專利名稱：臍血dna的制作及保存方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及一種臍血DNA的制作及保存方法。
現(xiàn)有技術(shù)臍血作為一種資源，其重要性及應(yīng)用越來越受到人們的重視。目前臍血干細(xì)胞的制作與保存已開始進(jìn)行，但臍血DNA作為一種最原始、最純粹的DNA，其制作與保存意義重大，目前尚無人進(jìn)行該方面的工作。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種臍血DNA的制作、保存方法。該方法利用分子生物學(xué)手段將嬰兒臍血總DNA提取并保存，為今后身份鑒別、基因診斷、基因治療、器官移植等提供最原始的DNA記錄。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種臍血DNA的制作及保存方法，它依次包括如下步驟(1)采集臍血，將出生嬰兒的臍帶血和胎盤血采集到含抗凝劑的臍血收集袋中；(2)取血加入含有抗凝劑的離心管中，離心去除紅細(xì)胞；(3)吸去上清，用加樣槍將中層淡黃色細(xì)胞層，小心轉(zhuǎn)移至新的離心管中；(4)加入細(xì)胞裂解液，輕輕混勻，置于37℃水浴；(5)加入蛋白酶K，輕輕混勻；(6)置于50℃水浴，不時旋轉(zhuǎn)；(7)將上述混合液冷卻至室溫，加入等體積水飽和酚，緩慢顛轉(zhuǎn)，溫和混勻兩相，直至成乳濁液；
(8)離心；(9)用水飽和酚抽提一次，再用氯仿抽提一次，收集水相；(10)加入冷的無水乙醇，沉淀DNA；(11)加入緩沖溶液溶解DNA；(12)進(jìn)行DNA電泳及酶消化試驗(yàn)，檢測DNA的濃度和純度，及其完整性和消化能力、基因特征、血型，得出分析結(jié)果；(13)將DNA置于濾膜上，抽真空密封于錫箔袋中，將該錫箔袋放入DNA珍藏盒內(nèi)；該盒內(nèi)還放置有微型光盤，其上刻錄有臍血DNA的上述分析結(jié)果，包括DNA的濃度、純度、及其完整性和消化能力、基因特征、血型；(14)余下的DNA入庫保存。
所述步驟(2)中的抗凝劑為乙二胺四乙酸。
所述步驟(5)中的蛋白酶K終濃度為100ug/ml。
所述步驟(11)中的緩沖溶液為三羥甲基胺基甲烷-乙二胺四乙酸溶液、或去離子水。
所述步驟(12)的電泳為瓊脂糖凝膠電泳；所用酶為限制性內(nèi)切酶HindIII。
所述微型光盤上還刻錄有以下內(nèi)容DNA及分子遺傳學(xué)的背景資料；嬰兒DNA的統(tǒng)一編號；父母或新生兒出生時的照片；嬰兒出生時的體重、出生年月日、民族、籍貫。
本發(fā)明還提供一種臍血DNA庫的建立方法，它包括如下步驟(1)將按上述方法得到的DNA的分析結(jié)果輸入計(jì)算機(jī)；(2)建立DNA分析結(jié)果數(shù)據(jù)庫。
在上述步驟(2)中，所述數(shù)據(jù)庫系統(tǒng)可完成顧客信息的錄入、查詢、修改，其記錄有新生兒的所有出生的數(shù)據(jù)、圖片信息及提取臍血基因過程中的所有操縱數(shù)據(jù)；每條記錄都以序列編號標(biāo)識，數(shù)據(jù)庫通過條碼識別可根據(jù)編號、出生時間、父母姓名的數(shù)據(jù)完成單個或幾個字段的復(fù)合查詢，在將來的升級網(wǎng)絡(luò)版中將繼續(xù)完善數(shù)據(jù)共享，選擇打印，擴(kuò)大記錄字段等功能。


圖1為臍血DNA制作及保存流程圖。
具體實(shí)施例方式
