一種新型腎臟病模型的制作方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種腎臟疾病模型的構建，尤其涉及一種新型腎臟病模型的制作方法。
【背景技術】
[0002]隨著社會經濟的發(fā)展和人們生活方式的改變，慢性腎臟病(CKD)已呈流行趨勢，人群中的發(fā)病率高達10%以上。鑒于人們對CKD發(fā)病機制的認識還不夠深入，臨床上也缺乏滿意的干預手段，大部分病人最終進入終末期腎病階段，需要血液凈化及腎臟移植治療，給家庭和社會帶來沉重的負擔。在CKD的病因中，急性腎臟損傷(AKI)后的漸進性進展被認為是CKD發(fā)生的重要病因之一。因此深入研究和認識AKI向CKD進展的分子病理機制，提出新的治療靶點，是臨床干預CKD的重要基礎。近些年來，人們利用傳統(tǒng)的AKI動物模型(如缺血/再灌注腎損傷模型，順鉑誘導的急性腎損傷等)，延長觀察時間，進行AKI向CKD轉化的相關研究。但是由于這些傳統(tǒng)AKI模型的高死亡率(長期觀察的死亡率甚至可以達到80-90%以上)，而幸存的動物可能由于其基因背景相關的抗損傷作用(腎臟損傷較重的大部分已經死亡，腎臟損害較輕的可以存活，這可能與基因差異相關)，其病理損害較輕，無法呈現典型的CKD病理表現(廣泛的纖維化和腎小管萎縮等)。正是缺少可以廣泛應用及認可的AKI向CKD進展的動物模型，使得該領域的研究無法快速進展，也極大的限制了臨床干預手段的研發(fā)。

【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明的目的就在于為了解決上述問題而提供一種新型腎臟病模型的制作方法。
[0004]本發(fā)明通過以下技術方案來實現上述目的:
[0005]本發(fā)明將小鼠腎動脈夾閉60分鐘，小鼠可存活，于21天取腎臟檢測病理，可發(fā)現彌漫型纖維化等慢性腎損傷病理改變;其操作過程包括以下步驟:
[0006](I)將小鼠麻醉后打開前腹，分離暴露出腎動脈；
[0007](2)用動脈夾將單側腎動脈夾閉60分鐘；
[0008](3)夾閉完成后，取出動脈夾，關閉腹腔；
[0009](3)將小鼠正常飼養(yǎng)3周，取雙側腎臟檢測病理狀況。
[0010]進一步，所述步驟(I)的具體方法為:取小鼠腹部正中切口，沿腹白線切開肌層，進入腹腔，推開腸管向對側，暴露一側腎臟及血管，充分游離腎門處血管，暴露動靜脈;所述步驟(2)的具體方法為:以血管夾同時夾閉腎動靜脈，計時60分鐘，期間溫鹽水紗布覆蓋腹腔切口，保持小鼠身體溫暖;所述步驟(3)的具體方法為:所述關閉腹腔為縫合腹部肌肉及皮膚。
[0011]本發(fā)明的有益效果在于:
[0012]本發(fā)明是一種新型腎臟病模型的制作方法，與現有技術相比，本發(fā)明動物模型的成功建立為腎臟病領域進行深入的AKI向CKD轉化的機制及干預研究提供了有效的工具和可能，不僅大大降低了造模動物死亡率，并有效的形成慢性腎損傷，具有推廣應用的價值。
【具體實施方式】
[0013]下面對本發(fā)明作進一步說明:
[0014]本發(fā)明將小鼠腎動脈夾閉60分鐘，小鼠可存活，于21天取腎臟檢測病理，可發(fā)現彌漫型纖維化等慢性腎損傷病理改變;其操作過程包括以下步驟:
[0015](I)將小鼠麻醉后打開前腹，分離暴露出腎動脈；
[0016](2)用動脈夾將單側腎動脈夾閉60分鐘；
[0017](3)夾閉完成后，取出動脈夾，關閉腹腔；
[0018](3)將小鼠正常飼養(yǎng)3周，取雙側腎臟檢測病理狀況。
