一種生物酶固定用反膠束乳液及其固定生物酶的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物酶固定的技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種生物酶固定用反膠束乳液及其固定生物酶的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]生物酶盡管具有催化活性高、專一性強(qiáng)以及選擇性好等特性，但其存在價格昂貴、不易回收以及容易團(tuán)聚等缺點(diǎn)限制了其的應(yīng)用。為了克服這一系列缺點(diǎn)，將生物酶固定于載體納米磁性顆粒的研究受到科研人員越來越多的重視，該方法具有制備工藝簡單、價格便宜以及便于回收等優(yōu)點(diǎn)，其中載體代表有納米Fe3O4磁性顆粒等。但是常規(guī)的固定方式通常是在水中進(jìn)行，這種方法使生物酶與納米磁性顆粒發(fā)生任意位點(diǎn)的結(jié)合，導(dǎo)致生物酶的活性降低。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)中使用納米Fe3O4磁性顆粒固定生物酶后導(dǎo)致生物酶活性降低的技術(shù)缺陷;進(jìn)而提供一種生物酶固定用反膠束乳液及其固定生物酶的方法。
[0004]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案:
[0005]—種生物酶固定用反膠束乳液，包括以下重量份數(shù)的各組分:
[0006]0P-10:5?20份
[0007]正辛醇:10?35份
[0008]異辛烷:30?60份
[0009]Tris-HCl 緩沖液:0.1 ?1.0 份
[0010]蒸飽水:0.1?8.0份。
[0011]進(jìn)一步的，一種生物酶固定用反膠束乳液，包括以下重量份數(shù)的各組分:
[0012]0P-10:15份
[0013]正辛醇:21份
[0014]異辛烷:48份
[0015]Tris-HCl 緩沖液:0.5份
[0016]蒸餾水:3.5份。
[0017]進(jìn)一步的，一種生物酶固定用反膠束乳液，包括以下重量份數(shù)的各組分:
[0018]0P-10:14份
[0019]正辛醇:22份
[0020]異辛烷:45份
[0021]Tris-HCl 緩沖液:0.8 份
[0022]蒸餾水:3.2份。
[0023]進(jìn)一步的，一種生物酶固定用反膠束乳液，包括以下重量份數(shù)的各組分:
[0024]OP-1O:12份
[0025]正辛醇:20份
[0026]異辛烷:46份
[0027]Tris-HCl 緩沖液:0.8份
[0028]蒸餾水:3.2份。
[0029]—種用生物酶固定用反膠束乳液固定生物酶的方法，包括以下幾個步驟:
[0030]1)、將0P-10:5?20重量份、正辛醇:10?35重量份、異辛烷:30?60重量份、Tris-HCl緩沖液:0.1?1.0重量份、蒸餾水:0.1?8.0重量份，混合攪拌均勻，得到混合乳液；
[0031 ] 2)、對I)所得的混合乳液進(jìn)行超聲波處理，形成反膠束體系；
[0032]3)、向2)所得的反膠束體系中加入待固定的生物酶I?10重量份、納米Fe3O4磁性顆粒5?20重量份，充分?jǐn)嚢瑁沟眉{米Fe3O4磁性顆粒將生物酶固定；
[0033]4)、用蒸餾水清洗步驟3)所得的產(chǎn)物，獲得納米Fe3O4磁性顆粒固定的生物酶。
[0034]進(jìn)一步的，所述的步驟3)中的生物酶為假絲酵母脂肪酶。
[0035]進(jìn)一步的，所述的步驟2)中的超聲波處理時超聲波的強(qiáng)度為0.5?1.2KW/m3，超聲頻率為18?40KHz。
[0036]進(jìn)一步的，所述的步驟2)中的超聲波處理的時間為0.5?2小時。
[0037]進(jìn)一步的，所述的步驟3)中的納米Fe304磁性顆粒的粒徑為40?60nm。