臍血，就是指新生兒出生10分鐘內(nèi)，臍帶被結(jié)扎后，胎盤內(nèi)由臍帶流出的血。從新生兒臍血中提取的整組DNA，稱之為臍血DNA，大量臍血DNA樣本則組成臍血DNA庫。臍血DNA包含了嬰兒所有遺傳信息和基因特征，是最原始、最純正的DNA記錄。隨著年齡的增長及與外界環(huán)境的不斷接觸，DNA有可能受到影響而發(fā)生變化，許多疾病都是由于基因變異所致。所以，保存臍血DNA的價值就在于基因的原始性，它是對孩子生命信息最真實(shí)、最本質(zhì)的反映。人的一生中，也只有這樣唯一的一次保存機(jī)會。這種信息是最原始、最真實(shí)、沒有任何外因干擾和變異的生命信息，可以用來診斷和預(yù)防遺傳疾病的發(fā)生，一旦孩子在生長、發(fā)育過程中發(fā)生疾病，可以通過臍血DNA中的信息對其進(jìn)行基因診斷、基因治療。特別是在分子生物學(xué)日益發(fā)達(dá)和完善的今天，應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)作病因診斷和治療更有特別價值。另外，臍血DNA在人體身份識別、親子鑒定、器官移植、遺傳疾病診斷、治療和研究方面更具重大意義。
如圖1所示，本發(fā)明的具體操作步驟如下1.在嬰兒分娩過程中，由專職醫(yī)務(wù)人員采取嬰兒臍血；2.將臍血血樣和詳細(xì)登記表送至中心實(shí)驗(yàn)室；3.按無重復(fù)編號登記于中心實(shí)驗(yàn)室的中央計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)庫登記；4.按如下步驟提取臍血整組DNA(1)采集臍血，將出生嬰兒的臍帶血和胎盤血采集到含抗凝劑的臍血收集袋中；(2)取血加入含有抗凝劑的離心管中，離心去除紅細(xì)胞；(3)吸去上清，用加樣槍將淡黃色細(xì)胞層(中層)小心轉(zhuǎn)移至新的離心管中；(4)加入細(xì)胞裂解液，輕輕混勻，置于37℃水??；(5)加入蛋白酶K，輕輕混勻；(6)置于50℃水浴，不時旋轉(zhuǎn)；(7)將上述混合液冷卻至室溫，加入等體積水飽和酚，緩慢顛轉(zhuǎn)，溫和混勻兩相，直至成乳濁液；(8)離心；(9)用水飽和酚抽提一次，再用氯仿抽提一次，收集水相；(10)加入冷的無水乙醇，沉淀DNA；(11)加入緩沖溶液溶解DNA，該緩沖溶液可以是三羥甲基胺基甲烷-乙二胺四乙酸溶液、或去離子水；(12)進(jìn)行DNA電泳及酶消化試驗(yàn)，檢測DNA的濃度和純度，及其完整性和消化能力，得出分析結(jié)果；上述電泳為瓊脂糖凝膠電泳，所用酶為限制性內(nèi)切酶HindIII。
(13)將DNA置于濾膜上，抽真空密封于錫箔袋中，將該錫箔袋放入DNA珍藏盒內(nèi)；該盒內(nèi)還放置有微型光盤，其上刻錄有臍血DNA的上述分析結(jié)果，包括DNA的濃度、純度、有其完整性和消化能力等信息、基因特征、血型；(14)余下的DNA入庫保存；入庫之前，應(yīng)先進(jìn)行DNA分析進(jìn)行DNA電泳及酶消化試驗(yàn)，檢測DNA的濃度和純度，及其完整性和消化能力，得出分析結(jié)果；將分析數(shù)據(jù)輸入計(jì)算機(jī)，建立DNA分析結(jié)果數(shù)據(jù)庫。
該數(shù)據(jù)庫系統(tǒng)可完成顧客信息的錄入、查詢、修改，其記錄有新生兒的所有出生的數(shù)據(jù)、圖片信息及提取臍血基因過程中的所有操縱數(shù)據(jù)。每條記錄都以序列編號標(biāo)識，數(shù)據(jù)庫通過條碼識別可根據(jù)編號、出生時間、父母姓名的數(shù)據(jù)完成單個或幾個字段的復(fù)合查詢。在將來的升級網(wǎng)絡(luò)版中將繼續(xù)完善數(shù)據(jù)共享，選擇打印，擴(kuò)大記錄字段等功能。
臍血DNA是新生兒踏入人生第一步的最真實(shí)最科學(xué)的記錄，并將伴隨其一生。在基因工程技術(shù)飛速發(fā)展的今天，這一DNA最原始記錄將作為標(biāo)志物，在兒童生長發(fā)育、疾病診斷、身份識別及健康咨詢等諸多方面提供越來越多的幫助。
權(quán)利要求
