小球藻提取物在花椰菜種子萌發(fā)中應(yīng)用及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明涉及小球藻提取物在農(nóng)業(yè)技術(shù)領(lǐng)域的應(yīng)用，具體涉及小球藻提取物在花椰 菜種子萌發(fā)中應(yīng)用及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 小球藻（Ch 1 ore 1 la Iryreno idosa)隸屬于綠藻門(mén) Chlorphy ta、綠球藻目 〇11〇1'〇6〇6〇3168、卵囊藻科0〇〇5^〖3〇636、小球藻屬〇11〇^11&，為海洋常見(jiàn)單細(xì)胞藻類(lèi)，具 有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值和巨大的應(yīng)用和開(kāi)發(fā)潛力。小球藻天然含豐富的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、食用纖維、 生物素、纖維素、不飽和脂肪酸、生物活性多糖、核酸、維生素、微量元素、礦物質(zhì)、葉酸與葉 綠素。這些特殊的有效成分具有防治消化性潰瘍、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫、抗輻射、抗病原微生 物、防治貧血、降血脂和抗動(dòng)脈粥樣硬化等保健和藥理作用。其干粉的蛋白質(zhì)含量在50%以 上，是優(yōu)良的單細(xì)胞飼料蛋白源，在飼料中添加能提高肉豬、肉雞和蛋雞的生產(chǎn)性能，應(yīng)用 于水產(chǎn)飼料能提高魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)速度。小球藻提取物以500-1000倍稀釋?zhuān)瑖娛┯谑卟?、果?shù)等 葉面，具有增強(qiáng)植物的光合作用、促使根部生長(zhǎng)旺盛、提高對(duì)養(yǎng)分的吸收能力以及提高對(duì)細(xì) 菌的抵抗力的效果。因此，近些年對(duì)小球藻的關(guān)注度也越來(lái)越高。從小球藻的培養(yǎng)、應(yīng)用等 各個(gè)方面都深入研究。專(zhuān)利CN 102586116 B公開(kāi)了"一種普通小球藻及其培養(yǎng)方法和應(yīng) 用"，該發(fā)明培養(yǎng)方法把污水處理和生產(chǎn)生物能源與其他副產(chǎn)品（如，蛋白質(zhì)、化妝品原料及 動(dòng)物飼料等)相結(jié)合，降低生產(chǎn)成本，達(dá)到廢物資源的綜合利用，實(shí)現(xiàn)節(jié)能減排的綠色生產(chǎn)。 專(zhuān)利CN 103519035 B公開(kāi)了"一種小球藻發(fā)酵型果凍的制備方法"該發(fā)明本發(fā)明以小球藻 為原料，利用其本身具有的高蛋白和天然色素，無(wú)需添加香精及色素，制得的果凍具有天然 的綠色，發(fā)酵乳的清香，及酸甜適宜的口感，同時(shí)又具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。根據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)得 知，近幾年來(lái)，我國(guó)小球藻的研究熱點(diǎn)在小球藻的生物培養(yǎng)、生物柴油以及在保健品、食品 方面的研究，在農(nóng)業(yè)技術(shù)領(lǐng)域的研究卻寥寥無(wú)幾。
[0003] 為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，本發(fā)明的首要目的是提供一種易培養(yǎng)、易提 取的小球藻提取物。該發(fā)明提高了花椰菜種子的發(fā)芽率、縮短了種子萌發(fā)周期。
[0004] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供上述小球藻提取物的制備方法。
