1.基于3D數(shù)字顯微成像系統(tǒng)的高動(dòng)態(tài)范圍圖像成像方法,其特征在于,包括如下步驟:
步驟1,針對(duì)顯微鏡載物臺(tái)上的待觀測(cè)物體,通過(guò)調(diào)節(jié)載物臺(tái)的高度,并利用相機(jī)獲取自待觀測(cè)物體底部到待觀測(cè)物體頂部的每個(gè)層面的高動(dòng)態(tài)多聚焦圖像,以獲得三維立體成像所需的原始高動(dòng)態(tài)多聚焦序列圖像;
步驟2,采用相位匹配方法對(duì)所得原始高動(dòng)態(tài)多聚焦序列圖像進(jìn)行配準(zhǔn),以使得所述原始高動(dòng)態(tài)多聚焦序列圖像中前后相連的圖像對(duì)的空間位置、縮放尺度和圖像尺寸對(duì)應(yīng)一致,從而得到配準(zhǔn)好的高動(dòng)態(tài)多聚焦序列圖像;
步驟3,針對(duì)配準(zhǔn)好的高動(dòng)態(tài)多聚焦序列圖像,采用背景累積的前景背景分割方法提取需要生成三維立體的觀測(cè)樣本區(qū)域;
步驟4,對(duì)所述觀測(cè)樣本區(qū)域采用四叉樹(shù)分割方法進(jìn)行分割,且檢測(cè)高動(dòng)態(tài)多聚焦序列圖像的每一幅圖像中的清晰部分,并記錄每一幅圖像所對(duì)應(yīng)的高度信息;
步驟5,對(duì)檢測(cè)出來(lái)的各幅圖像中的清晰部分進(jìn)行融合,從而生成待觀測(cè)物體的三維立體形狀。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高動(dòng)態(tài)范圍圖像成像方法,其特征在于,所述步驟1中利用相機(jī)獲取每個(gè)層面的高動(dòng)態(tài)范圍圖像的過(guò)程包括:
(a)標(biāo)定相機(jī)的相應(yīng)曲線(xiàn);(b)獲取對(duì)于同一場(chǎng)景中不同曝光值的圖像;(c)利用標(biāo)定的相機(jī)的所述相應(yīng)曲線(xiàn),生成所述場(chǎng)景的32位的光照譜圖;(d)利用局部色調(diào)映射將所述32位的光照譜圖映射至8位的普通圖像,并保存所述普通圖像為計(jì)算機(jī)能夠顯示和儲(chǔ)存的格式。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高動(dòng)態(tài)范圍圖像成像方法,其特征在于,在步驟1中,所述原始高動(dòng)態(tài)多聚焦序列圖像的獲得過(guò)程包括:
在步驟1中,首先,通過(guò)移動(dòng)載物臺(tái)的高度,改變待觀測(cè)物體與顯微鏡的物鏡之間的距離,實(shí)現(xiàn)單目顯微鏡不同聚焦平面圖像序列;其次,記錄每一幅聚焦平面圖像高度信息的要求;再次,對(duì)于每一幅聚焦平面圖像進(jìn)行聚焦檢測(cè),并記錄所述每一幅聚焦平面圖像中具有最大聚焦清晰度的像素點(diǎn),以用于后續(xù)的三維立體形狀重建。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高動(dòng)態(tài)范圍圖像成像方法,其特征在于,在步驟2中,所述相位匹配方法對(duì)所得原始高動(dòng)態(tài)多聚焦序列圖像進(jìn)行配準(zhǔn)的過(guò)程包括:
首先,在所述原始高動(dòng)態(tài)多聚聚序列圖像中,針對(duì)每?jī)煞昂笙噙B的各圖像對(duì),將圖像對(duì)中的各圖像轉(zhuǎn)換為灰度圖像,從而得到灰度圖像對(duì);
其次,采用復(fù)數(shù)帶通濾波器從轉(zhuǎn)換后的灰度圖像對(duì)中提取出各個(gè)頻段的相位信息;
再次,利用提取的所述相位信息,通過(guò)傅里葉變換實(shí)現(xiàn)所述灰度圖像對(duì)在超像素層級(jí)上的移動(dòng),以保證前后相連兩幅圖像的位置的一致性;
