專利名稱：診斷個體中肝臟病理的存在和/或嚴(yán)重性和/或監(jiān)控這種病理的治療有效性的方法
專利說明診斷個體中肝臟病理的存在和/或嚴(yán)重性和/或監(jiān)控這種病理的治療有效性的方法 本發(fā)明涉及肝臟病學(xué)中的診斷領(lǐng)域，具體地涉及評估肝臟的肝纖維化的存在和/或其嚴(yán)重性的方法，或者評估纖維化面積的方法，或者評估肝臟結(jié)構(gòu)的方法(纖維化評分(fibrosis score)和分形維數(shù)(fractaldimension))。
出于本發(fā)明的目的，術(shù)語“評估纖維化的存在”指研究通過本發(fā)明的方法檢測患者中是否存在纖維化的問題；術(shù)語“評估嚴(yán)重性”指尋求對纖維化程度的檢測，這必須與作為肝臟功能缺乏的肝臟損傷的嚴(yán)重性區(qū)別開。術(shù)語“評估纖維化面積”指尋求對纖維化導(dǎo)致的肝臟損害程度的檢測。須明確說明的是，肝臟的功能缺乏依賴于肝臟的解剖學(xué)損害，但這并不是線性關(guān)系。
慢性肝臟疾病的嚴(yán)重程度依賴于纖維化，其是繼發(fā)于炎癥的傷痕。形成纖維的肝臟疾病的原因主要是B病毒和C病毒的感染、酒精和脂肪變性(脂肪肝)。
直到目前，評估纖維化仍是基于肝臟穿刺活檢(LNB)。根據(jù)LNB，通過半定量的纖維化評分對肝臟纖維化進行分類。基于對類似損害的觀察，存在多種分類。對這些損害的描述主要是根據(jù)肝臟的基本單元(在功能和解剖學(xué)水平上)(即肝“葉”)的結(jié)構(gòu)的紊亂(或變形)而定性的。纖維化開始于“肝門”區(qū)域中肝葉的外圍(F1階段)，以致在肝葉內(nèi)延伸(纖維化的受限帶或F2階段)，接著將其分割(纖維化的延伸帶或F3階段)，以致成為集中的并分離肝細(xì)胞(F4階段或硬化)。上面所述的Métavir分類(Bedossa等人，1994，Hepatology，vol.20，第15-20頁)是最常用的之一。其將肝纖維化分為F0至F4的5個階段，其中F4階段對應(yīng)于最終的硬化階段。當(dāng)在F≥2階段時，纖維化被稱作臨床上顯著的。該纖維化評分F被全世界所有的肝臟專家所使用(根據(jù)不同的分類)。它是用于確定肝臟疾病嚴(yán)重程度、其發(fā)展?jié)摿椭委熣髡椎淖钪匾膮?shù)。其在能夠開出治療處方或者在治療疾病中起決定性輔助作用。由于以下三個原因，這種F-評分分類是半定量的a)對損害的描述是完全定性的，由此是由作為解剖學(xué)病理學(xué)家的醫(yī)師評估；b)該評分只能夠提供有限和受限的階段數(shù)值(4至6，不計算纖維化的消失)；c)作為階段的函數(shù)，纖維化量的進展不是線性的。根據(jù)肝葉內(nèi)纖維化的延伸，定量方面是由于級別的順序特征。
存在用于檢測纖維化的完全定量的方法它是通過稱作圖像分析的半自動技術(shù)檢測纖維化的面積(或表面)。纖維化的面積，其與被認(rèn)為作為參照的纖維化血液標(biāo)志物比較，已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)是比Métavir評分更可靠的檢測(Pilette等人，1998，J Hepatol，vol.28，第439-46頁)。
然而，LNB是昂貴和侵入式檢測，因此其容易復(fù)雜化，并需要至少一天的住院治療。目前LNB的約束(成本，需要住院治療的侵入式程序)限制了其應(yīng)用。求助于這種診斷方法仍是肝臟最專用的。結(jié)果，目前治療的醫(yī)學(xué)處理涉及通常處于該疾病的相對晚期的患者(硬化，通常是并發(fā)的)，所以治療可能性更小。
一些研究清楚地證明LNB是篩選和進行治療的主要限制性因素。開發(fā)LNB的替代方案(本發(fā)明的目標(biāo))是2002年美法共識會談的研究建議的一部分。
包括直至最近的硬化階段(recent cirrhosis stage)的肝臟纖維化是可以回復(fù)的狀況。對纖維化的早期篩選使其可以提出用于治療該疾病或者至少用于限制其結(jié)果的步驟。
LNB的替代方案是非侵入式的方法，居首的是纖維化的血液標(biāo)志物。術(shù)語“纖維化的血液標(biāo)志物”事實上有兩層含義。對于生物學(xué)家，其涉及反映纖維化的動態(tài)過程之一的標(biāo)志物纖維發(fā)生(產(chǎn)生纖維化)、纖維分解(纖維化的破壞)。對于臨床醫(yī)生，其涉及解剖-病理學(xué)檢查時觀察到的纖維化程度的標(biāo)志物，即來自以上兩個動態(tài)過程的靜態(tài)圖像。另外，臨床醫(yī)生將這些指示物區(qū)分為直接標(biāo)志物和間接標(biāo)志物，如果它們來自參與細(xì)胞外基質(zhì)(纖維化)的分子之一則為直接標(biāo)志物，間接標(biāo)志物反映該可見纖維化，但不是整合部分。
以公開號WO 02/16949公開的國際專利申請描述了診斷炎癥、纖維化疾病或癌癥疾病的方法，其中檢測了患者血清或血漿中生化標(biāo)志物的值，通過邏輯函數(shù)將所述數(shù)值進行結(jié)合，對所述邏輯函數(shù)的最終數(shù)值進行分析以確定肝臟中纖維化的存在或者壞死-炎癥的存在。該國際專利申請使其可能提出纖維化測試。然而，所使用的標(biāo)志物是傳統(tǒng)的生物化學(xué)標(biāo)志物(間接標(biāo)志物)，其不是纖維化的特異性指示物，并且隨肝臟疾病過程中所存在的其它紊亂而變化。特別是，由Biopredictive公司銷售的被稱作Fibrotest的對應(yīng)于專利WO 02/16949的方法(還可見Imbert-Bismut等人，Lancet2001，Vol.37，第1069-1075頁)的測試，具有難以正確分類具有F0和F4階段病毒性肝炎形式的缺點。
另外，以WO 03/073822公開的國際專利申請涉及用于診斷患者中肝臟纖維化的存在以及嚴(yán)重性的方法。該方法基于檢測三種標(biāo)志物即α-2-巨球蛋白、透明質(zhì)酸和金屬蛋白酶-1組織抑制劑。
本發(fā)明的目的是提出用于確定纖維化的F階段的新手段，特別是評分F≥2的階段，以精確定量該纖維化的確切程度，以診斷肝臟疾病的存在和/或嚴(yán)重性，以及/或監(jiān)控治療性處理的有效性。
對治療性處理或者延緩疾病的處理的有效性的監(jiān)控是重要的。因為大多數(shù)慢性肝臟疾病伴隨著纖維化，所以治療性處理或者延緩疾病的處理具有減慢纖維化進展或者甚至使纖維化復(fù)原的作用。因此，重要的是能夠具有可以評估纖維化中這種變化的測試。
與現(xiàn)有技術(shù)的手段和方法不同，本發(fā)明不僅涉及原因是病毒的纖維形成，還涉及原因是酒精的纖維化，以及涉及脂肪變性。
而且，本發(fā)明的手段比現(xiàn)有技術(shù)的手段更可靠。
這些手段是(1)纖維化的存在和嚴(yán)重性的診斷性評分，也被稱作肝門(portal)和中隔(septal)纖維化的診斷性評分；(2)定量纖維化面積的非侵入式方法和(3)確定分形維數(shù)的非侵入式方法，該分形維數(shù)指示纖維化導(dǎo)致的肝臟變形程度。
因此，本發(fā)明使得確定臨床上重要的肝門纖維化和中隔纖維化(其由Métavir評分反映)的非侵入式診斷評分成為可能。根據(jù)本發(fā)明，該評分在0(最小纖維化)至1(最大纖維化)的范圍內(nèi)，用作F≥2的Métavir評分的參照閾值固定在0.5。該評分采用主觀半定量纖維化參照-Métavir評分進行計算。Métavir評分是被作為解剖病理學(xué)家的醫(yī)師在顯微鏡下對肝碎片進行檢查后確定的。因此，這種非侵入式評分的標(biāo)準(zhǔn)是虛擬的，因為其相對于由0至4的Métavir評分所反應(yīng)的對纖維化的真實檢測(盡管其自身也是隨意和主觀的)是失真的。該標(biāo)準(zhǔn)是虛擬的，因為其由數(shù)學(xué)公式所產(chǎn)生，并且沒有檢測單位，并且該標(biāo)準(zhǔn)是失真的，因為在Métavir和非侵入式評分之間沒有直接(或者線性)比例。然而，該0至1的評分代表肝門纖維化和中隔纖維化的更精確的檢測，因為其是定量的變量，能夠進行更精確的比較。兩個結(jié)果的例子是個體可以從0.14的評分發(fā)展到0.28的評分，盡管他(她)仍然處于Métavir的F0-F1階段，然而他(她)的纖維化評分已經(jīng)加倍(在相對數(shù)值上的100％進展)。相反，當(dāng)個體從0.48的評分發(fā)展到0.52的評分，其可被錯誤地得出所述個體已經(jīng)從F0-F1階段發(fā)展到F2-F3階段(或者出現(xiàn)“臨床上顯著的”纖維化)的結(jié)論，然而實際上該進展只有8％(相對值-0.48與0.52相比或[(0.52-0.48)/0.52]＝0.08或8％-，或4％-0.52-0.48＝0.04-絕對值)，并且不是臨床上顯著的。
此外，本發(fā)明不僅使確定診斷性評分成為可能，還使得定量肝臟纖維化的面積成為可能。對纖維化的面積的測量使得能獲得這樣的結(jié)果，即對于計算被纖維化占據(jù)的肝臟的百分比來說，比目前所使用的纖維化的MétavirF評分更精確。到目前為止，在任何所描述的方法中這樣的定量仍是不可能的。它是纖維化面積的指數(shù)(或者評估評分)，在2％至55％的范圍內(nèi)，其中2％和55％分別為參照患者群中最小和最大纖維化面積。該指數(shù)是采用定量的纖維化參照計算的。因此，該指數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)是真實的，因為它直接(非失真)反映了客觀而是非隨意的真實檢測。因此，它是精確并且有意義的檢測，因為它評估實際數(shù)值而沒有失真。兩個結(jié)果的例子是個體可以從8.2％的纖維化評估面積發(fā)展為16.4％的纖維化評估面積。在病因被阻斷或者接受抗纖維化治療后，患有硬化的個體可以從35％的纖維化評估面積回復(fù)到31％，接著27％，最終23％，然而盡管是有規(guī)律的下降，該患者仍處于硬化階段(F4)。
此外，本發(fā)明不僅使確定肝臟纖維化的診斷性評分和定量肝臟纖維化面積成為可能，還使確定肝臟的結(jié)構(gòu)(分形維數(shù))成為可能。對肝臟結(jié)構(gòu)的檢測使得能夠獲得比目前所用的纖維化的Métavir F評分更精確的結(jié)果以評估肝臟變形的程度。纖維化導(dǎo)致的這種肝臟變形程度是通過圖像分析所得到的分形維數(shù)，該圖像分析基于包括Kolmogorov維數(shù)(Kolmogorov dimension)(Moal F等人，2002，Hepatology，vol.36，第840-9頁)在內(nèi)的多種評估因素?，F(xiàn)有技術(shù)中沒有方法使得通過檢驗血液標(biāo)志物確立分形維數(shù)的非侵入式檢測成為可能。