[0005] 本發(fā)明的再一個(gè)目的在于提供上述小球藻提取物在花椰菜種子萌發(fā)中應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0007] 1、配制葡萄糖液體培養(yǎng)基于120°(：、11^&，條件下高壓滅菌1.51 1，冷卻后接入小球 藻藻種，置于培養(yǎng)箱中光照培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25-30°C，培養(yǎng)時(shí)間3d后按1:1比例擴(kuò)培至試管 中，生長(zhǎng)至深綠時(shí)進(jìn)一步擴(kuò)培至l〇〇ml錐形瓶中；
[0008] 2、小球藻提取物的制備：取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的小球藻液30mL，密度為2.0 X 107CFU/ 1111，搖勾，離心51]1；[11(25001'/1]1；[11)，離心完畢后沉淀為藻泥。向小球藻泥中加入95%乙醇制成 懸濁液，加入纖維素酶和果膠酶(比例為1: l)2-6ml，酶解24h，酶解溫度25°C。酶解之后進(jìn)行 再次離心，時(shí)間lOmin，轉(zhuǎn)速是4000r/min。取上清液，減壓蒸餾除去乙醇溶劑得小球藻提取 物；
[0009] 3、花椰菜種子的處理與培養(yǎng):取大小一致，顆粒飽滿(mǎn)的花椰菜種子，用2%雙氧水 消毒2遍，蒸餾水沖洗3次，然后均勻置于鋪有濾紙的玻璃培養(yǎng)皿中，加入配制成4%濃度的 小球藻提取液至種子完全浸泡，放入保溫箱于25 °C恒溫靜置24h，后置于室溫自然光照培養(yǎng) 發(fā)芽。
[0010]所述的葡萄糖液體培養(yǎng)基為:食品工業(yè)廢水l〇〇ml、葡萄糖10.0g、微量元素。
[0011] 所述的微量元素為FeC6H5〇 · 5H20 3.9g、NaEDTA 4.35g、MnCI · 4H20 2.188g、 ZnS04*7H20 0.0278g、CoCl*6H20 0.0687g、CuS〇4*5H2〇 0.0102g、H3B03 0.08gNa2Mo〇4 2.0g〇
[0012] 所述的纖維素酶與果膠酶活性之比為1. 〇萬(wàn)單位:2.0萬(wàn)單位。
[0013] 經(jīng)過(guò)小球藻提取液的浸泡處理，花椰菜種子發(fā)芽率高于95%，發(fā)芽周期縮短2到3 天。
[0014] 小球藻提取物促進(jìn)種子萌發(fā)作用機(jī)理為小球藻提取物含有氨基酸、多糖、蛋白質(zhì)、 維生素等功能性成分，補(bǔ)充了種子萌發(fā)過(guò)程所需要的營(yíng)養(yǎng)成分，活化種子細(xì)胞，促進(jìn)種子細(xì) 胞分化與生長(zhǎng)，從而促使種子萌發(fā)。
[0015] 本發(fā)明具有以下有益效果：
[0016] 1、本發(fā)明采用工業(yè)廢水作為小球藻培養(yǎng)基，為小球藻提供各種豐富的氮磷元素的 同時(shí)達(dá)到凈化污水的效果，為實(shí)現(xiàn)工業(yè)綠色減排生產(chǎn)提供依據(jù)。
[0017] 2、由于小球藻提取液中富含各種功能性營(yíng)養(yǎng)成分，為花椰菜種子萌發(fā)提供所需的 綠色純天然各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，縮短種子發(fā)芽周期，提高了種子發(fā)芽率。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 實(shí)施例1
[0019] 1、配制葡萄糖液體培養(yǎng)基于120°(：、11^&，條件下高壓滅菌1.51 1，冷卻后接入小球 藻藻種，置于培養(yǎng)箱中光照培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25°C，培養(yǎng)時(shí)間3d后按1:1比例擴(kuò)培至試管中，生 長(zhǎng)至深綠時(shí)進(jìn)一步擴(kuò)培至l〇〇ml錐形瓶中；