1.臍血DNA的制作及保存方法，它依次包括如下步驟(1)采集臍血，將出生嬰兒的臍帶血和胎盤血采集到含抗凝劑的臍血收集袋中；(2)取血加入含有抗凝劑的離心管中，離心去除紅細(xì)胞；(3)吸去上清，用加樣槍將中層淡黃色細(xì)胞層，小心轉(zhuǎn)移至新的離心管中；(4)加入細(xì)胞裂解液，輕輕混勻，置于37℃水??；(5)加入蛋白酶K，輕輕混勻；(6)置于50℃水浴，不時旋轉(zhuǎn)；(7)將上述混合液冷卻至室溫，加入等體積水飽和酚，緩慢顛轉(zhuǎn)，溫和混勻兩相，直至成乳濁液；(8)離心；(9)用水飽和酚抽提一次，再用氯仿抽提一次，收集水相；(10)加入冷的無水乙醇，沉淀DNA；(11)加入緩沖溶液溶解DNA；(12)進(jìn)行DNA電泳及酶消化試驗(yàn)，檢測DNA的濃度和純度，及其完整性和消化能力、基因特征、血型，得出分析結(jié)果；(13)將DNA置于濾膜上，抽真空密封于錫箔袋中，將該錫箔袋放入DNA珍藏盒內(nèi)；該盒內(nèi)還放置有微型光盤，其上刻錄有臍血DNA的上述分析結(jié)果，包括DNA的濃度、純度、及其完整性和消化能力、基因特征、血型；(14)余下的DNA入庫保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求書1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中的抗凝劑為乙二胺四乙酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求書1所述的方法，其特征在于，所述步驟(5)中的蛋白酶K終濃度為100ug/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求書1所述的方法，其特征在于，所述步驟(11)中的緩沖溶液為三羥甲基胺基甲烷-乙二胺四乙酸溶液、或去離子水。
5.根據(jù)權(quán)利要求書1所述的方法，其特征在于，所述步驟(12)的電泳為瓊脂糖凝膠電泳；所用酶為限制性內(nèi)切酶HindIII。
6.根據(jù)權(quán)利要求書1所述的方法，其特征在于，所述微型光盤上還刻錄有以下內(nèi)容DNA及分子遺傳學(xué)的背景資料；嬰兒DNA的統(tǒng)一編號；父母或新生兒出生時的照片；嬰兒出生時的體重、出生年月日、民族、籍貫。
7.臍血DNA庫的建立方法，它包括如下步驟(1)將按權(quán)利要求1的方法得到的DNA的分析結(jié)果輸入計(jì)算機(jī)；(2)建立DNA分析結(jié)果數(shù)據(jù)庫。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的臍血DNA庫的建立方法，其特征在于，所述步驟(2)中，所述數(shù)據(jù)庫系統(tǒng)可完成顧客信息的錄入、查詢、修改，其記錄有新生兒的所有出生的數(shù)據(jù)、圖片信息及提取臍血基因過程中的所有操縱數(shù)據(jù)；每條記錄都以序列編號標(biāo)識，數(shù)據(jù)庫通過條碼識別可根據(jù)編號、出生時間、父母姓名的數(shù)據(jù)完成單個或幾個字段的復(fù)合查詢，在將來的升級網(wǎng)絡(luò)版中將繼續(xù)完善數(shù)據(jù)共享，選擇打印，擴(kuò)大記錄字段等功能。
全文摘要
臍血DNA的制作及保存方法，即取嬰兒臍帶血和胎盤血，加入含抗凝劑的離心管中，去除紅細(xì)胞；吸去上清，將中層淡黃色細(xì)胞層轉(zhuǎn)移至新的離心管中；加入細(xì)胞裂解液混勻，置于37℃水浴；加入蛋白酶K混勻；置于50℃水浴，不時旋轉(zhuǎn)；冷卻至室溫，加入等體積水飽和酚，緩慢顛轉(zhuǎn)，溫和混勻兩相，直至成乳濁液；離心；用水飽和酚抽提一次，再用氯仿抽提一次，收集水相；加入冷的無水乙醇，沉淀DNA；加緩沖溶液溶解DNA；進(jìn)行DNA電泳及酶消化試驗(yàn)，得出分析結(jié)果；將DNA置于濾膜上，密封于錫箔袋中，將該袋放入DNA珍藏盒內(nèi)；余下的DNA入庫保存，并建立臍血DNA庫。
文檔編號G06F17/40GK1614029SQ20031010324
公開日2005年5月11日 申請日期2003年11月3日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月3日
發(fā)明者李少波, 李宏實(shí), 毛金武, 周見遠(yuǎn), 唐貴卿 申請人:李少波, 李宏實(shí), 毛金武, 周見遠(yuǎn), 唐貴卿