事實上，本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)開發(fā)了在下面的表1中所提供的評分 表1 診斷有效性是與LNB相比被正確分類的個體的百分比。本發(fā)明診斷性評分的診斷有效性在該評分的末端會提高。SNIFF診斷性評分不會將任何患有病毒性肝炎的患者錯誤地分類為F0和F4(極少的F3分類錯誤)。換句話說，這種SNIFF評分對于臨床醫(yī)生所面臨的兩個重要問題是非常有效的(100％的正確回答)是否存在錯誤劃分沒有纖維化的個體或者患有硬化的個體的風(fēng)險？對于50％的具有最低和最高值的患者，使用5個變量的SNIFF評分的診斷有效性是90.8％。已知LNB的誤差，特別是在纖維化的低級階段(觀察誤差)和高級階段(樣品誤差)，該誤差率是接近0％。
因此，具體地，本發(fā)明的目的是以比現(xiàn)有技術(shù)的手段所能夠達(dá)到的更高的精確度確定患有或者沒有肝臟疾病的患者是否患有纖維化以及確定肝臟損傷的嚴(yán)重性(損害程度)。本發(fā)明的測試具有能夠每隔6至12個月進行一次的優(yōu)點，而根據(jù)共識會談LNB只能夠根據(jù)情況每3至5年重復(fù)一次。
本發(fā)明的方法包括對與特定組合中所采用的間接標(biāo)志物相關(guān)的各種直接纖維化標(biāo)志物進行組合和檢測，其中所述標(biāo)志物被稱作變量。檢測來自個體的樣品中的這些變量。對這些變量的選擇是由通過各種數(shù)學(xué)模型的統(tǒng)計學(xué)分析所得到的變量組合的最佳整體有效性決定的，每種變量提供了一份有統(tǒng)計學(xué)上顯著并且不依賴其他變量的信息。換句話說，其包括最少數(shù)目的變量而達(dá)到的最佳有效性。這意味著，與可能已經(jīng)被公開的更受限的組合相比，該數(shù)學(xué)模型中任何新變量會提供一份有創(chuàng)造性的信息(或者增加診斷有效性效率)。
在本文中，術(shù)語“樣品”是指在任何分析之前，從個體取出的樣品。該樣品可以是來自所述個體的生物介質(zhì)，例如血液、血清、血漿、尿或唾液，也可以是來自所述個體的一種或者多種細(xì)胞，例如組織活檢樣品或者更具體是肝臟活檢樣品。
術(shù)語“肝臟疾病”旨在指選自病毒起因的慢性肝纖維化、酒精起因的慢性肝纖維化以及慢性肝脂肪變性的肝臟疾病。
在本文中，術(shù)語“個體”指男性、女性或者動物、年輕人或者成年人、健康人或者易于患有或者患有肝臟疾病或其他疾病的人，其中所述肝臟疾病例如為病毒起因的慢性肝纖維化、酒精起因的慢性肝纖維化以及慢性肝脂肪變性，受到影響的個體可能接受或者未接受針對該肝臟疾病的治療性處理。
因此，本發(fā)明涉及診斷個體中肝臟疾病的存在和/或嚴(yán)重性的方法，和/或監(jiān)控肝臟疾病的治療性處理的有效性的方法，其包括建立至少一種非侵入式診斷性評分，特別是用于肝門纖維化和中隔纖維化的診斷性評分，和/或用于纖維化面積的非侵入式評估評分，和/或用于分形維數(shù)的非侵入式評估評分，其通過進行下面的步驟來實現(xiàn) a)為了確定纖維化的面積或者分形維數(shù)， 檢測來自所述個體的樣品中的至少一種選自α-2巨球蛋白(A2M)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、載脂蛋白A1(ApoA1)、III-型前膠原N-末端前肽(P3P)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、膽紅素、γ-球蛋白(GLB)、血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALAT)、脲、鈉(NA)、糖血、甘油三酯、白蛋白(ALB)、堿性磷酸酶(ALP)、YKL-40(人類軟骨糖蛋白39)、基質(zhì)金屬蛋白酶1組織抑制劑(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)和鐵蛋白的變量， a’)為了確立用于肝門纖維化和中隔纖維化的診斷性評分，測量在來自所述個體的樣品中至少三種選自α-2巨球蛋白(A2M)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、載脂蛋白A1(ApoA1)、III-型前膠原N-末端前肽(P3P)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、膽紅素、γ-球蛋白(GLB)、血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALAT)、脲、鈉(NA)、糖血、甘油三酯、白蛋白(ALB)、堿性磷酸酶(ALP)、YKL-40(人類軟骨糖蛋白39)、基質(zhì)金屬蛋白酶1組織抑制劑(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)和鐵蛋白的變量；這三種變量中的至少一種選自血小板(PLT)和凝血酶原時間(PT)；在恰好檢測三種變量的情況下，這三種變量合起來不能是血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)和膽紅素；優(yōu)選地，所選擇的該至少三種變量合起來不包括α-2巨球蛋白(A2M)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)和基質(zhì)金屬蛋白酶1組織抑制劑(TIMP-1)， b)任選地，收集至少一種表征所述個體的臨床變量； 為了用于肝門纖維化和中隔纖維化的診斷性評分，以上的步驟a’)和b)檢測或收集至少4種變量， c)將所述變量結(jié)合進邏輯或線性函數(shù)中，以獲得用于肝門纖維化和中隔纖維化的診斷性評分，和/或用于纖維化面積的診斷性評估評分，和/或用于分形維數(shù)的診斷性評估評分； d)基于在進行步驟(c)的結(jié)合時所得到的評分，診斷所述疾病的存在和/或嚴(yán)重性，和/或所述治療的有效性。
根據(jù)本發(fā)明的一個實施方式，在步驟a’中，所述至少3種變量選自α-2巨球蛋白(A2M)、載脂蛋白A1(ApoA1)、III-型前膠原N-末端前肽(P3P)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、膽紅素、γ-球蛋白(GLB)、血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALAT)、脲、鈉(NA)、糖血、甘油三酯、白蛋白(ALB)、堿性磷酸酶(ALP)、YKL-40(人類軟骨糖蛋白39)、基質(zhì)金屬蛋白酶1組織抑制劑(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)和鐵蛋白；這三種變量中至少一種選自血小板(PLT)和凝血酶原時間(PT)；在恰好檢測三種變量的情況下，這三種變量合起來不能是血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)和膽紅素；優(yōu)選地，所選擇的至少三種變量合起來不包括α-2巨球蛋白(A2M)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)和基質(zhì)金屬蛋白酶1組織抑制劑(TIMP-1)。
根據(jù)本發(fā)明的另一實施方式，在步驟a’中，所述的至少3種變量選自α-2巨球蛋白(A2M)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、載脂蛋白A1(ApoA1)、III-型前膠原N-末端前肽(P3P)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、膽紅素、γ-球蛋白(GLB)、血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALAT)、脲、鈉(NA)、糖血、甘油三酯、白蛋白(ALB)、堿性磷酸酶(ALP)、YKL-40(人類軟骨糖蛋白39)、基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)和鐵蛋白；這三種變量中至少一種選自血小板(PLT)和凝血酶原時間(PT)；在恰好檢測三種變量的情況下，這三種變量合起來不能血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)和膽紅素；優(yōu)選地，所選擇的至少三種變量合起來不為α-2巨球蛋白(A2M)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)和基質(zhì)金屬蛋白酶1組織抑制劑(TIMP-1)。
本發(fā)明還涉及肝纖維化的診斷性測試，其采用本發(fā)明的方法。出于本發(fā)明的目的，術(shù)語“診斷性”指確定纖維化的存在，和/或確定其進展的階段。為了建立該診斷，所使用的測試或者方法的特異性通常是所期望的。
有利的是，表征個體的臨床變量選自體重(重量)、體重指數(shù)(BMI)即重量/(尺寸或高度)2的比值、在收集樣品時的年齡以及病因。術(shù)語“病因”(或病原)指酒精性或者病毒性病因。因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚的是，只有已經(jīng)診斷出肝臟疾病，例如病毒起因的慢性肝纖維化或者酒精起因的慢性肝纖維化時，才可以使用“病因”臨床變量。
在本發(fā)明的方法中，在步驟(c)之前，在步驟(a)或者(a’)中所檢測的變量以及在步驟(b)中所收集的變量可以互相結(jié)合。因此，在本發(fā)明所采用的邏輯函數(shù)中可使用“自然變量”或者“組合變量”，其中所述“原始變量”也被稱作“獨立或者簡單變量”，其為在被加入到邏輯函數(shù)之前沒有經(jīng)歷任何修飾的變量，所述“組合變量”是獨立變量相互之間的數(shù)學(xué)組合。作為例子，在本發(fā)明中可以使用的組合變量以非窮盡的方式包括 -GAPRI＝((GGT/45)/PLT)*100 -GLOPRI＝(GLB/PLT)*100 -GLOTRI＝(GLB/PT)*100 -HYAPRI＝(HA/PLT)*100 -HYATRI＝(HA/PT)*100 -AMPRI＝(A2M/PLT)*100 -AMTRI＝(A2M/PT)*100 -HYAMTRI＝(HA*A2M)/(PT*100) -HYAMPRI＝(HA*A2M)/(A2M*100)＝HA/100 -HAMPRI＝(HA*A2M)/(PLT*100) -HYAMPTRI＝(HA*A2M)/(PLT*PT) -GHAMPRI＝(GLB*HA*A2M)/(PLT*1000) -GHAMTRI＝(GLB*HA*A2M)/(PT*1000) - GHAMPTRI＝(GLB*HA*A2M)/(PLT*PT*10)。