[0020] 2、小球藻提取物的制備：取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的小球藻液30mL，密度為2.0 X 107CFU/ 1111，搖勾，離心51]1；[11(25001'/1]1；[11)，離心完畢后沉淀為藻泥。向小球藻泥中加入95%乙醇制成 懸濁液，加入纖維素酶和果膠酶(比例為1:1 )4ml，酶解24h，酶解溫度25°C。酶解之后進(jìn)行再 次離心，時(shí)間lOmin，轉(zhuǎn)速是4000r/min。取上清液，減壓蒸餾除去乙醇溶劑得小球藻提取物；
[0021] 3、花椰菜種子的處理與培養(yǎng):選取大小一致，顆粒飽滿(mǎn)的100粒花椰菜種子，用2% 雙氧水消毒2次，蒸餾水沖洗3次，然后均勻置于鋪有濾紙的玻璃培養(yǎng)皿中，加入配制成4% 濃度的小球藻提取液至種子完全浸泡，放入保溫箱于25 °C恒溫靜置24h，后置于室溫自然光 照培養(yǎng)發(fā)芽。
[0022] 經(jīng)測(cè)定花椰菜種子發(fā)芽率為96%，發(fā)芽周期為4天。
[0023] 實(shí)施例2
[0024] 1、配制葡萄糖液體培養(yǎng)基于120°(：、11^&，條件下高壓滅菌1.511，冷卻后接入小球 藻藻種，置于培養(yǎng)箱中光照培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度28°C，培養(yǎng)時(shí)間3d后按1:1比例擴(kuò)培至試管中，生 長(zhǎng)至深綠時(shí)進(jìn)一步擴(kuò)培至l〇〇ml錐形瓶中；
[0025] 2、小球藻提取物的制備：取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的小球藻液30mL，密度為2.0 X 107CFU/ 1111，搖勾，離心51]1；[11(25001'/1]1；[11)，離心完畢后沉淀為藻泥。向小球藻泥中加入95%乙醇制成 懸濁液，加入纖維素酶和果膠酶(比例為l:l)6ml，酶解24h，酶解溫度25°C。酶解之后進(jìn)行再 次離心，時(shí)間lOmin，轉(zhuǎn)速是4000r/min。取上清液，減壓蒸餾除去乙醇溶劑得小球藻提取物； [0026] 3、花椰菜種子的處理與培養(yǎng):選取大小一致，顆粒飽滿(mǎn)的150?；ㄒ朔N子，用2% 雙氧水消毒2次，蒸餾水沖洗3次，然后均勻置于鋪有濾紙的玻璃培養(yǎng)皿中，加入配制成4% 濃度的小球藻提取液至種子完全浸泡，放入保溫箱于25 °C恒溫靜置24h，后置于室溫自然光 照培養(yǎng)發(fā)芽。
[0027]經(jīng)測(cè)定花椰菜種子發(fā)芽率為98%，發(fā)芽周期為5天。
[0028] 對(duì)比例1
[0029] 選取大小一致，顆粒飽滿(mǎn)的100?；ㄒ朔N子，用2%雙氧水消毒2次，蒸餾水沖洗3 次，然后均勻置于鋪有濾紙的玻璃培養(yǎng)皿中，加入普通種子培養(yǎng)液至種子完全浸泡，放入保 溫箱于25 °C恒溫靜置24h，后置于室溫自然光照培養(yǎng)發(fā)芽。
[0030] 對(duì)比例2
[0031] 選取大小一致，顆粒飽滿(mǎn)的150粒花椰菜種子，用2%雙氧水消毒2次，蒸餾水沖洗3 次，然后均勻置于鋪有濾紙的玻璃培養(yǎng)皿中，加入普通種子培養(yǎng)液至種子完全浸泡，放入保 溫箱于25 °C恒溫靜置24h，后置于室溫自然光照培養(yǎng)發(fā)芽。
[0032]所述的普通種子培養(yǎng)液為:硝酸鉀3g，硝酸鈣5g硫酸鎂3g，磷酸銨2g;硫酸鉀lg，磷 酸二氫鐘lg、乙二銨四乙酸二鈉 l〇〇mg，硫酸亞鐵75mg;硼酸30mg，硫酸猛20mg，硫酸鋅5mg， 硫酸銅lmg，鉬酸銨2mg，蒸餾水100mL。
[0033] 花椰菜種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)的測(cè)定方法如下：
[0034] 發(fā)芽率=(發(fā)芽結(jié)束發(fā)芽種子數(shù)/播種種子數(shù)）X 100%
[0035] 發(fā)芽勢(shì)=[第2天發(fā)芽種子數(shù)/播種種子數(shù)]X 100%;
[0036] 實(shí)施例1、對(duì)比例1中花椰菜種子發(fā)芽率如下表：
[0037]
[0038] 實(shí)施例1、對(duì)比例1中花椰菜種子發(fā)芽勢(shì)如下表：
[0039]
[0040] 實(shí)施例2、對(duì)比例2中花椰菜種子發(fā)芽率如下表：