最后,對(duì)于原始高動(dòng)態(tài)多聚焦序列圖像中的每一組圖像對(duì),重復(fù)該過(guò)程,直到高動(dòng)態(tài)多聚焦圖像序列中所有圖像的縮放尺度和位移保持一致。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高動(dòng)態(tài)范圍圖像成像方法,其特征在于,所述步驟4中采用四叉樹(shù)分割方法分割觀測(cè)樣本區(qū)域的過(guò)程包括:
首先,將原始高動(dòng)態(tài)多聚焦序列圖像作為四叉樹(shù)根的一層輸入到四叉樹(shù)中;
其次,設(shè)定圖像分解條件,并根據(jù)四叉樹(shù)中的各層圖像是否滿(mǎn)足分解條件進(jìn)行處理:
如果對(duì)于一層圖像滿(mǎn)足所述的圖像分解條件,則對(duì)這層圖像進(jìn)行四叉分解,并輸入到四叉樹(shù)的下一層;依次類(lèi)推,直到圖像序列被分解所得的最小圖像塊都不滿(mǎn)足所述的圖像分解條件,則結(jié)束四叉樹(shù)分解過(guò)程;其中,設(shè)定的圖像分解條件為:
對(duì)于四叉樹(shù)中圖像序列中每一層被分解的圖像塊分別計(jì)算其聚焦因子最大差異值MDFM和梯度差異值SMDG;其中,聚焦因子最大差異值MDFM和梯度差異值SMDG的計(jì)算公式分別如下:
MDFM=FMmax-FMmin;
其中,F(xiàn)Mmax表示焦距測(cè)量的最大值,F(xiàn)Mmin表示焦距測(cè)量的最小值;gradmax(x,y)表示最大梯度值,gradmin(x,y)表示最小梯度值;
針對(duì)四叉樹(shù)中的一層圖像塊,如果滿(mǎn)足MDFM≥0.98×SMDG,表面該層圖像序列中存在完全聚焦的圖像塊,則該層圖像塊將不會(huì)繼續(xù)向下分解;反之,該層圖像塊將會(huì)繼續(xù)分解下去,直到四叉樹(shù)中所有圖像都被分解到無(wú)法分解的子圖像塊。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的高動(dòng)態(tài)范圍圖像成像方法,其特征在于,所述焦距測(cè)量的最大值FMmax、焦距測(cè)量的最小值FMmin的獲取過(guò)程為:
首先,計(jì)算四叉樹(shù)根的一層圖像中每一個(gè)像素的梯度矩陣,計(jì)算公式為:
GMi=gradient(Ii),i=1,2,…,n;
其中,Ii為第i個(gè)原始高動(dòng)態(tài)多聚焦圖像,GMi為與Ii相對(duì)應(yīng)的梯度矩陣;n為原始高動(dòng)態(tài)多聚焦序列圖像中的圖像總個(gè)數(shù);
其次,找到這一層圖像每一點(diǎn)的所有梯度矩陣中最大的梯度矩陣以及最小的梯度矩陣,公式如下:
GMmax=max(GMi(x,y)),i=1,2,…,n;
GMmin=min(GMi(x,y)),i=1,2,…,n;
再次,計(jì)算這一層圖像所有點(diǎn)的梯度矩陣之和,計(jì)算公式如下:
FMi=ΣxΣygradi(x,y),i=1,2,…,n;
最后,分別找到上述梯度矩陣之和的最大值和最小值,計(jì)算公式如下:
FMmax=max{FMi},i=1,2,…,n;
FMmin=min{FMi},i=1,2,…,n。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的高動(dòng)態(tài)范圍圖像成像方法,其特征在于,所述步驟5中針對(duì)各幅圖像的清晰部分進(jìn)行融合的過(guò)程包括:針對(duì)所得所有的清晰部分作為清晰的子圖像塊,分別記錄其高度信息,并將所有的清晰的子圖像塊融合成一幅完整的觀測(cè)樣本的三維立體圖像。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高動(dòng)態(tài)范圍圖像成像方法,其特征在于,所述步驟5中還包括:采用中值濾波方法對(duì)生成的三維立體形狀進(jìn)行濾波,以消除三維立體形狀因采樣頻率不足而引起的鋸齒效果,從而使得生成的三維立體形成更加平滑。