這些組合變量的首位字母縮寫詞使用獨立(簡單)變量的縮寫作為前綴，后綴RI表示“比例指數(shù)”。
需要注意的是，一種原理相似的被稱作APRI(＝ASAT/PLT)的不同評分已經(jīng)被公開(Wai等人，Hepatology，2003，vol38，第518-526頁)。以下稱作RAT的該ASAT/ALAT比例，也是現(xiàn)有技術(shù)的一部分。
根據(jù)本發(fā)明，名稱非侵入式肝臟纖維化評分(首位字母縮寫詞SNIFF)被提供給由標(biāo)志物組合所構(gòu)成的評分，其中標(biāo)志物優(yōu)選血液標(biāo)志物，該評分在0至1的范圍內(nèi)，其評估病毒性起因的肝臟疾病(SNIFF)或酒精性起因的肝臟疾病(SNIFFA)或者這兩種病因的肝臟疾病(SNIFFAV)或者脂肪變性起因的肝臟疾病(SNIAFFSA)的Métavir F型評分。名稱非侵入式肝臟纖維化面積評分(首位字母縮寫詞SNIAFF)用于由標(biāo)志物組合所構(gòu)成的評分，其中標(biāo)志物優(yōu)選血液標(biāo)志物，該評分在大多數(shù)病例中在5至55％的范圍內(nèi)。其為病毒性起因的肝臟疾病(SNIAFF)或酒精性起因的肝臟疾病(SNIAFFA)或者這兩種病因的肝臟疾病(SNIAFFAV)或者脂肪變性起因的肝臟疾病(SNIAFFSA)的肝臟纖維化面積的評估評分。
肝臟病理的嚴(yán)重性是對肝臟中纖維化程度的評估。
在本發(fā)明方法的步驟(a’)中，對來自個體的至少3種變量進行檢測，優(yōu)選檢測4種、5種、6種或7種變量。
在本發(fā)明的步驟(a)或(a’)中進行的檢測是針對變量(A2M、HA、膽紅素、PLT、PT、脲、NA、糖血、甘油三酯、ALB和P3P的情況)的定量進行的檢測，或者針對對變量(GGT、ASAT、ALAT和ALP的情況)的酶活的定量進行的檢測。本領(lǐng)域技術(shù)人員知道對給定物質(zhì)或蛋白質(zhì)或其酶活進行定量的各種直接或間接方法。這些方法可以使用一種或者多種在免疫測定技術(shù)(放射免疫測定或RIA、ELISA測定、Western印跡等)中識別所述蛋白質(zhì)的單克隆或者多克隆抗體，使用Northern印跡、條帶印跡或者PCR型技術(shù)分析所述蛋白質(zhì)的mRNA的量、以及諸如任選地結(jié)合質(zhì)譜的HPLC等技術(shù)。上述的蛋白質(zhì)活性測定使用這些蛋白質(zhì)各自特異的至少一種底物進行測定。國際專利申請WO 03/073822列舉了可以用于定量α-2巨球蛋白(A2M)和透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)的方法。
作為例子，下面以非窮盡的方式提供了能夠用于作為本發(fā)明對象的方法的步驟(a)或(a’)中對血液樣品進行檢測的商品化試劑盒或測定的優(yōu)選列表 -凝血酶原時間快速時間(QT)是通過將鈣促凝血酶原激酶(例如Neoplastin CI plus，Diagnostica Stago，Asnières，F(xiàn)rance)加入到血漿中被確定的，并以秒測量凝血時間。為了獲得凝血酶原凝血酶原時間(PT)，從一組被評估為100％的正常血漿的各種稀釋液繪制了校準(zhǔn)直線。從患者血漿中所得到的結(jié)果被表示為相對于該組正常血漿的百分比。PT的上限值不受限制，并可以超過100％。
-A2M其測定是通過使用例如Behring濁度計分析儀的激光免疫比濁確定的。試劑可為兔抗-人A2M抗血清。
-HA通過ELISA(例如Corgenix，Inc.Biogenic SA 34130Mauguio France)確定血清濃度，其使用從牛軟骨中分離的特異性結(jié)合HA的蛋白質(zhì)。
-P3P通過RIA(例如RIA-gnost PIIIP試劑盒，Hoechst，Tokyo，Japan)確定血清濃度，其使用鼠抗牛皮膚PIIINP的單克隆抗體。
-PLT在含有EDTA(乙二銨四乙酸)的真空采血管(vacutainer)(例如Becton Dickinson，F(xiàn)rance)中收集血液樣品，并可在Advia120計數(shù)器(Bayer Diagnostic)上進行分析。
-脲例如通過“動力學(xué)UV脲測定”(Roche Diagnostics)進行測定。
-GGT例如通過“針對Szasz標(biāo)準(zhǔn)化的γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶測定”(Roche Diagnostics)進行測定。
-膽紅素例如通過“膽紅素測定”(Jendrassik-Grof法)(RocheDiagnostics)進行測定。
-ALP例如通過“ALP IFCC”(Roche Diagnostics)進行測定。
-ALAT例如通過“ALT IFCC”(Roche Diagnostics)進行測定。
-ASAT例如通過“AST IFCC”(Roche Diagnostics)進行測定。
-鈉例如通過“鈉離子選擇性電極”(Roche Diagnostics)進行測定。
-糖血例如通過“葡萄糖GOD-PAP”(Roche Diagnostics)進行測定。
-甘油三酯例如通過“甘油三酯GPO-PAP”(Roche Diagnostics)進行測定。
-脲、GGT、膽紅素、堿性磷酸酶、鈉、糖血、ALAT和ASAT可以在分析儀上進行分析，例如Hitachi917，Roche Diagnostics GmbH，D-68298 Mannheim，Germany。
-γ-球蛋白、白蛋白和α-2球蛋白通過蛋白質(zhì)電泳進行測定，例如毛細(xì)管電泳(Capillarys)，SEBIA23，rue M Robespierre，92130 IssyLes Moulineaux，F(xiàn)rance。
-ApoA1例如通過使用分析儀以“Determination of apolipoproteinA-1(確定載脂蛋白A-1)”(Dade Behring)進行測定，例如BN2 DadeBehring Marburg GmbH，Emil von Behring Str.76，D-35041 Marburg，Germany。
-TIMP1例如通過TIMP1-ELISA，Amersham進行測定。
-MMP2例如通過MMP2-ELISA，Amersham進行測定。
-YKL-40例如通過YKL-40 Biometra，YKL-40/8020，QuidelCorporation進行測定。
-PIIIP例如通過PIIIP RIA試劑盒，OCFKO7-PIIIP，cis biointernational進行測定。
對于作為本發(fā)明對象的方法的步驟(a)或(a’)中所檢測變量，所得到的數(shù)值表示為 -mg/dl，α-2巨球蛋白(A2M)， -μg/l，透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)， -g/l，載脂蛋白A1(ApoAl)**， -U/ml，III-型前膠原N-末端前肽(P3P)**， -IU/l，γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)， -μmol/l，膽紅素， -g/l，γ-球蛋白(GLB)*， -Giga/l，血小板(PLT)， -％，凝血酶原時間(PT)， -IU/l，天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)， -IU/l，丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALAT)， -mmol/l，甘油三酯*， -mmol/l，脲*， -mmol/l，鈉(NA)、 -mmol/l，糖血*， -g/l，白蛋白(ALB)*， -IU/l，堿性磷酸酶(ALP)， -ng/ml，TIMP1， -ng/ml，MMP2， -ng/ml，YKL-40， -U/ml，PIIIP， -μg/l，鐵蛋白。
在作為本發(fā)明對象的方法的步驟(b)中所收集的臨床變量表示為 -kg，在收集樣品的日期時的體重(重量)， -年，在收集樣品的日期時的年齡(年齡)*， -kg/m2，在BMI*中kg，體重；m(米)，身高， -代碼1為酒精病因，2為病毒病因。
使用星號(*)強調(diào)的變量表示為一位(*)或者兩位小數(shù)(**)，而其它的則沒有小數(shù)。
有利的是，在作為本發(fā)明對象的方法的步驟(a)或(a’)中所使用的來自個體的樣品是來自所述個體的生物基質(zhì)，例如血液、血清、血漿、尿或唾液，或者是來自所述個體的一種或者多種細(xì)胞，例如組織活檢樣品或者更具體是肝臟活檢樣品。
在本發(fā)明中，可以預(yù)料到在步驟(a)或(a’)中檢測的各種變量是在來自患者的不同樣品中檢測的。以非窮盡的方式舉例而言，一種變量是在來自個體的尿中檢測的，而另外3種是在來自相同個體的血液中檢測的，在相對短的時間段中取出這兩種樣品(血液和尿)。然而，特別優(yōu)選的是，在作為本發(fā)明對象的方法的步驟(a)或(a’)中所使用的來自個體的樣品是在任何檢測之前從個體取出的血液樣品。
根據(jù)本發(fā)明的第一實施方式，在作為本發(fā)明對象的方法的步驟(c)中將變量α-2巨球蛋白(A2M)和凝血酶原時間(PT)以及至少兩種選自血小板(PLT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、脲、透明質(zhì)酸(HA)和年齡的變量進行結(jié)合。有利的是，所獲得的評分是使用至少4種變量的病毒起因的肝臟纖維化的非侵入式評分。
在該第一實施方式中可得到的優(yōu)選評分中，優(yōu)選在步驟(c)中結(jié)合以下變量的評分 -α-2巨球蛋白(A2M)、凝血酶原時間(PT)、透明質(zhì)酸(HA)和年齡(被稱作SNIFF 4a的評分)； -α-2巨球蛋白(A2M)、凝血酶原時間(PT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)和年齡(被稱作SNIFF 4b的評分)； -α-2巨球蛋白(A2M)、凝血酶原時間(PT)、血小板(PLT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)和年齡(被稱作SNIFF 5的評分)； -α-2巨球蛋白(A2M)、凝血酶原時間(PT)、血小板(PLT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、脲和透明質(zhì)酸(HA)(被稱作SNIFF 6的評分)； -α-2巨球蛋白(A2M)、凝血酶原時間(PT)、血小板(PLT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、脲、透明質(zhì)酸(HA)和年齡(被稱作SNIFF 7的評分)。