[0041]
[0042] ~實(shí)施例2、對(duì)比例2中花椰菜種子發(fā)芽勢(shì)如下表:^' '
[0043]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 小球藻提取物在花椰菜種子萌發(fā)中應(yīng)用及其制備方法，其特征在于包括以下步驟： 1) 、配制葡萄糖液體培養(yǎng)基于120°c、lkpa，條件下高壓滅菌1.5h，冷卻后接入小球藻藻 種，置于培養(yǎng)箱中光照培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25-30°C，培養(yǎng)時(shí)間3d后按1:1比例擴(kuò)培至試管中，生 長(zhǎng)至深綠時(shí)進(jìn)一步擴(kuò)培至l〇〇ml錐形瓶中； 2) 、小球藻提取物的制備:取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的小球藻液30mL，密度為2.0 X 107CFU/ml，搖 勻，離心5min(2500r/min)，離心完畢后沉淀為藻泥。向小球藻泥中加入95%乙醇制成懸濁 液，加入纖維素酶和果膠酶（比例為1:1) 2-6ml，酶解24h，酶解溫度25 °C。酶解之后進(jìn)行再次 離心，時(shí)間lOmin，轉(zhuǎn)速是4000r/min。取上清液，減壓蒸餾除去乙醇溶劑得小球藻提取物； 3) 、花椰菜種子的處理與培養(yǎng):取大小一致，顆粒飽滿(mǎn)的花椰菜種子，用2%雙氧水消毒 2遍，蒸餾水沖洗3次，然后均勻置于鋪有濾紙的玻璃培養(yǎng)皿中，加入配制成4%濃度的小球 藻提取液至種子完全浸泡，放入保溫箱于25°C恒溫靜置24h，后置于室溫自然光照培養(yǎng)發(fā) 芽。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小球藻提取物在花椰菜種子萌發(fā)中應(yīng)用及其制備方法其特征 在于:葡萄糖液體培養(yǎng)基為:食品工業(yè)廢水l〇〇ml、葡萄糖10.0 g、微量元素。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的小球藻提取物在花椰菜種子萌發(fā)中應(yīng)用及其制備方法其特征 在于：微量元素為FeC6H5〇 · 5H20 3.9g、NaEDTA 4.35g、MnCI · 4H20 2.188g、ZnS〇4· 7H20 0.0278g、CoCl*6H20 0.0687g、CuS〇4*5H20 0.0102g、H3B03 0.08g Na2Mo〇4 2.0g。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小球藻提取物在花椰菜種子萌發(fā)中應(yīng)用及其制備方法其特征 在于:步驟(2)中纖維素酶與果膠酶活性之比為1.0萬(wàn)單位:2.0萬(wàn)單位。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了小球藻提取物在花椰菜種子萌發(fā)中應(yīng)用及其制備方法，具體包括：小球藻提取物制備、花椰菜種子的處理與培養(yǎng)。本發(fā)明采用工業(yè)廢水作為小球藻培養(yǎng)基，為小球藻提供各種豐富的氮磷元素的同時(shí)達(dá)到凈化污水的效果，為實(shí)現(xiàn)工業(yè)綠色減排生產(chǎn)提供依據(jù)。再者由于小球藻提取液中富含各種功能性營(yíng)養(yǎng)成分，為花椰菜種子萌發(fā)提供所需的綠色純天然各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，縮短種子發(fā)芽周期，提高種子發(fā)芽率。
【IPC分類(lèi)】A01C1/00, A01G31/00, C05F11/10
【公開(kāi)號(hào)】CN105601357
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510657894
【發(fā)明人】支秀芳
【申請(qǐng)人】支秀芳
【公開(kāi)日】2016年5月25日
【申請(qǐng)日】2015年10月12日