[0019]進一步，所述步驟(I)的具體方法為:取小鼠腹部正中切口，沿腹白線切開肌層，進入腹腔，推開腸管向對側，暴露一側腎臟及血管，充分游離腎門處血管，暴露動靜脈;所述步驟(2)的具體方法為:以血管夾同時夾閉腎動靜脈，計時60分鐘，期間溫鹽水紗布覆蓋腹腔切口，保持小鼠身體溫暖;所述步驟(3)的具體方法為:所述關閉腹腔為縫合腹部肌肉及皮膚。
[0020]本發(fā)明應用單側腎臟較長時間缺血(30-60分鐘)再灌注，對側腎正常保留，經過四周的觀察，不但在AKI側腎臟誘導了典型的CKD病變(廣泛的小管間質纖維化及腎小管萎縮)，還極大地降低了死亡率(由于對側腎臟的代償，死亡率可以接近0%)。同時，通過調控缺血時間(30、45、60分鐘等)，可以獲得達到不同程度的CKD。由于健側腎臟的代償作用，小鼠無尿毒癥表現，因此患側腎臟的進展性損傷中也除外了尿毒癥毒素的復雜影響，其CKD的發(fā)生基本上是單純AKI的作用。此外，本模型的另一優(yōu)勢是，在典型的CKD發(fā)生后，切除健側腎臟，可以導致尿毒癥的表現，進而可以進行AKI誘導的終末期腎病的相關研究。
[0021]以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征及本發(fā)明的優(yōu)點。本行業(yè)的技術人員應該了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會有各種變化和改進，這些變化和改進都落入要求保護的本發(fā)明范圍內。本發(fā)明要求保護范圍由所附的權利要求書及其等效物界定。
【主權項】
1.一種新型腎臟病模型的制作方法，其特征在于:將小鼠腎動脈夾閉60分鐘，小鼠可存活，于21天取腎臟檢測病理，可發(fā)現彌漫型纖維化等慢性腎損傷病理改變;其操作過程包括以下步驟: (1)將小鼠麻醉后打開前腹，分離暴露出腎動脈； (2)用動脈夾將單側腎動脈夾閉60分鐘； (3)夾閉完成后，取出動脈夾，關閉腹腔； (3)將小鼠正常飼養(yǎng)3周，取雙側腎臟檢測病理狀況。2.根據權利要求1所述的新型腎臟病模型的制作方法，其特征在于:所述步驟(I)的具體方法為:取小鼠腹部正中切口，沿腹白線切開肌層，進入腹腔，推開腸管向對側，暴露一側腎臟及血管，充分游離腎門處血管，暴露動靜脈。3.根據權利要求1所述的新型腎臟病模型的制作方法，其特征在于:所述步驟(2)的具體方法為:以血管夾同時夾閉腎動靜脈，計時60分鐘，期間溫鹽水紗布覆蓋腹腔切口，保持小鼠身體溫暖。4.根據權利要求1所述的新型腎臟病模型的制作方法，其特征在于:所述步驟(3)的具體方法為:所述關閉腹腔為縫合腹部肌肉及皮膚。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種新型腎臟病模型的制作方法，具體為將小鼠腎動脈夾閉60分鐘，小鼠可存活，于21天取腎臟檢測病理，可發(fā)現彌漫型纖維化等慢性腎損傷病理改變；與現有技術相比，本發(fā)明動物模型的成功建立為腎臟病領域進行深入的AKI向CKD轉化的機制及干預研究提供了有效的工具和可能，不僅大大降低了造模動物死亡率，并有效的形成慢性腎損傷，具有推廣應用的價值。
【IPC分類】A61D1/00
【公開號】CN105596108
【申請?zhí)枴緾N201610057281
【發(fā)明人】賈占軍, 于婧, 董雋, 張愛華, 黃松明, 王璐, 公偉, 李樹珍
【申請人】南京醫(yī)科大學附屬南京兒童醫(yī)院
【公開日】2016年5月25日
【申請日】2016年1月27日