這樣可得到的評分是病毒起因的肝臟纖維化的非侵入式評分，其被稱作SNIFF，其使用4至7個變量為Métavir F型評分提供了0至1的評估評分。
在本發(fā)明的第二實施方式中，除了凝血酶原時間(PT)變量外，在步驟(c)中結(jié)合了至少3種選自天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALAT)和堿性磷酸酶(ALP)、年齡、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)和α-2巨球蛋白(A2M)的變量。這樣可得到的評分是酒精起因的肝臟纖維化的非侵入式評分，其被稱作SNIFFA。
在該第二實施方式中可獲得的優(yōu)選評分中，優(yōu)選在步驟(c)中結(jié)合了以下變量的評分 -凝血酶原時間(PT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALAT)和堿性磷酸酶(ALP)(被稱作SNIFFA 4b的評分)， -凝血酶原時間(PT)、年齡、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)和α-2巨球蛋白(A2M)(被稱作SNIFFA 4c的評分)。
根據(jù)本發(fā)明的第三實施方式，在該方法的步驟(c)中結(jié)合了至少以下的4種變量透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、膽紅素和血小板(PLT)。這樣所獲得的評分是肝臟纖維化面積的非侵入式評估評分(被稱作使用至少4個變量的SNIAFF)，其在大部分病例中在5至35％的范圍內(nèi)。優(yōu)選地，除了上面所述的4種變量，在步驟(c)中結(jié)合至少1種、更優(yōu)選至少2種、甚至更優(yōu)選至少4種選自α-2巨球蛋白(A2M)、脲、載脂蛋白A1(ApoAl)和γ-球蛋白(GLB)的變量。
在該第三實施方式中可獲得的優(yōu)選評分中，優(yōu)選在步驟(c)中所結(jié)合以下變量的評分 -透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、膽紅素、血小板(PLT)和載脂蛋白A1(ApoA1)(被稱作SNIAFF 5的評分)； -透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、膽紅素、血小板(PLT)、α-2巨球蛋白(A2M)和脲(被稱作SNIAFF 6a的評分)； -透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、膽紅素、血小板(PLT)、脲和γ-球蛋白(GLB)(被稱作SNIAFF 6b的評分)。
在本發(fā)明的第四實施方式中，可以獲得被稱作SNIDAFF的評分，其是基于用于酒精性肝臟疾病和病毒性肝臟疾病的通常變量的用于篩選肝臟纖維化的非侵入式評分，在0至1的范圍內(nèi)。出于本發(fā)明的目的，術(shù)語“篩選”應(yīng)當(dāng)被理解為在不患有已知肝臟疾病的患者中或者在患有已知慢性肝臟疾病的患者中尋找纖維化的存在，而不管其階段。對于篩選來說，該測試的靈敏性是特別重要的標(biāo)準(zhǔn)。
有利的是，該SNIDAFF評分是通過在本發(fā)明方法的步驟(c)中結(jié)合至少以下4種變量而獲得的血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)和年齡。優(yōu)選地，除了上面所述的4種變量以外，在步驟(c)中結(jié)合至少一種、優(yōu)選至少兩種選自堿性磷酸酶(ALP)、α-2巨球蛋白(A2M)和脲的變量。
這樣，在該第四實施方式中可獲得的優(yōu)選評分中，優(yōu)選在步驟(c)中結(jié)合以下變量的評分 -血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、年齡、堿性磷酸酶(ALP)和α-2巨球蛋白(被稱作SNIDAFF 6a的評分)； -血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、年齡、堿性磷酸酶(ALP)和脲(被稱作SNIDAFF 6b的評分)。
在本發(fā)明的第五實施方式中，可得到被稱作SNIFFSA的評分，其為脂肪變性肝臟疾病的肝臟纖維化的非侵入式評分，在0至1的范圍內(nèi)。有利的是，該SNIFFSA評分可以通過在本發(fā)明方法的步驟(c)中除了凝血酶原時間(PT)變量以外還結(jié)合至少3種選自天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、甘油三酯、年齡和糖血的變量而獲得。
在該第五實施方式中可獲得的優(yōu)選評分中，優(yōu)選在步驟(c)中結(jié)合以下變量的評分 -凝血酶原時間(PT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、年齡和糖血(被稱作SNIFFSA 4a的評分)， -凝血酶原時間(PT)、甘油三酯、年齡和糖血(被稱作SNIFFSA 4b的評分)。
在本發(fā)明的第六實施方式中，可獲得被稱作SNIFFAV的評分，其為病毒性或酒精性病理的肝臟纖維化的非侵入式評分，在0至1的范圍內(nèi)。有利的是，該SNIFFAV評分可以通過在本發(fā)明方法的步驟(c)中結(jié)合下面6種變量中的至少5種變量而獲得α-2巨球蛋白(A2M)、血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)、脲、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)或病因。
在該第六實施方式中可獲得的優(yōu)選評分中，優(yōu)選在步驟(c)中結(jié)合以下變量的評分 -α-2巨球蛋白(A2M)、血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)、脲和透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)(被稱作SNIFFAV 5的評分)； -α-2巨球蛋白(A2M)、血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)、脲、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)和病因(被稱作SNIFFAV 6的評分)。
在本發(fā)明的第七實施方式中，可得到被稱作SNIAFFAV的評分，其為病毒性或酒精性肝臟病理的肝臟纖維化面積的非侵入式評估評分，在大多數(shù)病例中在5至55％的范圍內(nèi)。有利的是，該SNIAFFAV評分可以通過在本發(fā)明方法的步驟(c)中除了凝血酶原時間(PT)變量之外，還結(jié)合至少3種、優(yōu)選至少4種、更優(yōu)選5種、6種或7種選自血小板(PLT)、脲、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、膽紅素、α-2巨球蛋白(A2M)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、γ-球蛋白(GLB)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)和病因的變量。
因此，在該第7實施方式中可得到的優(yōu)選評分中，優(yōu)選在步驟(c)中結(jié)合以下變量的評分 -凝血酶原時間(PT)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、膽紅素和α-2巨球蛋白(A2M)(被稱作SNIAFFAV 4的評分)， -凝血酶原時間(PT)、血小板(PLT)、脲、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)和病因(被稱作SNIAFFAV 5的評分)， -凝血酶原時間(PT)、脲、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、膽紅素和α-2巨球蛋白(A2M)(被稱作SNIAFFAV 5b的評分)， -凝血酶原時間(PT)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、膽紅素、α-2巨球蛋白(A2M)和病因(被稱作SNIAFFAV 5c的評分)， -凝血酶原時間(PT)、血小板(PLT)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、膽紅素、α-2巨球蛋白(A2M)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、γ-球蛋白(GLB)和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)(被稱作SNIAFFAV 8的評分)。
在本發(fā)明的第八實施方式中，可得到被稱作SNIDIFFAV的評分，其為病毒性或者酒精性肝臟病理的肝臟纖維化的分形維數(shù)的非侵入式評估評分，在大多數(shù)病例中在0.7至1.3的范圍內(nèi)。有利的是，該SNIDIFFAV評分可通過在本發(fā)明方法的步驟(c)中結(jié)合下列5種變量中的至少4種而獲得α-2巨球蛋白(A2M)、白蛋白(ALB)、凝血酶原時間(PT)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALAT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)和年齡。
在該第八實施方式中可得到的優(yōu)選評分中，優(yōu)選在步驟(c)中結(jié)合以下變量的評分 -α-2巨球蛋白(A2M)、凝血酶原時間(PT)、白蛋白(ALB)和年齡(被稱作SNIDIFFAV 4a的評分)， -α-2巨球蛋白(A2M)、凝血酶原時間(PT)、白蛋白(ALB)和透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)(被稱作SNIDIFFAV 4b的評分)， -α-2巨球蛋白(A2M)、白蛋白(ALB)、凝血酶原時間(PT)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALAT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)和年齡(被稱作SNIDIFFAV 6的評分)。
