^/1，瓊脂粉的濃度為8~118/1，蔗糖的濃度為25 ~35g/L〇3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其特征在于，TDZ(噻苯隆）的濃 度為0.004-0.00611^/1，6-84(6-芐氨基腺嘌呤）的濃度為1.2-1.411^/1，184(吲哚丁酸）的 濃度為〇. 4-0.6 mg/L，椰乳的濃度為180-190 mg/L，瓊脂粉的濃度為9~1 Og/L，蔗糖的濃度 為28~32g/L。4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3的其中之一所述的一種何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其特征在于，所 述的何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH值為5.8~6.5。5. 根據(jù)權(quán)利要求4的所述的一種何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其特征在于，所述的何首烏葉 片誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH值為6.3。6. 根據(jù)權(quán)利要求1至3的其中之一所述的一種何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其特征在于，所 述的椰乳是從沒(méi)成熟的椰汁果實(shí)中采集。7. -種何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配制方法，其特征在于，其包括以下步驟： 步驟S10溶解配制培養(yǎng)基，用蒸餾水溶解MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基各成分，并添加 TDZ(噻苯?。?_ BA(6-芐氨基腺嘌呤）、IBA(吲哚丁酸）、椰乳、瓊脂粉、蔗糖； 步驟S20高溫滅菌，將步驟S10配制好的培養(yǎng)基放于高壓滅菌鍋中，于120~121°C高溫滅 菌20~21分鐘，冷卻凝固。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配制方法，其特征在于，所述的 步驟S10還包括步驟SI 1調(diào)節(jié)pH值，使用HCL和K0H滴定調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值至6.3。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種何首烏葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基，屬于何首烏組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，該培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加有TDZ（噻苯?。?-BA(6-芐氨基腺嘌呤)、IBA（吲哚丁酸）、椰乳、瓊脂粉、蔗糖，以何首烏葉片作為外置體，不僅僅取材容易簡(jiǎn)單，還能降低取材對(duì)母體的傷害，同時(shí)本培養(yǎng)基還具有誘導(dǎo)率高的優(yōu)點(diǎn)。
【IPC分類】A01H4/00
【公開(kāi)號(hào)】CN105638471
【申請(qǐng)?zhí)枴?br>【發(fā)明人】何志鏗
【申請(qǐng)人】佛山市金藍(lán)領(lǐng)教育科技有限公司
【公開(kāi)日】2016年6月8日
【申請(qǐng)日】2016年1月9日