[0038]本發(fā)明反膠束將表面活性劑分散于連續(xù)非極性溶劑中自發(fā)形成的一種納米級穩(wěn)定聚集體，其中由表面活性劑親水基形成的球狀極性核作為“水池”，不僅能夠增溶一定數(shù)量的水或水溶液，而且可有效地限定其中分子或離子的存在狀態(tài)和相互作用。以該反膠束體系為介質(zhì)進(jìn)行生物酶固定，使生物酶定向地存在于反膠束的油水界面處，其活性基團(tuán)定向規(guī)則的朝向有機(jī)溶劑相中，而與納米磁性顆粒的反應(yīng)基團(tuán)規(guī)則的朝向水池中，極大地避免了生物酶活性基的損失，固定后的生物酶具有高效的催化性能。另一方面，采用反膠束體系固定生物酶的方法工藝簡單、環(huán)境友好和安全性高等優(yōu)點(diǎn)，更為重要的是本方法避免了生物酶活性位點(diǎn)的減少，使其催化活性更加高效，同時反應(yīng)完成后反膠束體系可以回收和重復(fù)使用，因此具有十分廣闊的發(fā)展前景。
【附圖說明】
[0039]附圖用來提供對本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說明書的一部分，與本發(fā)明的實(shí)施例一起用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。在附圖中:
[0040]圖1是不同固定酶對戊酸戊酯的催化合成率；
[0041]圖2是實(shí)施例3中反膠束固定酶的重復(fù)使用性能；
[0042 ]圖3是Fe 304磁性顆粒固定生物酶前后的磁性效果。
【具體實(shí)施方式】
[0043]以下結(jié)合附圖對本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行說明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的優(yōu)選實(shí)施例僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0044]實(shí)施例1
[0045]—種生物酶固定用反膠束乳液，包括以下重量份數(shù)的各組分:
[0046]OP-1O:15份
[0047]正辛醇:21份
[0048]異辛烷:48份
[0049]Tris-HCl 緩沖液:0.5 份
[0050]蒸餾水:3.5份。
[0051]該實(shí)施例生固定生物酶的方法，包括以下幾個步驟:
[0052]I )、將0P-10:15重量份、正辛醇:21重量份、異辛烷:48重量份、Tris-HCl緩沖液:
0.5重量份、蒸餾水:3.5重量份，混合攪拌均勻，得到混合乳液；
[0053]2)、對I)所得的混合乳液進(jìn)行超聲波處理，形成反膠束體系；超聲波的強(qiáng)度為
0.5Kff/m3，超聲頻率為18KHz，處理的時間為2小時；
[0054]3)、向2)所得的反膠束體系中加入假絲酵母脂肪酶2重量份、納米Fe3O4磁性顆粒10重量份，充分?jǐn)嚢?，使得納米Fe3O4磁性顆粒將生物酶固定；納米Fe3O4磁性顆粒的粒徑為40nm；
[0055]4)、用蒸餾水清洗步驟3)所得的產(chǎn)物，獲得納米Fe3O4磁性顆粒固定的生物酶。
[0056]實(shí)施例2
[0057]一種生物酶固定用反膠束乳液，包括以下重量份數(shù)的各組分:
[0058]0P-10:14份
[0059]正辛醇:22份
[0060]異辛烷:45份
[0061 ]Tris-HCl 緩沖液:0.8份
[0062]蒸餾水:3.2份。
[0063]該實(shí)施例生固定生物酶的方法，包括以下幾個步驟:
[0064]I )、將0P-10:14重量份、正辛醇:22重量份、異辛烷:45重量份、Tris-HCl緩沖液:
0.8重量份、蒸餾水:3.2重量份，混合攪拌均勻，得到混合乳液；
[0065]2)、對I)所得的混合乳液進(jìn)行超聲波處理，形成反膠束體系；超聲波的強(qiáng)度為
1.2Kff/m3，超聲頻率為40KHz，處理的時間為0.5小時；
[0066]3)、向2)所得的反膠束體系中加入假絲酵母脂肪酶5重量份、納米Fe3O4磁性顆粒10重量份，充分?jǐn)嚢?，使得納米Fe3O4磁性顆粒將生物酶固定；納米Fe3O4磁性顆粒的粒徑為60nm；
[0067]4)、用蒸餾水清洗步驟3)所得的產(chǎn)物，獲得納米Fe3O4磁性顆粒固定的生物酶。
[0068]實(shí)施例3
[0069]—種生物酶固定用反膠束乳液，包括以下重量份數(shù)的各組分:
[0070]0P-10:12份
[0071]正辛醇:20份
[0072]異辛烷:46份
[0073]Tris-HCl 緩沖液:0.8份
[0074]蒸餾水:3.2份。
[0075]該實(shí)施例生固定生物酶的方法，包括以下幾個步驟:<