在本發(fā)明的第九實施方式中，可得到被稱作SNIAFFA的評分，其為酒精性肝臟病理的肝臟纖維化面積的非侵入式評估評分，大多數(shù)病例中在5至55％的范圍內(nèi)。有利的是，該SNIAFFA評分可以通過在本發(fā)明方法的步驟(c)中除了凝血酶原時間(PT)變量外，還結(jié)合至少3種選自α-2巨球蛋白(A2M)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、血小板(PLT)和個體重量的變量。
在該第九實施方式中可得到的優(yōu)選評分中，優(yōu)選在步驟(c)中結(jié)合以下變量的評分 -凝血酶原時間(PT)、α-2巨球蛋白(A2M)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)和個體重量(被稱作SNIAFFA 4a和SNIAFFA 4b的評分)， -凝血酶原時間(PT)、α-2巨球蛋白(A2M)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)和血小板(PLT)(被稱作SNIAFFA 4c的評分)。
在本發(fā)明的第十實施方式中，可得到被稱作SNIAFFSA的評分，其為脂肪變性肝臟病理的肝臟纖維化面積的非侵入式評估評分，大多數(shù)病例中在5至35％的范圍內(nèi)。有利的是，該SNIAFFSA評分可以通過在本發(fā)明方法的步驟(c)中除了凝血酶原時間(PT)、γ-球蛋白(GLB)和重量3種變量外，還結(jié)合至少一種、優(yōu)選至少兩種選自透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、血小板(PLT)、個體的年齡和BMI的變量。
在該第十實施方式中可得到的優(yōu)選評分中，優(yōu)選在步驟(c)中結(jié)合以下變量的評分 -凝血酶原時間(PT)、γ-球蛋白(GLB)、體重和年齡(被稱作SNIAFFSA 4的評分)， -凝血酶原時間(PT)、γ-球蛋白(GLB)、體重、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、血小板(PLT)和BMI(被稱作SNIAFFSA 6的評分)。
作為變體，本發(fā)明還涉及診斷個體中肝臟病理的存在和/或指示其嚴(yán)重性，和/或監(jiān)控對肝臟疾理的治療性處理的有效性的方法，其包括下列步驟 a’)在來自所述個體的樣品內(nèi)檢測至少一種選自α-2巨球蛋白(A2M)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、載脂蛋白A1(ApoA1)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、膽紅素、γ-球蛋白(GLB)、血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALAT)、脲、鈉(NA)、甘油三酯、糖血、白蛋白(ALB)和堿性磷酸酶(ALP)、YKL-40(人軟骨糖蛋白39)、基質(zhì)金屬蛋白酶1組織抑制劑(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)和鐵蛋白的變量； b’)任選地收集至少一種表征所述個體的臨床變量； c’)在邏輯或者線性函數(shù)中，將在(a’)中所檢測的變量以及任選的在(b’)中所收集的變量進行結(jié)合，以獲得評分； d’)基于在進行步驟(c)的結(jié)合時所得到的評分，診斷所述病理的存在和/或嚴(yán)重性。
上面所述步驟(a)、(b)、(c)和(d)的特征(樣品、變量的測定、變量的單位)經(jīng)必要修改后也適用于步驟(a’)、(b’)、(c’)和(d’)。
根據(jù)本發(fā)明的該變體的第一實施方式，可在步驟(a’)中檢測以下兩種變量α-2巨球蛋白(A2M)和透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)，以獲得被稱作SNIAFFA 2的評分，其為酒精性肝臟病理的肝臟纖維化面積的非侵入式評估評分，在大部分病例中，在5至55％的范圍內(nèi)。
可以將這兩種變量與至少一種、優(yōu)選至少兩種選自個體體重和III-型前膠原N-末端前肽(P3P)的變量進行結(jié)合。
在可在本發(fā)明該變體的第一實施方式中得到的優(yōu)選評分中，優(yōu)選在步驟(c)中結(jié)合以下變量的評分 -α-2巨球蛋白(A2M)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)和個體的體重，這樣可以基于三種變量獲得SNIAFFA 3評分， -α-2巨球蛋白(A2M)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、個體的體重和III-型前膠原N-末端前肽(P3P)(被稱作SNIAFFA 4的評分)。
根據(jù)本發(fā)明該變體的第二實施方式，可在本發(fā)明的方法的步驟(a’)中檢測丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALAT)變量，以便獲得被稱作SNIAH的評分，其為病毒性肝臟病理的肝臟壞死-炎癥活性的非侵入式評估評分。
根據(jù)本發(fā)明該變體的第三實施方式，可在本發(fā)明的方法的步驟(a’)中檢測以下3種生物學(xué)變量凝血酶原時間(PT)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALAT)和堿性磷酸酶(ALP)。在本發(fā)明的步驟(c’)中將這3種變量結(jié)合在一起使得能獲得SNIFFA 3評分(使用3種變量的酒精起因的肝臟纖維化的非侵入式評分)。
另外，可以替換的是，可以使用采用四種變量的被稱作SNIFFA的酒精起因的肝臟纖維化的非侵入式評分。這樣，通過在步驟(c’)中結(jié)合下面的變量確定了采用4種變量的SNIFFA 4評分α-2巨球蛋白(A2M)、年齡、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)和丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALAT)，這使得獲得SNIFFA 4a評分成為可能。
通過結(jié)合生物學(xué)或者臨床標(biāo)志物(或者自變量)預(yù)測所述SNIFF、SNIFFA、SNIFFSA、SNIAH、SNIDAFF和SNIFFAV評分(或者因變量)。這些結(jié)合(或者模型)已經(jīng)通過被稱作二元邏輯回歸的統(tǒng)計方法獲得，程序如下 首先通過單變量分析測試自變量。
接著，對在單變量分析中有顯著性的自變量在多變量分析中通過二元邏輯回歸以逐步遞增或遞減的選擇進行測試。
該邏輯回歸產(chǎn)生了以以下形式的每種評分的公式 評分＝a0+a1x1+a2x2+... 其中，系數(shù)ai是常數(shù)，變量xi是自變量。
該評分相應(yīng)于p的分對數(shù)，其中p是臨床上顯著纖維化存在的可能性。采用下面的公式計算這種可能性p P＝exp(a0+a1x1+a2x2+...)/(1+exp(a0+a1x1+a2x2+...)) 或者p＝l/(1+exp(-a0-a1x1-a2x2-...)) 其中系數(shù)ai和變量xi對應(yīng)于評分公式中的系數(shù)和變量。通過可能性p＞0.5確定損害的存在(例如，臨床上顯著的纖維化)。需要注意的是，術(shù)語邏輯回歸“評分”和SNIFF“評分”并不對應(yīng)于上述等式中的相同術(shù)語。在臨床應(yīng)用中，SNIFF對應(yīng)于p。
下面我們提供了每種SNIFF評分的表格，其中第一列是每種自變量的名稱，第二列是關(guān)聯(lián)系數(shù)ai(在下文中和通常在文獻中稱作β，在下面的表格中稱作B)，接著是其標(biāo)準(zhǔn)偏差(在下面的表格中被稱作S.D)，接著是其顯著程度(在下面的表格中稱作signif)，最后兩列提供了exp(ai)置信區(qū)間，即相應(yīng)的優(yōu)勢比(在下面的表格中稱作exp(β))的置信區(qū)間(在下面的表格中稱作CI)。
對于在上述本發(fā)明變體中定義的每種SNIFF評分，模型的整體預(yù)測值是由在第二表格中正確分類的個體的“整體百分率”所反映的。
對于可適用等式中的每個評分，每個自變量xi的系數(shù)βi可從對應(yīng)于所述評分±3.3標(biāo)準(zhǔn)偏差的表格中提供的值β變化，該數(shù)值也提供在表格中。類似地，a0可以從表格中所給定的常數(shù)值±3.3標(biāo)準(zhǔn)偏差變化。
以下面的表格為基礎(chǔ)舉例而言，希望使用采用4種標(biāo)志物的SNIFF4a評分的本領(lǐng)域技術(shù)人員將采用下面的公式 p＝l/1+exp(-a0-a1(HA，μg/l)-a2(PT，％)-a3(A2M，mg/dl)-a4(年齡，年))，其中 -a0在-3.130和7.860之間(2.365±3.3×1.665)，優(yōu)選a0為2.365， -a1在-0.002和0.024之間(0.011±3.3×0.004)，優(yōu)選a1為0.011， -a2在-0.118和-0.006之間(-0.062±3.3×0.017)，優(yōu)選a2為-0.062， -a3在0.003和0.009之間(0.006±3.3×0.001)，優(yōu)選a3為0.006， -a4在-0.016和0.076之間(0.030±3.3×0.014)，優(yōu)選a4為0.030。
該SNIFF評分是以總量的形式(包括了所有的個體)或者優(yōu)化的形式表示的，在這種情況中，從分析中去除極端個體，其特征是學(xué)生化殘差(studentized residue)大于3。在數(shù)值方面，它們一直較小，通常≤5％。由此，在后面所提供的表格中，以“o”指出的一些，例如SNIFF 4ao，提供在該優(yōu)化之后所獲得的系數(shù)β。
另外，對于在本發(fā)明中沒有提供各種常數(shù)a0和ai的評分來說，希望使用它的本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠確定所述常數(shù)。于是，必要的是具有含有所使用的(如在步驟a與b中所檢測的)自變量的數(shù)據(jù)庫，以及具有所研究的病理的個體群(酒精或病毒或脂肪變性)，理想的是數(shù)百人，然后計算在步驟c中所指出的以及上面所解釋的系數(shù)ai(或β)。因變量是所尋求的損害，例如由Métavir評分≥2所確定的臨床上顯著的纖維化。
1.用于SNIFF 4a(3種纖維化的標(biāo)志物+年齡) 分類表.分界值(caesura value)是.500 2.用于SNIFF 4ao(3種纖維化的標(biāo)志物+年齡) 分類表.分界值是.500 3.用于SNIFF 4b，采用3種纖維化的標(biāo)志物+年齡 分類表(a) a分界值是.500 4.用于SNIFF 4bo，采用3種纖維化的標(biāo)志物+年齡 分類表.分界值是.500. 5.用于SNIFF 5，采用4種纖維化的標(biāo)志物+年齡 分類表(a) a分界值是.500。
6.用于SNIFF 5o，采用4種纖維化的標(biāo)志物+年齡 分類表.分界值是.500。
7.用于SNIFF 6，采用5+1種纖維化的標(biāo)志物 AMTRI(A2M/PT)×100 分類表(a) a分界值是.500 8.用于優(yōu)化的SNIFF 6o，采用5+1種纖維化的標(biāo)志物 等式中的變量 分類表(a) a分界值是.500 AMTRI(A2M/PT)×100 9.用于SNIFF 6，采用7種纖維化的標(biāo)志物+年齡 分類表(a) a分界值是.500 采用不同的分界值的SNIFF 7a變體，以消除Métavir F3假陰性，β系數(shù)沒有變化。
分界值是.370 10.用于優(yōu)化的SNIFF 7o，采用6種纖維化的標(biāo)志物+年齡 分類表(a) a分界值是.500 采用不同分界值的優(yōu)化的SNIFF 7bo，以消除Métavir F3假陰性，β系數(shù)沒有變化。
分界值是.290 11.用于SNIFFA3，采用3種纖維化的標(biāo)志物 分類表(a) a分界值是.500 12.用于SNIFFA 3o，采用3種纖維化的標(biāo)志物 分類表(a) a分界值是.500 13.用于SNIFFA 4a，采用3種纖維化的標(biāo)志物+年齡 分類表(a) a分界值是.500 14.用于SNIFFA 4ao，采用3種纖維化的標(biāo)志物+年齡 等式中的變量 分類表(a) a分界值是.500 15.用于SNIFFA 4b，采用4種纖維化的標(biāo)志物 分類表(a) a分界值是.500 RAT＝ASAT/ALAT 16.用于SNIFFA 4bo，采用4種纖維化標(biāo)志物 分類表(a) a分界值是.500 RAT＝ASAT/ALAT 采用不同分界值的優(yōu)化的SNIFF 4b2o變體，以消除Métavir F0假陽性，β系數(shù)沒有變化。
分界值是.550 17.用于SNIFFA 4c，采用3種纖維化的標(biāo)志物+年齡 分類表.分界值為0.50。
18.對于SNIFFA 4co，采用3種纖維化的標(biāo)志物+年齡 分類表.分界值為0.62。
19.用于SNIDAFF 6a，采用5種纖維化的標(biāo)志物 分類表(a) a分界值是.470 20.用于SNIDAFF 6b，采用5種纖維化標(biāo)志物 分類表(a) a分界值是.400 21.用于SNIAH 等式中的變量 分類表(a) a分界值是.500 22.用于SNIAH o a分界值是.500 23.用于SNIFFSA3 等式中的變量 分類表(a) a分界值是.500 24.用于SNIFFSA4a 分界值是.500 25.用于SNIFFSA4ao a分界值是.500 26.用于SNIFFSA4b a分界值是.500 27.用于SNIFFAV 5 等式中的變量 分類表(a) a分界值是.500 28.用于SNIFFAV 5o 分類表 分界值是.490 29.用于SNIFFAV 6 等式中的變量 分類表(a) a分界值是.500 30.用于SNIFFAV 6o 分界值是.500?？赡軙⒁獾氖怯行缘脑黾硬⒉皇顷P(guān)于診斷有效性(82.8比83.4％)，而是關(guān)于其他有效性指數(shù)，例如ROC曲線下的面積(0.910對0.890)。
通過使用下面程序的被稱作多元線性回歸的統(tǒng)計方法獲得SNIAFF、SNIAFFA、SNIAFFSA、SNIAFFAV和SNIDIFFAV評分 首先在單變量分析中測試自變量。
第二步中，對在單變量分析中有顯著性的變量在多變量分析中通過線性回歸以逐步遞增或遞減的選擇進行測試。
通過下面的等式描述線性統(tǒng)計模型 yi＝a+β1x1+β2x2+... 其中a是常數(shù)，βi是每種自變量xi的系數(shù)，Yi是因變量(纖維化的面積)。
下面我們提供了每種評分的表格，其中第一列是每種自變量的名稱，第二列是系數(shù)β的數(shù)值，接著是其標(biāo)準(zhǔn)偏差，接著是標(biāo)準(zhǔn)化的系數(shù)β，最后兩列是的在95％時，系數(shù)β的置信區(qū)間。
對于以上本發(fā)明變體中定義的每種評分，模型的整體預(yù)測值是在第二表格中由對每個模型進行調(diào)節(jié)的系數(shù)R-2所反映，其為由模型的自變量所說明的yi的變化百分率。
對于可適用等式中的每種評分，每種自變量xi的系數(shù)βi可從對應(yīng)于所述評分±3.3標(biāo)準(zhǔn)偏差的表格中所提供的值β變化，表格中也提供了該值。類似地，a0可從表格中所提供的常數(shù)值±3.3標(biāo)準(zhǔn)偏差變化。
31.用于SNIAFF 5，采用5種纖維化的標(biāo)志物 模型概述 GAPRI＝((GGT/45)/PLT)×100 32.用于SNIAFF 6a 模型概述 GAPRI＝((GGT/45)/PLT)×100 33.用于SNIAFF 6b 系數(shù) GAPRI＝((GGT/45)/PLT)×100 34.用于SNIAFFA 2 模型概述 系數(shù) 35.用于SNIAFFA 3 模型概述 系數(shù) 36.用于SNIAFFA 4，使用3種纖維化的標(biāo)志物 HYAMPI(HA×A2M)/(A2M×100) 37.用于SNIAFFA 40，采用3種纖維化的標(biāo)志物 38.用于SNIAFFA 4a，采用3種纖維化的標(biāo)志物 HYAMPRI(HA×A2M)/(A2M×100)，AMTRI(A2M/PT)×100 39.用于SNIAFFA 4b，采用3種纖維化的標(biāo)志物 AMTRI(A2M/PT)×100 40.用于SNIAFFA 4co，采用3種纖維化的標(biāo)志物 HAMPRI＝(HA×A2M)/(PLT×100)，HYATRI(HA/PT)×100，AMPRI(A2M/PLT)×100，HYAMTRI(HA×A2M)/(PT×100)，HYAMPRI(HA×A2M)/(A2M×100)。
41.用于SNIAFFAV4 42.用于SNIAFFAV 5 模型概述 系數(shù) 43.用于SNIAFFAV 5b 44.用于SNIAFFAV 5bo 45.用于SNIAFFAV 5co HYAMTRI(HA×A2M)/(PT×100) 46.用于SNIAFFAV8 AMTRI(A2M/PT)×100，GLOPRI(GLB/PLT)×100，HYAPRI(HA/PLT)×100，GAPRI＝((GGT/45)/PLT)×100，APRI＝(ASAT/PLT)×100 47.用于SNIDIFFAV 4a 模型概述 系數(shù) 48.用于SNIDIFFAV4b 系數(shù) 模型概述 49.用于SNIDIFFAV 6 50.用于SNIAFFSA4 51.用于SNIAFFSA 6 52.用于SNIAFFSA6o 下面以說明的方式提供的實施例將描述本發(fā)明的其它優(yōu)點和特征，其中將參考附圖，在附圖中 -

圖1表示對于臨床上顯著的纖維化從SNIFF 7bo評分獲得的ROC曲線。統(tǒng)計學(xué)C(或ROC曲線下的面積)是0.910±0.016； -圖2表示采用7種變量的SNIFF 7bo評分與Métavir F評分對比的盒形圖(中值，四分位，端值)(參照是通過LNB檢測的)； -圖3表示采用7種變量的SNIFF 7bo評分的分布與Métavir F評分的對比(參照是通過LNB檢測的)； -圖4表示采用7種變量的SNIFF 7bo評分的預(yù)測組的分布作為Métavir F評分的函數(shù)(≥F20不是，1是)； -圖5表示SNIFF 5的診斷有效性作為其值的函數(shù)； -圖6表示采用5種變量的SNIAFF與纖維化面積之間的關(guān)系。將其與圖3(采用7種變量的SNIFF 7bo與F評分之間的關(guān)系)進行比較，因為它們?yōu)椴《拘愿闻K疾病的最佳指示物； -圖7表示采用4種變量的SNIFFA 4bo與F評分之間的關(guān)系(圖7A)，以及采用4種變量的SNIAFFA 4o與纖維化面積之間的關(guān)系(圖7B)(酒精性肝臟疾病的最佳指示物)，F(xiàn)CS臨床上顯著的纖維化； -圖8表示在同樣238個患者的人群中采用7種變量的Fibrobest(C指數(shù)0.839)與采用7種變量的SNIFF 7o(C指數(shù)0.900)的ROC曲線之間的比較。該差別是統(tǒng)計學(xué)上顯著的(通過Hanley-McNeil方法，p＝0.0036)； -圖9表示在同樣238個患有病毒性肝炎的患者人群中采用7種變量的Fibrobest與采用7種變量的SNIFF 7o的盒形圖之間的比較。對于Métavir F0和F1階段，SNIFF 7bo的盒形圖比Fibrotest 7的低，對于Métavir F2、F3和F4階段，則比Fibrotest 7的高，這樣解釋了SNIFF 7bo對于臨床上顯著的纖維化較好的區(qū)分能力，其為相對于Fibrotest的分界值0.50以及SNIFF 7bo的分界值0.29確定的。
實施1確定SNIFF評分 A.患者 取出具有慢性肝臟疾病的患者的血液樣品。根據(jù)優(yōu)良實驗規(guī)范(good laboratory practice)確定該生物血液的簡單變量。其結(jié)果表達(dá)為之前所詳細(xì)描述的單位。
B.測定方法 通過放射免疫測定技術(shù)(Kabi-Pharmacia RIA Diagnostics，Uppsala，Sweden)檢測血液樣品中的透明質(zhì)酸鹽濃度。
通過使用Behring濁度計分析儀的免疫比濁確定A2M濃度。試劑為兔抗-人A2M抗血清。
從快速時間(QT)檢測凝血酶原時間，其中QT是通過將鈣促凝血酶原激酶(例如Neoplastin CI plus，Diagnostica Stago，Asnières，F(xiàn)rance)加入到血漿中被確定的，并以秒檢測凝血時間。為了獲得凝血酶原時間(PT)，從一組被評估為100％的正常血漿的各種稀釋液繪制了校準(zhǔn)曲線。
C.計算SNIFF評分 獨立(或簡單)變量的結(jié)果以其自身使用或者在適當(dāng)?shù)那闆r下被轉(zhuǎn)化為組合變量后使用。所有這些變量都被包括在邏輯回歸公式中。通過實施例，并在已經(jīng)描述的表格以及已經(jīng)描述的公式應(yīng)用的實施例的基礎(chǔ)上，希望使用采用4種標(biāo)志物的SNIFF 4a評分的本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠通過利用下面的公式 P＝1/(1+exp(-a0-a1(HA，μg/l)-a2(PT，％)-a3(A2M，mg/dl)＝a4(年齡，年)) 即 P＝1/(1+exp(-2.365-(0.011×(HA，μg/l))-(-0.062×(PT，％))-(0.006×(A2M，mg/dl))-(0.030×(年齡，年))) 提供了兩個相反的實施例 根據(jù)固定在0.5的分界值，病例1將被分類為具有臨床上顯著的肝纖維化，病例5將被分類為不具有任何纖維化。
實施例2本發(fā)明評分的有效性，本發(fā)明的評分與現(xiàn)有技術(shù)的方法所得到的結(jié)果的比較 ROC曲線(圖1)代表了作為測試數(shù)值的函數(shù)的特異性和靈敏度。其是通過指數(shù)C進行檢測的，其中指數(shù)C被認(rèn)為從0.7與臨床上相關(guān)。曲線越靠近方框的左上角(100％的特異性和靈敏度)，就越好。這是通過在ROC曲線下的面積(AUROC)進行檢測的，也被稱作統(tǒng)計學(xué)C?？梢詫⑦@些AUROC進行比較，這樣另外的優(yōu)點可通過根據(jù)本發(fā)明SNIFF評分的令人吃驚的作用得到證實(圖8)。
在本發(fā)明的測試中所獲得的指數(shù)C具有數(shù)值為0.841±0.025的SNIFF 5評分，以及數(shù)值為0.910±0.016的SNIFF 7 bo評分(圖8)。因此，這些數(shù)值C是臨床上相關(guān)的。
在圖2中所表示的盒形圖顯示了根據(jù)Métavir F階段的SNIFF種類的統(tǒng)計學(xué)分布中值(粗體水平黑線)、四分位(灰色長方形的上限和下限)以及端值(末端的水平直線)。所涉及的評分是SNIFF 7bo評分。
圖3涉及與圖2的結(jié)果相同的表示，但其顯示使用7種變量所獲得的個體SNIFF原始數(shù)據(jù)作為Métavir F評分的函數(shù)。也顯示了被預(yù)測的組≥F20(正方形)不是，1是(圓形)(圖3)。該圖能清楚地看出評分上的重疊，特別是在Métavir F2和F3階段之間。另一方面，在人數(shù)眾多的情況下，其難以考慮分布，特別是因為個體數(shù)值的重疊。
圖4是前圖(圖3)的不同表示，其中通過所預(yù)測的臨床上顯著纖維化的預(yù)測組，將這些患者集合起來≥F20(灰色)不是，1是(黑色)。這分別對應(yīng)于圖3中的正方形和圓形。SNIFF不會錯誤地分類F0和F4的病人，以及非常少的F3病人被分錯(在圖4的SNIFF 7bo情況下沒有)。換句話說，實際上，對于不存在纖維化或者存在硬化，SNIFF 7bo正確地分類了100％的患者。
通過前面的附圖可以猜測，通過圖5可以清楚地看出診斷有效性對于低數(shù)值和高數(shù)值評分是非常好的，而對于中等數(shù)值評分則會降低。所以，對于50.0％的患者來說，通過SNIFF 5的診斷效率為90.8％(圖5)。
采用7種變量的SNIFF 7評分提供了比采用5個變量的SNIAFF 50指數(shù)(r＝0.803，p＜10-4)低的纖維化評估r＝0.769，p＜10-4。
這種比較顯示纖維化面積的評估評分(圖6)是比纖維化的SNIFF評分更可靠(精確)的指示物。
類似的，采用4種變量的SNIFFA 4bo評分提供了比采用4種變量的SNIFFA 4o指數(shù)(r＝0.914，p＜10-4)低的纖維化評估r＝0.847，p＜10-4。
這種比較也顯示纖維化面積的SNIAFFA評估評分是比也發(fā)生在酒精性肝臟疾病中的纖維化(圖7)的SNIFFA評分更可靠(精確)的指示物。
SNIFF有效性與Fibrotest有效性的比較顯示Fibrotest 7對比SNIFF 7的診斷效率是74.2％比82.1％。AUROC使得能顯示有效性的差別是統(tǒng)計學(xué)上非常顯著的(圖8)。圖9通過圖表顯示相對于Fibrotest7，SNIFF7具有更好的區(qū)分能力。
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權(quán)利要求
1.診斷個體中肝臟病理的存在和/或嚴(yán)重性和/或監(jiān)控個體中肝臟病理的治療性處理的有效性的方法，包括建立至少一種非侵入式診斷性評分，尤其是用于肝門和中隔纖維化的診斷性評分，和/或用于纖維化面積的評估評分，和/或用于分形維數(shù)的評估評分，其通過下列步驟來實現(xiàn)
a’)為了確定纖維化的面積或者分形維數(shù)，
在來自所述個體的樣品中檢測至少一種選自α-2巨球蛋白(A2M)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、載脂蛋白Al(ApoAl)、III型前膠原N-末端前肽(P3P)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、膽紅素、γ-球蛋白(GLB)、血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALAT)、脲、鈉(NA)、糖血、甘油三酯、白蛋白(ALB)、堿性磷酸酶(ALP)、YKL-40(人軟骨糖蛋白39)、基質(zhì)金屬蛋白酶1組織抑制劑(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)和鐵蛋白的變量；
a)為了建立用于肝門和中隔纖維化的診斷性評分，在來自所述個體的樣品中檢測至少三種選自α-2巨球蛋白(A2M)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、載脂蛋白A1(ApoA1)、III-型前膠原N-末端前肽(P3P)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、膽紅素、γ-球蛋白(GLB)、血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALAT)、脲、鈉(NA)、糖血、甘油三酯、白蛋白(ALB)、堿性磷酸酶(ALP)、YKL-40(人軟骨糖蛋白39)、基質(zhì)金屬蛋白酶1組織抑制劑(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)和鐵蛋白的變量，
所述三種變量的至少一種是選自血小板(PLT)和凝血酶原時間(PT)；在恰好檢測三種變量的情況下，這三種變量合起來不能是血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)和膽紅素；優(yōu)選地，所選擇的至少三種變量合起來不為α-2巨球蛋白(A2M)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)和基質(zhì)金屬蛋白酶1組織抑制劑(TIMP-1)；
b)任選地，收集至少一種表征所述個體的臨床變量；
為了所述用于肝門和中隔纖維化的診斷性評分，以上的步驟a)和b)使得至少4種變量被檢測或收集，
c)將所述變量結(jié)合在邏輯或線性函數(shù)中，以獲得用于肝門和中隔纖維化的診斷性評分，和/或用于所述纖維化面積的診斷性評估評分，和/或用于所述分形維數(shù)的診斷性評估評分；
d)基于實施步驟(c)所述結(jié)合時得到的評分，診斷所述病理的存在和/或嚴(yán)重性和/或所述治療的有效性。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于表征所述個體的所述臨床變量選自體重(重量)、體重指數(shù)、收集所述樣品的時的年齡以及病因。
3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于在步驟(c)之前，將在步驟(a)或者(a’)中所檢測的變量以及在步驟(b)中所收集的變量互相結(jié)合。
4.如權(quán)利要求1至3中任一項所述的方法，其特征在于所述肝臟病理選自病毒性起因的肝臟疾病、酒精性起因的肝臟疾病和脂肪變性。
5.如權(quán)利要求1至4中任一項所述的方法，其特征在于在所述方法的步驟(a)中，在來自所述個體的樣品中檢測4、5、6或7種變量。
6.如權(quán)利要求1至5中任一項所述的方法，其特征在于在所述方法的步驟(c)中將所述變量α-2巨球蛋白(A2M)和凝血酶原時間(PT)以及至少兩種選自血小板(PLT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、脲、透明質(zhì)酸(HA)和年齡的變量進行結(jié)合。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于在步驟(c)中將下列變量進行結(jié)合
-α-2巨球蛋白(A2M)、凝血酶原時間(PT)、透明質(zhì)酸(HA)和年齡(被稱作SNIFF 4a的評分)；
-α-2巨球蛋白(A2M)、凝血酶原時間(PT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)和年齡(被稱作SNIFF 4b的評分)；
-α-2巨球蛋白(A2M)、凝血酶原時間(PT)、血小板(PLT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)和年齡(被稱作SNIFF 5的評分)；
-α-2巨球蛋白(A2M)、凝血酶原時間(PT)、血小板(PLT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、脲和透明質(zhì)酸(HA)(被稱作SNIFF 6的評分)；或者
-α-2巨球蛋白(A2M)、凝血酶原時間(PT)、血小板(PLT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、脲、透明質(zhì)酸(HA)和年齡(被稱作SNIFF 7的評分)。
8.如權(quán)利要求1至5中任一項所述的方法，其特征在于除了凝血酶原時間(PT)變量之外，在所述方法的步驟(c)中還結(jié)合了至少3種選自天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALAT)和堿性磷酸酶(ALP)、年齡、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)和α-2巨球蛋白(A2M)的變量。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于在步驟(c)中將下列變量進行結(jié)合
-凝血酶原時間(PT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALAT)和堿性磷酸酶(ALP)(被稱作SNIFFA 4b的評分)，或者
-凝血酶原時間(PT)、年齡、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)和α-2巨球蛋白(A2M)(被稱作SNIFFA 4c的評分)。
10.如權(quán)利要求1至5中任一項所述的方法，其特征在于在所述方法的步驟(c)中結(jié)合了至少下列四種變量透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、膽紅素和血小板(PLT)。
11.如權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于在步驟(c)中還結(jié)合了至少2種、更優(yōu)選至少4種選自α-2巨球蛋白(A2M)、脲、載脂蛋白A1(ApoA1)和γ-球蛋白(GLB)的變量。
12.如權(quán)利要求10或11所述的方法，其特征在于在步驟(c)中結(jié)合了以下變量
-透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、膽紅素、血小板(PLT)和載脂蛋白A1(ApoA1)(被稱作SNIAFF 5的評分)；
-透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、膽紅素、血小板(PLT)、α-2巨球蛋白(A2M)和脲(被稱作SNIAFF 6a的評分)；或者
-透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、膽紅素、血小板(PLT)、脲和γ-球蛋白(GLB)(被稱作SNIAFF 6b的評分)。
13.如權(quán)利要求1至5中任一項所述的方法，其特征在于結(jié)合了至少下列四種變量血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)和年齡。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于在步驟(c)中結(jié)合了至少一種、優(yōu)選至少兩種選自堿性磷酸酶(ALP)、α-2巨球蛋白(A2M)和脲的變量。
15.如權(quán)利要求13或14所述的方法，其特征在于在步驟(c)中結(jié)合了下列變量
-血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、年齡、堿性磷酸酶(ALP)和α-2巨球蛋白(被稱作SNIDAFF 6a的評分)；
-血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、年齡、堿性磷酸酶(ALP)和脲(被稱作SNIDAFF 6b的評分)。
16.如權(quán)利要求1至5中任一項所述的方法，其特征在于除了凝血酶原時間(PT)變量之外，在所述方法的步驟(c)中還結(jié)合了至少3種選自天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、甘油三酯、年齡和糖血的變量。
17.如權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于在步驟(c)中結(jié)合了下列變量
-凝血酶原時間(PT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)、年齡和糖血(被稱作SNIFFSA 4a的評分)，或者
-凝血酶原時間(PT)、甘油三酯、年齡和糖血(被稱作SNIFFSA 4b的評分)。
18.如權(quán)利要求1至5中任一項所述的方法，其特征在于在所述方法的步驟(c)中結(jié)合下列6種變量中的至少5種α-2巨球蛋白(A2M)、血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)、脲、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)或病因。
19.如權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于在步驟(c)中結(jié)合了下列變量
-α-2巨球蛋白(A2M)、血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)、脲和透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)(被稱作SNIFFAV 5的評分)；或者
-α-2巨球蛋白(A2M)、血小板(PLT)、凝血酶原時間(PT)、脲、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)和病因(被稱作SNIFFAV 6的評分)。
20.如權(quán)利要求1至5中任一項所述的方法，其特征在于除了凝血酶原時間(PT)變量之外，在本發(fā)明所述方法的步驟(c)中還結(jié)合了至少3種、優(yōu)選至少4種、更優(yōu)選5種或6種選自血小板(PLT)、脲、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、膽紅素、α-2巨球蛋白(A2M)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、γ-球蛋白(GLB)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)和病因的變量。
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其特征在于在步驟(c)中結(jié)合了下列變量
-凝血酶原時間(PT)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、膽紅素和α-2巨球蛋白(A2M)(被稱作SNIAFFAV 4的評分)，
-凝血酶原時間(PT)、血小板(PLT)、脲、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)和病因(被稱作SNIAFFAV 5的評分)，
-凝血酶原時間(PT)、脲、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、膽紅素和α-2巨球蛋白(A2M)(被稱作SNIAFFAV 5b的評分)，
-凝血酶原時間(PT)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、膽紅素、α-2巨球蛋白(A2M)和病因(被稱作SNIAFFAV 5c的評分)，或者
-凝血酶原時間(PT)、血小板(PLT)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、膽紅素、α-2巨球蛋白(A2M)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、γ-球蛋白(GLB)和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)(被稱作SNIAFFAV 8的評分)。
22.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項所述的方法，其特征在于在所述方法的步驟(c)中結(jié)合了下列5種變量的至少4種α-2巨球蛋白(A2M)、白蛋白(ALB)、凝血酶原時間(PT)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALAT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)和年齡。
23.如權(quán)利要求22所述的方法，其特征在于在步驟(c)中結(jié)合了下列變量
-α-2巨球蛋白(A2M)、凝血酶原時間(PT)、白蛋白(ALB)和年齡(被稱作SNIDIFFAV 4a的評分)，
-α-2巨球蛋白(A2M)、凝血酶原時間(PT)、白蛋白(ALB)和透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)(被稱作SNIDIFFAV 4b的評分)，或
-α-2巨球蛋白(A2M)、白蛋白(ALB)、凝血酶原時間(PT)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALAT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ASAT)和年齡(被稱作SNIDIFFAV 6的評分)。
24.如權(quán)利要求1至5中任一項所述的方法，其特征在于除了凝血酶原時間(PT)變量之外，在所述方法的步驟(c)中還結(jié)合了至少3種選自α-2巨球蛋白(A2M)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、血小板(PLT)和所述個體的重量的變量。
25.如權(quán)利要求24所述的方法，其特征在于在步驟(c)中結(jié)合了下列變量
-凝血酶原時間(PT)、α-2巨球蛋白(A2M)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)和所述個體的重量(被稱作SNIAFFA 4a的評分)；或者
-凝血酶原時間(PT)、α-2巨球蛋白(A2M)、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)和血小板(PLT)(被稱作SNIAFFA 4b和SNIAFFA 4c的評分)。
26.如權(quán)利要求1至5中任一項所述的方法，其特征在于除了凝血酶原時間(PT)、γ-球蛋白(GLB)和重量三種變量之外，在所述方法的步驟(c)中還結(jié)合了至少一種、優(yōu)選至少兩種選自透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、血小板(PLT)、所述個體的年齡和BMI的變量。
27.如權(quán)利要求26所述的方法，其特征在于在步驟(c)中結(jié)合了下列變量
-凝血酶原時間(PT)、γ-球蛋白(GLB)、重量和年齡(被稱作SNIAFFSA 4的評分)，
-凝血酶原時間(PT)、γ-球蛋白(GLB)、重量、透明質(zhì)酸(HA或透明質(zhì)酸鹽)、血小板(PLT)和BMI(被稱作SNIAFFSA 6的評分)。
28.肝纖維化的診斷性測試，其特征在于其使用權(quán)利要求1至27中任一項所述的方法。
全文摘要
本發(fā)明涉及診斷個體中肝臟病理的存在和/或嚴(yán)重性和/或監(jiān)控個體中肝臟病理的治療性處理的有效性的方法，包括建立至少一種非侵入式診斷性評分，特別是用于肝門和/或中隔纖維化的診斷性評分，和/或纖維化面積的評估評分，和/或分形維數(shù)的評估評分。
文檔編號G06F19/00GK1985259SQ20058002386
公開日2007年6月20日 申請日期2005年5月13日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月14日
發(fā)明者保羅·卡樂斯 申請人:昂熱大學(xué), 昂熱大學(xué)中央醫(yī)院